抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)荧光判读与讲解

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抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的检测及临床意义

抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)检测及临床意思之阳早格格创做――间交荧光免疫(IIF)要领（欧盟）一、ANCA观念及分类抗中性粒细胞胞浆抗体是一种以中性粒细胞战单核细胞胞浆成份为靶抗本的自己抗体，对于系统性血管炎炎症性肠病等多种徐病的诊疗战鉴别诊疗具备要害的意思，已成为自己免疫性徐病的一项非常要害的惯例检测名目.暂时，已经有十余种中性粒细胞胞浆身分被证据为ANCA的靶抗本，蛋黑酶3(PR3)，髓过氧化物酶(MPO)，人黑细胞弹性蛋黑酶(HEL)，乳铁蛋黑(LF)，构造蛋黑酶G(Cath G)，杀菌/通透性巩固蛋黑(BPI)，人溶酶体相闭膜蛋黑2(H-LAMP2)，溶菌素(LYS)，天青杀素，防卫素，烯醇化酶，葡萄糖醛酸酶.根据乙醇牢固的中性粒细胞基量片中，不妨区别二种分歧的荧光模型：一种胞浆型（c-ANCA），是匀称分集正在所有中性粒细胞胞浆中的颗粒型荧光，细胞核无荧光.正在乙醇战甲醛牢固的中性粒细胞片中，其荧光模型表示相共.其主要的靶抗本是蛋黑酶3(PR3).另一种是核周型（p-ANCA），是盘绕中性粒细胞细胞核周围的仄滑戴状荧光.由多种抗本引起，主要靶抗本是髓过氧化物酶(MPO)，人黑细胞弹性蛋黑酶(HEL)，乳铁蛋黑(LF)，构造蛋黑酶G(Cath G)，杀菌/通透性巩固蛋黑(BPI)，人溶酶体相闭膜蛋黑2(H-LAMP2)，溶菌素(LYS)等.分歧抗体正在乙醇战甲醛牢固的中性粒细胞片中，其荧光模型表示有所分歧.抗MPO抗体爆收的p-ANCA果耐甲醛，其荧光模型与正在乙醇牢固的中性粒细胞中出现的c-ANCA类似故喊甲醛抗性的p-ANCA.而其余非MPO 抗体没有与甲醛牢固的中性粒细胞反应，无荧光表示，那种典型又称为甲醛敏感的p-ANCA.故根据乙醇战甲醛牢固的中性粒细胞片表示，可收端判决ANCA 的靶抗本PR3，MPO ，非MPO 三类.二、ANCA 的检测间交荧光免疫要领是检测ANCA 的参照要领大概者尺度要领，于今也是最时常使用的典范要领.IIF 是区别c-ANCA 战p-ANCA 的前提，有较下敏感性，可半定量，但是IIF 测定的是总ANCA ，没有克没有及准确区别靶抗本，需特同性的检测要领动做补充.由于多种免疫性徐病患者存留ANA ，用IIF 法检测ANCA 时，会爆收搞扰真验截行的推断.为预防搞扰局面，采与了四基量共同的检测即：乙醇牢固的粒细胞；甲醛牢固的粒细胞；Hep-2（人喉癌细胞）细胞；猴肝细胞.基量片各细胞分集及意思如表一所述.ANCA 荧光模型及表示如表二所述.表一：四联基量片分集及意思区别ANA 的搞扰：Hep-2细胞有典型荧光表示，Hep-2细胞甲醛牢固粒细胞1：推断c-ANCA ，2：区别 p-ANCA 对于甲醛敏感仍旧耐受甲A 粒甲A ，表二：ANCA 荧光模型及表示三、注意事项为普及对于徐病诊疗的特同性，检测时应注意以下问题1、检测ANCA ，普遍修议共时搞IIF 初筛战确认真验，以普及ANCA 的临床应用价格，没有搞单独初筛大概单独确认真验，免得落矮对于徐病诊疗的特同性.2、没有克没有及仅检测抗PR3战MPO 二种特同性抗体，而没有检测，那样简单节造ANCA 对于徐病诊疗的特同性.3、用IIF 检测时，仅使用乙醇牢固的粒细胞片，那样没有克没有及庄区别ANA 与ANCA ：借帮猴肝细胞战其中的肝血窦粒细胞.ANCA 阳性，惟有肝血窦粒细胞出现荧光，.如果二者共时阳性，所有肝细胞核皆有荧光.猴肝细胞乙醇牢固粒细胞是尺度真验基量.区别二种荧光模型：c-ANC荧光模型荧光表示乙醇牢固粒细胞甲醛牢固粒细胞 Hep-2细胞猴肝细胞A N A 阳性c-ANCA 阳性胞量浮现弥集的细颗粒荧光，胞量荧光浑晰勾勒出核的表面，分页核之间荧光巩固.胞量浮现弥集的细颗粒荧光，胞量荧光浑晰勾勒出核的表面，分页核之间荧光巩固. 阳性肝细胞自己无荧光. 仅肝血窦粒细胞出现荧光.p-ANCA 阳性甲醛耐受p -ANC A 浮现核周胞量仄滑丝状戴荧光.荧光阳性的胞量主要集结正在分页核周围，产死环状大概没有准则的块状.胞量浮现弥集的细颗粒荧光，胞量荧光浑晰勾勒出核的表面，分页核之间荧光巩固.阳性肝净细胞自己无荧光. 仅肝血窦粒细胞出现荧光.甲醛敏感p -ANC A浮现核周胞量仄滑丝状戴荧光.荧光阳性的胞量主要集结正在分页核周围，产死环状大概没有准则的块状.