第14章维生素类药物的分析优秀课件
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药物分析-14维生素类药物的分析
§14 维生素类药物的分析·脂溶性维生素：VitA、D2、D3、E、K1等·水溶性维生素：VitB族（B1、B2、B6、B12）、VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺一、维生素A中国药典收载的维生素A是指人工合成的维生素A醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液。
（一）结构与性质1.具有一个共轭多烯侧链的环己烯·具有UV吸收·存在多种立体异构化合物2.不稳定性（1）易发生脱氢、脱水、聚合反应·脱氢维生素A（A2），脱水维生素A（A3）效价低于维生素A ·鲸醇（维生素A醇的二聚体）无生物活性（2）共轭多烯侧链易被氧化维生素A应凉暗处保存，充氮气或加抗氧剂★3.与三氯化锑发生呈色反应4.溶解性不溶于水，乙醇中微溶；易溶于有机溶剂和植物油等（二）鉴别试验1.三氯化锑反应条件: 无水（SbCl3水解），无醇（和碳正离子作用使其电荷消失）。
2.UV法（BP2003）VitA有一个吸收峰，盐酸催化下加热30s生成脱水VitA，有三个吸收峰，且红移（向长波长位移）。
3.TLC法·BP 对照品法（供试品与不同VitA酯类），显色剂：三氯化锑·USP 规定斑点颜色和Rf值，显色剂：磷钼酸（氧化剂）12（三）含量测定 ★1.三点校正法 （1）原理①杂质的吸收在310~340nm 波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；②物质对光的吸收具有加和性。
（2）波长的选择λ1为VitA 的λmax ；λ2、λ3为分别在λ1的两侧各选一点 ①等波长差法——VitA 醋酸酯nm 12340316328=∆λλλλ，、、)2(52.3340316328328A A A A --=（校正）②等吸收比法——VitA 醇33431032576A A A == 334310325325260.4555.2815.6A A A A --=（校正）（3）测定方法①直接测定法（等波长差法）——高纯度维生素A 醋酸酯 Ⅰ核对λmax/329~326max 328改用造化法与规定值比较求否是−→−−→−∈A A nm i λ Ⅱ计算吸收度比及比值差规定吸光度比值-328/A A iⅢ判断差值是否超过±0.02，确定用A 或A 校正%15%3)3%%,15(]%3,%3[32802.032832832802.0计算用改用皂化法＜或＞计算用计算用、计算无超过（校正）（校正）有超过A f f A f A f f A −−−−→−→-+→--∈→+-∈→−−−−→−±±)2(52.3340316328328A A A A --=（校正）%100328328328⨯-=A A A f （校正）Ⅳ求（样品）%11cm E lc AE cm ⨯=)%(%11（样品）·注意：（纯品）（样品）%11%11cm cm E E ≠，c 为混合样品的浓度。
维生素类药物的分析课件
• 测定对象：VA醇
4、测定方法 首先判断用哪个吸收度(A328 or A328(校正)）进行 含量计算。 第一法：供试液浓度为9～15IU/ml，溶剂为环 己烷，在300、316、328、340、360nm五个波 长处测定吸收度。 1）最大吸收波长在326～329nm之间，计算吸 收度比值Ai /A328，并与规定值相减，差值不超过 ±0.02，则用A328计算含量。
S
KOH /乙醇
皂化
液植Vit物A 醋油酸酯甘油 和Vit脂A 醇肪 酸
盐
乙醚提取除去植物油的干扰挥干乙醚 异丙醇
溶解 稀释至9～15IU / ml 于300、310、325、
334nm 处 测Ai
A325校正 6.815A325 2.555A310 4.260A334
f A325(校正) A325 100% A325
氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵 碱)
1. 溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性 2. UV:246nm(盐酸液) 3. 硫色素反应
OHO 硫色素正丁醇 蓝色荧光
4. 碱性：嘧啶环 —— 伯氨，噻唑环 —— 季铵 ❖ 可与酸成盐 ❖ 与生物碱↓→↓ ❖ 含量测定 —— 非水碱量法
二、鉴别试验
1. 硫色素反应（维生素B1专属反应）
5、讨论 1）维生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程
式法推导而来：维生素A醇的吸收度校正公式是用相似 三角形法推导而来。
