抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)荧光判读与讲解

c, p p, c(少见)
p, c(少见) 低阳性率 p
PR3(30%),MPO(70%) PR3(25%),MPO(65%)
PR3(10%),MPO(60%) PR3( 5%),MPO(15%) MPO(30%)
EUROIMMUN
ANCA临床意义(2)：IBD/ALD/CTD
相关疾病
炎症性肠病 溃疡性结肠炎(UC, 60-80%) 克罗恩病(Crohn’s病, 10-20%)
Actin
Vimentin
EUROIMMUN
抗溶酶体抗体
1
4
粒细胞 (乙醇固定)
猴肝
2
3
粒细胞 (甲醛固定)
抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）
EUROIMMUN
ANCA临床意义(1)：原发性系统性小血管炎
相关疾病
IIF染色型 特异性靶抗原抗体
韦格纳氏肉芽肿(WG)
c, p(少见) PR3(85%),MPO(10%)
显微型多动脉炎(MPA) 坏死性新月体肾小球肾炎 （NCGN） 过敏性肉芽肿性血管炎(CSS) 结节性多动脉炎(PAN) 抗肾小球基底膜疾病 （抗GBM病）
ANCA分两种：cANCA及pANCA。
EUROIMMUN
ANCA检测方法及指标
间接免疫荧光法
ELISA方法/欧蒙印迹法
ANCA检测和报Байду номын сангаас的国际公识
(Savige, van der Woude, Wiik et al., 1999)
IIFT
阴性
阳性
最优检测 最低检测
单特异性 ELISA检测
自身免疫性肝病 原发性硬化性胆管炎(PSC, 70-88%) 原发性胆汁性肝硬化(PBC, 3-18%) 自身免疫性肝炎(AIH) 结缔组织病 系统性红斑狼疮(SLE) 类风湿性关节炎(RA) Felty综合征
IIF染色型 特异性靶抗原抗体
p, a
BPI , lamina ？其它
p, a
BPI, lamina ？其它
细胞核周围呈现平滑的带状荧 光，细胞核阴性
胞浆型ANCA（cANCA）
细胞浆呈现不均匀的颗粒样荧光， 有时形成小团块或粗大颗粒，核分
叶处有荧光增强
EUROIMMUN
两种ANCA荧光染色成因
无水乙醇固定 时，MPO等抗 原物质可以从 嗜天青颗粒中 释放出来，由 于电荷作用吸 附在细胞核周
围形成p-
ANCA
p, a
actin? BPI ,其它
p, a
actin? BPI ,其它
p, a
actin? BPI ,其它
p, a
LF, CG,MPO(少见)
p, a
LF, CG,MPO (少见)
p, a
LEFU,RCOIMGM,UMN PO(少见)
ANCA临床意义(3)：药物性 /感染性疾病
相关疾病
IIF染色型
结果
EUROIMMUN
间接免疫荧光法检测ANCA 间接免疫荧光法是检测ANCA的经典方法
特点：敏感性高，半定量，是区分cANCA和 pANCA的基础
局限性：间接免疫荧光法测定的是总ANCA，不能 区分靶抗原，需要确认实验作为补充
EUROIMMUN
间接免疫荧光法检测ANCA
核周型ANCA（pANCA）
ANA阴阳性
1）ANA阴阳性 2）ANCA：粒细胞是否荧光增强
pANCA
猴肝
注意
ANA阳性 ANA阳性 辅助判读 辅助判读
EUROIMMUN
cANCA
1
4
粒细胞 (乙醇固定)
猴肝
2
3
粒细胞 (甲醛固定)
EUROIMMUNHEp-2 cells
cANCA: 靶抗原
蛋白酶3 (PR3) 杀菌性/通透性增强蛋白 (BPI; CAP57) 其它未知抗原
中性粒细胞结构： 细胞直径10-12um，核呈 深染的弯曲杆状（马蹄铁 形）或分叶状，分叶核一 般为2~5叶，叶间有前戏 的缩窄部相连。
EUROIMMUN
ANCA(抗中性粒细胞胞浆抗体)
欧蒙公司产品基质是从O型血的人血中提取出来的 中心粒细胞。
ANCA的靶抗原位于中心粒细胞胞浆中，ANCA 是从间接免疫荧光法中发现的。
EUROIMMUN
cANCA: 相关疾病
韦格纳肉芽肿（WG） - 典型的WG：可逐渐发展成为肾小球肾炎 - 局限性的WG：可不累及肾小球
>90% 70%
显微镜下多动脉炎（MPA）
up to 30%
变应性肉芽肿性血管炎（Churg-Strauss 综合征）
10-20%
结节性多动脉炎(PAN)
判读
基质
粒细胞 (乙醇固定) GRANULOC.EOH 粒细胞 (甲醛固定) GRANULOC.HCHO HEP-2
猴肝 HEPAR PRIM
cANCA
粒细胞 (甲醛固定)
HEP-2
提示
1）ANCA阴阳性 2）cANCA 或 pANCA 1）cANCA：进一步提示是否 2）pANCA：甲醛敏感型或抗性
药物性ANCA阳性血管炎
药物性狼疮(DIL)
p
甲状腺功能亢进(PTU治疗)
p, a
呼吸系统炎性疾病
囊性纤维化(CF)
a, p
原发性支气管扩张症
a, p
原发性支气管扩张
a, p
感染性疾病
细菌(心内膜炎、呼吸道感染)
a, p
病毒(HIV感染)
a, p
真菌(着色真菌病)
a, p
原虫(急性疟疾、侵袭性阿米巴感染) a, p
甲醛的强固定作用细胞浆 中ANCA抗原如MPO不能 从嗜天青颗粒中释放，表 现为胞浆内均一的荧光染
色即c-ANCA
EUROIMMUN
ANCA筛查: 免疫荧光
粒细胞 (乙醇固定) 粒细胞 (甲醛固定)
猴肝 HEp-2
EUROIMMUN
cANCA
EUROIMMUN
ANCA判读
建议
读片顺序：
粒细胞 (乙醇固定)
5-10%
EUROIMMUN
注意区分ANA对荧光模型的干扰
ANA homogen Nuclear dots Centromere ANA nucleolar
Scl-70
Sm/RNP
SS-A/SS-B
Nuclear memb. Ribosomes Mitochondria Golgi apparat. Lysosomes
特异性靶抗原抗体
MPO （常见） LF,HEL MPO,LF,HEL,BPI,其它
BPI（91%） BPI，其它 BPI，其它
BPI，CG，其它 不明 不明 CG，EUPRORIM3MUN
ANCA检测方法及检测指标
EUROIMMUN
ANCA(抗中性粒细胞胞浆抗体)
ANCA=Anti-Neutrophil Cytoplasm Autoantibodies