阳性阳性肝净细胞自己无荧光. 仅肝血窦粒细胞出现荧光.A N A 阳性ANCA 阳性细胞核阳性，荧光强度巩固阳性细胞核浮现荧光表示，如ANA 所述肝细胞核阳性.肝血窦粒细胞已睹荧光.甲醛耐受p-ANCA 阳性细胞核阳性，荧光强度巩固荧光表示如c-ANCA 阳性，乙醇，甲醛牢固粒细胞所述细胞核浮现荧光表示，如ANA 所述.肝细胞战肝血窦粒细胞皆有荧光.甲醛敏感p-ANCA 阳性细胞核阳性，荧光强度巩固阳性细胞核浮现荧光表示，如ANA 所述.肝细胞战肝血窦粒细胞皆有荧光.重排除ANA的搞扰，简单出现假阳性.四、临床意思（一）ANCA与本收性小血管炎韦格纳肉芽肿(WG)，隐微多动脉炎(MPA)，坏死性月牙体性肾小球肾炎(NCGN)战变应性肉芽肿性血管炎(CSS)等等本收性系统性小血管炎的收病与ANCA稀切相闭，临床上已将上述徐病统称为ANCA相闭小血管炎.ANCA,特同性PR3抗体战抗MPO抗体的检测已成为本收性小血管炎的敏感特同的血浑教检测名目.1、抗PR3抗体特同性PR3抗体为WG的标记性抗体，抗PR3抗体荧光模型以c-ANCA为主.但是以c-ANCA诊疗WG特同性为90％，而以抗PR3抗体的特同性可超出95％.抗PR3抗体正在其余的本收性血管炎中业不妨检测出去，但是阳性率较矮.抗PR3抗体敏感度与徐病的活动性及病程有闭，正在徐病的早期症状没有明隐时，便可出现阳性.果而抗PR3抗体常动做WG的早期诊疗、疗效推断、复收预计的指标，对于临床治疗有要害的参照价格.2、抗MPO抗体抗MPO抗体荧光模型以p-ANCA为主，主要与MPA、NCGN、CSS相闭.还可睹于其余徐病，如节结性多动脉炎，抗肾小球基底膜肾病，WG，SLE，RA，药物诱导的狼疮，Felty概括症等.抗体滴度与徐病活动性相闭，可用于早期诊疗、疗效推断、复收预计的指标，对于临床治疗有要害的参照价格.抗MPO抗体阳性下度提示坏死性血管炎大概特收性NCGN，对于诊疗本收性小血管炎的特同性达到99％.果而每一个没有明本果的血管炎大概肾小球肾炎的患者，皆该当检测ANCA.表三：ANCA 与本收性小血管炎（二）ANCA 与药物诱导性血管炎连年去没有竭有药物治疗引起的ANCA 阳性的病例报导，如丙基硫氧嘧啶，肼苯哒嗪，普鲁卡果酰胺，青酶胺，好谦霉素，他巴唑/甲巯咪唑等.其中报导比较多的是少久使用丙基硫氧嘧啶引起的ANCA ，其特性是滴度下，抗体谱广（抗本主假如MPO ，也可共时陪随大概单独出现其余靶抗本，如PR3，LF ，Cath G ，BPI ，LYS 等）.药物诱导性血管炎患者临床表示与本收性血管炎类似，停行丙基硫氧嘧啶用药后，临床症状佳转，ANCA 可转阳.果此，少久使用丙基硫氧嘧啶治疗历程中，应定期检测ANCA ，趁早创造药物诱导性血管炎.（三）ANCA 与其余徐病除本收性血管炎中，其余一些徐病中也可出现ANCA ，主要为p-ANCA ，其靶抗本并没有是PR ，MPO ，而是LF ，Cath G ，BPI ，LYS 等1、缓性炎症性肠病(CIBD)CIBD 是一种消化系统的自己免疫性徐病，包罗溃疡性结肠炎（UC ），克罗恩病（CD ）二种.往常的CIBD 诊疗依好X 线查看，内窥镜及构造教诊疗，缺累灵验的考查室指标.连年去钻研创造UC 病人血浑中ANCA 阳性率为60-80％，而CD 患者的阳性率为10-20％，多为p-ANCA ，相闭靶抗本有BPI 等.滴度与徐病的活动度战病程无闭.果相闭徐病荧光模型靶抗本（％）韦格纳肉芽肿(WG) C ，P （少睹） PR3（85），MPO （10）隐微多动脉炎(MPA)C ，PPR3（45），MPO （45）坏死性月牙体性肾小球肾炎(N CGN)C ，P （少睹） PR3（25），MPO （65）变应性肉芽肿性血管炎(CSS) C ，P （少睹） PR3（10），MPO （60）结节性多动脉炎（PAN ）少睹 PR3（5），MPO （15）抗肾小球基底膜病（抗GBN ）PMPO为p-ANCA正在UC阳性率下，CD阳性率矮，故可动做二者的鉴别诊疗及UC早期诊疗指标.2、结缔构造病正在结缔构造病中，ANCA阳性主要睹于SLE战RA，其余结缔构造病中少睹.但是文件报导正在SLE战RA阳性率好别特地大（16-69％），那大概与使用要领，抗本基量片及处事人员火仄有很大闭系.SLE中ANCA阳性大概与缓性炎症反应有闭，如动脉炎，浆膜炎战CRP减少等.有报导抗MPO抗体与RA的闭节中益伤及血管益伤有闭.3、自己免疫性肝病正在自己免疫性肝病中，也可检测到p-ANCA.正在本收性软化性胆管炎(PSC)患者中，p-ANCA阳性率下达70-80％，是该病要害的血浑教指标.4、其余徐病有文件报导，HIV,阿米巴，细菌熏染以及没有明本果的肺部缓性炎症及纤维化患者中有p-ANCA阳性.。

