组织化学染色

染料和染色的原理
一、染料的特点：
组织病理学染料是生物学染色剂
对所染组织成分具有亲和力 染色剂中同时具备发色团和助色团才具有染色功
能
发色团是使染料显色的化学团（色原），一种染
料由一个或多个发色团，染料颜色取决于发色团 多少和强弱。
助色团指使色原产生电离成为盐类，对被染物产
生亲和力的原子团
化学成分为网状蛋白，一种特殊的胶原蛋白，抗酸
病理状态下可转化为胶原纤维 具有嗜银性，又称嗜银纤维
HE染色着色淡，特殊染色可显示
结缔组织染色——网状纤维染色
网状纤维染色的原理
网状纤维染色方法很多，但基本原理相同，即经过 氧化剂的氧化使网状纤维对银离子具有选择性的亲和 能力（嗜银性），并在媒染剂的作用下网状纤维吸附 二氨合银离子，在经甲醛将其还原为黑色金属银而显 示出网状纤维。
质，刚果红染色后在偏正光镜下呈“苹果绿”的双折射，具 有独特的原纤维超微结构，大多数由B-折叠层构象的蛋白质 构成。 淀粉样物的沉积与很多疾病有关，不同疾病所构成的淀粉 样物的蛋白质不同。如骨髓瘤相关淀粉样变为免疫球蛋白轻 链；Alzheimer病为淀粉样蛋白B前体。
淀粉样物染色
染色方法和结果：
刚果红染色：淀粉样物，弹力纤维呈红色，核呈 蓝色
染色的常用术语
促染剂：促使染料着色，增强染色能力，但本身不 参与染色反应，如乙酸 异染性染色：组织经过盐基性染料染色后，出现与 染料不同的颜色
分化：指用某种溶液选择性脱去过深的着色，并使 不应着色的组织细胞成分脱色的过程，HE染色时的 盐酸酒精分化 蓝化作用（返蓝）：苏木素在酸性条件下呈红色， 碱性条件下呈蓝色，HE染色时在酸分化后，再用碱 性水使核变蓝，称蓝化
• 中性黏多糖：主要存在于胃黏膜表面上皮、幽门腺、十 二指肠腺等处；
• 酸性黏多糖：其基质成分可分为硫酸性（HID染色呈棕 黑色）和非硫酸性（AB染色呈蓝绿色）两种形式存在， 主要分布于消化道、呼吸道及其他部位的黏液腺分泌物 中； • 黏蛋白：是由糖和蛋白质结合而构成，故又称糖蛋白， 见于各种组织上皮和腺体导管的分泌物中。
糖类物质染色——2、AB染色
应用
• 用于一般黏液性病变的观察。 • 在肿瘤诊断与研究中： ①用于肿瘤类型的鉴别，如黏液腺癌与未分化癌的鉴别， 黏液表皮样癌与鳞癌的鉴别；
②黏液染色还可以证明癌细胞是否浸润间质；
③观察胃黏膜腺体的肠上皮化生等
糖类物质染色——2、AB染色
组织中粘液物质的分类
糖类物质染色
物理机制：
毛细管渗透作用：染色剂沿组织间微孔渗透到组织中。 吸收或溶解作用：组织吸收或溶解染料而着色，如脂肪染 色 吸附作用：染料的色素粒子浸润组织中，因分子引力，色 素粒子被吸附而染色
• 例如脂肪染色:
苏丹类染色剂在脂质中的溶解度＞酒精中的溶 解度 溶解于酒精的苏丹类染色剂与组织中的脂质 接触时，染色剂就从溶液中“转移”到脂质中， 从而使脂质着色。
染色方法的分类
按照染色方法分类 一般方法分类：常规染色，特殊染色等 按主要组织和细胞成分分类：结缔组织染色， 肌组织染色，神经组织染色 按染色对象种类分类：切片染色法，组织块 染色法，大体标本染色法
染色方法的命名
按发明者姓名命名：如Van. Gieson（VG） 染色 按所有染料分类：如苏丹IV染色，锇酸染色 按所染组织分类：如网状纤维染色 其他分类：

染色中易出现的问题和对策
选择适当的组织处理方法：包括固定液和切 片的选择，如脂肪和酶类染色需冰冻切片
染色液的有效期和保存方式 染色液的浓度和pH值 染色时间的控制
染色前切片的预处理：如脱甲醛色素，脱汞 盐固定液的汞结晶等
染色中易出现的问题和对策
• 注意特染的应用范围，如某种病变应用什么方法染色才能 达到目的，一般根据HE切片所见，选择适当的特染方法。 • 必须掌握各种特殊染色的结果，避免导致错误的结论或严 重的误诊，如在网染时把胶元纤维误以为网状纤维。 • 应做阳性切片作对照，保证染色结果的可靠性。 • 染色所用的器皿都必须清洗。
