《生物化学》实验指导(8个实验)
生物化学实验指导
实验一植物DNA的提取与测定一、目的本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA的原理和方法，进一步了解DNA的性质。
二、原理细胞中的DNA绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。
提取DNA时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA从抽提液中沉淀出来。
DNP与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。
以NaCl溶液为例：RNP在0.14 mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP在其中的溶解度仅为纯水中的1％。
当NaCl浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP的溶解则随之不断增加。
当NaCl浓度大于1mol/L时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2倍，因此通常可用1.4 mol/L NaCl提取DNA。
为了得到纯的DNA制品，可用适量的RNase处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。
关于植物总DNA的提取主要有两种方法：1．CTAB法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中。
2．SDS法：利用高浓度的阴离子去垢剂SDS（sodium dodecyl sulfate，十二烷基硫酸钠）使DNA与蛋白质分离，在高温（55～65℃）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的方法使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
生物化学实验指导
二、结果及讨论
【参考范围】 1、波长的检测：在 529nm ± 1nm 处有最大吸收值为合格。 2、杂光的检测：T% ≤ 5%为合格。 3、比色皿配套：Tmax % – Tmin% ≤ 0. 5% 为合格比色皿配套。 【注意事项】 1、722 型分光光度计的使用方法：选定检测波长，置调节模式为透光率 T，将某一盛装参比介质 的空白比色皿置于光路，打开遮光板，调 0%T，盖上遮光板调 100%T，再将盛装待测液体的比色皿置 于光路，测出 T 值，或置调节模式为吸光度 A，即可测出 A 值。注意每次测定均需重新调 0%T、100%T。 2、在杂光检测中，用于调 0%T 的黑纸片应完好无孔洞，否则会导致假合格现象。 3、使用比色皿时，其盛装液体不能超过总体积的 2/3，也不宜少于 1/2，且在检测前必须用擦镜纸 将比色皿外的液体擦拭干净。
糖标准溶液管：第 2、3 号管。注意稀释后要混匀。
2 号管
3 号管
110mmol/L 葡萄糖液（μl）
100
50
D.W.（μl）
50
50
葡萄糖液浓度（mmol/L）
பைடு நூலகம்
73.33
55
2、再将第 2、3 号管分别取 50μl，加 D.W.50μl 依次作等倍稀释（各 4 管），得到 8 种较低浓度的
葡萄糖标准溶液，稀释方法见下图：
实验一 分光光度计性能检测
【实验目的】 1、掌握分光光度计的性能检测，包括波长检测、杂光检测以及比色皿配对。 2、掌握分光光度计的使用方法。 【实验原理】 1、波长检测：⑴可见光区域的黄光波段比较狭窄，适用于光度计波长的粗测；⑵镨钕滤光片在
生物化学实验指导
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生物化学实验指导
第一部分生物化学与分子生物学概论本部分的内容为生物化学实验中所涉及的主要原理。
介绍如何正确记录实验过程及书写实验报告的一般规则，是训练学生进行正规实验寻林的重要内容。
普通实验技术包括玻璃仪器的洗涤，洗液的配制，吸量管的使用、混匀的方法以及过滤、离心等一般实验室技术。
实验样品的制备着重讨论在生物化学实验中，血液、尿液样品及组织材料的采集和处理，匀浆制备和组织浸出液制备。
离心分离技术、电泳原理、分光分析、层析分离技术，重点讨论这些重要技术的原理，内容则尽可能简洁扼要，作为具体实验内容的参考。
一.实验记录和实验报告的书写实验是在理论指导下的科学实践，目的在于经过实践掌握科学观察的基本方法和技能，培养学生科学思维、分析判断和解决实际问题的能力。
也是培养探求真知、尊重科学事实和真理的学风，培养科学态度的重要环节。
（一）实验记录记录实验中观察到的现象、结果和数据，及时地记录在激烈路本上。
原始数据必须准确简练、详尽、清楚。
记录时不能夹杂主观因素，在定量实验中观测的数据，如称量物的重量、滴定管的读数、光密度值等，都应设计一定的表格，依据仪器的精确度记录有效数字。
完整的实验记录包括实验日期、实验题目、目的、操作、结果。
（二）实验报告实验结束后，应及时整理和总结实验结果及记录，按照下列顺序写出实验报告：1.实验名称（The title of experiment ）：2.目的（Objective）：3.原理（Principle）：最好使用简式。
4.操作步骤（Operational procedure）：5.实验记录6.计算与结果（Calculation and Results）：7.讨论（Discussion）：对实验方法，实验结果和异常现象进行探讨和评论，以及对于实验设计的认识、体会和建议。