医学检验·检查项目：抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)_课件模板

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临床意义：各不相同，不同的抗原抗体系统与不同的疾病有关，故对ANCA 的特异性靶抗原检测更有助于临床诊断。
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正常值：阴性。 (注：具体参考值请根据各实
验室而定。)。
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临Hale Waihona Puke 意义：omephritis，IFSNG N)，新月形肾小球肾炎(NCGN)，结节性多动脉炎(PAN)等均可检出ANCA 。WG 的cANCA 阳性率可高达 90%，抗PR3抗体阳性是诊断WG的特异性指标。在坏死性或新月形肾小球肾炎患者， ANCA的阳性率可达80%，pANCA 对应的特异性
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简介：
)加到已知抗原标本上，在湿盒中37℃保温30min，使抗原抗体充分结合，然后洗涤，除去未结合的抗体。
第二步，加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果第一步发生了抗原抗体反应，标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结合，从而可鉴定未知抗体。
相关疾病：
溃疡性结肠炎、懒惰白细胞综合征、急性海绵窦栓塞性静脉炎、血管炎性周围神经病、显微型多血管炎、非特异性系统性坏死性小血管炎、系统性血管炎、显微镜下多血管炎、大动脉炎、韦格纳肉芽肿、颞动脉炎、类风湿性关节炎、红斑狼疮、克罗恩病、原发性小血管炎性肾损害、变应性血管炎、韦格内肉芽肿、系统

anca间接荧光法

anca间接荧光法是一种重要的实验室检测方法，用于诊断和监测自身免疫性疾病，特别是小血管炎。

本文将介绍anca间接荧光法的原理、应用和意义。

anca间接荧光法是通过检测血清中的抗中性粒细胞胞质抗体（ANCA）来诊断和监测自身免疫性疾病。

这种抗体与小血管炎、肾炎和其他炎症性疾病密切相关。

在anca间接荧光法中，患者的血清样本与中性粒细胞的切片共同孵育，然后用荧光染料标记的抗人类IgG抗体与患者血清中的ANCA结合。

通过显微镜观察，可以检测出细胞质内的荧光信号，从而确定是否存在ANCA。

anca间接荧光法在临床上具有广泛的应用。

首先，它是一种常用的自身免疫性疾病的诊断方法。

通过检测血清中的ANCA水平和类型，可以帮助医生确定患者是否患有小血管炎或其他相关疾病。

其次，anca间接荧光法还可以用于疾病的监测。

通过定期检测患者的ANCA 水平，医生可以评估治疗的效果和疾病的进展情况。

最后，anca间接荧光法还可用于研究自身免疫性疾病的发病机制和病理生理过程。

anca间接荧光法在自身免疫性疾病的诊断和监测中具有重要意义。

通过该方法可以快速、准确地确定患者是否存在ANCA，从而指导医生制定合理的治疗方案。

此外，anca间接荧光法还可以帮助研究人员深入了解自身免疫性疾病的发病机制，为新药的开发和治疗策略的制定提供重要依据。

总之，anca间接荧光法是一种重要的实验室检测方法，对于自身免疫性疾病的诊断、监测和研究具有重要意义。

它的应用可以为医生提供更准确的诊断结果，帮助患者获得更及时的治疗，同时也为科学家提供了研究自身免疫性疾病的重要工具。

panca滴度参考值

panca滴度参考值
Panca滴度，即抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）的一种类型，全称为抗蛋白酶3抗体（Anti-Proteinase 3 antibodies），是诊断某些自身免疫性疾病，尤其是血管炎和小血管炎的重要血清学指标。

Panca滴度的参考值因不同的实验室和检测方法可能有所差异，但一般来说，正常人的Panca滴度应为阴性或低于特定阈值。

在解读Panca滴度结果时，需要注意以下几点：
滴度水平：Panca滴度通常以单位体积内抗体的浓度来表示，如某实验室设定的参考值上限为20 U/mL，那么滴度低于此值可视为阴性。

阳性判断：若患者血清中的Panca滴度高于参考值上限，则判断为阳性，可能提示存在与中性粒细胞相关的自身免疫性疾病。

疾病关联：Panca阳性多见于肉芽肿性血管炎（Wegener's肉芽肿）、显微镜下多血管炎等，但也可见于其他疾病如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮等。

滴度变化：对于已经确诊的患者，定期监测Panca滴度的变化有助于评估病情活动性和治疗效果。

结果解读：Panca滴度结果应结合患者的临床表现、其他实验室检查和影像学检查等进行综合判断。

总之，Panca滴度参考值是根据不同实验室和检测方法设定的，用于辅助诊断与中性粒细胞相关的自身免疫性疾病。

在解读结果时，应综合考虑多个因素以做出准确判断。

抗中性粒细胞胞浆抗体相关性小血管炎等ANCA相关性血管炎诊断标准、复发和感染、治疗进展、治疗共识总结

抗中性粒细胞胞浆抗体相关性小血管炎等ANCA相关性血管炎诊断标准、复发和感染、治疗进展、治疗共识不同总结诊断标准抗中性粒细胞胞浆抗体相关性小血管炎（AAV）是一组自身免疫性疾病，主要累及小血管，病理以血管壁坏死性炎症为特征，少见免疫复合物沉积。