单一染色：用一种染料进行的染色，如甲苯胺蓝染幽门螺 杆菌
多色染色：用两种以上染液染色的方法，如三色染色 对比染色：又称复染或衬染，先将某一成分或结构染色后， 再用另一种染料染其他成分，如苏木素衬染细胞核
染色的常用术语
进行性染色：渐进性染色，采用低浓度的染液，使 组织成分着色自浅入深，直到达到合适强度， 退行性染色：又称后退性染色，先使组织着色过度， 再用某些溶液脱去多余染液，达到合适染色强度 媒染剂：具有促进染色能力，对染料和组织都有亲 和力并与染料和组织结合在一起的试剂。如硫酸铝 钾等

脑膜瘤和胶质瘤：脑膜瘤有网状纤维。胶质 瘤少
结缔组织染色——网状纤维染色
网状纤维染色的应用
某些梭形细胞肿瘤的诊断：已被免疫组化取代，很少用 ①平滑肌瘤的瘤细胞间可见大量平行分布的网状纤维； ②纤维肉瘤则见大量网状纤维密集包绕细胞； ③滑膜肉瘤的梭形细胞产生网状纤维少。
结缔组织染色——网状纤维染色
糖类物质染色——2、AB-PAS染色
AB与PAS共同染色，亦称套染，对于显示和区别酸性 黏液物质与中性黏液物质均有较好效果。
结果： 酸性黏液物质呈蓝色，中性黏液物质呈红色，混合性黏
液物质呈紫红色；细胞核呈浅蓝色。
脂类物质染色
染色方法和结果： 苏丹Ⅲ染色法：脂肪染橙红色，细胞核淡蓝色（切片染 色后不能长期保存)。 Lillie油红－O染色法：脂类物质呈鲜红色或橘红色，细 胞核呈淡蓝色。 以上两种染色的原理：是染料在脂质中的溶解度大于所 用溶液的溶解度，染料被移入脂质中。均需要冰冻切片， 甘油或甘油明胶封固。 锇酸染色：锇酸与脂肪形成不溶于有机质的氢氧化锇； 黑色脂肪呈黑色，类脂质颗粒呈褐色。应用组织块浸染。
染料和染色的原理
二、染料的分类

染料的来源分类：天然和合成染料 化学反应分类：碱性染料、酸性染料、中性染料 用途分类： 细胞核染料：苏木素，核固红，结晶紫等 细胞质染料：伊红，酸性复红，苦味酸等 脂肪染料：油红O，苏丹III，苏丹IV 纤维结缔组织染料：苦味酸，亮绿等
染料和染色的原理
三、染料的原理
糖类物质染色——1、PAS染色
应用： • 肿瘤的诊断和鉴别诊断 • 基底膜厚度的判断（肾病的诊断） • 基底膜的完整性 • 病原菌感染的诊断
糖类物质染色——1、PAS染色
PAS反应阳性的物质
糖类物质染色——2、AB染色
染色原理： 染色机制不清，可能是阿辛蓝中的异硫脲基通 过静电与组织内的多聚阴离子相连。 结果： 酸性粘蛋白（硫粘蛋白和唾液酸蛋白）： 蓝色 蛋白多糖和透明质酸： 蓝色 细胞核：红色
糖类物质（碳水化合物）染色
糖类物质除参与细胞代谢外，现已证实还参与多种细 胞功能活动，包括蛋白折叠，细胞粘附，酶活动及免疫 识别等，糖生物学已成为一门复杂的学科。
糖类可分为单糖，双糖，粘多糖，粘蛋白，粘脂等， 病理学中最有意义的是糖原和黏多糖。 因糖原极不稳定，易自溶，因此做糖原分析的组织应 在取材后立刻固定。糖原是水溶性的，建议最好使用酒 精福尔马林。
网状纤维染色的应用
判断组织坏死的性质和预测坏死后的结局： ①、凝固性坏死：用网染可以观察到早期凝固 性坏死处网状纤维支架还保留的特点。 ②、肝炎的坏死范围和程度：如网状支架塌陷， 则演变成肝硬化。
结缔组织染色——网状纤维染色
网状纤维染色的应用
骨髓网状纤维染色：
580例骨髓病变网状纤维的染色结果
结缔组织染色——胶原纤维染色
糖类物质染色——1、PAS染色（Periodic
Acid Schiff PAS） 染色原理： 过碘酸是一种氧化剂，它能氧化糖类及有关物 质中的1,2-乙二醇基使之变为二醛，醛与Schiff 试剂结合形成亮红色的终产物-碱性品红。形成 颜色的深浅取决于组织内反应的乙二醇浓度。 结果： 糖原和其他PAS阳性物质呈红色，细胞核呈蓝 色
结缔组织染色——网状纤维染色
常用网状纤维的染色方法
Gomori染色法 结果：网状纤维呈黑色，胶原纤维呈黄色或黄 褐色，细胞核呈灰黑色。 特点：此法简单可靠，染色时间短，常用于活 检病理组织检查。
