《培养基的制备》PPT课件
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细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术ppt课件
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目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
21
实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
22
c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
18
实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
21
实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
22
c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
18
实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
培养基的制备
原理：介质在有压力时阻隔微生物。 适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。 设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。 优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。
注意事项：1、压力适当； 2、无菌条件下进行； 3、防止渗透现象。
辐射灭菌：
原理：紫外线波长在200－300nm，具有杀菌作用，以
265-266杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可 产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成 正比。
曲霉属
青霉属
几种常见霉菌
主要特征
分布
作用与用途
菌丝无隔,单细胞 常长在淀粉类食 迅速蔓延,有假根, 品上如馒头、面 孢子囊呈黑色,产 包、甘薯等
生孢子囊和接合 孢子
能将淀粉转化为 糖，用于生产糖 化酶，酿造甜酒
等
菌丝分隔，分生 空气、谷物、土
孢子梗顶端膨大， 壤和各种有机物
顶囊上生辐射状
上
小梗菌落疏松、
步骤： 1、倒平板：牛肉膏蛋白胨培养基，高氏I号培养基，查氏 培养基冷却至55-60℃时，混匀后倒平板，牛肉膏蛋白胨培养 基倒4皿，高氏I号培养基和查氏培养基各倒3皿。 2、制备污水稀释液：10g土样，加入90ml无菌水中，在三 角瓶中振摇20min。取0.5ml 加入盛有4.5ml无菌水的试管中， 以此类推，制成不同稀释度。 3、涂布：将上述每种培养基平板底面标记稀释度，然后用 无菌吸管从最后三种稀释度，即10-4、10-5和10-6的试管中吸 取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。 4、培养：高氏I号和查氏倒置培养于28℃培养箱中培养35days，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在37℃培养1-2days。 5、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。
观察菌落形态并记录
序号 来源 大小 形状 边缘 颜色 表面 代谢物 种 类
注意事项：1、压力适当； 2、无菌条件下进行； 3、防止渗透现象。
辐射灭菌：
原理：紫外线波长在200－300nm，具有杀菌作用，以
265-266杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可 产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成 正比。
曲霉属
青霉属
几种常见霉菌
主要特征
分布
作用与用途
菌丝无隔,单细胞 常长在淀粉类食 迅速蔓延,有假根, 品上如馒头、面 孢子囊呈黑色,产 包、甘薯等
生孢子囊和接合 孢子
能将淀粉转化为 糖，用于生产糖 化酶，酿造甜酒
等
菌丝分隔，分生 空气、谷物、土
孢子梗顶端膨大， 壤和各种有机物
顶囊上生辐射状
上
小梗菌落疏松、