主要包括肉芽肿性血管炎（GPA）、显微镜下多血管炎（MPA）、嗜酸性肉芽肿性血管炎（EGPA）。

表1：2022年ACR/EULAR关于GPA分类标准确诊为小或中血管炎，并且排除其他诊断：以上得分≥5分者可以分类诊断为GPA，敏感性92％，特异性94％表2：2022年ACR/EULAR关于EGPA分类标准确诊为小或中血管炎，并且排除其他诊断：以上得分≥6分的患者可以分类诊断为EGPA，敏感性85％，特异性99％表3：2022年ACR/EULAR关于MPA分类标准确诊为小或中血管炎，并且排除其他诊断以上得分≥5分的患者可以分类诊断为MPA，该标准敏感性91%、特异性94%。

AAV复发和感染ANCA检测对诊断及分类、病理活检的重要性（如肾或肺组织活检），血管炎的病情评估包括疾病活动度、严重程度、损伤，并结合分期来判断病情是否严重。

此外，AAV最大的临床特点是极易复发，约25%~33%的患者会出现复发，平均复发时间为24个月。

复发时临床表现各不相同，以皮肤和关节表现最多见，而肺、肾表现较少，也可出现以往末受累器官受累。

另外治疗免疫抑制使用不足会导致AAV复发，而免疫抑制过度则会发生感染。

随着长期应用糖皮质激素和细胞毒药物或免疫抑制剂治疗，临床医生还需要密切重视其副作用尤其是感染。

AAV治疗进展AAV的治疗分为诱导缓解与维持缓解阶段，戴冽教授指出在诱导缓解治疗期间应尽快使疾病达到缓解，以防止造成器官的不可逆损害。

维持阶段的治疗是使疾病持续处于缓解状态，减少疾病复发。

1、诱导缓解的治疗药物是糖皮质激素联合免疫抑制剂。

糖皮质激素是AAV诱导缓解的一线治疗药物。

最常用于诱导缓解治疗的免疫制剂为环磷酰胺（CTX）、以B细胞为靶向的单克隆抗体利妥昔单抗。

抗中性粒细胞胞浆抗体的两种检测方法比较

抗中性粒细胞胞浆抗体的两种检测方法比较目的比较线性免疫分析法(LIA)与间接免疫荧光法(IIF)检测抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的性能,评价两种方法在ANCA检测中的应用效果。

方法用LIA法和IIF法对92份自身免疫性疾病患者血清和160份健康献血者血清进行检测,用χ2检验,对两种方法结果进行比较分析。

结果LIA法阳性率为6.4%(16/252),其中PR3阳性率为2.4%(6/252),MPO阳性率为4.0%(10/252);IIF法阳性率为8.7%(22/252),其中C-ANCA阳性率为3.5%(9/252),P-ANCA阳性率为5.2%(13/252)。

在经确证为血管炎的19例标本中,LIA法检出阳性16例,假阴性3例,敏感性为84.2%(16/19),准确性为100%(16/16); IIF法检出阳性23例,假阳性4例,敏感性为94.7%(18/19),准确性为81.8%(19/23)。

两种方法的敏感性和准确性比较均有显著性差异(P＜0.01)。

结论两种方法检测ANCA的阳性率的比较差异无显著性(P>0.05);但IIF法相对敏感,LIA法有较高的准确性,两者联合检测可提高ANCA的检出质量。

【Abstract】Objective To compare the properties of Line Immunoassay(LIA) with Indirect Immunofluorescent(IIF) in detecting anti-neutrophil cytetoplasmic anti-autoantibody(ANCA) and evaluate their effectiveness.Methods Serum samples of 92 patients with autoimmune diseases and 160 healthyblood donors were detected with LIA and IIF separately,then compare those testing results.Results LIA method showed that positive rate was 6.4%(16/252),in which PR3-positive rate was 2.4%(6/252),MPO-positive rate was 4.0%(10/252); and IIF method showed that positive rate was 8.7%(22/252),where C-ANCA positive rate was 3.5%(9/252),P-ANCA positive rate was 5.2%(13/252).After the confirmation of 19 specimens,LIA method detected to show that 16 cases were positive and3 cases were negative,the sensitivity was 84.2%(16/19),accuracy was 100%(16/16); IIF method reviewed that the 23 cases positive,false positive in 4 cases,the sensitivity was 94.7%(18/19),accuracy was 81.8%(19/23).The sensitivity and accuracy of the two methods had a significant difference (P＜0.01).Conclusion The difference of the two detecting positive rate of ANCA resultswas significant(P>0.05),while IIF method is relatively sensitive,LIA method has high bination of the two detection methods can improve the quality of detection of ANCA.【Key words】Antineutropil cytoplasmic antibodies(ANCA);Line Immunoassay;Indirect ImmunofluorescentANCA是一種针对中性粒细胞和单核细胞胞浆成分的自身抗体,临床上主要用于诊断Wegener肉芽肿、原发性小血管炎、炎性肠病等系统性血管炎疾病[1],现已成为临床常规检测项目。

ANA、ANCA检测及临床应用

ANA、ANCA检测及临床应用1、检测原理及方法1.1 ANA检测原理ANA（自身抗体）是机体免疫系统产生的抗体，针对自身组织中的核糖核酸和核蛋白进行作用。

ANA检测是通过间接免疫荧光抗体（IFA）技术，观察患者血液标本中的自身抗体与细胞核内抗原结合的荧光反应，以判断患者是否存在ANA阳性。

1.2 ANCA检测原理ANCA（抗中性粒细胞胞浆抗体）是机体免疫系统产生的抗体，针对中性粒细胞胞浆成分进行作用。

ANCA检测是通过酶联免疫吸附试验（ELISA）或免疫荧光抗体（IFA）技术，观察患者血液标本中的ANCA与中性粒细胞胞浆成分结合的反应，以判断患者是否存在ANCA阳性。

