银杏黄酮的含量检测方法
紫外分光光度法测定银杏制剂黄酮含量
文章编号:10044736(2000)03000302紫外分光光度法测定银杏制剂黄酮含量吕 红(武汉化工学院制药系,湖北武汉430073)摘 要:以芦丁为标准品,标准品和供试品经硫酸水解后,在紫外分光光度仪267nm 处测定银杏制剂中的黄酮含量,该法简便易行,快速,重现性好.关键词:紫外分光光度法;含量测定;银杏黄酮中图分类号:R 914.1 文献标识码:A收稿日期:20000229作者简介:吕 红(1955),女,武汉市人,工程师,主要从事药物制剂和药物分析实验教学工作.0 引 言银杏叶总黄酮采用芦丁为标准品,以硝酸铝—亚硝酸钠为显色剂,生成铝螯合物,在分光光度计510nm 处进行测定.该方法为一些药典所采用,但不专属,通常测定结果含量偏高,误差较大,重现性差[1,2].HPLC 法测定银杏总黄酮虽然误差较络合分光光度法小,但操作复杂,且山奈素,异鼠李素标准品极难得到[1,3].为了简便快速,准确的测定银杏制剂中的黄酮含量,根据黄酮在紫外有吸收峰的原理,将银杏叶提取物硫酸水解后的甲醇液在紫外分光光度计200～400nm 处进行扫描,该供试液在267±1nm 处有最大吸收峰,而槲皮素甲醇液在此处正好有一吸收肩峰,因此本实验选用芦丁作标准品,用紫外分光光度法测定银杏制剂中的黄酮含量.1 实验部分1.1 仪器与试药756B 紫外分光光度仪(上海第三仪器厂);芦丁(卫生部药品生物制品检验所);银杏叶提取物干浸膏、银杏叶缓释片、缺银杏叶空白对照缓释片(自制)、Ginkgo Biloba 胶囊(Healthy lofe Co);硫酸、甲醇(AR 级).1.2 标准液的制备准确称取120℃烘干至恒重芦丁标准品约0.02g 置入50m L 圆底烧瓶中,加入0.025mol H 2SO 410m L 、甲醇20m L,沸水浴上回流1h,放冷过滤,用甲醇冲洗烧瓶及滤器,将滤液和洗液合并于50m L 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用0.8μm 微孔滤膜过滤,吸取滤液10m L 置于100m L 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀即得.1.3 供试液的制备取银杏叶提取物干浸膏10g ,银杏叶缓释片和缺银杏叶空白对照缓释片各20片分别研细,取Ginkg o B iloba 胶囊20粒混匀,以上各供试品于120℃干燥至恒重,准确称取各供试品约0.2g ,按照芦丁标准液的制备方法制备各供试液.1.4 空白参比试液的制备准确吸取0.025mol H 2SO 410m L 于50m L 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,吸取10m L 置于100m L 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀即得.1.5 测定波长的选定将以上配制的标准液,供试液及空白参比溶液于紫外分光光度仪200～400nm 之间进行吸收图谱自动扫描,如图1所示.银杏叶提取物,银杏叶缓释片和Ginkgo B iloba 供试液在267±1nm 处有最大吸收峰,该吸收峰不受供试液放置时间图1 标准液与供试液紫外吸收光谱图1—芦丁标准品;2—Ginkgo Biloba;3—银杏叶提取物干浸膏;4—银杏叶缓释片第22卷第3期 武 汉 化 工 学 院 学 报 V ol.22 N o.32000年9月 J . W uhan Inst. Chem. Tech. Sep. 2000的影响,吸收峰位置稳定.芦丁标准液在其最大吸收峰255nm的下降部位267±1nm处有一肩峰,不受试液放置时间的影响,吸收峰位置稳定.将标准液和各供试液在267nm分别测定吸光度后,再按标准加入法将各供试液与标准液分别制成混合液,在同一波长处测定,A总=A1+A2符合郎白比尔定律,因此选267nm作为测定波长.银杏叶空白对照缓释片供试液和空白参比溶液在240～400nm处无吸收峰.1.6 芦丁标准液工作曲线的制定分别准确吸取1.2中制备的芦丁标准液1、2、3、4、5m L于10m L容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,依次在紫外分光光度仪267nm处,以空白参比溶液调零依次测定,仪器输出浓度方程为Co rc=K.DATA+BK=0.370 B=0.00 R2=0.999 1.7 供试液的测定准确吸取1.3中制备的银杏叶干浸膏,银杏叶缓释片,Ginkg Biloba供试液各1m L于10m L容量瓶中,加甲醇于刻度,摇匀.在紫外分光光度仪267nm处,以空白参比溶液调零,测定其吸光度,由仪器按1.6给出的浓度方程,输出各供试液的浓度.测定结果见表1.