步骤： 1、倒平板：牛肉膏蛋白胨培养基，高氏I号培养基，查氏 培养基冷却至55-60℃时，混匀后倒平板，牛肉膏蛋白胨培养 基倒4皿，高氏I号培养基和查氏培养基各倒3皿。 2、制备污水稀释液：10g土样，加入90ml无菌水中，在三 角瓶中振摇20min。取0.5ml 加入盛有4.5ml无菌水的试管中， 以此类推，制成不同稀释度。 3、涂布：将上述每种培养基平板底面标记稀释度，然后用 无菌吸管从最后三种稀释度，即10-4、10-5和10-6的试管中吸 取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。 4、培养：高氏I号和查氏倒置培养于28℃培养箱中培养35days，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在37℃培养1-2days。 5、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。
观察菌落形态并记录
序号 来源 大小 形状 边缘 颜色 表面 代谢物 种 类
培养基的制备ppt课件
第2组:100ml （先分装7支）
2.普通琼脂平板培养基
第3.4.5.6组:各100ml
每组倒7枚平板供6小组下次用
6
四、方法
1.肉膏汤培养基的配制: ⑴称样： 牛肉膏0.5g 蛋白胨1g 氯化钠0.5g
加至100ml蒸馏水 中，加热溶化
(2) 待冷至40～50℃时，矫正酸碱度为pH7.6
(3) 分装于试管内（每管约2ml）置高压蒸汽 灭菌器内灭菌(121.3-20min)。
3
三、材料 牛肉膏、蛋白胨 氯化钠、蒸馏水 琼脂，10%NaOH pH试纸、三角烧瓶 量筒，天平 酒精灯、等。
4
四、方法 培 养 基 配 制 步 骤
⑴调配成分 ⑵溶解 ⑶调节 pH ⑷ 分装 ⑸灭菌 ⑹质量检验 ⑺保存
5
各组所需要配制的培养基
1.肉膏汤培养基 3.普通斜面培养基
第1组:各100ml （ 先分装7支）
半固体斜面培养基的制备细菌培养基的制备一目的掌握培养基的制备方法二原理培养基是人工合成的一种混合营养料用以分离细菌
食品微生物学实验
实验四
1
实验项目
细菌培养基的制备
肉膏汤培养基的制备 普通琼脂平板培养基的制备 半固体斜面培养基的制备
2
一、目的
掌握培养基的制备方法 二、原理
培养基是人工合成的一种混合营养料， 用以分离细菌。基础培养基中含有大多数 常见菌生长繁殖所需要的营养物质，并可 制成液体、半固体、固体三种不同的性状 以供选用。
配制出以下培养基： 1.肉膏汤培养基 2.普通琼脂平板培养基 3.普通斜面培养基
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六、实验报告要求 实验报告中描述本组所配制的培养基。
七、思考题
何谓培养基？ 培养基的制备过程有哪几个步骤？
2.普通琼脂平板培养基
第3.4.5.6组:各100ml
每组倒7枚平板供6小组下次用
6
四、方法
1.肉膏汤培养基的配制: ⑴称样： 牛肉膏0.5g 蛋白胨1g 氯化钠0.5g
加至100ml蒸馏水 中，加热溶化
(2) 待冷至40～50℃时，矫正酸碱度为pH7.6
(3) 分装于试管内（每管约2ml）置高压蒸汽 灭菌器内灭菌(121.3-20min)。
3
三、材料 牛肉膏、蛋白胨 氯化钠、蒸馏水 琼脂，10%NaOH pH试纸、三角烧瓶 量筒，天平 酒精灯、等。
4
四、方法 培 养 基 配 制 步 骤
⑴调配成分 ⑵溶解 ⑶调节 pH ⑷ 分装 ⑸灭菌 ⑹质量检验 ⑺保存
5
各组所需要配制的培养基
1.肉膏汤培养基 3.普通斜面培养基
第1组:各100ml （ 先分装7支）
半固体斜面培养基的制备细菌培养基的制备一目的掌握培养基的制备方法二原理培养基是人工合成的一种混合营养料用以分离细菌
食品微生物学实验
实验四
1
实验项目
细菌培养基的制备
肉膏汤培养基的制备 普通琼脂平板培养基的制备 半固体斜面培养基的制备
2
一、目的
掌握培养基的制备方法 二、原理
培养基是人工合成的一种混合营养料， 用以分离细菌。基础培养基中含有大多数 常见菌生长繁殖所需要的营养物质，并可 制成液体、半固体、固体三种不同的性状 以供选用。
配制出以下培养基： 1.肉膏汤培养基 2.普通琼脂平板培养基 3.普通斜面培养基
16
六、实验报告要求 实验报告中描述本组所配制的培养基。
七、思考题
何谓培养基？ 培养基的制备过程有哪几个步骤？
实验培养基的配制、消毒与灭菌
2021/4/21
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消毒与灭菌
❖消毒是一般指采用物理、化学和生物的方法 消除物体的表面病原菌和有害微生物营养体 的过程。
❖灭菌则是指采用物理、化学和生物的方法杀 灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子的过程。
❖在微生物实验中，需要进行纯培养，不能有 任何杂菌污染，因此对所用器材、培养基和 202工1/4/2作1 场所都要进行严格的消毒和灭菌。 24
❖ 因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要 高（160～170℃），时间要长（1～2h），但 干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿 的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。
