分子生物学检验完整版
分子生物学检验技术第3章
二、分析鉴定
（七） 其它方法 • Edman降解法测定蛋白质多肽的排列顺序 • 核磁共振（NMR）、荧光光谱法测定溶液中蛋白 质分子的结构 • X射线衍射分析法、小角中子衍射法测定晶体蛋 白质的分子结构等
第三节 蛋白质相互作用的研究
第三节 蛋白质相互作用的研究
一、蛋白质－蛋白质 二、蛋白质－核酸
报告基因
一、蛋白质－蛋白质
• DNA-BD和DNA-AD分开时不能激活转录，只有 当两者在空间上接近时，才能呈现转录因子 的活性。
• 只有当蛋白质X与蛋白质Y间发生相互作用时， 才能激活报告基因的转录，而当两者单独作 用时均无此功能 。
二、蛋白质-核酸
（一）凝胶滞后试验 （二）滤膜结合 （三）甲基化干扰 （四）DNaseⅠ足纹 （五）核酸-蛋白质杂交
二、蛋白质-核酸
（一）凝胶滞后试验 • 蛋白质可以与末端标记的核
酸探针特异性结合，所形成 的复合物电泳时在凝胶中的 泳动速度比未与蛋白结合的 游离探针慢，即表现为相对 滞后 • 该实验可以评价蛋白与核酸 结合的特异性
二、蛋白质-核酸
（二）滤膜结合法 利用硝酸纤维素滤膜不能结合双链DNA，但
可与蛋白质结合的特性，将与蛋白质结合的DNA 片段与游离DNA片段分离开。
一、分 离 纯 化
3.根据电荷 毛细管电泳 离子交换层析
4.根据蛋白质的亲和能力 亲和层析
一、 分 离 纯 化
（四） 蛋白质分离纯化的条件 • 缓冲液 • 盐、金属离子和螯合剂 • 还原剂 • 去垢剂 • 蛋白酶抑制剂 表面效应 • 蛋白质的环境因素 温度 储存
二、分析鉴定
（一）Western印迹技术 （二）二维凝胶电泳（2-DE）技术 （三）图像分析技术 （四）放射性核素标记亲和标签法 （五）蛋白质芯片技术 （六）质谱技术 （七）其它方法
10真菌与其他病原体的分子生物学检验
分子生物学检验的临床意义：
方法简便、快速、敏感、特异 适用于：无症状携带者检测、早期诊断、流行病学调查、
基因分析、耐药检测
19
2、肺炎衣原体
chlamydia pneumoniae (CP) 1989年确定，重要的人兽共患病原体 人类感染很普遍，血清学证实50~90%的成年人
IgG抗体可用于回顾性诊断，对于肺炎支原体肺炎的早期 诊断价值不大
29
肺炎支原体
分子生物学检测方法
PCR, qPCR：
几乎能检测所有已知的人类致病支原体，靶序列： 16S rRNA基因可变区、保守区，P1蛋白基因区
具有很高的敏感性和特异性，且检测方法快速、便捷 但感染后肺炎支原体的持续存在、无症状的支原体携
作复杂、敏感性低、特异性不高 抗原检测： UU抗原是解脲支原体感染时被识别的主要外
膜抗原，具有种特异性。报道方法有：用酶联免疫吸附试 验、荧光标记抗体、肺炎支原体膜蛋白单克隆抗体、反向 间接血凝法，直接检测分泌物和体液中支原体抗原，具有 很高的特异度和灵敏度 血清学方法：有支原体特异性血清学检测、支原体的非特 异血清学方法，对支原体肺炎能起辅助诊断的作用，但检 测特异性抗体的方法尚不能达到早期快速诊断的目的
特异性检测出新型隐球菌 区别变种，不受治疗影响 敏感性更高，可用于痰液、支气管和肺泡灌洗液的
检测
14
二、衣原体的分子生物学检验
沙眼衣原体的分子生物学检验 肺炎衣原体的分子生物学检验
15
衣原体
chlamydia，原核细胞型微生物， 自然界广泛分布，专性活细胞内寄生，广泛寄
分子生物学检验
分子生物学检验第二章临床分子生物学检验标志物1. 分子生物标志物：指可以反映机体生理，病理状态的核酸、蛋白质、代谢产物等生物分子，是生物标志物的一种类型。
2. 中心法则：指遗传信息从DNA传递给RNA，再从RNA传递给蛋白质，即完成遗传信息的转录和翻译的过程。
也可以从DNA传递给DNA，即完成DNA的复制过程。
这是所有有细胞结构的生物所遵循的法则。
在某些病毒中的RNA自我复制(如烟草花叶病毒等)和在某些病毒中能以RNA为模板逆转录成DNA的过程(某些致癌病毒)是对中心法则的补充。
3. 基因组：是一个细胞或一种生物体的整套遗传物质，包括基因和非编码DNA。
4. 原核生物基因组特征：1）原核生物基因组较小：大小一般在106—107碱基对之间；2）原核生物的类核结构：原核生物基因组DNA 位于细胞中央的核区，没有核膜将其与细胞质隔开在蛋白质的协助下，以一定的形式盘曲，折叠包装起来，形成类核；3）原核生物的操纵子结构：原核生物的结构基上百次，又称短串联重复；9. 多基因家族：指由某一祖先基因经过重复和变异所产生的一组基因，在多基因家族中，某些成员并不产生有功能的基因产物，这些基因称为假基因；10. 多态性：当某种变异相对常见，在群体中的频率高于1%时，则称为多态性，频率低于1%的变异称为突变；（错义突变，无义突变，RNA 加工突变）；11. 