色谱法Tswett叶绿素分离试验共48页文档
纸色谱法实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除纸色谱法实验报告篇一：纸层析法分离氨基酸实验报告前言纸层析法纸层析法又称纸色谱法，是目前广泛应用的一种分离技术。
本世纪初俄国植物学家m.Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。
现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。
它是一种以纸为载体的色谱法。
固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。
将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。
当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。
将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。
根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较，进行定性。
用斑点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量（如光度法、比色法等）。
纸层析法（paperchromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗菌素等物质的一种分离分析工具。
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。
在环境分析测试中，有时用纸层析法分离试样组分，它用于一些精度不高的分析，如3，4-苯并芘。
但不如gc、hpLc 应用普遍。
在做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎，浸出绿色液体，将液体与层析液（石油醚）混合，将滤纸一段进入混合液体，四种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸上留下4条色素带。
由此观查出各种色素的相对含量和种类。
纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离，叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b，它们在层析液中的溶解度不同，溶解度大的随层析液在滤纸上扩散地快，反之则慢；含量较多者色素带也较宽。
最后在滤纸上留下4条色素带，所以利用纸层析法能清楚地将叶绿体中的色素分离。
叶绿体色素的提取分离及理化性质检测实验报告
实验名称：叶绿体色素的提取、分离、理化性质系别：机械工程系班级：机械11实验者：潘霖学号：2011010389同组姓名：肖鹤翀实验日期：2011.10.22Ⅰ提取与分离一、实验目的：1.学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法。
2.了解叶绿素的组成、性质和测定叶绿素有助于理解光合作用的本质。
二、实验原理:叶绿体是进行光合作用的细胞器。
叶绿体中的叶绿素a，叶绿素b，胡萝卜素和叶黄素与类囊体膜结合成为色素蛋白复合体。
这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇等有机溶剂提取。
提取液可用薄层色谱法加以分离和鉴别。
薄层层析色谱法是将吸附剂均匀地涂在玻璃板上成一薄层，将此吸附剂薄层作为固定相，把待分离的样品溶液点在薄层板的下端，然后用一定量的溶剂作流动相，将薄层板的下端浸入到展开剂当中。
由于吸附剂对不同物质的吸附能力大小不同，吸附力强的物质相对移动慢一些，而吸附力弱的物质则相对移动快一些，从而使各组分有不同的移动速度而彼此分开。
植物活性成分的分离常用薄层层析法和柱层析法，其中柱层析适用于大量制备。
本实验采用薄层层析色谱法，其中固定相用硅胶预制板。
三、实验材料与试剂:1.新鲜的菠菜叶片。
2.体积分数为95%的乙醇，碳酸钙粉末，展开剂（石油醚：丙酮：苯=7:5:1，体积比）。
3.研钵，漏斗，三角瓶，剪刀，点样毛细管，层析缸，硅胶预制板，滤纸。