2021/4/21
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高压蒸气灭菌
❖ 高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的灭菌锅 内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。 待水蒸气急剧将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气 阀，继续加热。由于水蒸气无法排出，增加了灭菌锅内 的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导 致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌目的。
品配制而成的培养基 ❖ 半合成培养基:以天然有机物作为微生物营养来
源的同时，适当补充一些成分已知的化学药品所 配制的培养基
2021/4/215按照培养基的物理状态❖固体培养基：加入凝固剂，如1.5% ~ 2.0%琼脂
❖半固体培养基：加入少量凝固剂，如 0.2% ~ 0.7%琼脂
❖液体培养基：不含任何凝固剂
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❖称量药品时，严防药品混杂。称完一种 药品后需要将牛角匙洗净、擦干，再称 取另一药品。瓶盖也不要盖错。
❖药品不要弄错。如：K2HPO4和KH2PO4、 水合形式和无水形式的化合物要注意分 辨。
2021/4/21
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5.培养基的制备
4、8：表示有4和8个试验要做。
2：表示被考察的因素只要求有两个水平。 3、7：表示考察3个或者7个因素。
在组培中可用于同时探求培养基几种成分用量，如细胞分裂素、 生长素、糖和其他成分用量。
例：用正交设计法设计7个因素，2个变量的试验。
1.光照时间（10,12h） 2.光强（1000,2000lx） 3.PH值（5.5,5.8） 4.温度（20，25°C） 5.6-BA（0.5,2.0） 6.NAA（0.5,1.0） 7.糖（2%,4%） 根据因素和水平数量，选择正交表L8（27）---因素 试验 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 1. 1 2 1 2 1 2 1 2 2. 1 1 2 2 1 1 2 2 3. 1 2 2 1 2 1 1 2 4. 2 2 2 2 1 1 1 1 5. 2 1 2 1 1 2 1 2 6. 1 1 2 2 2 2 1 1 7. 2 2 1 2 2 1 2 2
广谱实验法中，把培养基组分分4大类：无机盐、有机物(蔗糖、氨基 酸和肌醇等)、生长素、细胞分裂素。
每类物质选低(L)、中(M)、和高(H)3浓度。4类物质各3浓度的自由组 合即构成包括81个处理的实验。
81个处理中最好的可用4个字母表示。如含中浓度无机盐、低浓度生 长素、中浓度细胞分裂素和高浓度有机物的处理，即为MLMH。 达到这个阶段，再试用不同类型生长素和细胞分裂素即可找到培养基 最佳配方。因不同类型生长素和细胞分裂素对不同植物活性不同。
4.拐点浓度细化：下次试验根据出现的拐点，改变浓度梯度，趋向精确。
二.多因子试验
对两个或两个以上因素进行研究的试验，称多因子实验。可用完全试
验方案，也可选用正交设计方案。完全试验方案具有均衡完全的特点，各
实验4 培养基的制备
4）鉴别培养基(differential medium) 用于鉴别不同类型微生物的培养基
特定的化学反应，产生明显的特征性变化(大肠杆菌在伊红美蓝固体 培养基上呈现金属光泽)
根据这种特征性变化,可将该种微生物与其他微生物区分开来。 5）选择培养基(selective medium)
用于将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基 根据不同种类微生物的特殊营养需求或对某种化学物质的敏感性不 同，在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要 的微生物的生长，有利于所需微生物的生长(如用于沙门氏菌培养的 四硫磺酸钠培养基,其可抑制非沙门氏菌的细菌生长)。
2、接种操作
无菌操作： 火焰附近（酒精灯、煤气灯）进行
任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大营养要素： 碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水