2、ANA检测及临床应用2.1 检测适应症ANA检测广泛应用于自身免疫性疾病的诊断和鉴别诊断，包括系统性红斑狼疮、干燥综合征、结核性脓毒症、类风湿关节炎等。

2.2 临床意义ANA阳性表明免疫系统对自身抗原产生异常反应，但并不代表特定疾病的存在。

ANA阳性结果应结合患者的病史、临床表现和其他辅助检查结果进行综合分析和判断。

2.3 结果解读ANA检测结果通过荧光显微镜或荧光显微镜图片解读。

阳性结果表示患者血清中存在与细胞核内抗原结合的自身抗体。

阴性结果表示未检测到自身抗体。

3、ANCA检测及临床应用3.1 检测适应症ANCA检测主要应用于自身免疫性疾病，如无器官限定型小血管炎、肾小球肾炎、全身性血管炎等。

3.2 临床意义ANCA阳性结果提示存在抗中性粒细胞胞浆抗体，但并不一定与特定疾病相关。

阳性结果应结合患者的病史、临床表现和其他辅助检查结果进行综合分析和判断。

3.3 结果解读ANCA检测结果通常通过ELISA或免疫荧光染色解读，阳性结果表示患者血清中存在与中性粒细胞胞浆成分结合的自身抗体。

阴性结果表示未检测到自身抗体。

4、附件相关文献和研究报告等附件详见附件部分。

5、法律名词及注释5.1 ANA：自身抗体（Anti-Nuclear Antibody）5.2 ANCA：抗中性粒细胞胞浆抗体（Anti-Neutrophil Cytoplasmic Antibodies）5.3 IFA：间接免疫荧光抗体（Indirect Immunofluorescence Assay）5.4 ELISA：酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）6、结束语感谢您阅读本文档，如有任何问题或需进一步了解，请随时与我们联系。

荧光片讲解-ANCA-ppt

粒细胞(乙醇固定)
粒细胞(甲醛固定)
猴肝HEp-2 细胞
粒细胞(乙醇固定)
粒细胞(甲醛固定)
猴肝HEp-2 细胞
猴肝HEp-2 细胞粒细胞(乙醇固定)
粒细胞(甲醛固定)
粒细胞(甲醛固定) HEp-2 细胞
粒细胞(乙醇固定)猴肝
粒细胞(甲醛固定) HEp-2 细胞
粒细胞(乙醇固定)
猴肝
PR3 (EUROPLUS) MPO (EUROPLUS)
HEp-2 cells primate liver granulocytes (HCHO) granulocytes (EtOH)
PR3 (EUROPLUS) MPO (EUROPLUS)
HEp-2 cells primate liver granulocytes (HCHO) granulocytes (EtOH)
¾从纯天然的肝组织的肝血窦中找增强的中性粒细胞
关于乙醇固定的中性粒细胞：OK Maybe……..
EUROIMMUN
EUROIMMUN
甲醛抗性
pANCA 猴肝HEp-2 细胞粒细胞(乙醇固定)粒细胞(甲醛固定)
EUROIMMUN
ANA 干扰？
pANCA ？猴肝HEp-2 细胞粒细胞(乙醇固定)粒细胞(甲醛固定)
EUROIMMUN
阴性
猴肝HEp-2 细胞粒细胞(乙醇固定)粒细胞(甲醛固定)
EUROIMMUN
甲醛抗性
pANCA 猴肝HEp-2 细胞粒细胞(乙醇固定)粒细胞(甲醛固定)
EUROIMMUN
ANA 干扰？
pANCA ？猴肝HEp-2 细胞粒细胞(乙醇固定)粒细胞(甲醛固定)
主要会对乙醇固定粒细胞的基质产生干扰。

抗中性粒细胞胞浆抗体

北大第一医院肾内科对怀疑小血管炎的5604名患者血清进行了ANCA的检测， IIF-ANCA检出率为5.3%，阳性检出最多在7、8和12月份。85%的IIF-ANCA阳性患者确诊为ANCA相关小血管炎。抗MPO 和抗PR3阳性的比率约为7:1。平均发病年龄为53.1岁。
ANCA相关疾病在我国并不少见
多数MPA患者为p-ANCA，靶抗原为 MPO，抗MPO抗体与p-ANCA同时阳性诊断MPA的特异性可高达99%。
ANCA阳性的临床意义
单纯间接免疫荧光下 ANCA阳性，其诊断价值极为有限，故对怀疑原发性小血管炎的患者，应进一步检测ANCA所作用的特异性抗原成分，尤其是 PR3和MPO。
附着于血管内皮细胞表面
局部血管损伤，小血管炎症
ANCA的临床意义 ——ANCA相关小血管炎

显微镜下多血管炎（MPA）变应性肉芽肿血管炎（CSS）坏死性新月体肾炎（NCGN）（MPA肾脏局限型） Wegener肉芽肿（WG）

ANCA不仅与原发性小血管炎相关,也可见于许多其它炎症性疾病,例如炎症性肠病,包括溃疡性结肠炎和克隆氏病;自身免疫性肝胆疾病,如原发性硬化性胆管炎;类风湿性关节炎; 和某些肺部非感染性炎症性疾病,如囊性纤维化、肺间质纤维化等。但上述ANCA相关的疾病并不识别PR3和MPO,其特异性ANCA靶抗原为其它胞浆成分。
特异性靶抗原

c-ANCA p-ANCA
丝氨酸蛋白酶3 （PR3）髓过氧化物酶（MPO）弹性蛋白酶（HEL) 组织蛋白酶G（CG）溶菌酶（LY）乳铁蛋白（LF）通透性杀菌蛋白（BPI）
PR3