多态性类型：限制性片段长度多态性；小卫星和微卫星多态性；单核苷酸多态性（主要指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性）；拷贝数多态性（指基因组中较大的片段（200bp—2Mb）发生了拷贝数的变化）；12. DNA甲基化：（1）定义：指生物体在DNA甲基转移酶的催化下，以S—腺苷甲硫氨酸为甲基供体，将甲基转移到特定的碱基上的过程；（2）作用位点：腺嘌呤的N—6，胞嘌呤的N —4，鸟嘌呤的N—7，胞嘧啶的C—5；（3）作用机理：13. 微小RNA：是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，其大小长约20~25个核苷酸，在细胞内主要发挥基因转录后水平调控作用；14. 长链非编码RNA：长度大于200bp的非编码RNA；第四章：核酸杂交技术1. 融解温度（Tm）：DNA的变性会在一个很狭窄的温度范围内发生，这一温度范围的中点被称为融解温度；Tm值的大小取决于核酸分子的G-C含量。
【2024版】分子生物学检验技术教学大纲
可编辑修改精选全文完整版分子生物学检验技术教学大纲第一章原核生物基因组与病毒基因组[目的要求]掌握基因的分子生物学定义;限制性片段长度多态性的概念；质粒的定义与用途；操纵子的结构熟悉病毒基因组与细菌基因组的特点。
原核细胞内核酸含量、种类、功能与组织结构的差异;熟悉转座因子大肠杆菌、HIV与HBV基因组特点[教学时数]3学时[讲授内容]基因的概念基因的生物学定义、基因的分子生物学定义、细胞基因组。
原核生物与真核生物生物种类、原核细胞与真核细胞内核酸含量、种类、功能的差异，操纵子结构。
病毒基因组：重叠基因HBV与HIV等病毒的结构特点细菌基因纽细菌染色体基因组的结构特点;大肠杆菌、质粒。
[复习思考题]名词解释基因、质粒、断裂基因、假基因、限制性片段长度多态性、操纵子问答题1·简述原核细胞基因组特点。
第二章真核生物基因组[目的要求]掌握真核生物基因组的特点;单拷贝序列、中度重复序列与高度重复序列的概念。
熟悉：染色质的结构与要紧成分、核小体是染色质的基本结构单位。
熟悉染色体形态、功能研究中所用术语与新技术简介、朊病毒。
[教学时数]3学时[讲授内容] 真核生物学特点通常特点、C值矛盾、真核生物DNA序列的类型(单拷贝序列、中度重复序列、高度重复序列、人多基因家族、DNA指纹技术(限制性片段长度多态性)。
染色体的要紧成分、染色体的分型、染色体疾病[复习思考题]名词解释单顺反子、外显子、内含子、C值矛盾、单拷贝序列、中度重复序列、高度重复序列问答题真核生物基因组的特点。
第三章癌基因与抑瘤基因[目的要求]掌握癌基因与抑癌基因的概念；癌基因激活的机制熟悉sis家族、src家族、myc与myb家族、P53、RB家族及其表达产物；癌基因与抑癌基因的检测熟悉肿瘤发生的步骤；结肠癌的发病步骤[教学时数]3学时[讲授内容]肿瘤细胞的特征肿瘤病毒与癌基因DNA肿瘤病毒与癌基因;反转录病毒与癌基因。
肿瘤抑制基因肿瘤抑制基因存在的证据;RB基因，p53基因。
分子生物学检验完整版
1病原生物基因组在医学上有何应用？详见书P3a菌种鉴定b确定病毒感染和病毒载量c病毒分析d细菌耐药监测和分子流行病学调查2什么是原癌基因，原癌基因有什么特性，原癌基因可以分为哪些种类以及原癌基因常见的激活机制有哪些？原癌基因是指人类或其他动物细胞(以及致癌病毒)固有的一类基因，能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征的基因总称。
特性：进化上高度保守，负责调控正常细胞生命活动，可以转化为癌基因。
功能分类：生长因子，生长因子受体，信号转导蛋白，核调节蛋白，细胞周期调节蛋白，抑制凋亡蛋白激活机制：插入激活，基因重排，基因点突变，基因扩增，基因转录改变3试述Down综合征（21三体综合征）的主要临床特征及核型。
临床特征：生长发育障碍，智力低。
呆滞面容，又称伸舌样痴呆。
40%患者有先天性心脏畸形。
肌张力低，50%患者有贯通手，男患者无生育能力，女患者少数有生育能力，遗传风险高。
核型：92.5%患者游离型：核型为47，XX(XY),+212.5%患者为嵌合型：46，XX(XY)/47，XX(XY),+215%患者为易位型：46，XX(XY),-14，+t(14q21q)4简述淋球菌感染的主要传统实验室诊断方法及其主要特点，对比分析分子生物学方法的优势1直接涂片染镜检：敏感度和特异性差，不能用于确诊。
2分离培养法：诊断NG感染的金标准，但是其对标本和培养及营养要求高，培养周期长，出报告慢，难以满足临床要求。
3免疫学法：分泌物标本中的非特异性反应严重以及抗体法间的稳定性和条件限制，推广受限。