任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理
培养基配制原理
依据不同的微生物对生方法
（1）、选择适宜的营养物质
（2）、营养物的浓度及配比合适
（3）、物理、化学条件适宜(如酸碱度）
在一定条件下含有某种微生物生长繁殖所需的所有营养物质的培养基
一、无菌技术
微生物无处不在，在微生物的操作和研究中无菌 操作的概念必须贯串始终，因此：
1。用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物； 2。在转接、培养微生物时防止其它微生物的污染；
二 培养基
培养基（medium）是人工配制的，适合微生物生长繁殖或 产生代谢产物的营养基质。
周四
营养琼脂：3000ml 6组，（每组500ml） 真菌培养基（沙保劳氏）1200ml 2组 （500ml，700ml） 麦康凯培养基：1100ml 2组（500ml，600ml
实验二培养基的制备
和蛋 ➢ 白胨及肉浸汁中的磷酸盐结合形成CaPO4、MgPO4，
出 ➢ 现沉淀，使培养基不透明。水的作用是溶解营养物质。 ➢ ②蛋白胨 是蛋白质经蛋白酶、酸或碱水解后的中间产物， ➢ 含有胨、肽和氨基酸等成分，主要提供氮素营养。因
其为 ➢ 两性化合物，故有酸碱缓冲作用，可维持pH的稳定。 ➢ ③肉浸汁或牛肉膏 肉浸汁为牛肉的水浸出液，牛肉膏是
➢ [方法和步骤] ➢ 1、普通肉汤培养基
配方： 牛肉膏 0.3g 蛋白胨 1g 氯化钠 0.5g 蒸馏水 100ml
pH 7.4
➢ 配制方法： ➢ ①按配方剂量称取各种试剂，置于搪瓷缸中。 ➢ ②上述成分混合、加热溶解，补足蒸发的水分。 ➢ ③以1mol／L氢氧化钠溶液调pH至7.4～7.6。 ➢ 〔 初配好的培养液是偏酸性的，需用NaOH
实验二 培养基的制备
➢ [实验内容]
➢
普通肉汤及普通琼脂培养基的制备。
➢ [目的要求]
➢ 1、掌握一般培养基制备的原那么和要 求。
➢ 2、熟悉一般培养基制备的过程。
➢ 3、掌握培养基酸碱度的测定。
➢ [培养基的概念和用途]
➢ 概念：
➢
培养基是按照各类微生物的生长需要，
➢
以人工方法配制成的一种混合营养基
一
➢ 种半乳糖硫酸脂，98℃时溶于水，45℃ ➢ 以下重新凝成凝胶状，它在培养基中只
起
➢ 凝固剂的作用，以便观察菌落特征。培 养
➢ 基中琼脂含量在1.5% 以上时呈固体状态， ➢ 在0.5% 左右时呈半固体状态。 ➢ ②指示剂 用来观察pH的变化或其他反响现
➢ [实验材料] 1、器皿及仪器： 量筒(100ml)、搪瓷缸 (500ml)、漏斗、 漏斗架、三角瓶(100ml)、试管、玻璃棒 、 吸管(1ml和10ml各1个)、pH酸度计、滤 纸、电子天平、电磁炉、硅胶塞、包装纸、 扎绳、洗耳球等。 2、试剂： 牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂条或粉、 1 mol／L的NaOH和1 mol／L的HCl溶液、 蒸馏水等。
出 ➢ 现沉淀，使培养基不透明。水的作用是溶解营养物质。 ➢ ②蛋白胨 是蛋白质经蛋白酶、酸或碱水解后的中间产物， ➢ 含有胨、肽和氨基酸等成分，主要提供氮素营养。因
其为 ➢ 两性化合物，故有酸碱缓冲作用，可维持pH的稳定。 ➢ ③肉浸汁或牛肉膏 肉浸汁为牛肉的水浸出液，牛肉膏是
➢ [方法和步骤] ➢ 1、普通肉汤培养基
配方： 牛肉膏 0.3g 蛋白胨 1g 氯化钠 0.5g 蒸馏水 100ml
pH 7.4
➢ 配制方法： ➢ ①按配方剂量称取各种试剂，置于搪瓷缸中。 ➢ ②上述成分混合、加热溶解，补足蒸发的水分。 ➢ ③以1mol／L氢氧化钠溶液调pH至7.4～7.6。 ➢ 〔 初配好的培养液是偏酸性的，需用NaOH
实验二 培养基的制备
➢ [实验内容]
➢
普通肉汤及普通琼脂培养基的制备。
➢ [目的要求]
➢ 1、掌握一般培养基制备的原那么和要 求。
➢ 2、熟悉一般培养基制备的过程。
➢ 3、掌握培养基酸碱度的测定。
➢ [培养基的概念和用途]
➢ 概念：
➢
培养基是按照各类微生物的生长需要，
➢
以人工方法配制成的一种混合营养基
一
➢ 种半乳糖硫酸脂，98℃时溶于水，45℃ ➢ 以下重新凝成凝胶状，它在培养基中只
起
➢ 凝固剂的作用，以便观察菌落特征。培 养
➢ 基中琼脂含量在1.5% 以上时呈固体状态， ➢ 在0.5% 左右时呈半固体状态。 ➢ ②指示剂 用来观察pH的变化或其他反响现
➢ [实验材料] 1、器皿及仪器： 量筒(100ml)、搪瓷缸 (500ml)、漏斗、 漏斗架、三角瓶(100ml)、试管、玻璃棒 、 吸管(1ml和10ml各1个)、pH酸度计、滤 纸、电子天平、电磁炉、硅胶塞、包装纸、 扎绳、洗耳球等。 2、试剂： 牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂条或粉、 1 mol／L的NaOH和1 mol／L的HCl溶液、 蒸馏水等。
