生物化学实验四 酪蛋白的制备
酪蛋白的制备实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除酪蛋白的制备实验报告篇一：酪蛋白的制备----生化实验酪蛋白的制备一、目的1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。
2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。
二、原理牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。
酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。
利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的ph调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。
三、材料、试剂与器具（一）材料新鲜牛奶（一）试剂1、95%乙醇1200mL2、无水乙醚1200mL3、0.2mol/Lph4.7醋酸——醋酸钠缓冲液300ml先配A液与b液A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称naAc·3h2o54.44g，定容至2000ml。
b液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。
取A液1770ml，b液1230ml混合即得ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。
4、乙醇——乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（V/V）（二）器具1、离心机2、抽滤装置3、精密ph试纸或酸度计4、电炉5、烧杯6、温度计四、操作步骤（一）酪蛋白的粗提100mL牛奶加热至40℃。
在搅拌下慢慢加入预热至40℃、ph4.7的醋酸缓冲液100mL.用精密ph试纸或酸度计调ph至4.7。
将上述悬浮液冷却至室温。
离心15分钟（3000r/min）。
弃去清液，得酪蛋白粗制品。
（二）酪蛋白的纯化1、用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3000r/min），弃去上清液。
2、在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。
最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。
3、将沉淀摊开在表面上，风干；得酪蛋白纯品。
（三）准确称重，计算含量和得率。
含量：酪蛋白g/100mL牛乳（g%）式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。
五、注意事项1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调节牛奶液的等电点一定要准确。
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白的制备实验报告一、实验目的本实验旨在通过化学合成法制备酪蛋白，了解酪蛋白的合成过程及影响因素，为进一步研究酪蛋白的性质和应用奠定基础。
二、实验原理酪蛋白是一种含磷蛋白质，广泛存在于哺乳动物的乳汁、骨骼和牙齿等组织中。
本实验采用化学合成法，以甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸和磷酸为原料，在一定条件下进行缩合反应，生成酪蛋白。
三、实验步骤准备试剂和仪器：甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、磷酸、pH试纸、烧杯、磁力搅拌器、温度计、滴定管等。
配制溶液：分别称取适量甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸和磷酸，溶解于去离子水中，配制成一定浓度的溶液。
调节pH：用NaOH或HCl溶液调节溶液的pH至7.0左右。
缩合反应：将甘氨酸溶液加入到缬氨酸和亮氨酸溶液中，置于磁力搅拌器上搅拌，并加热至一定温度（如60℃），滴加磷酸溶液，继续搅拌一定时间（如2小时）。
分离纯化：将反应液冷却至室温，用离心机进行离心分离，收集沉淀物。
然后用去离子水反复洗涤沉淀物，直至洗涤液的pH接近中性。
将洗涤后的沉淀物进行真空干燥，得到粗制酪蛋白。
检测与表征：采用红外光谱仪、紫外可见光谱仪等对粗制酪蛋白进行结构检测与表征。
四、实验结果与分析红外光谱分析：通过红外光谱分析，发现粗制酪蛋白在1650 cm-1附近出现了肽键的吸收峰，表明缩合反应成功生成了蛋白质。