四、实验步骤:（一）色素提取液的制备1.取新鲜叶片4~5片，洗净，擦干叶表面，去除中脉剪碎，放入研钵中。
2.向研钵中加入少量CaCO3粉末，再加2~3ml体积分数为95%的乙醇，充分研磨至糊状，再加10~15ml体积分数为95%的乙醇，上清液用漏斗过滤出，残渣再用10ml体积分数为95%的乙醇冲洗一次，一同过滤于三角瓶中，即制成叶绿体色素提取液。
提取液应避光保存，因提取量较大，可用于其他相关实验（如后面的叶绿素理化性质的验证）。
（二）叶绿体色素的分离1.取硅胶预制板一个，用点样毛细管吸取上述提取液，平行于硅胶板的短边，距下边缘1cm处用毛细管划线，保证划线细直。
叶绿体色素的提取分离实验报告
叶绿体色素的提取分离、理化性质实验报告第一部分提取与分离一实验目的学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法二实验原理叶绿体是进行光合作用的细胞器。
叶绿体中的叶绿体a(C55H72O5N4Mg)、叶绿素b(C55H72O6N4Mg)、胡萝卜素(C40H56)和叶黄素(C40H56O2)与类囊体膜结合成为色素蛋白复合体。
这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇等有机溶剂提取。
提取液可用薄层色谱法加以分离与鉴别。
薄层色谱分析法是将吸附剂均匀的涂在玻璃板上成一薄层，将此吸附剂薄层做固定相，把待分离的样品溶液点在薄层板的下端，然后用一定量的溶剂做流动相，将薄层板的下端浸入到展开剂中。
流动相通过毛细管作用由下而上的逐渐浸润薄层板，并带动样品在板上也向上移动，样品中各组分在吸附剂和展开剂之间发生连续不断的吸附、脱附、再吸附、再脱附……的过程。
由于吸附剂的吸附能力大小不同，吸附力强的物质相对移动慢一些，而吸附力弱的则相对移动快一些，从而使各组分有不同的移动速度而彼此分开。
三实验材料与试剂1 新鲜的菠菜叶片2 体积分数为95%的乙醇，碳酸钙粉末，展开剂(石油醚:丙酮:苯=7:5:1，体积比)3 天平，研钵，漏斗，三角瓶，剪刀，点样毛细管，层析缸，硅胶预制板，滤纸四实验步骤(一)色素提取液的制备1 取新鲜叶片4至5片(2g左右)，洗净，擦干叶表面，去中脉剪碎，放入研钵中。
2 研钵中加入少量碳酸钙粉末，加2至3ml体积分数为95%的乙醇，研磨至糊状，再加10至15ml体积分数为95%的乙醇，上清液用漏斗过滤，残渣再用10ml体积分数为95%的乙醇冲洗一次，一同过滤于三角瓶中，即制成叶绿体色素提取液。
提取液应避光保存。
(二)叶绿体色素的分离1 取硅胶预制板一个，用点样毛细管吸取上述提取液，平行于硅胶板的短边，距下边缘约1cm处用毛细管划线，风干后再划第二次，重复操作3至4次。
2 在干洁的层析缸中加入适量的展开剂，高度约0.5cm，将硅胶预制板带有色素的一端放下，使其浸入展开剂中(但不要使待测样品浸入展开剂中)。
普通生物学实验实验报告叶绿素的提取分离与理化性质
普通生物学实验实验报告一、实验名称叶绿素的提取分离与理化性质二、实验目的1.学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法2.验证叶绿体色素的多种理化性质三、实验原理1.叶绿素中的叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素是色素蛋白复合体，不溶于水而易溶于有机溶剂，可以用乙醇进行提取。
2.由于硅胶板的吸附剂对不同色素的吸附能力不同，不同色素在展开剂中的溶解度不同，因而叶绿素提取液进行薄层层析时各组分移动速度不同而分开，因此可以用薄层层析法对色素进行分离，进而对色素进行观察鉴别。
3.叶绿素是由叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复合酯，能与碱性物质发生皂化反应生成甲醇和叶绿醇及能溶于水的叶绿酸盐，从而绿色素和黄色素分离。
4.叶绿素可以吸收光量子变成不稳定的激发态，当它变回基态时可发射红光量子产生荧光。
5.叶绿素的化学性质不稳定，在强光照下易被破坏，类胡萝卜素则较稳定。
6.叶绿素中的镁可被氢离子取代生成绿色的去镁叶绿素。
去镁叶绿素可与铜离子反应生成稳定的铜代叶绿素。
四、实验仪器和材料1.新鲜的菠菜叶片。
2.体积分数为95％的乙醇，碳酸钙粉末，展开剂。
3.天平，研钵，漏斗，三角瓶，剪刀，毛细玻璃管，层析缸，硅胶预制板，滤纸。