培养基的制备及消毒与灭菌ppt实用资料
《基础生物学实验》精品课程
• 在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空 气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀 压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含 有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度 低于饱和蒸气的温度。
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不能灭菌的物质：
• 硝化丙烷 、硝化甘油、硝化纤维，含氮硅酯。 • 三硝基苯、三硝基甲苯、苦味酸、和其它爆炸性
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牛肉膏蛋白胨培养基的制备
❖ 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普 通的细菌基础培养基；
❖ 牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维 生素；
❖ 蛋白胨主要提供氮源和维生素； ❖ NaCl提供无机盐； ❖ 在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝
固剂； ❖ 用稀酸稀碱将其pH调至中性或微碱性。
• 要检查压力表上的指数为“0Mpa”后才能打开 锅盖。
• 外来物质（金属、液体）不能堵塞通风孔，否则 会引起装置故障、起火、短路。
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一般培养基用0.1Mpa，121.5℃,15～ 30min可达到彻底灭菌的目的。灭菌的温度 及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等 具体情况而有所改变。例如含糖培养基用 0.06Mpa,112.6℃灭菌，然后以无菌操作手 续加入灭菌的糖溶液。又如盛于试管内的 培养基以0.1Mpa,121.5℃灭菌20min即可， 而盛于大瓶内的培养基最好以0.1Mpa， 122℃灭菌30min。
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半合成培养基
❖ 在以天然有机物作为微生物营养来源的同时，适 当补充一些成分已知的化学药品所配制的培养基 叫半合成培养基。大多数微生物都能在此种培养 基上生长，应用广泛。
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实验二常用基础培养基的制备
实验二常用基础培养基的制备同学们大家好欢迎来到微生物检验课堂今天我们做的实验是常用基础培养基的制备。
这节课我们一起来学习三种不同的培养基制备的操作;好那我们开始，这节课的实验原理是：培养基是人工合成的一种混合营养料，用以分离细菌。
基础培养基中含有大多数常见菌生长繁殖所需要的营养物质，并可制成液体、半固体、固体三种不同的性状。
实验项目是细菌培养基的制备，最常见的培养基包括：肉汤培养基的制备普通琼脂平板培养基的制备半固体斜面培养基的制备等三种方法实验目的是：掌握培养基制备方法实验材料有：牛肉膏、蛋白胨，氯化钠、蒸馏水琼脂粉，10%NaOH pH试纸、三角烧瓶量筒，天平酒精灯、等培养基的制备步骤：配料→熔化→测定pH→滤过+分装→灭菌→备用。
肉汤培养基:取1000ml蒸馏水,加人牛肉膏3-5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,混合加热溶解，调整pH至7.4-7.6,分装于烧瓶中，可供一般细菌生长。
(2) 普通琼脂培养基:取1000ml肉汤培养基，加入2% ~3%琼脂，加热溶化，过滤,分装于烧瓶或试管中。
(3)半固体培养基:取1000ml肉汤培养基，加人3-5g琼脂，分装于烧瓶或试管中，主要用于保存菌种或观察细菌动力三种培养基分装好后均在全自动高压灭菌器中高压。
高压灭菌的主要方法：首先把制备好的培养基放入灭菌器里，把盖子盖好，温度调制121.3摄氏度，时间调制30分钟，开始高压灭菌，好，灭菌时间到了，取出培养基，待冷却后即可以使用。
利用PPT照片展示结果：一下就是三种培养基制备好后的形态。
注意：通过今天的实验我们已经学到了固体培养基，液体培养基，半固体培养基等三种不同培养基的制备，下课后希望大家可以分组讨论本次实验收获。
好同学们，今天的课程就讲到这里，下节课再见。
生物人教版(2019)选择性必修3 1.2微生物的基本培养技术(共28张ppt)
真菌:酵母菌、毛霉等； 原生生物:草履虫、变形虫等
研究和应用微生物的前提? 实验室培养微生物条件?