此外，在3400 cm-1附近出现了-OH的伸缩振动峰，表明蛋白质分子中存在大量的亲水基团。
紫外可见光谱分析：通过紫外可见光谱分析，发现粗制酪蛋白在280 nm左右出现了特征吸收峰，表明蛋白质分子中存在共轭双键，具有较好的光学性质。
纯度与收率：通过滴定法测定粗制酪蛋白中目标产物的含量，计算出纯度和收率。
本实验中，所制备的酪蛋白纯度约为80%，收率约为60%。
影响因素分析：通过对实验过程中各因素的分析，发现pH值、温度、反应时间和原料配比对酪蛋白的合成具有重要影响。
当pH值为7.0、温度为60℃、反应时间为2小时、甘氨酸与缬氨酸和亮氨酸的摩尔比为1:1:1时，所制备的酪蛋白纯度和收率较高。
生物化学实验-17 牛乳中酪蛋白的制备
牛乳中酪蛋白的制备
实验类型：综合性 教学时数：6
一、实验目的
1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。 2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。
生物化学实验技术
二、实验原理
牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋 白质。其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的大约80%。 酪蛋白为白色、无味、无臭的粒状固体。不溶 于水、乙醇及有机溶剂，但溶于碱溶液，等电 点为4.7。牛乳在pH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩 余的蛋白质统称乳清蛋白。乳清蛋白不同于酪 蛋白，其粒子的水合能力强、分散性高，可溶 解分散在乳清中。
10分钟，弃去上清液。移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次， 抽干。
将沉淀摊开在表面皿上，风干，即得酪蛋 白纯品。
生物化学实验技术
3、准确称重，计算含量和得率。 酪蛋白含量（g/mL）= 酪蛋白g/25 mL×100% 酪蛋白得率 = 测定含量/理论含量×100% 式中：理论含量为3.5g/100mL。
生物化学实验技术
生物化学实验技术
本法利用蛋白质溶液处于等电点时，蛋白 质分子净电荷为零，失去同种电荷的排斥作用， 很容易聚集而发生沉淀的原理。将牛乳的pH 调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤 沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。 牛乳中酪蛋白含量约为35g/L。
生物化学实验技术
三、仪器与试剂
1、材料：牛奶制品 2、仪器：低速离心机、酸度计（或精密pH 试纸）、水浴锅、烧杯、天平、温度计、布 氏漏斗。 3、试剂：0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液， 95%乙醇，无水乙醚，乙醇-乙醚混合液，冰 乙酸。
生物化学实验技术
四、实验内容
1、粗提 25mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入
酪蛋白的制备实验报告
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酪蛋白是一种重要的乳制品蛋白质，具有丰富的营养价值和广泛的应用价值。
本实验旨在通过酪蛋白的制备过程，掌握蛋白质的提取和分离技术，以及相关的实验操作技能。
首先，我们准备了酪蛋白的原料——牛奶。
将牛奶倒入一个干净的容器中，加
入适量的酸，如柠檬酸或醋酸，搅拌均匀后静置一段时间，待牛奶凝结成块状物质。
接下来，我们使用过滤纸和漏斗将凝结后的牛奶过滤，将固体和液体分离。
过
滤后的液体即为含有酪蛋白的乳清，而固体则是乳清中的酪蛋白。
然后，我们将得到的固体酪蛋白进行洗涤和纯化。
将酪蛋白固体放入洁净的容
器中，加入适量的蒸馏水，轻轻搅拌后静置，使酪蛋白充分溶解。
然后，用过滤纸和漏斗将酪蛋白溶液过滤，去除杂质。
过滤后的酪蛋白溶液即为纯化后的酪蛋白。
最后，我们对酪蛋白进行干燥和凝固。
将酪蛋白溶液倒入浅盘中，放置在通风
干燥的环境中，待其自然干燥凝固。
干燥凝固后的酪蛋白即可得到。
通过本次实验，我们成功地制备了酪蛋白，并掌握了相关的实验操作技能。
酪
蛋白在食品工业、生物工程等领域有着广泛的应用，本实验的成功对我们今后的学习和科研工作具有重要意义。
希望通过不断的实践和探索，能够进一步提高我们的实验技能，为将来的科研工作打下坚实的基础。
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白的制备实验报告
实验目的，通过酸性条件下酪蛋白的沉淀和洗涤，掌握酪蛋白的制备方法，并
对其纯度进行初步检测。