结缔组织染色——网状纤维染色
网状纤维染色的应用
肿瘤的诊断和鉴别诊Biblioteka Baidu：
癌和肉瘤的鉴别：癌巢周围存在网状纤维； 肉瘤中网状纤维围绕每个细胞 尤文氏瘤和淋巴瘤：尤文氏瘤无网状纤维， 淋巴瘤内存在大量网状纤维
结缔组织染色——胶原纤维染色
Van Gieson（V.G）染色：
结果：胶原纤维鲜红色；肌纤维：黄色；细胞核：蓝黑 色或灰色
Masson三色染色：
结果：胶原纤维绿色或蓝色；肌纤维：红色；细胞核： 灰蓝色或灰黑色
结缔组织染色——胶原纤维染色
应用：
显示组织，器官损伤或炎症的修复与纤维化程度，如 早期肝硬化 显示与判断心肌坏死后被纤维组织取代的区域和病变 的新旧程度：HE染色心肌与胶原呈红色，胶原染色则 颜色不同；胶原染色新形成的胶原多呈细丝状，成熟 后则粗大，不规则波浪状 区别透明变性和淀粉样变性 鉴别心肌纤维化和心内膜弹力纤维增生症 肿瘤的鉴别诊断：纤维源性肿瘤的诊断
特殊染色在临床病理学中的应用
染色的意义和目的
用染料对组织切片进行处理，使组织中的不同 成分被染上相应的颜色，产生不同的折射率，以 利于光镜观察和分析。病理染色属于生物性染色 的范畴。
特殊染色（special staining）
应用某些能与组织细胞化学成分特异性结合的显 色剂，显示组织或细胞的正常结构或病理过程中出现 的异常物质、病变及病原体等，称特殊染色（Special staining） 。
结缔组织染色——弹力纤维染色 染色的方法和结果：
Verhoeff铁苏木素染色
结果：弹力纤维呈黑色，细胞核蓝色，胶原 纤维呈红色
结缔组织染色——弹力纤维染色
应用：
（1）显示皮肤组织中弹刀纤维的变化：如硬皮病，皮肤松 解症等 （2）显示与判断心血管疾病： 鉴别心内膜弹力纤维症与心内膜心肌纤维化 动脉粥样硬化时粥样斑块低部弹力板的情况 高血压小动脉的改变 老年性动脉病变，动脉弹力板变性，增厚 （3）观察疾病时弹力板是否破坏
染料和染色的原理
三、染料的原理
化学机制：
组织和细胞中含有碱性和酸性物质，分别与染料中的阳 离子和阴离子结合。
如HE染色：细胞核主要由核酸构成，与碱性染料-苏木 素结合，而胞浆主要由碱性物质构成，与酸性染料-伊红 结合。
染色的常用术语
普通染色：又称常规染色，即指HE染色（haematoxylin and eosin HE） 特殊染色：除HE以外的所有染色，显示特定的组织结构 和成分。
脂类物质染色
应用： 证实和区别脂肪变性。 显示病变的脂质沉着，如动脉粥样硬化斑块内 胆固醇沉积；显示脂肪栓塞；显示先天性类脂质 沉积病，如戈谢病（Gaucher disease），尼 曼－皮克病（Niemann-Pick disease ）等。 脂肪源性肿瘤的诊断和鉴别
淀粉样物染色
淀粉样物质（Amyloid）是一种细胞外无定形，嗜酸性物
常用染色方法和应用
结缔组织染色
结缔组织由细胞和细胞间的骨架成分构成， 分为无定形的间质（如硫酸盐和非硫酸盐黏多 糖）和定形或纤维型间质（如胶原纤维，弹力 纤维。网状纤维）。各种纤维成分的识别有助 于病理学的诊断和鉴别诊断。
结缔组织染色——网状纤维染色
网状纤维的特性
网状纤维是构成组织的网状支架 广泛分布于实质器官内，其中最丰富的区域是肝脏、脾脏、 淋巴结、骨髓、基膜、血管等 形态学上为交织成网的纤细纤维
胶原纤维是结缔组织中含量最多 的一种，皮肤，肌腱，硬膜等处 丰富 纤维母细胞合成，化学成分为胶 原蛋白
不溶于水，在酸性溶液中膨胀 HE染色呈红色，易辨认 出现质和量的改变时，与疾病状
态有关
结缔组织染色——胶原纤维染色
染色原理：
胶原纤维含碱性氨基酸，能够与酸性染料结合，酸 性染料具有不同程度的扩散性，扩散性高的小分子容 易进入结构致密的组织（肌纤维）间隙，扩散性低的 大分子只可能进入结构疏松的组织（胶原纤维）间隙， 从而产生不同的染色。