PR3是中性丝氨酸蛋白酶家族中的一员,是由228个氨基酸组成的分子量为 27KD的蛋白酶。

简述llF检测ANCA的方法学评价

简述llF检测ANCA的方法学评价ANCA(Anti-Neutrophil Cytoplasmic Antibodies) 抗中性粒细胞胞浆抗体，是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成份为靶抗原的自身抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等多种疾病的诊断和鉴别诊断具有重要的意义，已成为自身免疫性疾病非常重要的一项常规检测项目。

ANCA的检测方法间接荧光免疫（IIF）是实验室检测最经典的方法，并且至今仍被作为ANCA筛检的“金指标”，是常用于ANCA的筛查实验。

酶联免疫吸附实验（ELISA）：此方法为定量实验，可检测蛋白酶3、乳铁蛋白、髓过氧化物酶、弹性蛋白酶、组织蛋白酶G等。

间接免疫荧光法加ELISA方法联合检测则可使诊断特异性提高98%。

免疫印迹（Western Blot）：此方法为定性实验，可以在间接免疫荧光筛查实验阳性时排除干扰、确认靶抗原，其中靶抗原包括：髓过氧化物酶（MPO）、蛋白酶3(PR3)、抗肾小球基底膜抗体（GBM）。

临床意义cANCA：抗原主要为蛋白酶-3(PR3-proteinase) 。

阳性主要见于韦格纳肉芽肿，阳性率占80%，且与病程、严重性和活动性有关;是韦格纳肉芽肿 (WG)病的特异性抗体。

cANCA阳性也可见于少数显微镜下多血管炎（MPA）过敏性肉芽肿性血管炎（CSS）、结节性多动脉炎（PAN）、少数巨细胞动脉炎等。

pANCA：目前所发现的 pANCA的靶抗原有髓过氧化物酶（MPO）、乳铁蛋白、弹性蛋白酶、组织蛋白酶G、溶菌酶和β-葡萄糖醛酸酶。

阳性见于显微镜下多血管炎（MPA）、坏死性新月体性肾小球肾炎（NCGN）、过敏性肉芽肿性血管炎（CSS），还可见于炎症性肠病、自身免疫疾病等。

注意事项1.应用两基质（乙醇固定的粒细胞，猴肝）间接免疫荧光法检测SLE（系统性红斑狼疮）中的ANCA时，由于ANA干扰可产生31.2%的假阳性结果，主要为均质型ANA（占77.8%），所以在使用间接免疫荧光法检测ANCA时可选择三基质（乙醇固定的粒细胞，甲醛固定的粒细胞，Hep-2+乙醇固定的粒细胞）或四基质（乙醇固定的粒细胞，甲醛固定的粒细胞，Hep-2+乙醇固定的粒细胞，Hep-2细胞）生物玻片检测2.结合ELISA定量方法或免疫印迹（WB）定性方法检测ANCA靶抗原以避免干扰，可提高结果的准确性和ANCA临床应用价值。

ANCA荧光判读与讲解

提示
1）ANCA阴阳性 2）cANCA 或 pANCA
注意
ANA阳性
粒细胞 (甲醛固定) GRANULOC.HCHO
HEP-2 猴肝 HEPAR PRIM
1）cANCA：进一步提示是否 2）pANCA：甲醛敏感型或抗性
ANA阴阳性 1）ANA阴阳性 2）ANCA：粒细胞是否荧光增强
ANA阳性
辅助判读辅助判读
临床应用范围受限
假阳性
给临床信息少
国内ANCA临床常规检测存在的问题
EUROIMMUN
ANCA检测方法的合理选择
l 两种方法联合使用，可提高ANCA临床应用价值
原发性系统性小血管炎患者约5%IIFT阴性而ELISA阳性
EUROIMMUN
ANCA IIF法检测的影响因素-ANA
l 据国内外报道，采用IIF在SLE中检测ANCA，阳性率差异很大， 16%-69%，主要为pANCA 仅采用乙醇片判断，ANA干扰大 l 据欧蒙检测数据，SLE中单独采用乙醇固定抗原片检测ANCA，由于 ANA干扰可产生31.2%的假阳性结果，主要为均质型的ANA（占77.8%） l 推荐：IIF法检测ANCA提倡应用组合抗原片（甲醛固定片、乙醇固
>90% 70% up to 30% 10-20% 5-10%
EUROIMMUN
注意区分ANA对荧光模型的干扰
ANA homogen
Nuclear dots
Centromere
ANA nucleolar
Scl-70
Sm/RNP
SS-A/SS-B
Nuclear memb.
Ribosomes
Mitochondria
提醒：
强C-ANCA有时会掩盖弱pANCA;

抗中性粒细胞胞浆抗体ANCA的检测及临床意义

抗中性粒细胞胞浆抗体ANCA的检测及临床意义抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA，anti-neutrophil cytoplasmic antibodies）是一种自身免疫抗体，可对中性粒细胞胞浆内的不同成分产生免疫反应。

ANCA的检测对于自身免疫性疾病的诊断和治疗具有重要的临床意义。

本文将详细介绍ANCA的检测方法以及其在临床上的意义。

ANCA的检测一般采用免疫荧光法（IF）和酶联免疫吸附法（ELISA）。

IF法是目前最为常用和敏感的检测方法。

该方法通过将患者血清标本与蛇毒诱导的中性粒细胞发生免疫反应，然后使用荧光染料标记的二抗观察结果。

在IF法中，ANCA阳性可分为两种类型：周边型（P-ANCA，perinuclear ANCA）和细胞浆型（C-ANCA，cytoplasmic ANCA）。

P-ANCA主要与抗髓过氧化物酶（MPO，myeloperoxidase）产生免疫反应，而C-ANCA主要与抗蛋白酶3（PR3，proteinase 3）产生免疫反应。