2）在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波 长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定 。如果仪器波长精度不准确时，会产生较大误差。因此 ，在测定前务必要校正波长，并可用全反式维生素A进 行测定，比较测定结果和比值是否与对照品相符合，以 进一步核对仪器波长是否准确。测定的样品应不得少于 两份。
维生素类药物的分析.ppt
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3
第一节 维生素A的分析
全反式
R : -H -COCH3
维生素A醇 维生素A醋酸酯
-COC15H31 维生素A棕榈酸酯
2019-9-2
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4
一、结构与性质
（一）结构：具有共轭多烯侧链的环己烯
m ax 相对生物效价 顺反异构
维生素A
325.5
100%
全反式
新维生素Aa 328
A 328
第二法
－15%
2019-9-2
－3% 0
f谢谢您的观赏
3%
26
VitAD胶丸中VitA的含量测定
精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平 均装量0.08262g/丸）的内容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环 己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶 中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最 大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为
75%
2－顺
新维生素Ab 320.5
24%
4－顺
新维生素Ac 310.5
15%
2，4－顺
异维生素Aa 323
21%
6－顺
异维生素Ab 324
24%
2，6－顺
2019-9-2
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5
共轭多烯侧链易发生脱氢、脱水、聚合反应 VitA2
VitA3
2019-9-2
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鲸醇 6
2019-9-2
2019-9-2
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44
对照液 + NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇
S
维生素类药物的分析.ppt
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3
第一节 维生素A的分析
全反式
R : -H -COCH3
维生素A醇 维生素A醋酸酯
-COC15H31 维生素A棕榈酸酯
2019-10-14
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4
一、结构与性质
（一）结构：具有共轭多烯侧链的环己烯
m ax 相对生物效价 顺反异构
维生素A
325.5
100%
全反式
新维生素Aa 328
(
纯
/
)
g）
3330000 1820
2019-10-14
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23
A值的选择：
1、维生素A醋酸酯-第一法（等波长差法）
S 环己烷 9～15IU / ml 溶 液 分 别 于300、316、328、340、360nm 处 测Ai
• 判断 m ax 是否在326～329nm之间
环氧化物
VitA醛
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VitA酸
7
（二）性质
1.溶解性：易溶于有机溶剂和植物油等，不溶于水 2.不稳定性 3.紫外吸收特性 4.与三氯化锑呈色 V itA SbCl 3 蓝 色 紫 红
CHCl3
2019-10-14
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8
二、鉴别试验
（一）三氯化锑反应
V itA SbCl 3 蓝 色 紫 红
脂溶性
S
KO H /乙醇
皂
化
液植 Vit物A 醋 油酸 酯甘油
VitA 醇 和脂肪
酸
盐
水溶性
乙醚提取 除去植物油的干扰挥干乙醚 异丙醇
溶解 稀释至9～15IU / ml 于300、310、325、
维生素类药物分析PPT课件
★ 鉴别 ★ 含量测定
VA SbCl3
CHCl3
蓝色 ～ 紫红色
λmax = 620nm
22
小结. 维生素A结构性质
2
9'
1
3
8'
4
6
5