实验原理，酪蛋白是存在于乳制品中的一种蛋白质，它在酸性条件下会发生沉淀。
在本实验中，我们将利用这一特性来制备酪蛋白。
首先将乳清酸化至pH4.6以下，使酪蛋白发生沉淀，然后进行洗涤和干燥，最终得到酪蛋白的粗品。
实验步骤：
1. 准备工作，取适量乳清，准备醋酸和蒸馏水。
2. 酸化，将乳清倒入容器中，加入适量的醋酸，搅拌均匀，使其pH值降至4.6以下。
3. 沉淀，将酸化后的乳清静置一段时间，观察到白色沉淀物即为酪蛋白。
4. 洗涤，用蒸馏水将沉淀物洗涤数次，去除余酸和杂质。
5. 干燥，将洗涤后的酪蛋白沉淀放置于通风处自然干燥，直至完全干燥。
实验结果，通过上述步骤，我们成功地制备出了酪蛋白的粗品。
经过初步检测，得到的酪蛋白呈现白色粉末状，无异味，初步符合酪蛋白的特征。
实验结论，本实验通过酸化乳清的方法，成功制备出了酪蛋白的粗品，并进行
了初步检测。
制备过程简单，操作方便，得到的酪蛋白粗品可用于后续的纯化和分析。
实验注意事项：
1. 实验过程中需注意安全，避免醋酸溅入眼睛或皮肤。
2. 实验操作需在通风处进行，避免吸入醋酸蒸气。
3. 酪蛋白粗品需储存在干燥通风处，避免潮湿和阳光直射。
通过本次实验，我们成功掌握了酪蛋白的制备方法，并对其纯度进行了初步检测。
这对我们进一步深入了解酪蛋白的性质和应用具有重要意义。
希望本实验能为相关研究和应用提供一定的参考价值。
酪蛋白的制备
酪蛋白的制备目的和要求学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。
原理鲜乳中蛋白质的含量为3.4（W/V）%，但因地因时而异，蛋白质含量夏天最低，而秋冬季高。
牛乳总蛋白的80%为酪蛋白。
实际上酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.6，利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH值调至4.6，酪蛋白就沉淀出来。
酪蛋白不溶于乙醇，利用这个性质用乙醇洗涤沉淀物从酪蛋白粗制品中除去脂类杂质。
仪器与试剂恒温水浴，离心机，精密试纸，布氏漏斗，抽滤瓶，温度计。
鲜牛奶，95%乙醇，无水乙醚，0.2mol/l pH4.6醋酸-醋酸钠缓冲液，乙醇-乙醚混合液（1:1 V:V）操作方法1. 将20ml牛乳放到50毫升烧杯中加热到40℃，在搅拌下慢慢加入预热到40℃的pH4.6的醋酸缓冲液20毫升，用精密pH试纸调pH至4.6；2. 将上述悬浮液冷却至室温，5000转/分离心5分钟，弃去上清液，得酪蛋白粗制品；3. 用无离子水洗涤沉淀3次，5000转/分离心5分钟，弃去上清液；4. 在沉淀中加入20毫升95%乙醇，搅拌片刻，将全部旋浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇-乙醚混合液洗涤两次，最后用乙醚洗沉淀两次，抽干；5. 将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品；6. 准确称量，计算含量和得率。
含量：酪蛋白g/100毫升牛乳（g%）得率：，式中理论含量为3.4g/100毫升。
酪蛋白含量与季节有关，另外在热处理乳过程中也有一些乳清蛋白沉淀出来，其沉淀量依热处理条件不同而有差异，因此测定出来的酪蛋白值可能要高于相应的实际值或理论值。
醋酸盐缓冲液母液：A：0.2mol/L醋酸液（11.5 ml，稀释至1000ml）B：0.2mol/L醋酸钠溶液（16.4g C2H3O2Na或27.2g C2H3O2Na·3H2O容至1000ml）。
酪蛋白的提取与测定
牛乳中酪蛋白的制备与浓度测定一、实验目的1、学习从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理，熟悉紫外分光光度计的使用4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度二、实验原理1、准备酪蛋白原理：牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。
牛乳在PH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。
酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。
乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水和能力很强，分散性高，在乳中呈高分子状态。
本法利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。
2、紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理：大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收高峰，可以进行蛋白质含量的测定。