二、普通实验技术（一）玻璃仪器的洗涤与清洁玻璃仪器的洗涤与清洁直接影响实验结果的准确性，因此玻璃仪器的洗涤工作是很重要的。
1.新购置玻璃仪器的清洗新购置来的玻璃仪器表面附着有游离碱质，应先用肥皂水洗刷后再用流水冲洗，浸泡于I－2％HCl中过夜，取出后再用流水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2－3次，在干燥箱中烤干或自然晾干，备用。
【精品】食品专业基础实验指导书生物化学实验
《食品质量与安全》专业基础实验指导书上海理工大学医疗器械与食品学院实验实训中心目录课程名称:《生物化学实验指导》实验名称:实验一蛋白质含量的测定－考马斯亮蓝G250染色法实验二蛋白质的两性性质及等电点的测定实验三紫外吸收法测定核酸的含量实验四可溶性总糖的测定（蒽酮比色法)一、实验一蛋白质含量的测定－考马斯亮蓝G250染色法二、实验目的：通过实验掌握蛋白质的定量测定方法。
三、预习要求：要求预习实验讲义。
四、实验原理:考马斯亮蓝G250测定蛋白质浓度，是利用蛋白质-染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。
考马斯亮蓝G—250存在着两种不同的颜色形式,红色和蓝色。
考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下呈棕红色，最大光吸收在465nm，当它与蛋白质结合后变为蓝色,最大光吸收在595nm。
在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质—染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。
蛋白质和考马斯亮蓝G—250结合，在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物在室温下1小时内保持稳定。
蛋白质—染料复合物具有很高的消光系数，使得在测定蛋白质浓度时灵敏度很高，可测微克级蛋白质含量。
五、实验设备与器材：仪器721型分光光度计、分析天平（万分之一)、量筒（100ml)、烧杯(250ml)、移液管(1ml,5ml)、漏斗、漏斗架、容量瓶（100mL,1000mL）、试管试剂：牛血清白蛋白蛋白质标准溶液：称取10mg牛血清白蛋白,溶于100mL蒸馏水中，即为100μg/mL的蛋白溶液.考马斯亮蓝G250试剂：称取100mg考马斯亮蓝G250溶于50mL90%乙醇溶液中，加入85％的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容至1000mL。
此溶液在室温下可放置1个月。
95％乙醇溶液85％磷酸六、实验内容与步骤：1、标准曲线绘制取6支试管，按下表加入各试剂。
20170328修订-生物化学实验指导书(2017) (1)
《生物化学》实验指导书2017年03月28日修订目录实验一生物化学实验常用仪器设备及使用实验二甲醛滴定法实验三糖的定量：3，5－二硝基水杨酸比色法实验四粗脂肪提取和含量测定实验五血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳实验六动物组织中脱氧核糖核酸的制备及测定实验一生物化学实验常用仪器设备及使用一、生物化学实验须知1．实验室规则(1) 实验课必须提前5 分钟到实验室,不迟到,不早退，应自觉遵守课堂纪律。
(2) 使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约, 应特别注意保持药品和试剂的纯净, 严防混杂污染。
(3) 实验台、试剂药品架必须保持整洁, 仪器药品摆放井然有序。
实验完毕,需将药品、试剂排列整齐, 仪器洗净倒置放好, 实验台面抹拭干净, 经教师验收仪器后, 方可离开实验室。
(4) 使用和洗涤仪器时, 应小心谨慎, 防止损坏仪器。
使用精密仪器时, 应严格遵守操作规程, 发现故障应立即报告教师, 不要自己动手检修。
(5) 在实验过程中要听从教师的指导, 严肃认真地按操作规程进行实验, 并简要、准确地将实验结果和数据记录在实验记录本上。
课后写出实验报告, 由课代表收齐交给教师。
(6)仪器损坏时, 应如实向教师报告, 真填写损坏仪器登记表, 然后补偿一定金额。
(7)每次实验课安排同学轮流值日, 值日生要负责当天实验的卫生和安全检查。
2．实验记录实验课前应认真预习实验内容，将实验名称、实验原理、实验内容和步骤等简单扼要写在记录本上。
实验记录本要标明页码，不能随意撕掉任何一页。
实验中使用的试剂纯度和终浓度以及使用的仪器类型等都要记录清楚。
实验中观察到的现象、结果和得出的数据，应及时直接记在记录本上，绝对不可以随意记在单片纸上。
原始记录必须准确、简练、清楚。
3．实验报告的书写实验结束后,应及时整理和总结实验结果, 写出实验报告。
（1）标题标题应包括实验名称、实验时间、实验室名称、实验组号、实验者及同组者姓名、实验室条件。
（2）实验目的（3）实验原理应简述基本原理，不要完全照抄实验指导书。
生物化学实验指导
生物化学实验指导生物化学实验是探索生命奥秘的重要手段，通过实验操作，我们能够更深入地理解生物体内的化学反应和物质代谢过程。
本实验指导将帮助您顺利完成生物化学实验，提高实验技能和科学素养。
一、实验前的准备（一）了解实验目的在进行每个实验之前，务必清楚地知道实验的目的是什么。
这将有助于您在实验过程中保持专注，并理解实验结果的意义。
（二）预习实验内容认真阅读实验教材和相关的参考资料，熟悉实验的原理、步骤和注意事项。
如果有不明白的地方，可以向老师或同学请教。
（三）准备实验用品根据实验要求，准备好所需的仪器、试剂和材料。