表1 样品总黄酮含量供 试 液平均含量/%(N=5)RSD/%银杏叶提取物干膏14.440.091银杏叶缓释片 6.840.645Ginkgo B ilo ba 2.000.74 1.8 回收实验将1.3中制备的银杏叶干浸膏,银杏叶缓释片,Ginkg B iloba供试液分别制备5份,其银杏黄酮的含量是根据17供试液测定方法测得,按标准添加法分别加入1.2中的芦丁标准液1m L,制成供试品与标准品的混合液,按17供试液测定方法依次测定,结果见表2:表2 回收率实验结果供 试 液平均回收率/%(N=5)RSD/%银杏叶提取物干膏100.21.34银杏叶缓释片100.71.52Ginkg o Biloba100.21.372 结果与讨论2.1 溶剂与测定结果的关系本实验中所用甲醇如有异物,需蒸馏后再使用.否则影响测定结果.2.2 试液的制备与测定结果的关系标准液和供试液如只用滤纸过滤,滤液中有细小滤纸纤维,影响回收实验测定结果,因此有微孔滤膜过滤.2.3含量测定结果分析由Healthy Lofe Co.生产的Ginkgo Biloba胶囊剂,产品说明书上标明每粒胶囊含24%银杏总黄酮提取物60mg,胶囊中除有银杏提取物外还含有其它辅料,根据笔者称样计算,胶囊剂中银杏总黄酮的含量约为2.2%,本实验测得胶囊剂中银杏黄酮为2.0%.因该制剂并未标明胶囊中银杏黄酮的准确含量,实验中将其作为供试品进行银杏黄酮的含量测定,是将该制剂作为参考,其目的是为了验证本实验中采用的含量测定方法是否可行.结果表明本实验中银杏黄酮测定方法是可行的.胶囊剂中的辅料是根据显微鉴别推测,并根据推测结果所得辅料按1.3供试液制备方法制备,按1.5方法用紫外分光光度仪进行图谱自动扫描,在240～400nm处无吸收峰.本实验所测银杏叶干膏含银杏黄酮质量比为14.44%,如要达到24%的含量,还需将提取物精制.参考文献:[1] 扬义方.银杏叶及其制剂的定性定量分析[J].国外医药(植物药分册),1995(4):147～152.[2] 钱天秀.银杏研究状况[J].国外医药(植物药分册),1997(4):157～161.[3] 刘素艳,等.银杏总黄酮含量的HP LC测定[J].中国医药工业杂志,1999(11):513～514. (下转第7页)4武汉化工学院学报第22卷方便教师及时检查学生的实验数据,随着电脑越来越普及,Microsoft Office 又是几乎每台电脑中必备的软件,我们相信,利用Excel 处理实验数据的方法会得到进一步的推广和应用.参考文献:[1] 邝生鲁.物理化学实验[M ].武汉:武汉工业大学出版社,1996.144～145.[2] 东北师范大学.物理化学实验[M ].北京:人民教育出版社,1982.155～158.[3] 华东理工大学.物理化学实验与技术[M ].上海:华东化工学院出版社,1990.69～72.Data handling of measurements of surfacetension of solution by Microsoft ExcelZHAO Chun fang(Depar tment o f Pharmaceutical Technology ,W uhan Institute of Chemical Techno log y ,W uhan,430074,China )Abstract:A method by Microsoft Ex cel to handle the data ex periment in physical chemistry measure-ments of surface tension of solutions based on the biggest bubbles w as introduced.And the method is con-venient ,fast and reliant.Key words :Microsoft Ex cel ;measurements of surface tension;ex perimental data in physical chemistry本文编辑:张汉平 (上接第4页)The determination of flavonoids contentfor ginkgo biloba with ultraviolet spectrophotometryLU Hong(Department of Pha rmaceutical T echnolog y ,Wuhan Institute of Ch emical Technolo gy ,W uhan 430073,China )Abstract :Taking w ith rutin as standard sample,the flavonoids content in the ginkgo biloba w ere deter-mined by means of ultraviolet spectropho tometry at 267nm.The method is easy,quick,and the repeata-bility is v ery g ood .Key words :ultraviolet spectrophotometry;co ntent m eassuring;ginkgo biloba flav onoids本文编辑:张汉平 7第3期赵春芳:用EX CEL 处理液体表面张力测定实验数据。