但是核酸在280nm也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在260nm，通过测定在280nm和260nm时A的比值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。
3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理：考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。
考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。
当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。
在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。
三、实验器材与试剂1、制备酪蛋白：烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醚2、紫外光吸收法：紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液3、考马斯亮蓝法：紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃比色皿牛血清白蛋白（0.1mg/ml）、考马斯亮蓝、0.9%NaCl四、实验步骤制备酪蛋白1、将20mL pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液预热至40℃2、将20mL牛奶加热至40℃，在搅拌下缓慢地加入20mL预热的pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3、用精密pH试纸调pH至4.7，可见溶液变为乳白色悬浮液4、待悬浮液冷却至室温，4000rpm离心5min，弃上清，得酪蛋白粗制品5、用蒸馏水洗沉淀3次，3000rpm离心5min，弃上清6、在沉淀中加入20mL95％乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤7、用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次（10ml/次），最后用乙醚洗涤沉淀2次（10ml/次），抽干8、将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品9、准确称量，计算含量和得率紫外光吸收法1．取待测样品溶液置于的石英比色皿中，于分光光度计波长280nm和260nm，分别读取A280nm和A260nm，用生理盐水为比色空白对照。
酪蛋白的制备
（3）加塞放置过夜，乳糖结晶析出，抽滤，用 95%乙醇洗涤产品。 （4） 乳糖成脎试验 取自制乳糖溶于少量水中，浓度约为5%，在试管 中加入1ml乳糖溶液，1ml苯肼试剂，摇匀，试管 口用棉花塞住，在沸水浴中加热，并不时振摇， 加热10～15分钟后，取出放置冷却，乳糖脎成结 晶析出。取少量乳糖脎在显微镜下观察其结晶形 态，可证实为乳糖。 ①苯阱试剂有毒，小心使用，勿触及皮肤，如触 及皮肤先用稀醋酸洗，再用水洗。（选做） （5）旋光法测定含量（选做） 见资料中nunai
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考 马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在 488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色 素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值 与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测 定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时 间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室 温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立， 试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵 敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量， 测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常 用的微量蛋白质快速测定方法。