ELISA法可以定量检测ANCA的水平，并且对于早期诊断和临床监测具有较高的灵敏度和特异性。

ANCA检测的临床意义主要涵盖以下几个方面：1. 诊断自身免疫性疾病：ANCA检测对于疾病诊断具有重要意义，尤其是与ANCA相关的疾病，如ANCA相关性血管炎（AAV，ANCA-associated vasculitis）、系统性红斑狼疮（SLE，systemic lupus erythematosus）等。

对于患者表现为肾脏、肺部和鼻部等炎症病变的情况，ANCA检测可以提供重要的辅助诊断依据。

2.评估疾病活动性和预测预后：ANCA检测可以在患者治疗期间监测疾病的活动性。

活动性的AAV常伴有ANCA滴度升高，检测ANCA可以帮助评估治疗的疗效和预测预后。

一些研究发现，ANCA滴度的下降可以与治疗反应的改善相关。

3.指导治疗策略：ANCA检测可以为治疗提供指导信息。

让你迷之尴尬的“ANCA”

让你迷之尴尬的“ANCA”导语你是否听说过抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）？ANCA的结果是不是经常让你晕头转向呢？今天我来谈谈让你迷之尴尬的ANCA。

定义抗中性粒细胞胞浆抗体（antineutropil cytoplasmic antibodies，ANCA）代表一组抗中性粒细胞胞浆成分的抗体谱。

指与中性粒细胞及单核细胞胞质中溶酶体酶发生反应的抗体。

当中性粒细胞受抗原刺激后，胞浆中的α-颗粒释放蛋白酶-3（PR-3）、髓过氧化物酶物质（MPO）及白细胞抗原生成，刺激机体而产生ANCA。

其抗原主要为丝氨酸蛋白酶3（PR-3），髓过氧化物酶（MPO）。

ANCA是存在于血管炎患者血清中的自身抗体，是诊断血管炎的一种特异性指标。

ANCA常与疾病的活动性有关，疾病缓解期滴度下降或消失。

检测原理及方法ANCA其抗原成分包括：人类中性蛋白酶3（PR-3）、髓过氧化物酶（MPO）、杀菌/通透性增高蛋白（BPI）、丝氨酸蛋白酶、人白细胞弹性蛋白酶（HLE）、乳铁蛋白（LF）、组织蛋白酶G（Cath-G）、β葡萄糖醛酸酶和溶菌酶等。

临床上常用的ANCA检测方法主要有间接免疫荧光法(IFF)和酶联免疫吸附法(ELISA)。

首选方法为IFF，至今仍作为ANCA筛检的“金标准”。

在用IFF法检测ANCA的同时进行ELISA的检测将有助于疾病的动态观察；靶抗原PR3或MPO的分辨将有助于某些特发性坏死性血管炎或坏死性肾小球肾炎的确诊。

在荧光显微镜下根据荧光分布把ANCA分成胞浆型ANCA（C-ANCA）和核周型ANCA(P-ANCA)，前者的主要抗原成分为PR-3，后者主要是MPO，第三种是非典型ANCA(X-ANCA)，代表了前两者的混合物，其主要靶抗原还不清楚。

临床意义1C-ANCAC-ANCA可见于多种系统性血管炎；C-ANCA对呼吸道有亲合性，致上下呼吸道坏死，肉芽肿形成，故C-ANCA主要见于Wegener肉芽肿(WG)，阳性率占80%，C-ANCA在WG的特异性为95%，系WG的特异性抗体，且与WG疾病的病程、严重性、病情活动性有关。

欧蒙ANCA荧光片判读指导

样本10
EOH
HCHO
HEp-2 + EOH
甲醛抗性pANCA pos.BPI-ELISA pos.
乙醇
有荧光
pANCA荧光表现**
甲醛
无荧光#
HEp-2+粒细胞
pANCA
ANA
+
G>H^
ANCA判读
样本11
EOH
HCHO
HEp-2 + EOH
甲醛敏感pANCA pos.乳铁蛋白-ELISA pos.
EOH
HCHO
HEp-2 + EOH
常规样本7
pANCA 甲醛抗性LF positive
EOH
HCHO
HEp-2 + EOH
常规样本8
PANCA 甲醛敏感MPO,PR3 ELISA 阴性
EOH
HCHO
HEp-2 + EOH
常规样本9
CANCA PR3 positive
EOH
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)荧光片
判读与常规片分享
ANCA = Anti-Neutrophil Cytoplasm Autoantibodies
cANCA
胞浆型ANCA描述：中性粒细胞胞浆呈现弥散的粗细不一的颗粒荧光，胞浆荧光清晰勾勒细胞及细胞核的形态，分叶核间荧光呈现重染
pANCA
核周型ANCA描述：中性粒细胞呈现典型的核周胞浆带状荧光增强，荧光阳性染色主要集中在分叶核周围，形成环状或不规则的块状，带状荧光向细胞核内浸润或不浸润。
乙醇
有荧光
cANCA荧光表现*
甲醛
Neg
无荧光
ANCA判读
样本7
EOH

