蛋白检测-免疫荧光技术

主题：免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）

概述：

免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位。

目的：

测定内分泌激素、蛋白质、多肽、核酸、神经递质、受体、细胞因子、细胞表面抗原、肿瘤标志物、血药浓度等各种生物活性物质。

步骤：

1、细胞准备；

2、固定。根据需要选择适当的固定剂固定细胞，固定完毕后的细胞可置于含叠氮纳的PBS中4℃保存3个月；

3、通透。使用交联剂（如多聚甲醛）固定后的细胞，一般需要在加入抗体孵育前，对细胞进行通透处理，以保证抗体能够到达抗原部位。选择通透剂应充分考虑抗原蛋白的性质。

4、封闭。使用封闭液对细胞进行封闭。

5、一抗结合。室温孵育1h或者4℃过夜。

6、二抗结合。间接免疫荧光需要使用二抗。

7、封片，荧光显微镜检查。流程图：