18 平面色谱法
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2. 有性质相近的A、B两物质，其混和试样用TLC
分离时，Rf值分别为 0.45、0.63，欲使分离后两组
分色斑中心的间距为 2.00cm ，问溶剂前沿至样品 原点的距离为多少厘米？ 解：设A组分的展距为X,则组分的展距为X＋2 X X 2 R fA 0.45 R fB 0.63 L0 L0 2 X 11.1cm 0.63 0.45
第十八章 经典液相色谱法
内容回顾
色谱分离原理： 利用物质在固定相与流动相之间的 分配系数差异而实现分离。
Cs ms K k Cm mm Vs kK Vm t` k R
t0
概述
经典柱色谱法 经典 液相 色谱 平面色谱法 现代柱色谱法
薄层色谱法 (TLC) Thin layer Chromatography 纸色谱法 Paper Chromatography
（3）流动相的极性
18.2.3 色谱条件的选择
（1）被测物质的结构与性质 物质极性
a. 基本母核相同，则分子中基团的极性越强，整个 分子的极性也越强 b. 分子中双键越多，吸附能力越强，共轭双键多， 吸附力也增强
（2）吸附剂的选择(活度)
（3）流动相的选择 极性相似相溶原理
分离极性大的组分，选用极性大的溶剂作为流动相； 分离极性小的组分，选用极性小的溶剂作为流动相; 吸附与竞争
练 习
1. 已知某混合试样a、b、c三组分的K分别为400、 450、500，则a、b、c在薄层上的Rf值的大小顺序 为：
A Rf(a)> Rf(b)> Rf(c)
C Rf(b)> Rf(a)> Rf(c)
B Rf(c)> Rf(b)> Rf(a)
D Rf(a)> Rf(c)> Rf(b)
练 习
三、平面色谱操作方法
制板 点样
定性分析
展开
显色 分析
定时展开
定位 定性分析、定量分析
洗脱法 直接定量法
六、薄层扫描法（p472）－定量方法
尿中雌三醇含量的测定
取尿液5mL，加3.0g硫酸 铵，离心后取沉淀，然 后在pH9.5条件下用乙醚 萃取；在碱性条件下， 萃取液的雌三醇与丹酰 氯作用，生成丹酰雌三 醇。用薄层展开荧光扫
讨论：Rf与组分性质、流动相及溶解度有关 极性组分→易保留，Rf 小（流动相极性↑， Rf ↑）
非极性组分→易流出，Rf大（流动相极性↑，Rf ↓）
CHO H HO H H OH H OH OH CH2OH
CHO HO HO H H CH3 H H OH OH
CHO
H H H H CH3
H OH OH OH
2. 相对比移值Rr
R f（i） 原点到组分斑点质量中 心的距离 Li Rr R f（s） 原点到参考物斑点质量 中心的距离 Ls
•
• •
讨论 参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性； 参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分 相对比移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关， 范围可以大于或小于1
描法检测.
第三节 纸色谱法
将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、
定性、和定量的液-液分配色谱法
固定相：纸纤维吸附的水 流动相:与水不互溶的有机溶剂（水饱和正丁醇）
分离机制：液-液分配色谱，溶解度的不同 1 定性参数： R f 1 K VS Vm
1 Rf 1 K VS Vm
1）吸水→失活
a) 硅胶的活性与含水量有关，含水量高，活度级数 高，吸附力弱。
b) 105～110℃烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大
OH Si + OH Si Si O Si + H2O
c）500℃烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力
1. 硅胶（SiO2· H2O）
2）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性↑，吸附能力↑→强极性吸附 中心，不易洗脱
3 相平衡参数
1 Rf 1 k
(1) K R f
1 Rf 1 KVs / Vm
（2）薄层板一定，对于极性组分 展开剂极性↑大，Rf↑大（容易洗脱） 展开剂极性↓小，Rf↓小 （不容易洗脱）
4 分离参数
R 2(L2 L1 ) /( W1 W2 ) 2d /( W1 W2 )
硅胶GF254
三、平面色谱操作方法（p468）
制板 点样 展开 显色 分析 定时展开 定位
有色物质：日光
定位
显色
有紫外吸收 或有荧光物质：紫外光 用荧光板
石油醚（60～90℃） -乙酸乙酯（9:1）
用显色剂
1乙二醇
2丙三醇 3丁四醇
4糖醛酸
5甘露糖 6阿拉伯糖
7果糖
8半乳糖 9葡萄糖
10岩Leabharlann Baidu糖
薄层色谱法（p469）
将固定相均匀地涂铺在玻璃板、铝箔或 塑料板上形成薄层，点样后用展开剂 （流动相）将其展开，然后将薄层板斑