分子生物学的优点：敏感，特异，可直接从了临床标本中检出含量很低的病原菌，适应于快速检测5、在单基因遗传病的分子生物学检验中，点突变检测常用方法有哪些？1异源双链分析法（HA）2突变体富集PCR法3变性梯度凝胶电泳法4化学切割错配法5等位基因特异性寡核苷酸分析法6DNA芯片技术7连接酶链反应8等位基因特异性扩增法9RNA酶A切割法10染色体原位杂交11荧光原位杂交技术6、简述白假丝酵母菌的分子生物学检验方法白假丝酵母菌分子生物学检验主要包括白假丝酵母菌特异性核酸（DNA RNA）的检测、基因分型和耐药基因分析等。
(完整word)临床分子生物学检验 总
四个阶段：一、以导致遗传病的基因突变位点为靶标，以DNA分子杂交为核心二、以PCR技术为核心三、以生物芯片为核心四、以DNA测序技术为核心广义：分子标志物包括基因组DNA、各种RNA、蛋白质和各种代谢物临床分子生物学检验靶标主要以核酸（DNA和RNA)为主基因组DNA是临床分子生物学检验中最常用的分子靶标病原生物基因1。
菌种鉴定：PCR—测序和PCR—DNA探针杂交;缩短检测时间2。
确定病毒感染和病毒载量:明确感染源,判断病情,监测疗效3.病毒分析:基因型变异产生不同临床症状4。
细菌耐药监测和分子流行病学调查 :随机扩增多态性DNA；指导选择治疗方案，控制病原菌的感染传播基因变异1。
致病基因的分子缺陷 2.线粒体基因突 3。
肿瘤相关基因单基因病1。
致病基因结构发生了改变，影响了编码产物量和质的改变，如血红蛋白病、血友病、Duchenne肌营养不良等。
2。
致病基因中核苷酸三联体重复序列发生高度扩展，如脆性X综合征、亨廷顿病、强直性肌营养不良等。
基因多态性用于：1.基因定位和疾病相关性分析2。
疾病诊断和遗传咨询3。
多基因病的研究4。
器官移植配型和个体识别循环游离核酸检测（包括游离DNA和游离RNA）用于：产前诊断、恶性肿瘤早期诊断、病例检测临床分子生物学检验技术以分子杂交技术、PCR技术和DNA测序技术、芯片技术、双向电泳技术、生物信息学技术为主要技术分子生物学检验技术可用于微生物感染的确诊、感染性病原体的分型、耐药监测。
分子生物学检验技术有利于临床上对遗传性疾病的早期预防、早期诊断、早期治疗。
重要国际生物信息中心：1.美国国立生物技术信息中心（NCBI）2.欧洲生物信息学研究所(EBI） 3。
日本国立遗传研究所(DDBJ）一级核酸数据库有GenBank、EMBL和DDBJ；蛋白质序列数据库有SWISS-PROT、PIR、UNIPRO T等。
蛋白质X射线晶体三维结构数据库有PDB等.蛋白质数据库常用的有SWISS—PROT、 PIR、 PDB数据库。
细菌感染的分子生物学检验
第二节 结核分枝杆菌的分子生物学检验
结核分枝杆菌(TB)，简称结核杆菌，是引起结核 病的病原体。随着抗结核药物的不断发展和卫生 生活状况的改善，结核的发病率和死亡率曾一度 大幅下降。近年，由于艾滋病和结核分枝杆菌耐 药菌株的出现、免疫抑制剂的应用、吸毒、贫困 及人口广泛流动等因素，全球范围内结核病的疫 情死灰复燃。 据WHO统计，全世界约1/3的人感染了结核分枝 杆菌，在某些发展中国家成年人中群中结核分枝 杆菌携带率高达80%，其中的5%~10%携带者可 发展为活动性结核病。
TB是一种革兰氏阳性菌，G+C含量高，其细胞壁 除肽聚糖层外，还含有另外一层由特殊脂质、糖 脂和多糖组成的附加层。TB呈细长略弯曲，常聚 集成团，用抗酸性染色被染成红色。
对养要培求特殊条件，一 般要经4-6周才出现肉眼可 见的菌落。TB通过呼吸道、 消化道和破损的皮肤粘膜 侵入机体，它被吞噬后能 在吞噬细胞内繁殖，导致 巨噬细胞裂解，还可在细 胞外繁殖。
6、扩增结核分枝杆菌直接试验（ AMTDT）
AMTDT以结核分枝杆菌的16SrRNA为扩增模板，采 用转录介导的扩增技术对靶核酸进行扩增，采用化 学发光物吖啶酯标记的cDNA探针与扩增的靶基因杂 交，探针与扩增产物杂交后利用杂交保护试验除去 未杂交的标记探针，最后利用化学发光仪检测化学 发光信号。
结核分枝杆菌天然地对很多抗生素有抵抗力，使得 治疗极其困难。该菌的药物抵抗力主要由于其具有 高度疏水的细胞壁充当渗透屏障。同时，在基因组 中还发现有许多药物抗性决定因子的编码序列，包 括水解酶或者药物修饰酶，例如乙酰转移酶和很多 药物外排泵系统。
抵抗力特点：“三耐四敏” ※耐干燥、耐酸碱、耐孔雀绿（1：13000） ※对湿热、70％乙醇、紫外线、常用抗结核药物（但长
分子生物学检验技术
分子生物学检验技术临床学教案首页授课具体内容:第二章基因与基因组本章教学要求：掌握:基因及基因组的概念熟悉:原核、病毒及真核生物基因组结构两个重要概念：基因组（genome）：一个细胞或一种生物体的整套遗传物质。
基因（gene）：基因组中一个功能性遗传单位，是贮存有功能的蛋白质多肽链信息或RNA 序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。