检查仪器是否完好，试剂是否过期，并确保材料的质量和数量符合实验要求。
二、实验安全（一）个人防护在实验过程中，要穿戴好实验服、手套和护目镜等防护用品，以保护自己免受化学试剂和生物样本的伤害。
了解所使用化学试剂的性质和危险特性，遵守化学品的储存、使用和处理规定。
避免直接接触有毒、有害和腐蚀性试剂，如果不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并寻求医疗帮助。
（三）生物安全对于涉及生物样本的实验，要遵循生物安全操作规范，防止感染和交叉污染。
在处理微生物、细胞和组织样本时，要在无菌条件下进行，并妥善处理废弃物。
（四）防火防爆实验室中严禁烟火，要熟悉灭火器和紧急喷淋装置的位置和使用方法。
对于易燃易爆的试剂和气体，要严格按照操作规程使用和储存。
三、常用仪器的使用（一）移液器移液器是定量移取液体的常用工具。
使用前要根据所需移液量选择合适的移液器和吸头，并进行校准。
移液时要保持垂直，缓慢按下和释放按钮，避免产生气泡。
（二）离心机离心机用于分离不同密度的物质。
使用前要平衡样品，选择合适的转速和离心时间。
离心结束后，要等离心机完全停止转动后再打开盖子，以免发生危险。
分光光度计用于测定溶液中物质的浓度。
使用前要进行仪器校准，选择合适的波长和比色皿。
测量时要确保比色皿清洁，溶液无气泡和杂质。
（四）pH 计pH 计用于测量溶液的酸碱度。
生物化学实验指导电子版
生物化学实验指导电子版生物化学实验指导一、试剂1. 氯仿：用于芳香族化合物的溶解、清洗；2. 硫酸：用于提取溶液中的某些物质，同时也作为能溶解蛋白质的酸性溶剂；3. 乙酸：用于碱化反应，可能提升蛋白质的溶解性；4. 盐酸：用于常温下蛋白质的溶解；5. 磷酸：用于常温下极酸性物质的溶解；6. 氯化钾：用于静电，渗析，也用于调节溶液酸碱度；7. 硝酸铵：用于碱化反应，可以提高某些物质的溶解度；8. 碳酸二铵：用于碱化反应，也可以帮助提高溶液中某些物质的溶解度；9. 氯化钠：用于溶液稀释，也可以作为是pH调节剂；10. 氢氧化钠：用于调节溶液的酸碱度；二、器材1. 酸性硫酸铜滴定池：用于检测溶液中硫酸盐的浓度；2. 温度控制仪：用于控制反应温度；3. 硅胶色谱柱：用于分离混合液中的物质；4. 浴室：用于沸煮某类蛋白；5. 真空泵：用于将液体抽出；6. 多管共振探头：用于测定比色法中的较高浓度；7. 比色杯：用于比色现象；8. 高效液相色谱仪：用于快速地分离多种物质；9. 微型反应釜：用于芳香族化合物的反应；10. 微量称量管：用于精确称量少量物质；三、步骤1. 准备：将所需试剂和器材准备好；2. 溶解：使用氯仿等溶剂将芳香族化合物溶解；3. 提取：用硫酸和乙酸将混合液中的物质进行提取；4. 能谱检测：采用高效液相色谱仪，对混合液进行谱线检测；5. 碱化反应：利用硝酸铵或其他碱性物质进行溶液的碱化反应；6. 比色：用比色杯分析混合物中物质浓度；7. 极化：利用多管共振探头检测混合液中的蛋白质浓度；8. 冷却：将比色法中高浓度物质稀释后，再加入冰水将温度控制在冰点以下；9. 沸煮：将某类蛋白放入温度控制仪能控制的浴室中，进行沸煮；10. 离心：利用真空泵将液体从比色杯中离心，以便收集蛋白质沉淀。
《生物化学实验》课程标准
5.树立密切合作的风气，在实验中进一步提高学生的科学素质修养。
三、课程内容与教学要求
本实验课的技能要求分为知道、理解、掌握、学会四个层次。这四个层次的一般涵义表述如下：
知道———是指对这门学科和学科知识点的认知。
实验名称
分配
学时
实验
属性
开出
要求
教与学的方法建议
实验一、基本操作及氨基酸、蛋白质一般理化性质
4
基础
必做
技术指导，操作训练
实验二、生化样品的制备
4
综合
选做
技术指导，操作训练
实验三、蛋白质的提取分离
4
综合
选做
技术指导，操作训练
实验四、核酸分离制备与鉴定
6
综合
必做
技术指导，操作训练
实验五、氨基酸的纸层析
4
4
综合
必做
技术指导，操作训练
实验十一、PAGE－等电点聚焦电泳
8
综合
选做
技术指导，操作训练
实验十二、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
8
综合
必做
技术指导，操作训练
实验十三、对流免疫电泳测定胎儿甲种蛋白质
8
设计
开放实验
学生设计，教师指导
实验十四、蛋白质的浓度测定(双缩脲法)
4
综合
必做
技术指导，操作训练
实验十五、蛋白质的浓度测定（考马斯亮蓝法）
√
√
实验十六、微量凯氏定氮试验
实验内容
教学要求
知道
理解
掌握
学会
1消化
生物化学与分子生物学-实验指导
生物化学与分子生物学-实验指导实验一氨基酸纸层析法一、实验目的通过氨基酸的分离，了解层析法的基本原理和操作方法。
二、实验原理纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。
纸层析法又称纸色谱法，是用滤纸为支持物，所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，纸纤维上吸附的水分是固定相，有机溶剂是流动相。
溶剂由下向上移动的，称上行法；由上向下移动的，称下行法。
将样品点在滤纸上(此点称为原点)，进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。
由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。
溶质在滤纸上的移动速率用Rf值表示：在一定条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。