4.刻度试管，小试管，试管架，水浴锅，10mL移液管。
5.苯，醋酸铜粉末，质量分数为5％的稀盐酸，醋酸-醋酸铜溶液，氢氧化钾-甲醇溶液。
五、实验步骤1.叶绿素提取液的制备2.叶绿体色素的分离3．光对叶绿素的破坏作用取两只小试管，各加入2.5mL 的叶绿素提取液和2.5mL 的95％乙醇。
一支试管放在直射阳光下，另一支试管用锡箔纸包严，均静置40分钟。
4.皂化作用5.H 离子和Cu 离子对叶绿素Mg 离子的取代作用1) 取两只试管，试管1中加入5mL 叶绿素提取液作为对照。
试管2中加入5mL叶绿素提取液后再加入质量分数为5％的盐酸数滴并摇匀，当溶液变褐后再加入少量醋酸铜粉末，60℃水浴加热，观察溶液颜色变化并和试管1比较。
绿叶色素的分离实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习绿叶中色素的提取和分离方法。
2. 掌握层析法分离不同色素的原理和操作。
3. 了解不同色素在叶绿体中的分布和特点。
二、实验原理绿叶中的色素主要包括叶绿素、类胡萝卜素和叶黄素等。
这些色素在有机溶剂中具有良好的溶解度，因此可以通过有机溶剂提取绿叶中的色素。
在层析过程中，不同色素在层析液中的溶解度不同，从而在滤纸上形成不同的色素带。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜的绿色叶片、无水乙醇、层析液（20份石油醚、2份丙酮、1份苯混合）、二氧化硅、碳酸钙、定性滤纸、研钵、烧杯、漏斗、纱布、剪刀、小试管、培养皿、毛细吸管、量筒等。
2. 实验仪器：分析天平、酒精灯、烘箱、显微镜、电子天平等。
四、实验步骤1. 提取绿叶中的色素：（1）取新鲜的绿色叶片，用剪刀剪成小块，放入研钵中。
（2）加入适量的二氧化硅和碳酸钙，充分研磨。
（3）向研钵中加入10ml无水乙醇，继续研磨，使色素充分溶解。
（4）将研磨好的混合物过滤，收集滤液。
2. 制备滤纸条：（1）取一张定性滤纸，剪去两角，使滤纸条呈三角形。
（2）将滤纸条放入烧杯中，加入少量层析液，使滤纸条充分湿润。
（3）将滤纸条取出，在通风处吹干。
3. 画滤液细线：（1）用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀画一条细而直的滤液线。
（2）待滤液线干燥后，重复画2-3次，以增加色素量。
4. 色素分离：（1）将干燥后的滤纸条画线一端朝下放入有少许层析液的层析瓶中。
（2）盖上培养皿，使层析瓶密封。
（3）待层析液上升到滤纸条上端后，取下培养皿，观察色素分离情况。
5. 观察与记录实验结果：（1）观察滤纸条上出现的色素带数目、颜色、位置和宽窄。
（2）记录实验结果，分析不同色素的分布和特点。
五、实验结果与分析1. 滤纸条上出现的色素带从上至下依次为：胡萝卜素（橙黄色）、叶黄素（黄色）、叶绿素a（蓝绿色）、叶绿素b（黄绿色）。
2. 胡萝卜素和叶黄素主要吸收蓝紫光，叶绿素a和叶绿素b主要吸收蓝紫光和红光。
薄层色谱法分离鉴定叶绿素实验报告
薄层色谱法分离鉴定叶绿素实验报告院（系）生物与化学工程系年级专业姓名学号课程名称专业基础实验实验日期2011年月实验地点报导老师一、实验目的1．通过白菜叶中叶绿素的提取和分离，进一步理解和掌握柱色谱分离技术的原理和操作方法。
2．了解薄层层析色谱分离鉴别物质的原理方法。
二、实验原理植物叶片中的叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类，主要包括叶绿素a、叶绿素b、β-胡萝卜素及去镁叶绿素等四种。
叶绿体色素是脂溶性色素，植物叶绿体色素通常可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。
在波长662 nm、644 nm测定吸光值。
可根据下列公式计算叶绿素a和叶绿素b的含量。
叶绿素a的含量（mg·g-l）=[12.7A622－2.69A644]×2V/1000m （1）叶绿素b的含量（mg·g-l）=[22.7A622－4.68A644]×2V/1000m （2）通过薄层色谱(TLC)对叶绿体色素提取液进一步分离，可分离叶绿素a、叶绿素b、β-胡萝卜素及去镁叶绿素，经多次制备可得少量叶绿素纯品，并进行光谱表征。
三、仪器和药品仪器：离心机，紫外可见分光光度计，层析缸，硅胶G薄层板，容量瓶，毛细管，分液漏斗，研钵，其它常用玻璃仪器。
