肿瘤个体化治疗基因检测流程

肿瘤个体化治疗基因检测流程

1、目的：

保证所有肿瘤组织准确检测，符合技术要求。

2、范围：

所有技术人员及质检人员均适用。

3、职责：

3.1技术主管负责本规程的执行和监督。

3.2所有技术人员必须严格按照本规程的要求进行操作。

4、主要内容：

4.1病理常规操作

4.1.1病理样本的接收

4.1.1.1首先核对病理申请单与标本上的红色号码是否一致。

4.1.1.2核查病理申请单上写明的送检标本及数目是否与实际送检标本一致。

4.1.1.3观察送检标本的大小及固定液比例是否合适。(1)穿刺活检及纤支镜所取的小标本，4％中性甲醛(10％中性福尔马林)固定组织的量应在6～10倍。(2)对于较大的手术切除标本，应及时切开固定；核对后将病理申请单和标本编上病理标本号。

4.1.1.4将病人姓名、性别、年龄、病历号、科别、临床诊断、部位、标本来源、标本例数等逐项录入电脑存储。

4.1.1.5作为病理资料不仅要做好计算机录入工作，还须进行文字登记，以便病理档案长期保存。

4.1.2组织固定

临床医师切取标本后，应尽快将标本置于盛有足够量固定液的容器内，尽量避免可能出现固定不及时或不充分导致标本干涸或腐败，无法进行切片制作。添加的量应6～10倍于标本体积.

4.1.3取材及其后期处理

4.1.3.1病理科病理医生取材

4.1.3.2核对标本及其标志与申请单是否一致。

4.1.3.3按照病理取材规范选取病变及正常组织。

4.1.3.4对送检标本进行大体描述。

4.1.3.5取材后的标本保存至少两周。

4.1.3.6放入自动脱水机进行水洗－脱水－透明－浸蜡前处理。

4.1.4包埋

4.1.4.1先将熔化的石蜡倾入模具，再用加热的镊子夹取已经浸蜡的组织块，注意：特定的制定面或最下面向下埋入熔蜡。

4.1.4.2注意标本的编号和标本要对准，防止污染。

4.1.4.3为下一步切片准备，提供介质。

4.1.5切片

4.1.

5.1刀片锋利，组织块预冷。

4.1.

5.2切5-10um的连续组织切片，置于玻片上。

4.1.

5.3捞片，烘干。

4.1.6HE染色

苏木素－伊红染色。

苏木素染细胞核（核酸），伊红染细胞质（蛋白），使组织细胞对比清晰，便于显微镜下观察。

主要流程：二甲苯脱蜡－梯度酒精脱二甲苯－苏木素染色－分化、返蓝－伊红－梯度酒精、二甲苯－封片。

4.2标本前处理

4.2.1申请单填写

4.2.1.1登记患者基本情况，包括姓名、性别、年龄、送检单位、床位、门诊号/住院号、送检日期、取材部位、病理诊断、标本病理号等

4.2.1.2患者签署知情同意书，留下联系方式

4.2.1.3患者病史及临床情况

有无手术（穿刺标本）、手术时间、术前术后有无化疗、化疗方案及化疗效果及毒副作用（相关血项指标、胃肠反应、皮肤反应、神经反应等）、治疗的单位、癌症有无转移、复发或者不能切除、相关病史及家族史

4.2.2送检标本种类

外周全血；胸腹水；痰；尿

新鲜(冰冻)标本；

内镜活检标本；

手术标本蜡块或切片

外周血

4.2.3送检标本要求

新鲜标本用10%中性福尔马林固定或用RNAlater浸泡20分钟以上（常温可保存10天）

外借病理蜡块，常规病理大小即可

常规石蜡切片（10张白片），5-10um，常温送检

4.2.4样本评估

血：保存温度、时间，是否凝固

胸腹水、尿及痰：涂片HE染色观察结果是否有癌细胞

蜡块或白片：组织保存时间、福尔马林固定时间、组织大小、有无癌细胞

4.2.5申请单登记入册

登记基因检测申请号、姓名、送检单位、病理号、检测项目

4.3基因检测前处理

4.3.1石蜡白片前处理

4.3.1.1烤片（90-95℃，0.5小时）

4.3.1.2脱蜡（过夜，最后一缸换新二甲苯）

4.3.1.3HE染色

4.3.1.4镜下区分选择肿瘤组织

4.3.1.5刮片

4.3.1.6消化肿瘤组织（200μlTL+20μlOB酶，55℃2-3h消化时间视具体情况定）

4.3.2DNA的提取

4.3.2.1血液DNA提取

4.2.2.1.1250μl抗凝血加入250μl Buffer BL和25μl OB酶，70℃孵育15分钟。

4.3.2.1.2加入260μl无水乙醇震荡混合约20秒。

4.3.2.2.3取上清转入收集柱中，12000rpm离心2分钟。

4.3.2.2.4将收集柱置一新收集管上，加入500μl HB solution，12000rpm离心2分钟。

4.3.2.2.5加入700μl wash Buffer，12000rpm离心2分钟。

空甩离心，12000rpm2分钟。

4.3.2.2.6将收集柱置一新1.5ml离心管上，加入50μl70℃预热的洗脱液，静置5分钟，12000rpm离心4分钟洗脱，即为DNA模板。

4.3.2.2.7琼脂糖电泳检测提取DNA质量（或用分光光度计定量并记录）。

4.3.2.2石蜡DNA提取

4.3.2.2.1在消化充分的组织中加入220μl BUffer BL，震荡混合，于70℃孵育。

4.3.2.2.2加入220μl无水乙醇震荡混合约20秒。

4.3.2.2.3取上清转入收集柱中，12000rpm离心2分钟。

4.3.2.2.4将收集柱置一新收集管上，加入500μl HB solution，12000rpm离心2分钟。

4.3.2.2.5加入700μl wash Buffer，12000rpm离心2分钟。

4.3.2.2.6空甩离心，12000rpm2分钟。

4.3.2.2.7将收集柱置一新1.5ml离心管上，加入50μl70℃预热的