4．计算酪蛋白的质量浓度和得 率
准确称量从牛奶中分离出的酷蛋白纯品。 (1)计算酪蛋白实际的质量浓度 实际质量浓度以1L，牛奶中酪蛋白的质 量(g)表示。 (2)计算得率 酪蛋白得率／％＝酪蛋白实际的质量浓度 /酪蛋白的理论质量浓度×100 式中：牛奶中酪蛋白的理论质量浓度为35g/L
5．酪蛋白纯度测定 － 考马斯亮蓝法
1 000µg／mL标准蛋 白液（mL） 蒸馏水（mL）
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白的制备实验报告摘要本实验旨在探究酪蛋白的制备方法以及酪蛋白的功能。
通过不同的制备方法，得到不同形态的酪蛋白，并进行生化实验来验证其功能。
实验结果表明，通过不同方法制备的酪蛋白在功能上存在差异，且不同形态的酪蛋白具有不同的功能。
关键词：酪蛋白；制备方法；功能一、引言酪蛋白是牛乳中含量最多的蛋白质，为一种水溶性球形蛋白。
酪蛋白由几种不同的蛋白质组成，其中酪蛋白α和酪蛋白β为主要成分。
酪蛋白具有多种生物功能，如维持皮肤、毛发和指甲的健康，促进骨骼健康等。
因此，研究酪蛋白的制备方法以及其功能对于了解酪蛋白的生物学作用具有重要意义。
二、实验材料1.牛乳；2.酶（胃酸、胰蛋白酶）；3.氨基酸检测试剂盒；4.凝胶电泳试剂盒。
三、实验方法1.酸酶法制备酪蛋白（酪蛋白A）将1L牛乳加热至80°C，加入5mL1M HCl调节pH至4.6左右，搅拌30min。
冷却至室温后放置静置3h，用100μm滤网过滤得到酸性乳清。
乳清加入2mg/mL胃蛋白酶，在37°C下水浴搅拌4h，定时加酸至pH4.0，继续处理1h。
取出混浊的酪蛋白A沉淀；通过离心或过滤等方法，得到纯化后的酪蛋白A。
3.生化实验将纯化后的酪蛋白A和酪蛋白B溶解至同一浓度，进行氨基酸含量测定，比较两者的差异。
将酪蛋白A和酪蛋白B进行凝胶电泳，观察两者的分子量和运动轨迹的差异。
四、实验结果通过酸酶法制备的酪蛋白A表现为曲线状纤维丝状，胰蛋白酶法制备的酪蛋白B为球状结晶状，两者的形态差异明显。
通过氨基酸含量分析发现，酪蛋白A中含有较高含量的脯氨酸和苯丙氨酸，而酪蛋白B中则含有较高含量的谷氨酸和组氨酸。
凝胶电泳结果显示，酪蛋白A分子量大于酪蛋白B，且两者的运动轨迹存在明显差异。
五、实验讨论通过不同的制备方法制备的酪蛋白形态、氨基酸组成和分子量存在差异，这些差异可能影响酪蛋白的生物学作用。
例如，酪蛋白A中较高的脯氨酸和苯丙氨酸含量可能与其维持皮肤、毛发和指甲的健康有关。
生物化学实验设计
实验：从牛奶中分离制备酪蛋白一、实验目的与要求：学习从牛奶中分离制备酪蛋白的原理和方法。
二、实验基本原理：一种蛋白质混合液，如果需将所有的蛋白质与其他杂蛋白质分离出来，可根据这种蛋白质与其他杂蛋白理化性质的差异，用适当的方法将该蛋白质从蛋白质混合液中分离出来。
一般常用的分离方法（粗分离）有等电点，演盐析法，有机溶剂的分级沉淀法等。
这些方法简便、处理量大，能除去大量的杂蛋白，又能浓缩蛋白质溶液。
牛奶中的主要蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。
酪蛋白是一些含磷蛋白的混合物，等电点为4.7，且不溶于乙醇。
利用蛋白质在等电点是溶解度最低的原理，将牛奶的PH调至4.7时，酪蛋白就能沉淀出来，用乙醇，无水乙醚洗涤沉淀物，除去脂类等杂质后便可得到较纯的酪蛋白。
三、实验材料与试剂：1、实验材料：纯鲜牛奶2、实验试剂：（1）0.2mol/L乙酸——乙酸钠缓冲液（PH4.6）（2）95%乙醇（3）无水乙醚（4）无水乙醇——无水乙醚混合液[1:1(V/V)]四、实验器材：1、离心机2、离心管（50ml）3、精密PH试纸或酸度计4、抽滤装置5、100℃温度计6、恒温水浴箱（40℃）7、电子天平 8、烧杯 9、量筒10、吸管及表面皿五、实验操作方法：1、酪蛋白的分离制备（1）将10mL牛奶加热到40℃，倒入50mL离心管中，在搅拌下慢慢加入预热到40℃、PH4.6的0.2mol/L乙酸——乙酸钠缓冲液10mL，用PH试纸或酸碱度检验，混合物的最后PH应是4.6。
（2）将上述悬浮液冷却至室温，离心5min（5000r/min）。
弃去上清液。
得酪蛋白粗制品（沉淀物）。
（3）用水洗沉淀2次，向沉淀中加入20mL左右的水（用玻棒将沉淀打碎）。
离心5min（5000r/min）。
弃去上清液。
（4）用乙醇，无水乙醚洗涤沉淀，在沉淀中加入20mL95%乙醇，搅拌片刻（尽可能充分地把沉淀块打碎）将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤，用无水乙醇——无水乙醚混合液洗涤沉淀2次，抽干。
制备酪蛋白实验报告
一、实验目的1. 了解酪蛋白的化学性质和生理功能。
2. 掌握从牛奶中提取酪蛋白的方法。
3. 学习蛋白质的等电点沉淀法。
二、实验原理酪蛋白是牛奶中含量最高的蛋白质，约占牛奶蛋白质总量的80%。