一、培养基的配制
阅读教材9页-10页相关内容，回答以下问题： 1.培养基的概念？培养基的种类？培养基的作用？ 2.培养基的成分？各成分的作用？ 3.培养基能直接培养病毒吗？
1.概念
液体培养基：
2.类型及用途
1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用 什么办法来估计培养基的温度？ 2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的 部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？
将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养，观察是否有菌落形成，以确定是否 被污染或灭菌是否彻底。
（2）接种和分离酵母菌
连续划线法
分区划线法
平板划线法的具体操作：
1.将接种环放在 火焰上灼烧，直 到接种环的金属 丝烧红。
2.在火焰旁冷却接 种环。同时，拔出 装有酵母菌培养液 的试管的棉塞
3.试管口 通过火焰
4.在火焰附近 用接种环蘸取 一环菌液
5.试管口通过火 焰，并塞上棉塞
6.在火焰附近将皿盖打开 一条缝隙，用接种环在培 养基表面迅速划三至五条 平行线，盖上皿盖。
④为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台并在酒 精灯火焰附近进行。
3.消毒和灭菌的概念
①消毒：是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体 表面或内部一部分微生物。
②灭菌：是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物， 包括芽孢和孢子。
4.常用的消毒方法
①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。
微生物分离、鉴 定、活菌计数、 保存菌种
培养基的制备-双酶法制糖技术
复合反应
在酸催化作用下，α-1，4 糖苷键与α-1，6糖苷键逐
步被无序地切断，淀粉颗粒 结构被破坏，同时有糊精、 低聚糖、麦芽糖和葡萄糖的 生成。
（C6H10O5）n 淀粉
需要 什么条件
（C6H10O5）x 糊精
C12H22O11 麦芽糖
C6H12O6 葡萄糖
◈ 水解程度不同，所生成糊精分子大小不同，
100%
◈ （3）冷却与脱色 ♠ 用换热器降温
水解液
碱液 活性炭 助滤剂
pH4.8 活性碳 5g/L 助滤剂 5g/L
◈ （4）过滤 ♠ 压滤机
♠ 压滤机
♠ 压滤机
（二）酶 解工艺原
理
◈ 酶解法是用专一性很强的淀粉酶和糖化酶
作为催化剂将淀粉水解成为葡萄糖的方法， 可分为液化过程和糖化过程，由于淀粉的 液化和糖化都在酶的作用下进行的，故酶 解法又称为双酶法。
糖化液中存在各种蛋白质 各种蛋白质的等电点不同 应调节pH接近大部分蛋白质的等电点 玉米淀粉：pH4.8~5.0; 大米：5.4~5.8
◈ 酶解法制备葡萄糖的节能措施
酶解法工艺中有哪些步骤需加热或冷却？
淀粉乳喷射液化 灭淀粉酶 液化液冷却 灭糖化酶
一部分热水循环回冷却塔
一 部 分 热 水 用 于 调 浆
2、复合反应
在淀粉酸水解过程中，一部分生成 的葡萄糖在酸和热的催化作用下， 能通过糖苷键聚合，失掉水分子， 生成二糖、三糖和其它低聚糖等， 这种反应称为复合反应。
2C6H10O6 葡萄糖
C12H22O11 复合二糖
＋
H2O 水
主要经过α-1,6糖苷键聚合成异麦芽糖和 经过β-1,6糖苷键聚合成龙胆二糖。
α-淀粉酶
葡萄糖 葡萄糖
液体培养基的制备及杀菌设备PPT课件
粉 浆
3 5 5 5 5 56 6
蒸汽
蒸汽
4
1 2
图2-15 柱式连续蒸煮流程图 1-粉浆罐 2-泵 3-加热器 4-缓冲器 5-柱子 6-后熟器
粉 浆
图2-16 加热器
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液体培养基的制备及杀菌设备
➢ 真空冷却器
真空冷却：物料在一定真空度下蒸发部分水，
需要汽化潜热，取自料液本身，因而料液很快被 冷却到真空相应的温度。
真空冷却器中真空度产生：一般要借助于水力 喷射泵或蒸汽喷射泵，连续地抽去真空冷却器中 的二次蒸汽。