7' 6'
5' 4'
a. 溶解性
b.不稳定性
c.紫外吸收特性
d. 与SbCl3作用
3'
1'
CH2OR
2'
23
二、鉴别试验
Carr-
UV
Price
TLC
24
λ1λ2λ3λ112nm
1=328nm; 2=316nm; 3=340nm
35
ii．等吸收比法：测VitA醇
6 Aλ2 Aλ3 7Aλ1
1=325nm; 2 =310nm; 3=334nm
36
*波长的选择
1：VitA的max
2、3：分别在1两侧
ⅰ．等波长差法：
ⅱ．等吸收比法：
12311n2mAλ2
41
A 3（ 28校 正 A 32 ） 810 % 0(P) A 328
42
最大吸收波长是否在326～329之间
是
否
计算吸收度比值之差是否超过±0.02 第二法（皂化）
是 A3（ 28校正 A3） 2810% 0
A328
否
A328
皂化
A328（校正）
A328
皂化
-15%
-3% 0
3%
43
③计算
E1 1c % m c
A A (% )L c100 L
d:求效价
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效价
维生素A的含量用生物效价即国 际单位（IU/g）来表示。规定：
1 IU=0.344µg 全反式维生素A醋酸酯 1 IU=0.300µg 全反式维生素A醇
每1g全反式维生素A醋酸酯/醇相当于多 少国际单位？
含量测定
换算因子 意义：单位E1%cm数值所相当的效价。
换算因数＝效价（IU / g） E%1cm(纯)
无超过 0.02
➢ 计算 A328（校正） ➢ 用A328计算
含量测定
含量测定
第二法 A328校正
A328 第二法
－15%
－3% 0 3%
含量测定
（3）第二法（等吸收比法） [ 皂化法、6/7A法 ]
适用于维生素A醇 第一法无法消除杂质干扰时用此法
含量测定
脂溶性
S
KOH /乙醇
皂
化 液植Vit物A 醋油酸酯甘油 和 Vit脂A 醇肪
分类
按溶解度分 脂溶性 VitA、D2、D3、 E、K1 等 水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12)
VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。
维生素A结构
R : -H -COCH3 -COC15H31
维生素A醇 维生素A醋酸酯 维生素A棕榈酸酯
结构
VitA2 VitA3
结构
鲸醇
结构与性质
溶解性 紫外吸收 325~328nm 不稳定性 与三氯化锑反应
否
是
• 计算A325(校正)
取未皂化样品 采用色谱法纯 化后再测定
含量测定
A325校正 6.815A325 2.555A310 4.260A334 f A325(校正) A325 100% A325
含量测定
A325校正
A325
－3%
0
A325校正
3%
含量测定
VitAD胶丸中VitA的含量测定
第14章维生素类药物的分析
维生素
Frederick Gowland Hopkin Christiaan Eijkman George Wald
1929 Nobel Prize
1967 Nobel Prize
教学目标
掌握维生素A与维生素B1的结构、性质及 鉴别试验； 熟悉紫外三点校正法测定维生素A含量的 原理及计算；
△
λmax为326nm 一个吸收峰
λmax为350～390nm 三个吸收峰
鉴别试验
TLC法
鉴别试验
BP 对照品法 显色剂 三氯化锑
USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值
含量测定
UV法(三点校正法)
立体异构体 氧化降解产物 合成中间体
维生素A2 维生素A3 环氧化物 维生素A醛
维生素A酸
含量测定
酸盐
水溶性
乙醚提取除去植物油的干扰挥干乙醚 异丙醇
溶解 稀释至9～15IU / ml 于300、310、325、
334nm 处 测Ai
含量测定
• 判断max是否在323～327nm之间
是
否
• 计算 A300 A325
取未皂化样品 采用色谱法纯 化后再测定
含量测定
• 判断 A300 /A325 是否大于0.73
g）
3330000 1820
1830
含量测定
三点校正法（法定方法） 1. 原理： （1）杂质的吸收在310-340nm波长
范围内呈一条直线，且随波长的 增大吸收度减小； （2）物质对光的吸收具有加和性。
含量测定
2. 波长的选择： （1） 1
VitA的max（328nm或325nm） （2） 2 3
含量测定
1IU 0.344g维生素A醋酸酯
效价（IU / g） 1106g 2907000 0.344g
换算因数＝效价（IU / E%1cm(纯)
g）
2907000 1530
1900
含量测定
1IU 0.300g维生素A醇
效价（IU / g） 1106g 3330000 0.300g
换