只要条件(如温度、展层溶剂的组成)不变，Rf值是常数，故可根据Rf值作定性判断。
样品中如有多种氨基酸，其中某些氨基酸的Rf值相同或相近，此时如只用一种溶剂展层，就不能将它们分开。
为此，当用一种溶剂展层后，将滤纸转动90度，再用另一溶剂展层，从而达到分离目的，这种方法称为双向纸层析法。
氨基酸无色，可利用茚三酮显色反应，将氨基酸层析点显色作定性、定量用。
所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽与茚三酮反应都产生蓝紫色物质，只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生（亮）黄色物质。
原点到层析斑点中心的距离原点到溶剂前沿的距离Rf =三、药品器材 1实验器材层析滤纸（新华1号）、喷雾器、剪刀、层析缸、毛细管、电吹风、刻度尺、铅笔。
2实验试剂(1)氨基酸溶液：赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸溶液以及他们的混合溶液（各组分浓度0.5%）。
(2)展层剂：V[正丁醇（A.R.）]:V(80％甲酸):V(水)=15:3:2 (3)显色剂:0.5g茚三酮溶于100mL无水丙酮，贮存于棕色瓶中备用。
1_生物化学实验指导2020.09
保山中医专生物化学实验手册保山中医专生物化学教研室目录实验一生化实验的基本操作实验二酶的专一性实验三影响酶活性的因素实验四尿淀粉酶的测定和尿葡萄糖定性实验实验五血糖的测定实验六血清谷丙转氨酶活性的测定实验七血清尿素的测定（二乙酰一肟法）实验八血清肌酐的测定实验九血浆二氧化碳结合力的测定（滴定法）实验一生化实验的基本操作一、实验目的1．了解实验室的一般规则2．掌握刻度吸量管、微量移液器的使用二、操作：1．吸量管的操作种类：移液管或移液吸量管、刻度吸量管1.1移液管规格：1ml、5ml、10ml、20ml、25ml、50ml及100ml特点：只有一个刻度，放液时管尖残留液体不得吹出。
1.2刻度吸量管规格：0.5ml、1ml、2ml、5ml及10ml特点：吸量管刻度分到尖端者和不到尖端者两种所有刻度有自上而下或自下而上的两种实验室多为刻度到尖端者，要吹出残留在尖端的液体，供量取10ml以下的任意体积的液体之用。
2．吸量管的使用方法2.1 拿法：将中指和拇指拿住吸量管上端，食指指腹顶住吸管顶端。
2.2 取液：将吸量管插入液体内，用洗耳球吸取液体至最高刻度以上，然后迅速用食指按紧吸量管顶端，使液体不致从管内流出。
2.3 调刻度：将已充满液体的吸量管提出液面，用碎滤纸片抹干吸量管外面的液体。
然后持吸量管与地面保持垂直，放松食指控制液体缓慢地下降刚好至最上刻度（液体凹面、刻度和视线应在一水平面上），立即按紧吸量管顶端。
4．放液：吸量管靠壁，容器大约倾斜45度，放松食指，让液体缓慢地放入容器内。
3．吸量管的选用原则3.1量取整数量液体时，应选用移液管。
3.2选用与取液量最近的吸量管如欲取0.15ml液体，应选用0.5ml刻度吸量管。
实验二酶的专一性一、实验目的通过实验，验证酶的专一性，即酶对底物的选择性。
二、实验原理液淀粉酶催化淀粉水解，生成麦芽糖和少量的葡萄糖，它们均属还原性糖，可使班氏试剂中的二价铜离子（Cu2+）还原成亚铜（Cu+），生成砖红色的氧化亚铜（Cu2O）沉淀。
生化实验指导
生物化学实验指导成都中医药大学生化教研室编二00六年三月目录实验须知实验一基本操作技术实验二蛋白质的沉淀反应实验三蛋白质的等电点实验四核糖核酸的提取及成分鉴定实验五影响酶的作用的因素实验六麦芽淀粉酶的提取和鉴定实验七分光分析法实验八维生素C的定量测定（碘滴定法）实验九饱食、饥饿对肝糖原含量的影响实验十血糖的测定实验十一胰岛素和肾上腺对血糖浓度的影响实验十二剧烈运动对尿中乳酸含量的影响实验十三血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳实验十四脂肪酸的β-氧化与酮体的生成和利用实验十五血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳实验十六血清谷丙转氨酶活性的测定结合力测定实验十七血浆CO2实验十八茯苓多糖、猪苓多糖的水解和鉴定实验十九标准曲线及回收实验（以血糖的测定为例）实验二十氨基酸的薄层层析法实验二十一胡萝卜素的柱层析分离法附录试剂配制实验须知一、实验目的1.培养研究自然科学的正确态度和思维方法，提高分析问题和解决问题的能力。
2.学习生物化学的基本技术操作和方法3.通过实验验证某些基本理论，以巩固和加深对基本理论的理解。
二、实验前的准备学生在实验前必须按教学计划进行预习:1.复习有关理论2.明确实验目的3.熟悉实验中的主要步骤4.判断实验预期结果预习是做好实验的关键，事先做好必要的预习才能主动思考和独立操作，并且获得良好的结果三、实验时注意事项1.实验时必须严肃认真、一丝不苟，按照操作规程，细心的独立地进行操作，仔细地观察和综合分析所出现的现象和结果，客观地有条理地及时地记录实验记录本内2.实验室一切器材设备应加以爱护，使用试剂、水、电、火柴、酒精、蒸馏水、肥皂等消耗品时应注意节约，避免浪费。
使用仪器如生疏，或以前未曾用过，应先请教带习教师指导。
玻璃器皿使用时，既要大胆、又要小心谨慎，稳拿轻放，尽量避免损坏。
如有损坏应立即报告带习教师，并说明损坏原因，以便吸取经验教训。
凡能阻塞下水管之废品，如用过的滤纸，火柴梗以及沉淀物等，或浓酸、浓碱，均须倾倒入实验室内的废物缸中，勿倾入水槽中，以免将其阻塞和损坏。
临床生物化学检验实验指导(医学检验技术专业48学时)
《临床生物化学和生物化学检验》实验指导前言实验教学作为基础医学教学中的一项重要内容，在培养学生分析问题、解决问题及动手能力等方面发挥着十分重要的作用。