点定位后分析的方法。
薄层扫描仪
一、薄层色谱法的主要类型
吸附薄层色谱法 固定相－吸附剂
硅胶H 硅胶G
吸附剂：硅胶(10~40um)、 硅胶HF254 氧化铝 分配薄层色谱法 固定相－液体
11木糖 12鼠李糖
三、平面色谱操作方法
制板 点样
定性分析
展开
显色 分析
定时展开
定位 定性分析、定量分析
四、定性参数（P463）
1、比移值
原点到组分斑点质量中 心的距离 L1 Rf 原点到溶剂前沿的距离 L0
Rf范围：0< Rf <1 （组分迁移速度和距离小于展开剂 迁移速度和距离） Rf = 0.2——0.8（常用） 0.3——0.5（最佳）
经典柱色谱法
18.2 液－固吸附柱色谱法
18.2.1 分离原理
固定相：固体吸附剂 吸附剂一般是多孔性微粒状物质，具有较大的
比表面积，表面有许多吸附中心。
吸附是溶质在吸附剂表面的集中浓缩现象。
吸附色谱法的分离原理（P449）
吸附剂一般是多孔性微粒状物质，具有较大的比表 面积，表面有许多吸附中心。 吸附与竞争
在吸附剂上被吸 附的流动相分子
吸附 Xm + nYa 解吸附
流动相中 的溶质分子 在吸附剂上被 吸附的溶质分子
Xa + nYm
二、常用吸附剂
1. 硅胶（SiO2· H2O） 结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构
表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心
吸附活性次序：活泼型>游离型>束缚型
1. 硅胶（SiO2· H 2O ）
适用：分析酸性或中性物质 如有机酸、氨
基酸、甾体。
2. 氧化铝
碱性氧化铝 pH 9～10 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH＞7.5 适于分析酸性碱性和中性物 质
酸性氧化铝 pH 4～5 适于分析酸性、中性物质
18.2.3 色谱条件的选择
洗脱作用 洗脱作用 实质上是流动相分子与被分离
的组分分子竞争占据吸附剂表面活性中心的过程。 优化实验条件，使各组分分离： （1）试样的结构和性质 （2）吸附剂的选择(活度)
分离时，Rf值分别为 0.45、0.63，欲使分离后两组
分色斑中心的间距为 2.00cm ，问溶剂前沿至样品 原点的距离为多少厘米？ 解：设A组分的展距为X,则组分的展距为X＋2 X X 2 R fA 0.45 R fB 0.63 L0 L0 2 X 11.1cm 0.63 0.45
第十八章 经典液相色谱法
内容回顾
色谱分离原理： 利用物质在固定相与流动相之间的 分配系数差异而实现分离。
Cs ms K k Cm mm Vs kK Vm t` k R
t0
概述
经典柱色谱法 经典 液相 色谱 平面色谱法 现代柱色谱法
薄层色谱法 (TLC) Thin layer Chromatography 纸色谱法 Paper Chromatography
（3）流动相的极性
18.2.3 色谱条件的选择
（1）被测物质的结构与性质 物质极性
a. 基本母核相同，则分子中基团的极性越强，整个 分子的极性也越强 b. 分子中双键越多，吸附能力越强，共轭双键多， 吸附力也增强
（2）吸附剂的选择(活度)
（3）流动相的选择 极性相似相溶原理
分离极性大的组分，选用极性大的溶剂作为流动相； 分离极性小的组分，选用极性小的溶剂作为流动相; 吸附与竞争
练 习
1. 已知某混合试样a、b、c三组分的K分别为400、 450、500，则a、b、c在薄层上的Rf值的大小顺序 为：
A Rf(a)> Rf(b)> Rf(c)
C Rf(b)> Rf(a)> Rf(c)
B Rf(c)> Rf(b)> Rf(a)
D Rf(a)> Rf(c)> Rf(b)
练 习
三、平面色谱操作方法
制板 点样
定性分析
展开
显色 分析
定时展开
定位 定性分析、定量分析
洗脱法 直接定量法
六、薄层扫描法（p472）－定量方法
尿中雌三醇含量的测定
取尿液5mL，加3.0g硫酸 铵，离心后取沉淀，然 后在pH9.5条件下用乙醚 萃取；在碱性条件下， 萃取液的雌三醇与丹酰 氯作用，生成丹酰雌三 醇。用薄层展开荧光扫
讨论：Rf与组分性质、流动相及溶解度有关 极性组分→易保留，Rf 小（流动相极性↑， Rf ↑）
非极性组分→易流出，Rf大（流动相极性↑，Rf ↓）
CHO H HO H H OH H OH OH CH2OH
CHO HO HO H H CH3 H H OH OH
CHO
H H H H CH3
H OH OH OH
2. 相对比移值Rr
R f（i） 原点到组分斑点质量中 心的距离 Li Rr R f（s） 原点到参考物斑点质量 中心的距离 Ls
•
• •
讨论 参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性； 参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分 相对比移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关， 范围可以大于或小于1
描法检测.