试剂：石油醚（60~90℃），乙醇，乙醚，丙酮，脱脂棉，饱和NaCl溶液，蒸馏水，无水Na2SO4。
材料：白菜叶。
四、实验步骤1、绿素的提取在研钵中放入几片(4g)白菜菜叶，剪成碎块，放在研钵中加人6mL丙酮，适当研磨，将绿色溶液沿着玻璃棒倒入小烧杯中，再用丙酮重复上述操作二次，每次6mL将提取液用脱脂棉过滤，滤液转移至分液漏斗中，加人10mL石油醚和10mL饱和NaCl溶液(防止生成乳浊液)除去水溶性物质，分去H2O层，再用20mL 蒸馏水洗涤两次。
将有机层转入干燥的小锥形瓶中，加4g入无水Na2SO4干燥。
2、分光光度法测叶绿素的含量将叶绿素提取液放入离心试管中，盖好盖子，在3200r/min的转速下离心10min，取上清液转入50mL容量瓶中用石油醚定容，以石油醚为参比溶液，用0.5cm的比色皿测量其在波长644nm，662nm的吸光度并计算叶绿素的含量。
叶绿素的提取和分离
叶绿素的提取和分离一、实验过程1、提取绿色叶片中的色素将除去叶柄和粗叶脉的5g 左右新鲜绿色叶片（菠菜叶或白菜叶、女贞叶），剪碎，放在研钵中，加入少许二氧化硅和碳酸钙，进行充分的研磨，当研磨成糊状时，再加入5-6ml 丙酮，用杵棒迅速搅动后，静止3-5min，就可看到丙酮提取液为深绿色，再将澄清的提取液直接收集到有色的小广口瓶中（不经过滤）。
丙酮具有一定的毒性并且很容易挥发。
在进行实验操作时尽量少吸入丙酮，搅动后静止时，用纸或塑料薄膜盖在研钵上。
因为叶绿体中的各种色素都是脂类化合物，不溶于水，只溶于酒精、乙烷、丙酮、石油醚等有机溶剂中，且用丙酮的效果较好，加入丙酮就是为了快速提取色素。
又因丙酮的化学性质不稳定，极易挥发，所以必须在充分的研磨后加入，而不在研磨前或研磨中加入。
在实验过程中，发现在研钵中加入2ml 丙酮，数量不足，色素提取液量不多，如果再经脱脂棉过滤，滤液几乎全被吸走，提取色素困难，所以改成加入丙酮5-6ml。
将色素收集到有色的小广口瓶中，目的是避免叶绿体中的色素，在接触空气或光照下遭到破坏。
2、制备滤纸条取一张预先干燥处理过的定性滤纸，将滤纸剪成8-9cm 长，1cm 宽的滤纸条，再将滤纸条的一端对折剪去两角。
3、画滤液细线用牙签（或用钢笔尖、六号注射针头等）代替毛细吸管，蘸取有色小广口瓶中滤液，沿铅笔线处小心均匀地划出一条滤液细线，划的线条越细越齐（直），而且待滤液干燥后，继续重复画4～5 遍，实验效果越好。
4、叶绿体中的色素分离将4ml 层析液倒入100ml 烧杯中，再将滤纸条（有滤液细线的一端朝下）略微倾斜靠着烧杯的内壁，轻轻地插入到层析液中，随后用培养皿盖盖上烧杯，滤纸上的滤液细线要与层析液离开一定的距离，即层析液不能没及滤纸条上的滤液细线。
5、实验结果的观察层析几分钟以后（约4～5min），滤纸条上便清楚地呈现出四条色素带，从上而下依次是胡萝卜素（橙黄色），叶黄素（黄色），叶绿素a（蓝绿色），叶绿素b（黄绿色）。
叶绿素的提取和柱色谱的分离
叶绿素的提取和柱色谱的分离一．实验目的学习从植物中提取色素的方法叶绿素的去镁离子操作二．实验原理植物绿叶中含有多种天然色素，最常见的是胡萝卜素（橙色），叶绿素（绿色）和叶黄素（黄色）叶绿素存在两种想似的形式即叶绿素a（C55H72O5N4Mg）和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)两者差别只是a中一个甲基被b中的甲酰基取代。
它们都是吡咯衍生物和金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。
尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚，石油醚等一些非极性的溶剂。
三．主要仪器和试剂仪器：研钵、树脂管、锥形瓶，烧杯、量筒、玻璃棒、分析天平、铁架台、洗耳球、分液漏斗、移液管。
试剂：硅胶、乙酸乙酯、石油醚、丙酮、正丁烷、正丁醇、乙醇。
四、实验步骤1.菠菜叶绿素的提取将菠菜洗净，甩去叶面上的水珠。
称取10克用剪刀剪碎，置于研钵中捣烂。
加30ml2:1 石油醚-乙醇溶液，分几次浸提、抽滤。
滤液转入分液漏斗，每次用15ml水洗涤两次。
弃去水-醇层，将石油醚层用无水硫酸钠干燥2.柱色谱分离（1）湿法装柱将树脂管竖直固定在铁架台上，关闭活塞，加入石油醚至柱容积1/4处，将需要量的硅胶置于烧杯中，加入石油醚浸润，溶胀并调成浆糊状。