临床生物化学检验实验教学是临床生物化学检验课程的重要组成部分，本教研室根据中医本科专业的特点，并依据《临床生物化学检验》实验大纲要求，结合多年的教学实践，组织编写了《临床生物化学和生物化学检验》实验指导。
本实验指导内容共12项实验。
每项实验包括实验目的、实验原理、实验内容（材料、方法、结果分析及注意事项）等项目，同时后附思考题，以供学生独立思考、加深理解。
实验学时：48学时实验一基本操作（综合性实验，4学时）【实验目的】1.掌握移液管、微量加样器正确使用方法。
2.掌握721分光光度计的正确使用方法及简单维护3.熟悉试验结束后试管、移液管的清洗方式【实验仪器、器材与试剂】1.实验仪器和器材：721分光光度计、玻璃试管、微量加样器、移液管、试管架、洗耳球、记号笔等。
2.实验试剂：蒸馏水、生理盐水等。
【实验项目、方法与步骤】1、微量移液器使用（1）根据取用溶液体积选用适当量程的微量移液器a)P20 2 ~ 20b)P200 21 ~ 200c)P1000 201 ~ 1,000（2）容量设定从大值调整到小值时，刚好即可。
从小值调整到大值时，需要调超过三分之一圈后再返回，这是因为计数器里面有一定的空隙，需要弥补。
不要将按钮旋出量程，这将导致移液器损坏。
（3）吸液头安装正确的安装方法是：把白套筒顶端插入吸液头，在轻轻用力下压的同时，把移液器按逆时针方向旋转180度。
切记用力不能过猛，更不能采取剁吸液头的方法来进行安装，那样做会对移液器造成不必要的损伤。
（4）预洗吸液头安装了新的吸液头或增大了容量值以后，应把需要转移的液体吸取、排放两到三次。
这样做是为了让吸液头内壁形成一道同质液膜，确保移液工作的精度和准度，使移液过程具有重现性。
（5）吸液先将移液器排放按钮按至第一停点，再将吸液头垂直浸入液面。
生物化学实验指导.pdf
的要求进行独立操作与观察。 3．独立操作与观察 除个别实验分组进行外，一般由学生个人独立进行操作和观察。在实
验中要按实验指导认真操作，仔细观察，作好记录。 4．示教 每次的实验都备有示教内容，其目的是帮助学生了解某些实验中的难点，扩大在
液面处，眼睛平视标线，加溶剂至液体凹与标线相切，盖瓶塞倒转，使气泡升到顶，将瓶震荡数次，再倒
置，重复操作 10 次以上，才能混合均匀。（注意：不再定容了，防止溶液漏掉）
2 液体稀释 用移液管移取一定体积的溶液于容量瓶中，再按上法进行。如果稀释时产生热量，可先
于小烧杯中加少量溶剂溶解，冷却后移到容量瓶中，再按上法进行。
用容量瓶定容后，装入试剂瓶，帖上标签。
标签应注明以下内容：药品浓度，名称，配制人和日期等。
（六）清理实验场所。
（二） 缓冲溶液的配制
1 概念
由一定物质组成的溶液，在加入一定量的酸或碱时，其氢离子浓度改变甚微或基本不变，此种溶液称
为缓冲溶液；这种作用称为缓冲作用；其溶液内所含物质称为缓冲剂，调节缓冲剂的比例可以配置成各种
【实验用品】
1．材料： 2．器材和仪器：烧杯，容量瓶，量筒，玻璃棒，试剂瓶。 3．试剂：NaH2PO4·2H2O，Na2HPO4·12H2O。
【方法步骤】
（一） 溶液的配制步骤 （一）实验准备
1 准备所需的药品和玻璃仪器。 2 洗涤。 （二）计算 1 百分比浓度计算：
（1） G/V 比 如：配 1%NaCl, 称 1 g NaCl 溶于 100 mL 水。 （2） V/V 比 如：配 75%乙醇 100 mL，乙醇 100 mL×75%=75 mL，蒸馏水 25 mL。 （3） G/G 比 用的较少，如计算灰分中某种元素如 Fe 的含量。 2 摩尔浓度的计算：(药品的分子量一般在标签中注明)
《生物化学》实验指导(8个实验)
《生物化学》实验指导(8个实验)生物化学实验指导吕杰编著新疆大学资源与环境科学学院生态学教研室内容介绍《生物化学实验指导》是新疆大学资源与环境科学学院《生物化学》课程组的教师在参考国内重点院校、科研院所的生物化学实验与实习教材的基础上，结合教师的教学经验汇编而成。
该实习指导围绕教学大纲设计了8个实验内容。
目目录实验一氨基酸纸层析4实验二DNS-CL法测定N末端氨基酸5实验三考马斯亮蓝法测定蛋白质的浓度7实验四酪蛋白的制备8实验五葡萄糖标准曲线的绘制10实验六酵母蔗糖酶的提取及活力测定12实验七酵母RNA的分离及组分鉴定14实验八维生素C的定量测定16 实验一一氨基酸纸层析一、实验目的1、通过氨基酸的纸层析分离，学习纸层析的基本原理和操作方法。
二、实验原理纸层析：是以滤纸作为支持物的分配层析法，是20世纪40年代发展起来的一种生化分离技术。
由于设备简单，操作方便，所需样品量少，分辨力较高等优点而广泛的用于物质的分离，并可进行定性和定量的分析。
缺点是展开时间较长。
分配层析法：是利用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离的目的的一种实验方法。
在一定条件下，一种物质在某种溶剂系统中的分配系数是一个常数即=溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。
溶剂系统：由有机溶剂和水组成，水和滤纸纤维素有较强的亲和力，因而其扩散作用降低形成固定相，有机溶剂和滤纸亲和力弱，所以在滤纸毛细管中自由流动，形成流动相，由于混合液中各种氨基酸的分配系数值不同，其在两相中的分配数量及移动速率（即迁移率Rf值）就不同，从而达到分离的目的。
三、实验材料、仪器和试剂：1、实验材料：标准氨基酸溶液2、仪器:层析缸，层析纸，毛细管，天平，吹风机等。
3、、试剂：（1）氨基酸标准溶液：0.1M丙氨酸和0.1M谷氨酸标准溶液。