第一节原核生物基因组原核生物基因组特征什么是原核生物（prokaryote）？细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、放线菌和蓝绿藻等原始生物的总称，是最简单的细胞生物体。
一、原核生物基因组特征☆1.原核生物的类核结构原核生物没有典型的细胞核结构，基因组DNA位于细胞中央的核区，无核膜将其与细胞质隔开，但能在蛋白质的协助下，以一定的组织形式盘曲、折叠包装，形成类核（nucleoid），也称拟核。
2.原核生物的操纵子结构操纵子结构是原核生物基因组的功能单位原核生物的结构基因大多数按功能相关性成簇地串联排列于染色体上。
操纵子（operon）结构:结构基因连同其上游的调控区（包括调节基因、启动基因和操纵基因）以及下游的转录终止信号，共同组成了一个基因表达单位。
操纵子operon:多个功能相关的结构基因成簇串联排列，与上游共同的调控区和下游转录终止信号组成的基因表达单位。
结构基因大多组成操纵子启动子promoter ?-galactosidase半乳糖苷酶z终止子terminator ?-galactoside permease透酶y操纵元件operator ?-galactoside transacetylase半乳糖苷乙酰转移酶 a乳糖操纵子lac operon原核生物的mRNA是多顺反子mRNADNA Promoter Gene 1 Gene 2 Gene 3 Terminator多顺反子mRNA (polycistronic mRNA):原核生物的一个mRNA分子带有几个结构基因的遗传信息，利用共同的启动子及终止信号，组成操纵子的基因表达调控单元。
感染性疾病的分子生物学检验 医学课件
分子生物学检验 ∙
HIV基因组
基因组为RNA双分子，与其它逆转录病毒基本相同 其正链RNA分子大小为
HIV-1 9.3 kb 有3 组共8个基因 HIV-2 9.7 kb 有3 组共9个基因
5’端有帽子结构，3’端有poly(A)结构
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分子生物学检验 ∙
HIV基因组
第一组：逆转录病毒共同的结构基因和侧翼末端重复顺序 （long terminal repeats）
潜伏感染期间，病原体一般不排出体外 病原携带状态 ------ 可以没有临床症状，而能排出病原体
带病原体的种类不同：带病毒者、带菌者与带虫者 不同携带状态 潜伏期携带者、健康携带者、急性与慢性
携带者 是很多传染病的重要传染源
3
分子生物学检验 ∙
感染性疾病的分子生物学检验策略
一般性检出策略（检出病原体）：
第三组：负调控病毒的感染性，成熟或释放的基因
vif（viral infectivity factor） vpu（viral protein U） vpr（viral protein R）
gag（group of antigen)基因：编码核心蛋白 pol （polymerase）基因：编码逆转录酶，DNA聚合酶 env（envelop）基因：编码包膜蛋白 LTRs：不编码任何蛋白，可起始其它病毒基因的表达，无种属特异性
第二组：参与基因表达的调节基因
tat（trans-acting transcriptional gene） rev（regulator of expression of viral protein） nef（negative regulator factor）
1 样本处理（样本处理区） 2 扩增试剂准备（PCR前准备区） 3 加样（样本处理区） 4 RT-PCR反应（检测区）
(完整word)临床分子生物学检验
绪论1.20世纪50年代，Waston和Crick提出了DNA双螺旋结构,标志着现代分子生物学的兴起。
2.从广义上来讲，应用到临床的分子标志物包括基因组DNA、各种RNA、蛋白质和各种代谢物,目前，临床分子生物学检验的靶标主要以核酸(DNA或RNA）为主.第一章:核酸与分子标志物1.分子标志物：可以反映机体生理、病理状态的核酸、蛋白质、代谢产物等生物分子,是生物标志物的一种类型。
核酸分子标志物是分子生物学检验的主要内容，包括基因突变、DNA多态性、基因组DNA片段、RNA和循环核酸等多种形式。
2.DNA的组成：是一种高分子化合物，其基本单位是脱氧核苷酸,每个核苷酸由磷酸、脱氧核糖和含氮碱基3部分组成。
3。
DNA与RNA的区别：2位脱氢。
4。
DNA的结构：①DNA一级结构：各种核苷酸单体沿多核苷酸链排列的顺序，表明该DNA分子的化学构成。
②DNA二级结构：双螺旋结构，DNA双螺旋的直径为2nm,一圈螺旋含10个碱基对,每一圈螺距为3.4nm，每个碱基的旋转角度为36度.维持DNA结构稳定的力量主要是碱基对之间的堆积力，碱基对之间的氢键也起着重要的作用.③DNA三级结构：DNA双螺旋进一步盘曲形成的更加复杂的结构。