打开柱下活塞，调节流速为每秒钟一滴，将调好的硅胶在搅拌下自柱顶缓缓注入柱中，同时用硬橡胶棒轻轻敲击柱身，使硅胶在石油醚中均匀沉降，形成均匀紧密的吸附剂柱。
吸附剂加至2/3柱身后，待柱面液体水平，关闭活塞。
（2）湿法加样将待分离的提取液用玻璃棒引流沿着内壁缓缓加入，切记不要冲动吸附剂。
溶液加完后，小心开启柱下活塞，待提取液渗入硅胶层中分层，关闭活塞。
用少许石油醚冲洗柱内壁，再放出液体至液面降至硅胶层。
（3）淋洗和接收【1】首先用50ml9:1的石油醚-丙酮溶液洗脱，当第一个橙黄色带即将流出来时，换接收瓶。
——胡萝卜素。
【2】换50ml7:3石油醚-丙酮洗脱,当第二个棕黄色带流出时,换接收瓶。
叶绿素的提取和分离实验课件
叶绿素a 叶绿素
(占3/4)
叶绿素b
实验中的注意事项
(1)选材：应选取鲜嫩、颜色深绿的叶片，以保证含有较多 的色素。 (2)提取色素：研磨要迅速、充分，且加入几种物质（注意 SiO2和CaCO3）的量要成比例，以保证提取较多的色素和色素浓度 适宜。 (3)制备滤纸条：剪去两角，以保证色素在滤纸条上扩散均 匀、整齐，便于观察实验结果，否则，会形成弧形色素带。 (4)画滤液细线：用力要均匀，快慢要适中。滤液细线要细、 直，且干燥后重复画一两次，使滤液细线既有较多的色素，又使 各色素扩散的起点相同。 (5)色素分离：滤液细线不要触及层析液，否则滤液细线中 的色素分子将溶解到层析液中，滤纸条上得不到色素带。
叶 绿 素 离 的 实 提 验 取 与 分
捕获光能的色素
绿叶中会有哪些种类的色素呢？ 它们分别是什么颜色的？ 各种色素在绿叶的含量相同吗？
实验：绿叶中色素的提取与分离
实验材料和用具 (1)材料：新鲜的绿色叶片(如菠菜叶片) ; (2)用具：无水乙醇，层析液，二氧化硅，碳 酸钙；干燥的定性滤纸，烧杯 (100ml) ，研钵， 小玻璃漏斗，尼龙布，毛细吸管，剪刀，小试管， 培养皿盖，药勺，量筒(10ml)，天平。
实验：绿叶中色素的提取和分离
重点一：实验原理 (1)提取：叶绿体中的色素易溶于无水乙醇等 有机溶剂中。 (2)分离：叶绿体中的各种色素在层析液中溶 解度不同。
重点二：方法与步骤 1．提取色素 SiO2：使绿叶 充分研磨。 CaCO3：防止研 磨时色素受到破坏。 过滤：单层尼 龙布
2．制备滤纸条
从上到下 胡黄 a b
胡萝卜素 叶黄素 叶绿素a 叶绿素b 层析液
滤液细线
捕获光能的色素
叶绿素的提取及含量测定实验报告
叶绿素的提取及含量测定实验报告叶绿素的提取及含量测定实验报告在现实生活中，越来越多人会去使用报告，要注意报告在写作时具有一定的格式。
那么报告应该怎么写才合适呢？以下是小编收集整理的叶绿素的提取及含量测定实验报告，欢迎大家借鉴与参考，希望对大家有所帮助。
叶绿素的提取及含量测定实验报告1【实验目的】1、通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质的分离提纯与方法。
2、通过薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。
【实验原理】叶绿色存在两种结构相似的形式即叶绿素A(C55H77O5N4Mg)和叶绿素B（C55H70O6N4Mg）胡萝卜素是具有长链结构的共轭多烯，有三种异构体；叶黄素（C40H56O2）是胡萝卜素的羟基衍生物。
是胡萝卜素的羟基衍生物。
当提取时，从上到下颜色依次为：黄绿色，蓝绿色，黄色和橙色。
【实验仪器】研钵，色谱柱，丙酮，乙醇，乙醚，中性氧化铝，菠菜叶，烧杯，漏斗，玻璃棒，滤纸，剪刀，脱脂棉，纱布。
【实验步骤】1、称取30g洗净后用滤纸喜感的新鲜菠菜叶，用剪刀剪碎，放入研钵中研磨，研磨时放入少量碳酸钙，防止研磨过猛破坏叶绿素结构，研磨至烂。
2、将研磨碎的菠菜叶转入小烧杯中，加入30mL配好的乙醇乙醚溶液，盖上表面皿，防止有机溶剂蒸发。
按小组成员分别浸泡10,15,20,25,30,35,40,45,50,55分钟。
3、浸泡期间，填充色谱柱，在最下面垫入脱脂棉，再盖上一个小滤纸片，装入氧化铝至4/5处，再盖上一层滤纸片。
4、将烧杯中的菠菜叶连带着有机溶剂用纱布挤入漏斗中，转入分液漏斗，加入10mL水洗涤，除去水层（下层），再用10mL水洗涤一次。
5、将分页漏斗中的溶液慢慢倒入色谱柱中，加几滴丙酮既可以看到颜色变化。
6、洗净仪器，收拾实验室，打扫卫生。