3-自身抗体荧光片判读与讲解

抗核抗体（ANA）荧光模型解析及判读
储韬 FAE for AnHui
ANA筛查（间接免疫荧光法）
检测ANA的“金标准” 基质组合：Hep-2+灵长类肝抗原谱完整 (细胞核、细胞浆)
ANA筛查（基质组合）
Hep-2细胞灵长类肝
ANA筛查（基质组合）
抗核抗体荧光模型分类
根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：核均质型： dsDNA、组蛋白和核小体等核膜型：细胞核核颗粒型板层素、gp210等核糖核蛋白：Sm、nRNP、SS-A、SS-B 细胞周期蛋白：I型（PCNA）和II型 Ku 核仁型： Scl-70、RNA多聚酶、PM-Scl和原纤维蛋白等
EUROIMMUN
关于乙醇固定的中性粒细胞：
OK
Maybe
……..
EUROIMMUN
ANA（干扰）
HEp-2 细胞
粒细胞 (甲醛固定)
猴肝
粒细胞 (乙醇固定)
ANA+pANCA
HEp-2 细胞
粒细胞 (甲醛固定)
猴肝
粒细胞 (乙醇固定)
ANCA产品读片要点：
ANA主要会对乙醇固定粒细胞的基质产生干扰
甲醛敏感的pANCA最易被ANA干扰，从而产生误报。
使用多基质组合（HEp-2/猴肝/乙醇固定/甲醛固定）进行综合判断，可最大限度降低ANA的干扰。
EUROIMMUN
自身免疫性肝病（ALD）相关抗体荧光模型解析及判读
抗线粒体抗体（AMA）
鼠肾：肾小管上皮细胞胞浆颗粒样荧光。
相关疾病：原发性胆汁性肝硬化（PBC）等。
ANA
核浆点型：着丝点、核点等细胞浆胞浆颗粒型：线粒体、Jo-1、核糖体等胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等分裂期细胞：纺垂体、中间体、中心粒等

血清ANCA检测在结缔组织病中的临床意义探讨

血清ANCA检测在结缔组织病中的临床意义探讨抗中性粒细胞胞浆抗体（antineutrophil cytoplasmic antibody，ANCA ）是针对中性粒细胞颗粒成分和单核细胞溶酶体的自身抗体。

根据间接免疫荧光的着染部位不同分为胞浆型（c-ANCA）和核周型（p-ANCA）。

血清中的ANCA不仅与系统性小血管炎有明显相关，而且与自身免疫性疾病也有一定的关联性[1]。

本文就血清ANCA检测在系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）、类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）、原发性干燥综合征（prime sjogren syndrome，PSS）等结缔组织病（connective tissue disease，CTD）中的临床意义进行探讨。

1資料与方法1.1对象收集2010年1月—2012年12月我院门诊和住院的结缔组织病患者80例，男13例，女67例，年龄14～78岁，平均（39.4±17.2）岁。

其中SLE患者25例，诊断标准按1982年美国风湿病学会修订的的分类标准；RA患者43例，诊断标准按1987年美国风湿病学会的诊断分类标准；PSS患者12例，诊断标准按1991年蒋明等[2]建议标准。

另选取40例正常健康体检者为对照组，男7例，女33例，年龄18～79岁，平均（41.3±17.8）岁。

1.2方法1.2.1标本采集采集所有受试者空腹静脉血3 mL，及时分离血清，置2～8℃环境保存。

1.2.2试剂与仪器ANCA检测采用间接免疫荧光法，试剂由德国欧蒙医学实验诊断有限公司提供，使用奥林巴斯BX43荧光显微镜。

1.2.3ANCA检测步骤将受试者血清与0.01 mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液（PBS-Tween）按1∶[KG-*2]10稀释，吸取25 μL滴加于生物薄片上，室温孵育30 min，用PBS-Tween缓冲液流水冲洗，以去除未结合的样品，然后将其浸泡于PBS-Tween溶液中5 min以上，加入30 μL荧光标记的抗人球蛋白。

抗中性粒细胞胞浆抗体ANCA的检测及临床意义

抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA检测及临床意义――间接荧光免疫(IIF) 方法(欧盟)一、ANCA概念及分类抗中性粒细胞胞浆抗体是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成份为靶抗原的自身抗体，对系统性血管炎炎症性肠病等多种疾病的诊断和鉴别诊断具有重要的意义，已成为自身免疫性疾病的一项非常重要的常规检测项目。

目前，已经有十余种中性粒细胞胞浆成分被证实为ANCA勺靶抗原，蛋白酶3(PR3)，髓过氧化物酶(MPO,人白细胞弹性蛋白酶(HEL)，乳铁蛋白(LF), 组织蛋白酶G(Cath G)，杀菌/通透性增强蛋白(BPI)，人溶酶体相关膜蛋白2 (H-LAMP2),溶菌素(LYS),天青杀素，防御素，烯醇化酶，葡萄糖醛酸酶。

根据乙醇固定勺中性粒细胞基质片中，可以区分两种不同勺荧光模型：一种胞浆型(c-ANCA,是均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中的颗粒型荧光，细胞核无荧光。

在乙醇和甲醛固定勺中性粒细胞片中，其荧光模型表现相同。

其主要的靶抗原是蛋白酶3(PR3)。

另一种是核周型(p-ANCA,是围绕中性粒细胞细胞核周围的平滑带状荧光。

由多种抗原引起，主要靶抗原是髓过氧化物酶(MPO),人白细胞弹性蛋白酶(HEL)，乳铁蛋白(LF)，组织蛋白酶G(Cath G),杀菌/通透性增强蛋白(BPI), 人溶酶体相关膜蛋白2 (H-LAMP2)，溶菌素(LYS)等。

不同抗体在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现有所不同。

抗MP酰体产生的p-ANCA 因耐甲醛，其荧光模型与在乙醇固定的中性粒细胞中出现的c-ANCA类似故叫甲醛抗性的p-ANCA而其他非MPOS体不与甲醛固定的中性粒细胞反应，无荧光表现，这种类型又称为甲醛敏感的p-ANCA故根据乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片表现，可初步判定ANCA勺靶抗原PR3 MPO非MPC三类。

二、ANCA勺检测间接荧光免疫方法是检测ANCA勺参考方法或者标准方法，至今也是最常用的经典方法。