5.核小体的形成(真核生物染色体包装过程)：在核小体中,DNA盘绕组蛋白八聚体核心,使DNA缩短为原来的1/7；6个核小体形成螺丝管，缩短为1/6；核小体彼此相连成串珠状染色质细丝，螺旋化形成染色质纤维，进一步折叠成染色单体.6.DNA双螺旋结构的变异：右手螺旋A—DNA、C-DNA、D-DNA、E—DNA、H—DNA、L—DNA、P-DNA，左手螺旋Z —DNA7.RNA主要分为三类：tRNA、rRNA、mRNA 还有一些小型RNA：反义RNA、微小RNA（microRNA，miRNA是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA。
)8.真核mRNA与原核mRNA的区别(简答题)原核mRNA结构简单，为多顺反子,编码序列之间有间隔序列，原核生物mRNA中没有修饰碱基。
分子生物学与检验技术
40
第一章 绪论
一、分子生物学发展历程及其主要的里程碑
（三）深入发展阶段
20世纪70年代以后 1.重组DNA技术的建立和发展 2.后继研究和持续发展阶段
• Oswald Avery （1877-1955）
• 1944年证实DNA是遗传 信息的载体。
22
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第一章 绪论
一、分子生物学发展历程及其主要的里程碑
（二）建立与发展阶段
20世纪50年代到70年代 Watson和 Crick DNA双螺旋结构模型 意义：确立了核酸作为信息分子的结构基础；提出了碱基配 对是核酸复制、遗传信息传递的基本方式；最终阐明了遗传 的物质基础是核酸。这三点为认识核酸与蛋白质的关系及其 在生命中的作用打下了最为重要的基础。
2. 熟悉分子生物学与检验技术的发展及主
要里程碑
3. 了解分子生物学检验技术的临床应用前
景
Introduction
第一节
第二节
第三节
中英文
退 出
第一章 绪论
绪论
现代分子生物学兴起的标志：20世纪50年代Watson 和 Crick DNA双螺丝结构
分子生物学以揭示生命现象本质为目的，以
研究生物分子的结构与功能为对象，为
分子生物学与检验技术
• 徐美兰
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• 黄金大米（Golden Rice）是一种转基因大米，它 通过转基因技术将β-胡萝卜素转化酶系统转入到大 米中而获得，外表为金黄色，故称黄金大米。 • 苏黎世瑞士联邦理工学院的 Ingo Potrykus 教授和 德国弗赖堡大学的Peter Beyer（分别为育种专家 和分子生物学家）是这一大米作用机制的创始人。 • 1999年，研发此大米，并于2004年在美国进行试 验。
分子生物学检验完整版
分子生物学检验完整版分子生物学检验是一门在生命科学领域中具有重要地位的学科，它通过对生物大分子，如核酸和蛋白质的研究和分析，为疾病诊断、遗传咨询、法医学鉴定、农业和畜牧业的改良等众多领域提供了关键的技术支持和科学依据。
首先，让我们来了解一下分子生物学检验的基本原理。
其核心在于利用分子生物学的技术手段，对生物样本中的核酸（DNA 和 RNA）和蛋白质进行检测和分析。
DNA 是遗传信息的携带者，它的序列和结构变化能够反映出个体的遗传特征、疾病易感性以及疾病的发生发展过程。
RNA 则在基因表达调控中起着重要作用，对 RNA 的分析可以帮助我们了解基因的活性和表达水平。
而蛋白质作为生命活动的执行者，其种类、数量和结构的变化也与各种生理和病理过程密切相关。
在实际应用中，分子生物学检验涵盖了众多技术方法。
其中，聚合酶链式反应（PCR）技术是最为常见和重要的之一。
PCR 能够在体外快速扩增特定的 DNA 片段，使其数量达到可检测的水平。
通过设计针对特定基因或序列的引物，PCR 可以用于检测病原体的存在、基因突变的鉴定以及基因分型等。
实时荧光定量 PCR 技术则在 PCR 的基础上，实现了对扩增产物的实时定量监测，大大提高了检测的准确性和灵敏度。
另一个重要的技术是核酸杂交。
它基于核酸分子碱基互补配对的原理，通过将待测核酸与已知序列的探针进行杂交，从而检测待测样本中是否存在特定的核酸序列。
这种技术在基因诊断、病毒检测以及遗传性疾病的筛查中发挥着重要作用。
除了核酸检测，蛋白质的分析也是分子生物学检验的重要组成部分。
蛋白质免疫印迹（Western blotting）技术可以检测特定蛋白质的表达水平和分子量。
酶联免疫吸附测定（ELISA）则能够对蛋白质进行定量分析，广泛应用于疾病标志物的检测和药物研发等领域。
在疾病诊断方面，分子生物学检验展现出了巨大的优势。