【注意事项】1.过滤时不能用滤纸，而是用脱脂棉。
原因是滤纸能吸收色素，降低滤液中色素的含量，使实验效果不明显。
2.加入丙酮后要迅速、充分研磨，以防止丙酮挥发，使更多的色素溶解在丙酮中。
植物组织叶绿素的提取及分离
植物组织中叶绿素的提取及分离一、实验目的1、通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法；2、通过柱色谱和薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。
二、实验原理绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素（绿）、胡萝卜素（橙）和叶黄素（黄）等多种天然色素。
叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)，其差别仅是a中一个甲基被b中的甲酰基所取代。
它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。
植物中叶绿素a的含量通常是b的3倍。
尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。
胡萝卜素（C40H56）是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体，即a-,β-和γ-胡萝卜素，其中β-异构体含量最多，也最重要。
在生物体内，β-体受酶催化氧化即形成维生素A。
目前β-胡萝卜素已可进行工业生产，可作为维生素A使用，也可作为食品工业中的色素。
叶黄素（C40H56O2）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。
与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
本实验从菠菜中提取上述几各色素，并通过柱层析进行分离。
三、主要仪器与试剂仪器：研钵、布氏漏斗、圆底烧瓶、直形冷凝管、层析缸试剂：硅胶G，中性氧化铝，甲醇，石油醚（60-90℃），丙酮，乙酸乙酯，菠菜叶。
四、实验流程五、操作步骤1、菠菜色素的提取称取2g洗净后的新鲜（或冷冻）的菠菜叶，用剪刀剪碎并与10mL甲醇拌匀，在研钵中研磨约5min然后用布氏漏斗抽滤菠菜汁，弃去滤渣。
将菠菜汁放回研钵，每次用10mL 3:2（体积比）的石油醚-甲醇混合液萃取两次，每次需加以研磨并且抽滤。
合并深绿色萃取液，转入分液漏斗，每次用5mL水洗涤两次，以除去萃取液中的甲醇。
洗涤时要轻轻旋荡，以防止产生乳化。
弃去水-甲醇层，石油醚层用无水硫酸钠干燥后滤入圆底烧瓶，在水浴上蒸去大部分石油醚至体积约为1mL 为止。
叶绿素的提取实验报告
叶绿素的提取实验报告一．实验目地、学习从植物中提取色素地方法.、学习柱色谱(层析)地原理及其操作方法.、掌握天然药物化学实验报告地一般写法.二．实验原理、绿色植物叶中含有叶绿素(绿)、胡萝卜素(橙)和叶黄素(黄)等多种天然色素.各种色素能溶解在有机溶剂（无水乙醇等）中形成溶液，使色素从生物组织中脱离出来.文档来自于网络搜索、柱色谱是通过色谱柱来实现分离地.在色谱柱内装有固体吸附剂(固定相)如氧化铝或硅胶.液体样品从柱顶加入，当液体流经吸附剂时，由于吸附剂表面对液体中各组分吸附能力不同而按一定地顺序吸附.然后从柱顶加入洗脱剂(流动相)，样品中地各组分随洗脱剂按一定地顺序从色谱柱下端流出，根据不同颜色分段收集.吸附剂，常用吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁等.吸附剂对化合物地吸附能力与分子地极性有关，极性越强，吸附能力越大，分子中含有极性较大地基团，其吸附能力也越强.溶剂，溶剂分为溶解样品地溶剂和洗脱剂.选择溶剂时还要考虑到被分离物各组分地极性和溶解度.通常是先将要分离地样品溶于非极性溶剂中，从柱顶加入柱中.然后用稍大极性地溶剂使各组分在柱中形成若干谱带.再用极性更大地溶剂洗脱被吸附地物质.为了提高洗脱效果，有时也使用混合溶剂.在本实验中色素成分在不同比例混合洗脱剂地作用下可以分离出来.文档来自于网络搜索三．实验仪器及试剂仪器：烧杯、量筒、色谱柱、分液漏斗、玻璃棒、干燥地锥形瓶、滤纸、旋转蒸发仪、酸式滴定管、布氏漏斗、研钵、胶头滴管、剪刀、天平文档来自于网络搜索试剂：新鲜植物叶、中性氧化铝、甲醇( ％，分析纯) 、乙醇、石油醚( ～％) 、丙酮、无水硫酸钠、正丁醇、新鲜植物叶、文档来自于网络搜索四．