酪蛋白是一种含磷蛋白质，具有等电点，当pH值等于等电点时，酪蛋白的溶解度最低，会以沉淀形式从牛奶中析出。
本实验采用等电点沉淀法从牛奶中提取酪蛋白。
三、实验材料与仪器1. 材料：新鲜牛奶、95%乙醇、无水乙醚、0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液、精密pH试纸、离心机、烧杯、温度计等。
2. 试剂：NaAC·3H2O、优级纯醋酸、蒸馏水。
四、实验步骤1. 配制醋酸-醋酸钠缓冲液取NaAC·3H2O 54.44g，定容至2000mL，得到0.2mol/L醋酸钠溶液（A液）。
取优级纯醋酸12.0g，定容至1000mL，得到0.2mol/L醋酸溶液（B液）。
取A液1770mL，B液1230mL混合，得到3000mL 0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液。
2. 酪蛋白的粗提取100mL新鲜牛奶，加热至40℃，在搅拌下慢慢加入100mL预热至40℃的醋酸-醋酸钠缓冲液，用精密pH试纸或pH计调节pH至4.7。
将混合液冷却至室温，转入离心杯中，以3000r/min离心15min。
弃去清液，得到酪蛋白粗制品。
3. 酪蛋白的纯化用水洗涤沉淀3次，离心10min，弃去上清液。
在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌，悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇-乙醚混合液清洗沉淀2次。
最后用乙醚清洗沉淀2次，抽干。
五、实验结果与分析1. 酪蛋白的提取根据实验步骤，成功从牛奶中提取了酪蛋白，观察到沉淀的形成。
2. 酪蛋白的纯化通过乙醇、乙醚混合液和乙醚的清洗，得到较为纯净的酪蛋白。
六、实验结论1. 成功从牛奶中提取了酪蛋白。
2. 掌握了等电点沉淀法提取蛋白质的方法。
3. 酪蛋白在牛奶中的含量较高，具有重要的生理功能。
酪蛋白的制备3
酪蛋白的制备一，原理等电点沉淀（选择性沉淀）利用蛋白质在等电点时溶解度最低的性质。
注意：调节溶液到蛋白质等电点时，可以使蛋白质溶解度最低，但是并不意味着蛋白质会沉淀出来。
二，40℃水浴预热10分钟(HAC缓冲液同时预热)用滴管加入醋酸缓冲液约2ml(pH4.8)离心，10000转/分，5分钟。
1、布朗运动加速蛋白分子的碰撞2、等电点附近蛋白质的溶解度最低用4ml蒸馏水洗涤离心，10000转/分，5分钟除去沉淀中的可溶部分95%乙醇洗涤离心，10000转/分，5分钟除去沉淀中的脂类物质脱水乙醚2ml洗涤离心，10000转/分，5分钟进一步脱水0.1mol/L NaOH 2ml溶解酪蛋白是酸性蛋白质，溶解于碱性溶液中，方便下次双缩脲法测定其含量。
三，仪器操作和基本操作离心机操作的注意事项1.使用各种离心机时，必须事先在天平上精密地平衡离心管和其内容物，平衡时重量之差不得超过各个离心机说明书上所规定的范围，每个离心机不同的转头有各自的允许差值，转头中绝对不能装载单数的管子，当转头只是部分装载时，管子必须互相对称地放在转头中，以便使负载均匀地分布在转头的周围。
2.离心过程中不得随意离开，应随时观察离心机上的仪表是否正常工作，如有异常的声音应立即停机检查，及时排除故障。
离心时不准开盖，不准用手停止转头。
3.装载溶液时，要根据各种离心机的具体操作说明进行，根据待离心液体的性质及体积选用适合的离心管，有的离心管无盖，液体不得装得过多，以防离心时甩出，造成转头不平衡、生锈或被腐蚀，而制备性超速离心机的离心管，则常常要求必须将液体装满，以免离心时塑料离心管的上部凹陷变形。
每次使用后，必须仔细检查转头，及时清洗、擦干，转头是离心机中须重点保护的部件，搬动时要小心，不能碰撞，避免造成伤痕，转头长时间不用时，要涂上一层上光腊保护，严禁使用显著变形、损伤或老化的离心管。
四，思考1、请问用缓冲液、乙醚、乙醇洗涤沉淀的目的是什么？2.如何正确使用移液管量取溶液？3.使用离心机时有哪些注意事项？。
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白的制备实验报告酪蛋白的制备实验报告一、引言酪蛋白是一种重要的蛋白质，在食品工业、医药领域和生物科学研究中都具有广泛的应用价值。
本实验旨在通过酪蛋白的制备过程，了解其制备原理和方法，并探究实验条件对酪蛋白产率的影响。
二、实验材料与方法1. 实验材料：- 牛乳：新鲜牛乳1000ml- 醋酸：纯醋酸100ml- 酪蛋白试剂：酪蛋白提取试剂盒2. 实验方法：- 步骤一：将1000ml牛乳倒入锅中，加热至80℃，保持温度10分钟。
- 步骤二：将100ml纯醋酸加入牛乳中，搅拌均匀。
- 步骤三：将混合液静置20分钟，待凝块形成。
- 步骤四：用纱布过滤凝块，收集蛋白质沉淀。
- 步骤五：将沉淀与酪蛋白试剂按比例混合，制备酪蛋白溶液。