例如，对于传染病的诊断，它可以快速准确地检测出病原体的核酸，如新型冠状病毒的核酸检测，为疫情防控提供了有力的支持。
分子生物学检验技术-基因病的分子诊断
携带p53基因突变的人经常是李-佛美尼综合症的患者； APC基因是与大肠直肠癌发生有关的肿瘤抑制基因； BRCA1和BRCA2基因的突变则和乳癌相关；
42
Rb
正常细胞中具有活性的RB蛋白（pRB）在细胞中保持着低磷酸化或无磷 酸化的状态，它与细胞周期调节因子E2F结合，抑制E2F的活性从而抑 制G1期到S期的进行，也就抑制了转录活性。 RB蛋白的失活途径有以下几种：
RAS家族是信号传递通路G-protein的成份，藉由跨膜蛋白与Gprotein的结合将信号传至核内;
蛋白质-酪胺酸激酶( protein tyrosine kinase) ABL是细胞内信号传 递蛋白与信号传递至核内有关;
核内转录因子;
MYC是DNA结合蛋白，而JUN是转录因子；
细胞周期有关的蛋白;
3. 血清胆红素轻～中度增高，溶血危象时显着增高。本病的溶血虽以血管外溶血为主， 但也存在着血管内溶血；
4. 血浆结合珠蛋白降低，血浆游离血红蛋白可能增高； 5. 红细胞半衰期测定显示红细胞生存时间明显缩短至5～15 天[正常为(28±5)天]； 6. 血红蛋白电泳显示HbS占80%以上，HbF增多至2%～15%，HbA2正常，而HbA缺如；
32
癌症的特点
几乎癌组织都是克隆性增殖; 患者的所有癌细胞都起源于单一
的癌细胞; 大多数癌症不能用单基因遗传方
式解释; 某些类型的癌症，亲属发生同类
肿瘤的风险会增加，但不表现孟 德尔遗传; 许多癌症与环境的物理化学因子 或生物因子有关;
造成癌症的因素
遗传因素 一些特殊的基因突变会造成特定的癌症
斑点杂交结果
βΑ/βΑ
分子生物学检测及动物试验标准版
五、放射性自显影
用放射性同位素标记dNTP（2’-单脱氧核 苷酸），测定核酸序列是应用最早。
放射性试剂
a-32p 有强放射性和散射性，少用 a-35S 标记dATP，高自显影条带分辨率
Northern 印迹杂交 (Northern blotting)
一、原理：
是将RNA样品通过琼脂凝胶电泳进行分离 ， 再转移到固相支持物上，用带标记物的探针对 固相膜上的RNA进行杂交，常用于RNA病毒核 酸的检测。
⑦引物的5’端：引物的5’端限定着PCR产物的 长度，它对扩增特异性影响不大，因此可以被修 饰。引物的5’端的修饰包括加酶切位点，标记生 物素、荧光素、地高辛等，引入蛋白质结合DNA 序列，引入突变位点等。
⑧引物的特异性：引物与非特异性扩增序列的 同源性不要超过90%或有8个互补碱基同源。
(2)耐热Taq-DNA聚合酶（Taq酶）：这是在耐热细菌体 内提取的一种DNA聚合酶，可保证在95℃ ，30分钟 以上不会变性失活。0.5-5U/100μL。
①引物长度：15—30个碱基为宜，引物过短会使 特异性降低，引物越长，扩增的特异性越好，但敏感 性相应下降。
②G+C含量：在40%-60%为宜，引物Tm值可用公 式计算：Tm=4（G+C）+2（A+T）
③碱基分布的随机性。应尽量避免具有多聚嘌呤 或嘧啶核苷酸的序列，尤其3’端不应超过3个连续的G 或C，因这样会使引物在G+C富集序列区错误引发。
DNA探 针与 RNA探针相比 ，不易降解 ， 一 般能抑 制 DNA酶活性；
DNA探针标记方法较成熟，制备方法简便。
DNA探针一般长度在几百碱基对，可以是双链DNA， 也可是单链DNA；可以是某一基因的全部序列，也可是部分 序列。
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1病原生物基因组在医学上有何应用？详见书P3a菌种鉴定b确定病毒感染和病毒载量c病毒分析d细菌耐药监测和分子流行病学调查2什么是原癌基因，原癌基因有什么特性，原癌基因可以分为哪些种类以及原癌基因常见的激活机制有哪些？原癌基因是指人类或其他动物细胞（以及致癌病毒）固有的一类基因，能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征的基因总称。
特性：进化上高度保守，负责调控正常细胞生命活动，可以转化为癌基因。
功能分类：生长因子，生长因子受体，信号转导蛋白，核调节蛋白，细胞周期调节蛋白，抑制凋亡蛋白激活机制：插入激活，基因重排，基因点突变，基因扩增，基因转录改变3试述Down综合征（21三体综合征）的主要临床特征及核型。
临床特征：生长发育障碍，智力低。
呆滞面容，又称伸舌样痴呆。
40%患者有先天性心脏畸形。
肌张力低，50%患者有贯通手，男患者无生育能力，女患者少数有生育能力，遗传风险高。