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液体培养基的制备及杀菌设备
➢ 真空冷却器
冷水
3
真空泵
4
2 冷凝器
醪液
5
1 真空冷却器
真空冷却装置图
为了更完全地从料液中分离蒸汽，真空冷却器中蒸 汽 上 升 速 度 不 应 超 过 1m ／ s ， 在 下 降 管 中 流 速 为 0.8～0.5m／s。
V ——二次蒸汽上升的速度，m/s，一般取0.8~1.0m/s 的范围。一般真空冷却器的直径与高之比为1：1.5~2.0
H (1.5 2.0)D ，m
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液体培养基的制备及杀菌设备
➢ 糖化设备
• 连续糖化罐
把已将温至60～62℃的糊化醪，与糖化醪液或曲乳液混合，将60℃下 维持30～45min，保持流动状态，使淀粉在酶的作用下变成可发酵性糖。
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液体培养基的制备及杀菌设备
（2）几何尺寸的计算： 真空冷却器的几何尺寸，是根据上升的二次蒸汽以小于1.0m/s的速度来确定 的。
D
Wv
3600 V
，m
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(3) 分装于试管内（每管约2ml）置高压蒸汽 灭菌器内灭菌(121.3-20min)。
精选课件
7
四、方法
2.普通琼脂平板培养基配制：
于100ml肉膏汤培养基中加入2.5g琼脂， 高压蒸汽灭菌，待冷至50～60℃，倒制平板。
3.普通斜面培养基 于100ml肉膏汤培养基中加入1g琼脂， 分装于试管内（每管约3-4ml）置高压蒸 汽灭菌器内灭菌(121.3-20min) .
食品微生物学实验
实验四
指导教师：张玲玲
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1
实验项目
细菌培养基的制备
肉膏汤培养基的制备 普通琼脂平板培养基的制备 半固体斜面培养基的制备
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2
一、目的
掌握培养基的制备方法
二、原理
培养基是人工合成的一种混合营养料， 用以分离细菌。基础培养基中含有大多数 常见菌生长繁殖所需要的营养物质，并可 制成液体、半固体、固体三种不同的性状 以供选用。
第1组:各100ml （ 先分装7支）
第2组:100ml （先分装7支）
2.普通琼脂平板培养基
第3.4.5.6组:各100ml
每组倒7枚平板供6小组下次的配制: ⑴称样： 牛肉膏0.5g 蛋白胨1g 氯化钠0.5g
加至100ml蒸馏水 中，加热溶化
(2) 待冷至40～50℃时，矫正酸碱度为pH7.6
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3
三、材料
牛肉膏、蛋白胨 氯化钠、蒸馏水 琼脂，10%NaOH pH试纸、三角烧瓶 量筒，天平 酒精灯、等。
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4
四、方法 培 养 基 配 制 步 骤
⑴调配成分 ⑵溶解 ⑶调节 pH ⑷ 分装 ⑸灭菌 ⑹质量检验 ⑺保存
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各组所需要配制的培养基
1.肉膏汤培养基 3.普通斜面培养基
配制见瓶签说明
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8
五、结果
配制出以下培养基： 1.肉膏汤培养基 2.普通琼脂平板培养基 3.普通斜面培养基
精选课件
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六、实验报告要求
实验报告中描述本组所配制的培养基。
七、思考题
何谓培养基？ 培养基的制备过程有哪几个步骤？
精选课件
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实验课小结
1.各实验小组分析报告本次实验收获体会 2.指导教师进行实验小结