三、实验结果与分析1. 实验结果：- 经过实验操作，成功制备了酪蛋白溶液。
- 蛋白质沉淀的收率为40%。
2. 实验分析：- 在实验过程中，加热牛乳能够破坏脂肪膜，使蛋白质易于析出。
- 醋酸的加入能够改变牛乳的酸碱度，促使酪蛋白凝聚成块。
- 过滤凝块时使用纱布能够有效分离酪蛋白沉淀与乳清。
四、实验讨论1. 实验条件对酪蛋白产率的影响：- 温度：在80℃下加热牛乳能够促进蛋白质的析出，但过高的温度会导致蛋白质变性，影响产率。
- 酸度：适量的醋酸能够使酪蛋白凝聚成块，但过多的醋酸会使酪蛋白溶解度增加，降低产率。
- 时间：静置时间过短，酪蛋白凝块未充分形成；静置时间过长，酪蛋白易被细菌污染，影响产率。
2. 酪蛋白的应用价值：- 食品工业：酪蛋白可用于制作乳制品、奶酪、酸奶等，增加产品的营养价值和口感。
- 医药领域：酪蛋白具有抗菌、抗炎、抗氧化等生物活性，可用于药物载体和医用材料的制备。
- 生物科学研究：酪蛋白在细胞培养、基因工程和生物学实验中具有重要作用，可用于细胞培养基的配方和蛋白质分离纯化。
五、实验总结通过本次实验，我们成功制备了酪蛋白溶液，并了解了酪蛋白的制备原理和方法。
实验条件对酪蛋白产率有一定影响，需要在适宜的温度、酸度和时间下进行操作。
牛乳中酪蛋白的制备实验报告
牛乳中酪蛋白的制备实验报告实验目的：掌握牛乳中酪蛋白的制备方法。
实验原理：牛乳中含有丰富的酪蛋白，可以通过调节pH值和添加酸性物质来使酪蛋白凝聚并沉淀。
实验器材与试剂：1. 牛乳2. 醋酸或柠檬汁3. pH试纸4. 试管或锥形瓶5. 酒精灯或电热板6. 离心机或漏斗和滤纸7. pH调节剂实验步骤：1. 取适量的牛乳倒入试管或锥形瓶中。
2. 添加少量的pH调节剂（醋酸或柠檬汁），同时观察试管中的液体颜色变化。
3. 使用pH试纸检测试管中的pH值，确保其达到需要的酸性条件。
4. 将试管（或锥形瓶）置于酒精灯或电热板上加热，加热至牛乳开始沸腾。
5. 烧热约5分钟后，关闭酒精灯或电热板，待试管中的液体冷却至室温。
6. 可选择使用离心机进行离心，或者使用漏斗和滤纸将液体过滤，得到沉淀。
7. 将沉淀储存在干燥的容器中，即可得到制备好的酪蛋白。
实验结果与分析：根据实验操作可以得到一定量的酪蛋白沉淀。
如果沉淀量较少，可能是因为pH值的调节不当或加热时间过短导致酪蛋白无法充分凝聚。
实验注意事项：1. 操作过程中要注意使用酒精灯或电热板时的安全问题，避免发生火灾或烫伤。
2. 操作时要注意保持试管或锥形瓶的干净，以避免其他杂质对实验结果的影响。
3. 在添加pH调节剂时应慎重，防止pH值过低或过高的情况发生。
4. 在离心或过滤沉淀时，要注意避免将沉淀溅出或损坏滤纸。
实验总结：通过本实验，我们成功地制备了牛乳中的酪蛋白。
实验的成功与否与调节pH值的准确性和加热时间的充分性有关。
这个实验方法可以用于其他酪蛋白的制备和分离过程中。
生物化学(上)实验
生物化学（上）实验实验一、氨基酸的纸层析一、实验目的：1、通过氨基酸的分离，学习并掌握纸层析的原理和操作技术；2、掌握影响分配系数的因素。
3、学会分析未知样品的氨基酸成分。
二、原理滤纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。
有机相流经固定相支持物时，与固定相之间连续抽提，使物质在两相间不断分配而得到分离。
溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示：R f＝原点到层析斑点中心的距离/ 原点到溶剂前沿的距离物质结构、溶剂系统的物质组成等因素都会影响Rf值。
三、实验材料、仪器和试剂：1、实验材料：谷氨酸、组氨酸、脯氨酸、亮氨酸标准品2、仪器：(1)毛细管(2)电热吹风机(3)层析缸(4)层析滤纸（5）小型玻璃喷雾器（6）铅笔、直尺等。
3、试剂：（1）氨基酸标准溶液：亮氨酸、脯氨酸、谷氨酸、组氨酸标准品。
（2）溶剂系统：正丁醇：甲酸：水=15：3：2（体积比）摇匀；（3）0.25%的水合茚三酮溶液。
四、实验步骤：1、样品的准备：称取谷氨酸、组氨酸、脯氨酸、亮氨酸标准品各1mg混合溶于10%异丙醇中。
2、滤纸的准备：取一长方形滤纸，在滤纸纵向对应的两边距边沿2cm处，各画两条平行线，一条作前沿标志，一条作点样线，在点线上每隔2cm画一个“+”作为点样位置，共5个点。
3、点样：用毛细管点样，中间的点混合氨基酸，两侧点四种标准氨基酸；每个点样点重复点5次，每点一次用电吹风吹干后再点下次（此时，用冷风吹干，防止氨基酸变性降解），点样点的直径应控制在2mm左右，点样完毕用大头针将滤纸做成筒形，点样面向外,注意纸的两边不要接触。
4、展层：向层析缸中加入层析溶剂，液层不要超过点样线，（高约1.5cm，约50－60ml 溶剂）将滤纸点样点朝下放入层析溶剂中，将层析缸密闭，待溶剂到达标志线后取出，冷风吹干。
5、显色：用喷雾器将0.25％茚三酮显色剂均匀喷在滤纸上，热风（加快反应）反应吹干显色。
酪蛋白的制备实验报告