（2）溶剂系统：正丁醇：甲酸：水=15：3：2（体积比）摇匀；（3）0.1%的茚三酮丙酮溶液；茚三酮15克，丙酮100毫升四、实验步骤：纸层析(1)取一长方形滤纸，在滤纸纵向对应的两边距边沿2cm处，用铅笔轻轻的各画两条平行线，一条作前沿标志，一条作点样线，在点线上每隔2cm画一个+作为点样位置，共5个点。
生物化学实验指导书
《生物化学实验》指导书西安工程大学生物工程系二〇一一年十一月二十五日目录实验1 蛋白质的沉淀,变性反应 (3)实验2 蛋白质含量的测定 (8)实验3 氨基酸的分离鉴定—薄层层析法 (10)实验4 液化淀粉酶活力测定 (13)实验5 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法 (17)实验6 核酸浓度测定—紫外线（UV）吸收法 (20)实验7 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 (22)实验8 植物中抗坏血酸含量的测定 (24)实验1 蛋白质的沉淀,变性反应目的要求：了解蛋白质的沉淀反应,变性作用和凝固作用的原理及它们的相互关系。
原理：在水溶液中，蛋白质分子的表面，由于形成水化层和双电层而形成稳定的胶体颗粒，所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。
但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的，相对的。
在一定物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷，脱水，甚至变性，则以固态形式从溶液中析出，这个过程称为蛋白质的沉淀反应，这种反应可以分为以下两种类型。
一、可逆沉淀反应在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但它的分子结构并未发生显著的变化，基本上保持原有的性质，沉淀因素除去以后，能再溶于原来的溶剂中。
这种作用称为可逆沉淀反应，又叫做不变性沉淀反应，属于这一类的反应有盐析作用；在低温下，乙醇，丙酮对蛋白质的短时间作用以及利用等电点的沉淀等。
二、不可逆沉淀反应在发生沉淀反应时，蛋白质分子结构，空间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，这时蛋白质已发生变性。
这种变性蛋白质的沉淀不能再溶于原来溶剂中的作用叫做不可逆沉淀反应。
重金属盐，植物碱试剂，过酸，加热，震荡，超声波，有机溶剂等都能够使蛋白质发生不可逆沉淀反应。
实验操作一、试剂1．蛋白质溶液取5mL鸡或鸭蛋清，用蒸馏水稀释至100mL，搅拌均匀后用4—8层纱布过滤，新鲜配制。
2．蛋白质氯化钠溶液取20mL蛋清，加蒸馏水200mL和饱和氯化钠溶液100mL，充分混匀后，以纱布过滤不溶物（加入氯化钠的目的是溶解球蛋白）。
生物化学实验指导
氧化亚铜也极不稳定，易被空气中的氧所氧化。保持反应液沸腾可防止空气进入，避免亚甲 基蓝和氧化亚铜被氧化而增加消耗量。
（3）滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从热源上取下来滴定，以防止空气进入 反应溶液中。
五 还原糖的计算 六 撰写实验报告及实验效果分析
实验三 蛋白质性质（一）——蛋白质及氨基酸的呈色反应 一 实验目的
一、蛋白质盐析作用 1. 取蛋白质溶液 5ml，加入等量饱和硫酸铵溶液，微微摇动试管，使溶液混合静置几 分钟，球蛋白即析出。 2. 将上述混合液过滤，滤液中加硫酸铵粉末，至不再溶解，析出的即为清蛋白。再加 水稀释，观察是否溶解。 二、乙醇沉淀蛋白质 取蛋白质溶液 1ml，加晶体 NaCl 少许，待溶解后再加入 95%乙醇 2ml 混匀。观察有无 沉淀析出。 三、重金属盐沉淀蛋白质 取试管 2 支，各加蛋白质 2ml，一管内滴加 1%醋酸铅溶液，另一管内滴加 1%CuSO4 溶液，至有沉淀生成。 四、生物碱试剂沉淀蛋白质
在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖 还原，产生红色氧化亚铜沉淀，其反应如下：
反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于
观察滴定终点。 Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2O
Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2OK2Cu2
学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。 二 实验原理
蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用，可产生特定的颜色反应，不同蛋白质所 含氨基酸不完全相同，颜色反应亦不同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白质物 质亦可产生相同颜色反应，因此不能仅根据颜色反应的结果来决定被测物是否是蛋白质。颜 色反应是一些常用蛋白质定性测定的依据。
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生物化学实验指导吕杰编著新疆大学资源与环境科学学院生态学教研室内容介绍《生物化学实验指导》是新疆大学资源与环境科学学院《生物化学》课程组的教师在参考国内重点院校、科研院所的生物化学实验与实习教材的基础上，结合教师的教学经验汇编而成。
该实习指导围绕教学大纲设计了8个实验内容。