算因数＝效价（IU / E%1cm(纯)
改用第二法
含量测定
Ai / A328 规定值 差值
A300 A328 0.555 A316 A328 0.907 A328 A328 1.000 0 A340 A328 0.811 A360 A328 0.299
含量测定
➢ 判断差值是否超过规定值的 0.02
有一个以上
超过 0.02
C
标示量
100％
含量测定
（2） 第一法 维生素A醋酸酯 • 方法：
S 环己烷 9～15IU / ml溶液 分别于300、316、328、340、360nm处测Ai
含量测定
➢ 判断 max 是否在326～329nm之间 max 在326～329nm之间
是
否
➢ 求算 Ai / A328
并与规定值比较
第二步 求 %1cm (样)
%1cm(样)
A C(%) l
含量测定
注意：
➢
➢ C为混合样品的浓度
含量测定
第三步 求效价
效价（IU / g）(样) E% 1cm(样) 换算因数
第四步：求标示量％
标示量％＝IU / 丸 标示量
100％
＝ IU / g标 平示均量丸重100％
A 换算因数 平均丸重
分别在1的两侧各选一点
含量测定
第一法:等波长差法
328 316 340 328
= 12nm 测定对象：VitA醋酸酯
第二法:等吸收比法
6 7
A1
A2
A3
1=325nm, 2=310nm, 3=334nm
测定对象：VitA醇
含量测定
3.测定法 （1）基本步骤: ❖第一步 A的选择 选择依据： 所选A值中杂质的干扰已基本消除。
结构与性质
共轭多烯侧链：易被氧化
VitA 紫外线、O2、氧化剂 环氧化物[O]VViittAA酸醛
△或有金属离子存在时氧化↑
结构与性质
环氧化物
VitA醛 VitA酸
鉴别试验
三氯化锑反应 (Carr-Price反应)
VitA SbCl 3 蓝色 紫红
CHCl3
条件：无水无醇
鉴别试验
+
CH2
-
SbCl5 RCOO
+
CH2
-
SbCl5 RCOO
鉴别试验
பைடு நூலகம்三氯化锑反应
维生素A ChP（2010） [鉴别] 取本品1滴，加三氯甲烷10ml振摇使溶解； 取2滴，加三氯甲烷2ml与25%三氯化锑的三氯甲 烷溶液0.5ml，即显蓝色，渐变成紫红色。
鉴别试验
UV法 （BP（2000）） VitA 无水乙醇 HCl 去水VitA
精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量 差异项下（平均装量0.07985g/丸）的内容 物 0.1287g 至10ml烧杯中，加环己烷溶解 并定量转移至50ml量瓶中，用环己烷稀释至 刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一50 ml 量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环 己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm， 并在下列波长处测得吸收度为
维生素A的含量用生物效价即国 际单位（IU/g）来表示。规定：
1 IU=0.344µg 全反式维生素A醋酸酯 1 IU=0.300µg 全反式维生素A醇
每1g全反式维生素A醋酸酯/醇相当于多 少国际单位？
含量测定
换算因子 意义：单位E1%cm数值所相当的效价。
换算因数＝效价（IU / g） E%1cm(纯)
无超过 0.02
➢ 计算 A328（校正） ➢ 用A328计算
含量测定
含量测定
第二法 A328校正
A328 第二法
－15%
－3% 0 3%
含量测定
（3）第二法（等吸收比法） [ 皂化法、6/7A法 ]
适用于维生素A醇 第一法无法消除杂质干扰时用此法
含量测定
脂溶性
S
KOH /乙醇
皂
化 液植Vit物A 醋油酸酯甘油 和 Vit脂A 醇肪
分类
按溶解度分 脂溶性 VitA、D2、D3、 E、K1 等 水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12)
VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。
维生素A结构
R : -H -COCH3 -COC15H31
维生素A醇 维生素A醋酸酯 维生素A棕榈酸酯
结构
VitA2 VitA3
结构
鲸醇
结构与性质
溶解性 紫外吸收 325~328nm 不稳定性 与三氯化锑反应
否
是
• 计算A325(校正)
取未皂化样品 采用色谱法纯 化后再测定
含量测定
A325校正 6.815A325 2.555A310 4.260A334 f A325(校正) A325 100% A325
含量测定
A325校正
A325
－3%
0
A325校正
3%
含量测定
VitAD胶丸中VitA的含量测定
第14章维生素类药物的分析
维生素