核型：92.5%患者游离型：核型为47，XX（XY）,+212.5%患者为嵌合型：46, XX（XY）/47 ，XX（XY）,+215%患者为易位型：46，XX（XY）,-14 ，+t（14q21q）4简述淋球菌感染的主要传统实验室诊断方法及其主要特点，对比分析分子生物学方法的优势1直接涂片染镜检：敏感度和特异性差，不能用于确诊。
2分离培养法：诊断NG感染的金标准，但是其对标本和培养及营养要求高，培养周期长，出报告慢，难以满足临床要求。
3免疫学法：分泌物标本中的非特异性反应严重以及抗体法间的稳定性和条件限制，推广受限。
分子生物学的优点：敏感，特异，可直接从了临床标本中检出含量很低的病原菌，适应于快速检测5、在单基因遗传病的分子生物学检验中，点突变检测常用方法有哪些？1异源双链分析法（HA）2突变体富集PCR法3变性梯度凝胶电泳法4化学切割错配法5等位基因特异性寡核苷酸分析法6DNA芯片技术7连接酶链反应8等位基因特异性扩增法9RNA酶A切割法10染色体原位杂交11荧光原位杂交技术6、简述白假丝酵母菌的分子生物学检验方法白假丝酵母菌分子生物学检验主要包括白假丝酵母菌特异性核酸（DNA RNA）的检测、基因分型和耐药基因分析等。
1PCR技术：选择高度特异性的天冬氨酸蛋白酶基因设计引物PCR—斑点杂交技术：正向杂交和反向杂交，后者可一次检测多种真菌DNA指纹技术：RFLPRAPD电泳核型分析AP —PCR技术：定义方法简便，快速，特别适合临床应用DNA序列分析：可测定rDNA序列也适用于基因突变引起的耐药基因芯片技术：适用于病原体的耐药研究7、 F VIII基因倒位导致血友病A，DMD基因外显子缺失导致与杜氏肌营养不良，珠蛋白基因突变导致与珠蛋白合成障碍性贫血。
（第11章，P197，P203，P207。
窝觉得大家把题目读三遍就可以了）答：F VIII基因倒位是导致的血友病A的主要原因（占50%）其它基因突变，如点突变，缺失，插入也会导致血友病A。
同理DMD基因外显子缺失是迪谢内肌营养不良（杜氏肌营养不良）发生的主要原因（60%-70%）。
珠蛋白合成障碍性贫血有六种，主要的两种是a珠蛋白生成障碍性贫血和B珠蛋白生成障碍性贫血，基因突变是主要发病原因。
&基因多态性有哪些的临床应用？（P4）答：1、基因定位和遗传病相关性分析；2、疾病诊断和遗传咨询；3、多基因病的研究；4、器官移植配型和个体识别9•第一代测序技术特点。
（p83）答：优点：高读长，准确率一次性达标率高，能很好处理重复序列和多聚序列，易小型化。
缺点：通量低，单个样本制备成本相对较高，难以做大量的平行测序，小规模进行。
10.慢粒融合基因。
急性早幼粒融合基因。
答案：（一）慢粒融合基因（p229）BCR-ABL融合基因：BCR-ABL为t（9；22）（q34;q11）染色体易位所产生的融合基因，可见于25%-40%的成人ALL和4%-6%的儿童ALL，更是CML的重要分子基础（95%），Ph1染色体异常即为t（9 ；22（q34;q11）易位。
（二）急性早幼粒融合基因（p230）（10-529）PML-RARa融合基因：多数急性早幼粒细胞白血病（APL ）有染色体t（15;17）（q22 ；q21）的易位，位于15q22的早幼力粒细胞白血病（PML）基因的17q21的维A酸受体a（RARa）基因融合成PML/RARa。
98%的AML-M3亚型发生该融合基因。
11华法林用药监测常用何种基因多态性，它有何特点。
P264 监测CYP2C9基因多态性，其特点为：CYP2C9约占CYP450总量的20%，参与约12%临床药物的代谢，尤其与磺酰脲类降糖药甲糖宁的代谢特异性有关。
（不肯定，参照P262）12在细胞增殖周期中，染色体的形态最典型和清晰的阶段。
P243 （填空题）有丝分裂中期13单基因遗传病间接诊断是在家系中进行？P192 （填空题）连锁分析和关联分析14染色体异常？原癌基因、核酸分子标志物、病毒感染的完整性检出策略、线粒体基因突变性糖尿病、PCR-RFLP、AP-PCR技术、抑癌基因、准病毒株、核型分析、连锁染色体异常：在受到环境，物理，化学，生物，自身遗传和母亲年龄等因素影响，导致人体染色体数目和结构的异常改变。
原癌基因：是指人类或其他动物细胞固有的一类基因，能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征的基因总称。
核酸分子标志物：是分子生物学检验的主要内容，包括基因突变，DNA多态性，基因组DNA片段，RNA和循环核酸等多种形式。
病毒感染的完整性检出策略：通过分子生物学检验技术对病毒的存在与否作出明确的判断，同时能够诊断出带菌者和潜在性感染者，并能对病毒进行拷贝数测定，基因分型检测及亚型和耐药性鉴定。
线粒体基因突变性糖尿病：（p240）tRNAIeu（UUR）A3243G 是国际上唯一公认的线粒体糖尿病致病突变，是国内外报道的最多，发病率较高的单基因糖尿病突变位点。