实验内容. 绿叶色素地提取把新鲜绿叶洗净晾干或用滤纸吸干，称取绿叶，剪碎后放入研钵，再加入乙醇.研磨后用布氏漏斗抽滤，弃去滤渣.文档来自于网络搜索将滤液放回研钵，每次用（体积比）地石油醚甲醇混合液萃取两次，每次需加以研磨并且抽滤.把两次滤液合并，转入分液漏斗中.用水洗涤两次，弃去水甲醇层, 洗涤时要轻轻旋荡，以防止产生乳化.石油醚层转入干燥地锥形瓶中用无水硫酸钠干燥.干燥后地液体在旋转蒸发仪上蒸除石油醚至体积约左右.文档来自于网络搜索.柱色谱分离色素取一支干净地酸式滴定管，向柱内加入石油醚至柱高约处.再缓慢加入氧化铝，并打开活塞，控制流出速度约为滴，并保持液面不低于固定相.打开下端活塞，放出溶剂，直到氧化铝表面溶剂剩下－高时关上活塞.注意，在任何情况下，氧化铝表面不得露出液面.文档来自于网络搜索色素浓溶液用滴管小心加到色谱柱顶部，并要旋转加入.加完后打开下部活塞，让液面下降到柱面以下左右关闭活塞.旋转加入数滴石油醚，重新打开活塞使液面下降，重复几次使有色物质全部进入柱体内，待色素全部进入柱体后，观察并记录下此时实验地现象.在柱顶小心加洗脱剂—石油醚丙酮溶液（体积比）.打开活塞，让洗脱剂逐滴放出，层析即开始进行，用试管收集.当第一个有色成分即将滴出时，取另一试管收集，得橙黄色溶液，它就是胡萝卜素.用石油醚丙酮（体积比）作洗脱剂，分出第二个黄色带，它是叶黄素（）.再用丁醇乙醇水（体积比）洗脱叶绿素（蓝绿色）和叶绿素（黄绿色）.文档来自于网络搜索五．实验结论与分析、本次实验总共重复了三次，第一次采用地是蚕豆叶，提取地色素浓液很少所以色素带分层现象不明显；第二次采用地是野草地嫩叶，提取出来地主要是淡黄色地色素，叶绿素较少；第三次因为时间关系采用了少量地是莴苣叶比较前两次实验，很遗憾实验分层现象还是不明显.通过不同品种地原材料地选取，以及用量地多少对实验很关键，总地来说还是用适当地过量地绿叶较好，可以避免转移过程中地损失，而且绿叶最好是深绿色地肉质植物.文档来自于网络搜索、研磨时加入适量地乙醇有助于打开植物细胞壁，有利于色素地流出，第一次采用地是甲醇，第二次是石油醚，第三次是乙醇，实验结果从提取地汁液来看第三次地汁液明显是深绿色，第一次是浅绿，第二次是淡黄色.通过查阅文献和实验比较，提取色素过程中，由于抽滤时不好控制，非极性溶剂难免会被抽去，且在几次转移中损失较多，程序繁杂.用浸泡法操作简便易行，损失少，产率高.因甲醇与乙醇地极性相近，乙醇易得，无毒，用％乙醇通过浸泡地方法提取菠菜色素为此实验地优化条件.文档来自于网络搜索、固定相地选择也是一个影响实验结果地关键，此次试验我们组并未将氧化铝和硅胶两种固定相一起作比较，但从别组两种比较地结果来看，通过比较，中性氧化铝虽用量比硅胶稍大，但其装柱较容易，只要保持比较均匀地速度从漏斗中加入，且轻轻敲打柱身，柱内气泡就较少，柱子装地也比较实，色带地分离效果比硅胶明显.使用硅胶做固定相时，虽用量较少，但在装柱过程中，容易出现大量泡，会影响色带地分离.为消除气泡，采用吸耳球对柱子加压，将气泡挤出柱体.但这种方法容易导致柱子地堵塞，而且在加压过程中，脱脂棉上层地少许沙子常会堵在滴定管地尖嘴处，导致色带分离时溶剂不易滴出，延长了实验时间，还影响了色带分离效果.但采用硅胶做固定相时，第一个胡萝卜素地橙黄色带分离效果很好.同时用两种固定相分离时，叶黄素地黄色色带都分离不够明显，经查阅资料认为叶黄素易溶于醇而在石油醚中溶解度较小，从嫩绿菠菜得到地提取液中，叶黄素含量很少，所以柱色谱中不易分出黄色带.但比较两者，采用硅胶分离时，黄色色带几乎看不出来.因此采取氧化铝做实验现象更明显.用中性氧化铝作为固定相装柱效果最好.装柱地时候采取干法装柱效果较好. 同时需注意在柱地底部要铺少许地脱脂棉以防止氧化铝堵塞柱子尖嘴处.装完柱后还要在柱地顶部铺一层细沙，当溶剂下降到沙层时要及时添加，以防柱身干裂.色谱柱顶部地氧化铝和沙层注意不要倾斜，如果倾斜会影响色带地分离效果.同时保持滴地速度放出溶液(使色带均匀下移)，所加压力不要太大.文档来自于网络搜索六．实验思考、植物地绿叶在研磨时不要太烂而成糊状导致不容易分离.、叶绿素色素对光，温度，氧气，酸，碱及其它氧化剂都非常敏感，故色素地提取和分离应避光.、在洗脱过程中，不要大量放出溶液，以免固定相表面暴露导致柱子干裂.、固定相地顶部保持水平，并且柱内应当没有气泡.气泡或倾斜地部会使得流出柱体地化合物地色带易变形.、甲醇有毒，请在通风良好处使用；、柱中不可有空气，必要时用装在玻棒上地橡皮塞轻轻敲击柱身；、柱中硅胶表面任何时候都不得露出液面，以防有空气进入；、待色素全部进入柱体后，方可进行洗脱，以防有拖尾影响分离效果.。