目录实验一氨基酸纸层析 (4)实验二DNS-CL法测定N末端氨基酸 (5)实验三考马斯亮蓝法测定蛋白质的浓度 (7)实验四酪蛋白的制备 (8)实验五葡萄糖标准曲线的绘制 (10)实验六酵母蔗糖酶的提取及活力测定 (12)实验七酵母RNA的分离及组分鉴定 (14)实验八维生素C的定量测定 (16)实验一氨基酸纸层析一、实验目的1、通过氨基酸的纸层析分离，学习纸层析的基本原理和操作方法。
二、实验原理纸层析：是以滤纸作为支持物的分配层析法，是20世纪40年代发展起来的一种生化分离技术。
由于设备简单，操作方便，所需样品量少，分辨力较高等优点而广泛的用于物质的分离，并可进行定性和定量的分析。
缺点是展开时间较长。
分配层析法：是利用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离的目的的一种实验方法。
在一定条件下，一种物质在某种溶剂系统中的分配系数是一个常数即α=溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。
溶剂系统：由有机溶剂和水组成，水和滤纸纤维素有较强的亲和力，因而其扩散作用降低形成固定相，有机溶剂和滤纸亲和力弱，所以在滤纸毛细管中自由流动，形成流动相，由于混合液中各种氨基酸的分配系数值不同，其在两相中的分配数量及移动速率（即迁移率Rf值）就不同，从而达到分离的目的。
三、实验材料、仪器和试剂：1、实验材料：标准氨基酸溶液2、仪器: 层析缸，层析纸，毛细管，天平，吹风机等。
3、试剂：（1）氨基酸标准溶液：0.1M丙氨酸和0.1M谷氨酸标准溶液。
（2）溶剂系统：正丁醇：甲酸：水=15：3：2（体积比）摇匀；（3）0. 1%的茚三酮丙酮溶液；茚三酮1—5克，丙酮100毫升四、实验步骤：纸层析(1) 取一长方形滤纸，在滤纸纵向对应的两边距边沿2cm 处，用铅笔轻轻的各画两条平行线，一条作前沿标志，一条作点样线，在点线上每隔2cm 画一个“+”作为点样位置，共5个点。
(2) 点样：用毛细管点样，其中2个点用毛细管点上氨基酸的标准溶液；中间间隔一点，另2点点上未知氨基酸的溶液。
每个点样点重复点5次，每点一次用电吹风吹干后再点下次，点样点的直径应控制在2mm左右，点样完毕用大头针将滤纸做成筒形，点样面向外，注意纸的两边不要接触。
(3) 展层：向层析缸中加入层析溶剂，液层不要超过点样线（高约1.5cm，约50－60ml 溶剂），将滤纸点样点朝下放入层析溶剂中，将层析缸密闭，待溶剂到达标志线后取出，吹干。
(4)显色：用喷雾器将茚三酮显色剂均匀喷在滤纸上，吹风机热风吹干显色。
五.结果分析：(1)用铅笔将层析色谱轮廓和中心点描出来；(2) 测量原点至色谱中心和至溶剂前沿的距离，计算各种氨基酸色谱的Rf 值。
Rf=组分移动的距离/溶剂前沿移动的距离=原点至组分斑点中心的距离/原点致溶剂前沿的距离六、思考题：1、何谓分配层析法和分配系数？实验二DNS-Cl法测定N末端氨基端一、实验目的1、学习聚酰胺薄膜层析的方法。
2、学习DNS-Cl测定氨基酸的原理及方法。
二、实验原理纸层析：是以滤纸作为支持物的分配层析法，是20世纪40年代发展起来的一种生化分离技术。
由于设备简单，操作方便，所需样品量少，分辨力较高等优点而广泛的用于物质的分离，并可进行定性和定量的分析。
缺点是展开时间较长。
分配层析法：是利用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离的目的的一种实验方法。
三、实验材料、仪器和试剂：1、实验器材层析缸毛细管紫外灯烘箱恒温箱聚酰胺薄膜吹风机2、试剂：①各种层析纯标准氨基酸②DNS-Cl丙酮溶液（称取25mg DNS-Cl溶于10mL丙酮中，贮于棕色瓶中，至于冰箱保存，一个月内稳定）③0.2mol/L NaHCO3 溶液④NaOH 1M⑤HCl 1M⑥展开剂I 88%甲酸：水=1.5:100（v/v）⑦展开剂II 苯：冰醋酸=9:1（v/v）四、实验步骤：1、氨基酸的DNS化分别取0.2-0.3mg的层析纯标准氨基酸及样品氨基酸溶于0.5mL 0.2mol/L的NaHCO3 溶液中，各取0.1mL于有玻璃塞的试管中，加入0.1mL DNS-CL的丙酮溶液，测pH值，必要时用NaOH 调pH至9.0-9.5，于室温放置2-4h，冷风吹除丙酮后，加HCl调pH2-3水解16-18h，加入乙酸乙酯抽提，分层后取有机相；2、聚酰胺薄膜的准备将聚酰胺薄膜剪成7*7cm的方块，在距边0.5cm处画互为垂直的两条基线，交叉点为原点，若只做单向层析，则只画一条基线，在基线上每隔1cm画一个点样点。
3、点样用毛细管取样，点在点样点上，点样点直径应小于2mm，若多次点样，点一次吹干一次。
4、展层将点好样的聚酰胺膜卷成圆筒形，点样侧在筒内，放入层析缸内，槽内加入5-10ml的展开液I进行展开，溶剂到达距顶部0.5cm时，取出膜吹干。
进行双向层析，第一向层析完毕，取出完全吹干，将膜转90°，用展层液II 展开。
为了区分DNS-谷氨酸和DNS-天冬氨酸，DNS-苏氨酸和DNS-丝氨酸，DNS-丙氨酸和DNS-NH2，可在展开后，吹干，接着用其它展层液在同一方向上展开。
5、DNS-氨基酸的检测展层结束后，取出薄膜用吹风机吹干，在360nm或者280nm紫外灯下检测，DNS-氨基酸应呈黄色荧光，用样品的层析谱与标准的DNS-氨基酸层析谱比较可鉴定样品氨基酸的种类。
五、结果分析：(1) 用铅笔将层析荧光点描出来；(2) 测量原点至色谱中心和至溶剂前沿的距离，计算各种氨基酸色谱的Rf 值。
Rf=组分移动的距离/溶剂前沿移动的距离=原点至组分斑点中心的距离/原点致溶剂前沿的距离六、思考题：1、为什么用棉线而不是橡皮筋固定薄膜？实验三考马斯亮蓝染色法定量测定蛋白质一、实验目的1. 掌握考马斯亮蓝染色法定量测定蛋白质的原理与方法2. 熟练分光光度计的使用和操作方法二、实验原理此方法是1976年Bradform建立。