（课本上找不到）PCR--PFLP::是对PCR产物作限制性片段的长度多态性分析，是根据PCR产物突变序列是否位于限制性内切酶的酶切位点内设计的。
AP-PCR技术：AP-PCR技术是在对所扩增的基因序列一无所知的情况下随意设计或选择一个非特异性引物，在PCR 反应体系中，首先使引物与模板DNA中许多序列通过错配而复性。
抑癌基因：又称肿瘤抑制基因，为一类可编码对肿瘤形成起阻抑作用蛋白质的基因，正常情况下负责控制细胞的生长和增殖。
准病毒株：即准种，是指HCV感染后，在感染者体内形成以一个优势株为主的相关突变株病毒群。
核型分析：人类的染色体数目和形态的相对恒定，将细胞的染色体按相应的生物固有的染色体形态特征和规定，进行配对，编码和分组的分析过程。
连锁：在疾病家系中，同一染色体上相邻的两个位点因其位置十分靠近，在遗传时两者分离的概率很低。
15HBV感染的病原学诊断目前主要依靠？答：免疫学方法检测HBV的血清学标志物和分子生物学检测HBV核酸。
P14116甲型分亚型的标准？P148 （书上未找到甲型）丙型肝炎5'UTR区的序列最为保守，种系变化程度及进化率都很低，可用于区分主要基因型。
NS5b区变异交大，易于区分不同病毒株，常被选作亚型区分依据。
17淋病奈瑟菌的分子生物学检验最常用的检测目标是？P172 核酸的检测：1.PCR，2实时荧光定量PCR, 3•连接酶链反应（LCR），4.链替代扩增技术（SDA）；耐药性检测：1.DNA测序，2.PCR-SSCP, 3.PCR-RFLP，4•基因芯片技术18最常用的检测大肠杆菌0157 : H7致病基因的方法是？主要检测的靶基因包括？P174 PCR是最常用的检测方法；主要检测的靶基因包括：stx1、stx2、eae、ehxA、saa19胎植入前诊断分子生物学技术主要包括？p2691单细胞PCR技术（步骤包括模板制备、单细胞基因扩增及产物分析）2荧光原位杂交技术（FISH）20.真菌分子生物学检验常用？p1791. PCR技术2. PCR斑点杂交技术3. DNA指纹技术4. AP-PCR 技术5. DNA序列分析6. 基因芯片技术21衣原体的特点。
衣原体能够通过细菌滤器、无肽聚糖、对r-干扰素敏感、基因组小、发育周期独断、专性活细胞内寄生的特殊原核细胞型微生物。
它广泛寄生于人，哺乳动物及禽类，少数致病。
它具有特征意义的特包涵体形态，细胞内定位，染色性。
22?多发性骨髓瘤患者最常见的肿瘤标志物。
3 2微球蛋白（B2MG ）23目前c-erb B-2/HER2用于哪种肿瘤的诊断？答：乳腺癌24常见原癌基因有？抑癌基因有？答：常见原癌基因有：sis、int-2、erb、ras等常见抑癌基因有：APC、P53、Rb等具体见P21225何种常见遗传病可通过染色体检查而确诊？答：Donwn综合征（21三体综合征）具体见P24726根据乙肝表面抗原的抗原性差异，可以将乙肝病毒分为几个血清型？P143答：可以分为10个血清型，其中主要血清型有adr adw ayw ayr27?STRs作为首选的群体遗传学和法医学研究的遗传标志物，其位点分析不可以应用于哪个方面?p285答：1、同卵双生子的区分2、妊娠期胎儿父权的认定3、微量组织来源的鉴定28对于基因背景未知的点突变，通常不采用何种检测方法？P191答：不采用直接检测基因点突变的方法，如等位基因特异性寡核苷酸探针杂交、等位基因特异性PCR、PCR-限制性片段长度多态性分析、基因芯片、PCR-ELISA等技术。
29单基因遗传病主要遗传方式涉及几对等位基因，其传递呈典型的孟德尔式遗传一对30分子生物学检测技术中，需要结合电泳技术的有？蛋白质组学技术（双向凝胶电泳）31常用于结核分枝杆菌感染检测的分子生物学检测技术中，采用杂交保护试验原理的技术是？扩增结核分枝杆菌直接试验32.弓形虫DNA的主要形式是？三种形式：染色体DNA、线粒体DNA和胞质DNA33.采用PCR扩增TP的耐药菌株23srRNA基因，经测序发现A2058位点的碱基突变，用何种分析发现有酶切图谱的变化？PCR-RFLP（PCR--限制性酶切片段多态性分析）34•在医院细菌感染的常用分子学技术中，被认为是菌株分子分型金标准的是？脉冲场凝胶电泳（PFGE）35、高危型人乳头瘤病毒约几种？答：高危型HPV约20 种，最经典的有13 种（16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、73、82 等）。
36、点突变涉及基因的？答：单个碱基（点突变也称为碱基置换，是指单个碱基的改变。
）37、PCR技术是新型隐球菌分子生物学检验最常用的方法，其中FQ-PCR和巢式PCR应用较多，常扩增的目的片段是？答：rDNA的复合体38、采用PCR实时荧光定量PCR技术、巢式PCR和竞争性PCR检测肺炎衣原体DNA一般选择哪部分为靶序列设计引物？答：肺炎衣原体种特异性抗原MOM基因39、镰状细胞贫血的分子机制。