Frederick Gowland Hopkin Christiaan Eijkman George Wald
1929 Nobel Prize
1967 Nobel Prize
教学目标
掌握维生素A与维生素B1的结构、性质及 鉴别试验； 熟悉紫外三点校正法测定维生素A含量的 原理及计算；
△
λmax为326nm 一个吸收峰
λmax为350～390nm 三个吸收峰
鉴别试验
TLC法
鉴别试验
BP 对照品法 显色剂 三氯化锑
USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值
含量测定
UV法(三点校正法)
立体异构体 氧化降解产物 合成中间体
维生素A2 维生素A3 环氧化物 维生素A醛
维生素A酸
含量测定
酸盐
水溶性
乙醚提取除去植物油的干扰挥干乙醚 异丙醇
溶解 稀释至9～15IU / ml 于300、310、325、
334nm 处 测Ai
含量测定
• 判断max是否在323～327nm之间
是
否
• 计算 A300 A325
取未皂化样品 采用色谱法纯 化后再测定
含量测定
• 判断 A300 /A325 是否大于0.73
g）
3330000 1820
1830
含量测定
三点校正法（法定方法） 1. 原理： （1）杂质的吸收在310-340nm波长
范围内呈一条直线，且随波长的 增大吸收度减小； （2）物质对光的吸收具有加和性。
含量测定
2. 波长的选择： （1） 1
VitA的max（328nm或325nm） （2） 2 3
含量测定
1IU 0.344g维生素A醋酸酯
效价（IU / g） 1106g 2907000 0.344g
换算因数＝效价（IU / E%1cm(纯)
g）
2907000 1530
1900
含量测定
1IU 0.300g维生素A醇
效价（IU / g） 1106g 3330000 0.300g
换
算因数＝效价（IU / E%1cm(纯)
改用第二法
含量测定
Ai / A328 规定值 差值
A300 A328 0.555 A316 A328 0.907 A328 A328 1.000 0 A340 A328 0.811 A360 A328 0.299
含量测定
➢ 判断差值是否超过规定值的 0.02
有一个以上
超过 0.02
C
标示量
100％
含量测定
（2） 第一法 维生素A醋酸酯 • 方法：
S 环己烷 9～15IU / ml溶液 分别于300、316、328、340、360nm处测Ai
含量测定
➢ 判断 max 是否在326～329nm之间 max 在326～329nm之间
是
否
➢ 求算 Ai / A328
并与规定值比较
第二步 求 %1cm (样)
%1cm(样)
A C(%) l
含量测定
注意：
➢
➢ C为混合样品的浓度
含量测定
第三步 求效价
效价（IU / g）(样) E% 1cm(样) 换算因数
第四步：求标示量％
标示量％＝IU / 丸 标示量
100％
＝ IU / g标 平示均量丸重100％
A 换算因数 平均丸重
分别在1的两侧各选一点
含量测定
第一法:等波长差法
328 316 340 328
= 12nm 测定对象：VitA醋酸酯
第二法:等吸收比法
6 7
A1
A2
A3
1=325nm, 2=310nm, 3=334nm
测定对象：VitA醇
含量测定
3.测定法 （1）基本步骤: ❖第一步 A的选择 选择依据： 所选A值中杂质的干扰已基本消除。
结构与性质
共轭多烯侧链：易被氧化
VitA 紫外线、O2、氧化剂 环氧化物[O]VViittAA酸醛
△或有金属离子存在时氧化↑
结构与性质
环氧化物
VitA醛 VitA酸
鉴别试验
三氯化锑反应 (Carr-Price反应)
VitA SbCl 3 蓝色 紫红
CHCl3
条件：无水无醇
鉴别试验
+
CH2
-
SbCl5 RCOO
+
CH2
-
SbCl5 RCOO
鉴别试验
பைடு நூலகம்三氯化锑反应
维生素A ChP（2010） [鉴别] 取本品1滴，加三氯甲烷10ml振摇使溶解； 取2滴，加三氯甲烷2ml与25%三氯化锑的三氯甲 烷溶液0.5ml，即显蓝色，渐变成紫红色。
鉴别试验
UV法 （BP（2000）） VitA 无水乙醇 HCl 去水VitA
精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量 差异项下（平均装量0.07985g/丸）的内容 物 0.1287g 至10ml烧杯中，加环己烷溶解 并定量转移至50ml量瓶中，用环己烷稀释至 刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一50 ml 量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环 己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm， 并在下列波长处测得吸收度为