第三节 纸色谱法
将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、
定性、和定量的液-液分配色谱法
固定相：纸纤维吸附的水 流动相:与水不互溶的有机溶剂（水饱和正丁醇）
分离机制：液-液分配色谱，溶解度的不同 1 定性参数： R f 1 K VS Vm
1 Rf 1 K VS Vm
1）吸水→失活
a) 硅胶的活性与含水量有关，含水量高，活度级数 高，吸附力弱。
b) 105～110℃烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大
OH Si + OH Si Si O Si + H2O
c）500℃烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力
1. 硅胶（SiO2· H2O）
2）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性↑，吸附能力↑→强极性吸附 中心，不易洗脱
3 相平衡参数
1 Rf 1 k
(1) K R f
1 Rf 1 KVs / Vm
（2）薄层板一定，对于极性组分 展开剂极性↑大，Rf↑大（容易洗脱） 展开剂极性↓小，Rf↓小 （不容易洗脱）
4 分离参数
R 2(L2 L1 ) /( W1 W2 ) 2d /( W1 W2 )
硅胶GF254
三、平面色谱操作方法（p468）
制板 点样 展开 显色 分析 定时展开 定位
有色物质：日光
定位
显色
有紫外吸收 或有荧光物质：紫外光 用荧光板
石油醚（60～90℃） -乙酸乙酯（9:1）
用显色剂
1乙二醇
2丙三醇 3丁四醇
4糖醛酸
5甘露糖 6阿拉伯糖
7果糖
8半乳糖 9葡萄糖
10岩Leabharlann Baidu糖
薄层色谱法（p469）
将固定相均匀地涂铺在玻璃板、铝箔或 塑料板上形成薄层，点样后用展开剂 （流动相）将其展开，然后将薄层板斑
点定位后分析的方法。
薄层扫描仪
一、薄层色谱法的主要类型
吸附薄层色谱法 固定相－吸附剂
硅胶H 硅胶G
吸附剂：硅胶(10~40um)、 硅胶HF254 氧化铝 分配薄层色谱法 固定相－液体
11木糖 12鼠李糖
三、平面色谱操作方法
制板 点样
定性分析
展开
显色 分析
定时展开
定位 定性分析、定量分析
四、定性参数（P463）
1、比移值
原点到组分斑点质量中 心的距离 L1 Rf 原点到溶剂前沿的距离 L0
Rf范围：0< Rf <1 （组分迁移速度和距离小于展开剂 迁移速度和距离） Rf = 0.2——0.8（常用） 0.3——0.5（最佳）
经典柱色谱法
18.2 液－固吸附柱色谱法
18.2.1 分离原理
固定相：固体吸附剂 吸附剂一般是多孔性微粒状物质，具有较大的
比表面积，表面有许多吸附中心。
吸附是溶质在吸附剂表面的集中浓缩现象。
吸附色谱法的分离原理（P449）
吸附剂一般是多孔性微粒状物质，具有较大的比表 面积，表面有许多吸附中心。 吸附与竞争
在吸附剂上被吸 附的流动相分子
吸附 Xm + nYa 解吸附
流动相中 的溶质分子 在吸附剂上被 吸附的溶质分子
Xa + nYm
二、常用吸附剂
1. 硅胶（SiO2· H2O） 结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构
表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心
吸附活性次序：活泼型>游离型>束缚型
1. 硅胶（SiO2· H 2O ）
适用：分析酸性或中性物质 如有机酸、氨
基酸、甾体。
2. 氧化铝
碱性氧化铝 pH 9～10 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH＞7.5 适于分析酸性碱性和中性物 质
酸性氧化铝 pH 4～5 适于分析酸性、中性物质
18.2.3 色谱条件的选择
洗脱作用 洗脱作用 实质上是流动相分子与被分离
的组分分子竞争占据吸附剂表面活性中心的过程。 优化实验条件，使各组分分离： （1）试样的结构和性质 （2）吸附剂的选择(活度)