考马氏亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质结合后，变成蓝色，最大吸收波长从465nm转移到595nm处，在一定的范围内，蛋白质含量与595nm的吸光度成正比。
大大提高了测定蛋白质的灵敏度（1ug）三、器材与试剂器材1. 可见光分光光度计2. 刻度移液管3.移液枪试剂1. 0.15M生理盐水2. 考马斯亮蓝试剂(考马斯亮蓝G250 100mg 溶于50ml 95%乙醇中，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml。
最终试剂中含有0.01% G250，4.7% 乙醇，8.5% 磷酸)3. 0.1mg /ml蛋白质标准液（结晶牛血清蛋白，预先经凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度用0.15M生理盐水配制成0.1mg/ml蛋白溶液。
）4. 两种未知浓度的蛋白质溶液。
四、实验步骤1. 标准曲线的制作(2) 加入3.0ml考马斯亮蓝G250试剂, 充分振荡混合，放置5min后，测定A595值。
(3) 分光光度法的基本原理和分光光度计的使用方法(4) A595为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，绘制标准曲线。
2. 未知溶液蛋白质含量的测定(1)未知蛋白质溶液:取实验室预备的未知蛋白质溶液，各吸取样品提取液0.1ml，加入考马斯亮蓝G250试剂3.0ml，充分振荡混合，放置5min后，测A595 值(2) 根据A595值，在标准曲线上求出样品中蛋白含量。
(3) 如果所测定的A595值不在标准曲线内，该如何处理？3. 结果计算根据标准曲线求出样品中蛋白质的含量。
五、复习思考题、作业题：1. Bradford法测定蛋白质含量的原理是什么？应如何克服不利因素对测定的影响？2．为什么标准蛋白质必须用凯氏定氮法测定纯度？3. 根据蛋白质的呈色反应，测定蛋白质的方法还有哪种？根据所学知识推断各种测定方法有何优点、缺点实验四酪蛋白的制备一、实验目的1、学习从奶粉中制备酪蛋白的原理和方法。
2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。
二、实验原理牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。
酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。
利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。
三、材料、试剂与器具（一）材料新鲜牛奶（一）试剂1、95%乙醇1200mL2、无水乙醚 1 200mL3、0.2mol/L pH4.7醋酸——醋酸钠缓冲液300ml先配A液与B液A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称NaAC·3H2O 54.44g，定容至2000ml。
B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。
取A液1770ml，B液1230ml混合即得Ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。
4、乙醇——乙醚混合液乙醇：乙醚=1 ：1（V/V）（二）器具1、离心机2、抽滤装置3、精密pH试纸或酸度计4、电炉5、烧杯6、温度计四、操作步骤（一）酪蛋白的粗提100mL牛奶加热至40℃。
在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液100mL.用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。
将上述悬浮液冷却至室温。
离心15分钟（3000 r /min）。
弃去清液，得酪蛋白粗制品。
（二）酪蛋白的纯化1、用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3 000r/min），弃去上清液。
2、在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。
最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。
3、将沉淀摊开在表面上，风干；得酪蛋白纯品。
（三）准确称重，计算含量和得率。
含量：酪蛋白g/100 mL牛乳（g%）100% 测得含量得率:理论含量式中理论含量为3.5g/100mL 牛乳。
五、注意事项1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调节牛奶液的等电点一定要准确。
最好用酸度计测定。
2、精制过程用乙醚是挥发性、有毒的有机溶剂，最好在通风橱内操作。
3、目前市面上出售的牛奶是经加工的奶制品，不是纯净牛奶，所以计算时应按产品的相应指标计算。
六、实验报告1、根据实际操作，以流程图形式总结酪蛋的制备方法。
2、合理分析实验所得率七、思考题1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？2、试设计另一种提取酪蛋白的方法？实验五葡萄糖标准曲线的绘制一、实验目的掌握葡萄糖标准曲线的绘制方法，进一步掌握分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。