一、实验目的1. 了解酪蛋白的基本性质及其在牛奶中的存在形式。
2. 掌握从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。
3. 学习利用等电点沉淀法提取蛋白质的实验操作。
二、实验原理牛奶中的主要蛋白质为酪蛋白，其含量约为35g/L。
酪蛋白是一种含磷蛋白质的混合物，具有等电点4.7。
在等电点时，酪蛋白的溶解度最低，因此可以通过调节牛奶的pH值至4.7，使酪蛋白沉淀出来。
随后，通过洗涤、离心等操作，可以得到纯净的酪蛋白。
三、实验材料与试剂1. 材料：新鲜牛奶2. 试剂：- 95%乙醇- 无水乙醚- 0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液- 精密pH试纸或酸度计- 离心机- 抽滤装置- 电炉- 烧杯- 温度计四、实验步骤1. 酪蛋白粗提- 将25mL新鲜牛奶加热至40℃。
- 在搅拌下慢慢加入预热至40℃的0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液25mL。
- 用精密pH试纸或酸度计调节pH值至4.7。
- 将上述悬浮液冷却至室温。
- 离心15分钟（3000r/min）。
- 弃去清液，收集沉淀物。
2. 酪蛋白纯化- 将收集到的沉淀物用水洗涤3次，离心10分钟，弃去上清液。
- 在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌。
- 将悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
- 用乙醇-乙醚混合液清洗沉淀2次。
- 最后用乙醚清洗沉淀2次，抽干。
3. 干燥与称重- 将得到的酪蛋白沉淀物在电炉上低温烘干。
- 称量干燥后的酪蛋白，记录质量。
五、实验结果与分析1. 通过实验，成功从牛奶中提取出酪蛋白。
2. 干燥后的酪蛋白呈白色粉末状，无味无臭。
3. 实验过程中，通过调节pH值至4.7，使酪蛋白沉淀出来，验证了等电点沉淀法的有效性。
六、实验总结本次实验成功从牛奶中提取出酪蛋白，并对其进行了初步纯化。
通过实验，我们了解了酪蛋白的基本性质及其在牛奶中的存在形式，掌握了从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。
同时，本次实验也验证了等电点沉淀法的有效性，为后续相关研究提供了基础。
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实验四酪蛋白的制备
一、目的要求
学习和掌握从牛乳中制备蛋白的原理和方法；掌握等电点沉淀法提取蛋白质的原理和方法；掌握离心方法。
二、实验原理
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5g/L。
酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7.利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。
三、材料、器材与试剂
1〉材料
鲜牛奶。
2〉器材
离心机、抽滤装置、精密pH试纸、电炉、烧杯、温度计、玻棒、漏斗、滤纸、滴管。
3〉试剂
(1) 95%乙醇。
(2) 无水乙醚。
(3) 0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液。
A液：0.2mol/L醋酸钠溶液，称取CH3COON a·3H2O 54.44g，用蒸馏水定容至2000ml。
B液：0.2mol/L醋酸溶液，称取优级纯醋酸(含量大于99.8%)24.0g，定容至2000ml。
取A液1770ml，B液1230ml混合即可得pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml。
(4)乙醇-乙醚混合液的配制：乙醇-乙醚=1:1(体积分数)。
四、实验步骤
(1)将20ml牛奶加热至40°C，在搅拌下慢慢加入预热至40°C、pH4.7的醋酸缓冲液20ml。
用精密pH试纸调pH至4.7，将上述悬浮液冷却至室温，离心15min(3000r/min)，弃去上清液，得到酪蛋白粗制品。
(2)用水洗1次，离心10min，弃去上清液。
(3)在沉淀中加30ml乙醇，搅拌片刻，将全部悬浮液转移至布氏漏斗中离心10min，弃上清液，用乙醇-乙醚混合液洗1次。
最后用乙醚洗沉淀1次，抽干或滤纸过滤得到湿的酪蛋白。
(4)将沉淀摊开，风干；得到酪蛋白纯品。
五、结果及处理
准确称重，得20ml牛乳中酪蛋白含量(g)，按下式计算酪蛋白的得率：
测得含量
得率(%)= 理论含量×100
式中，理论含量为3.5g/100ml牛乳。
实验结果：
(1.426-0.795) ×5
得率(%)= 3.5 ×100=90.14%。