色谱法叶绿素分离实验PPT课件
Tswett叶绿素分离实验
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• （1）色谱：植物色素经溶剂冲洗分离后如同白光色散成七色光带的现象 • （2) 色谱法：用于产生色谱的分离方法 • （3）色谱柱（chromatographic column）
装有用于分离的填充物的细长管（如玻璃管、不锈钢管）
起始线上，点样处称为原点，在密闭容器中用适宜的流动相（薄层色谱法
中又称为展开剂）展开。因吸附剂对不同组分的吸附能力不同，展开剂对
不同组分的解吸能力也不完全相同，造成各组分在薄层析上移动的速度有
快有慢，经过一段时间展开后，不同的组分彼此分开，最终形成相互分离
的斑点
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二、薄层色谱参数
1．比移值 (1）定义 组分迁移的距离与展
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第3节 薄层色谱分离检测技术
薄层色谱法(thin layer chromatography，TLC) 将固定相均匀平铺在光洁表面的玻璃、塑料或金属板上
形成薄层，在此薄层上进行色谱分离的方法 可分为吸附、分配、分子排阻色谱法等
一、分离原理
薄层色谱是一种开放性色谱，是将混合组分样品溶液点在薄层板一端的
15IIILeabharlann 25IV38
V
小
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C.氧化铝分类及应用范围
氧化铝种类 pH
应用范围
碱性氧化铝 9～10 分离碱性和中性化合物，如生物碱。
中性氧化铝
分离酸性、中性和碱性化合物，如生物
7.5
碱、挥发油、萜类、甾体以及在酸碱
中不稳定的酯类、苷类等化合物。
酸性氧化铝
4～5
分离酸性和中性化合物，如氨基酸、酸 性色素。
薄层色谱法分离鉴定叶绿素
胡萝卜素在层析液中的溶解度大， 胡萝卜素在层析液中的溶解度大 ， 对薄层板的吸附能力
薄 层
小，所以移动最快。 所以移动最快。
色 谱 法 分 离 鉴 定 叶 绿 素
在线答疑：wy在线答疑：wy-fxhx@ chenh113@
mL石油醚 15 mL石油醚 分液漏斗 上步的提取液 静置30s 静置30s mL蒸馏水 15 mL蒸馏水 mL饱和食盐水 5 mL饱和食盐水
分层
分去 下部水层
mL饱和食盐水 5 mL饱和食盐水 mL蒸馏水 15 mL蒸馏水
分去 下部水层
得到 提取液
转入棕色瓶 中保存
大 学 通 用 化 学 实 验 技 术
大 学 通 用 化 学 实 验 技 术
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(3) 试比较叶绿素a、叶绿素b和β-胡萝卜素的极性， 试比较叶绿素a 叶绿素b 胡萝卜素的极性，
薄 层
为什么β 胡萝卜素在薄层板上移动最快？ 为什么β-胡萝卜素在薄层板上移动最快？
色 谱 法 分 离 鉴 定 叶 绿 素
在线答疑：wy在线答疑：wy-fxhx@ chenh113@
(3) 试比较叶绿素a、叶绿素b和β-胡萝卜素的极性， 试比较叶绿素a 叶绿素b 胡萝卜素的极性， 为什么β 胡萝卜素在薄层板上移动最快？ 为什么β-胡萝卜素在薄层板上移动最快？ 极性： 叶绿素b 叶绿素a 胡萝卜素； 答 ： 极性 ： 叶绿素 b ＞ 叶绿素 a ＞ β- 胡萝卜素 ； β-
大 学 通 用 化 学 实 验 技 术
叶绿体色素的分离: 3. 叶绿体色素的分离: (1) 硅胶G薄层板活化及层析液的制备： 硅胶G薄层板活化及层析液的制备：
硅胶G 硅胶G薄层 板活化 硅胶G 硅胶G薄 层板 100～ ℃烘箱 100～120 ℃烘箱 干燥箱中 保存 烘30～60 min 30～ mL丙酮 丙酮︰ 10 mL丙酮︰石油醚 层析缸 (2︰3)层析液 (2︰3)层析液 振荡 析缸盖 轻轻 盖上层 静置 10～ 10～15 min