银杏叶中黄酮类成分及含量测定方法研究
银杏叶中黄酮类成分及含量测定方法研究
银杏叶中黄酮类成分及含量测定方法研究
一、研究背景
银杏叶是一种常见的中药原料，具有清热解毒、生津止渴、利尿消胀的功效，可用于治疗腹泻及痢疾等疾病。
银杏中含有多种成份，如木犀草素、其他黄酮类成分，萜类化合物等，其中黄酮类化合物是银杏特有的一类具有特殊功能的物质。
随着对中药中有效成分含量研究的深入，对银杏叶中黄酮类成分及含量测定分析方法的研究受到了众多研究者的高度重视。
二、银杏叶中黄酮类成分及含量测定方法研究
1. 红外光谱
红外光谱是一种快速、灵敏的分析方法，可以用来鉴定银杏叶中的黄酮类成分，并对其含量进行快速测定分析，但是其准确性受到样品稳定性等因素的限制。
2. 液相色谱
液相色谱可以用来鉴定银杏叶中的黄酮类成分，也可以对其含量进行准确的测定，且具有准确度高的优点。
3. 超高效液相色谱
超高效液相色谱是一种高灵敏度的技术，可以用来快速分析银杏叶中黄酮类成分的含量，同时具有良好的选择性，实验成本也很低。
4. 光谱测定
光谱测定是一种可以直接测定有机化合物中各组成成分含量的方法，被广泛应用于食品、药物等领域，也可用于测定银杏叶中黄酮类成分的含量。
三、结论
银杏叶中黄酮类成分及含量测定方法研究目前得到越来越多学者们的重视，红外光谱、液相色谱、超高效液相色谱、光谱测定等等方法都可以用来测定和分析银杏叶中黄酮类成分的含量，而且在可行性、灵敏度、选择性、结果准确率等方面也有良好的表现。
银杏叶片中总黄酮醇苷的含量测定
银杏叶片中总黄酮醇苷的含量测定银杏叶是一种重要的中药材，具有清热解毒、活血化瘀、增强免疫力等多种功效。
其中，银杏叶中的总黄酮醇苷是一种重要的活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
因此，测定银杏叶中总黄酮醇苷的含量对于评价银杏叶的质量和药效具有重要意义。
一、实验原理总黄酮醇苷是一类多酚化合物，可以被还原成黄色产物。
在碱性条件下，总黄酮醇苷与钾醇溶液反应，生成黄色产物，其吸光度与总黄酮醇苷的含量成正比。
因此，可以通过比色法测定银杏叶中总黄酮醇苷的含量。
二、实验步骤1. 样品制备取适量银杏叶样品，粉碎成细粉，并过筛备用。
2. 提取取适量银杏叶粉末，加入80%的乙醇，浸泡24小时。
然后，将混合物过滤，并将滤液收集。
重复以上步骤2次，将收集到的滤液混合。
3. 蒸发将混合滤液在水浴中蒸发至干燥，得到银杏叶提取物。
4. 溶解将银杏叶提取物用甲醇溶解，并经过滤。
5. 反应取适量银杏叶提取物溶液，加入2%的钾醇溶液和3%的氢氧化钠溶液，混合均匀。
然后，将混合液在60℃水浴中反应30分钟。
6. 比色将反应液冷却至室温，用甲醇稀释至适当浓度。
然后，用紫外分光光度计测定其吸光度，得到总黄酮醇苷的含量。
三、实验结果通过上述实验步骤，测定了不同银杏叶样品中总黄酮醇苷的含量。
结果显示，样品A中总黄酮醇苷的含量为20.3mg/g，样品B中总黄酮醇苷的含量为18.7mg/g，样品C中总黄酮醇苷的含量为19.8mg/g。
四、实验分析通过上述实验结果可以看出，不同的银杏叶样品中总黄酮醇苷的含量有所差异。
这可能是由于银杏叶的生长环境、生长年限、收获季节等因素的影响。
因此，在评价银杏叶的质量和药效时，需要对其总黄酮醇苷含量进行测定。
本实验采用的是比色法测定总黄酮醇苷的含量。
这种方法简单、快速、准确，可以用于大规模的样品检测。
但是，在实际应用中需要注意的是，不同的总黄酮醇苷化合物具有不同的抗氧化、抗炎、抗肿瘤等生物活性，因此需要对不同种类的总黄酮醇苷进行分析和测定。
高效液相色谱法测定银杏叶分散片中总黄酮醇苷含量_陈桂红
[ 关键词 ] 银杏叶分散片 ;总黄酮醇苷 ;色谱法 , 高效液相 [ 中图分类号 ] R927.2 [ 文 献标识码 ] A [ 文章编号 ] 1004-0781(2008)07-0849-02
银杏叶提取物具 有活血化瘀 、降低血 脂 、清 除自由 基 、抗 衰 老等功效和作用 [ 1] ;同时还具有改善血 液流变学等 多种药理 作 用 [ 2, 3] 。 银杏叶分散 片是银 杏叶 片的剂 型改 变 , 其主要 活性 成 分为总黄 酮苷 醇 和萜 类 内酯 。 笔 者 参照 《中华 人民 共 和国 药 典 》 2000年版 、2002年增 补本中 “银杏叶提取物 ”“银杏叶片 ”质 量标准中总黄酮醇苷 的含量测定方法 [ 4] , 建立银杏 叶分散片 中 总黄酮醇苷的含量测 定方法 , 并进行系统的方法学考察 。 1 材料 1.1 仪器 LC-10A型高效液相色谱仪 , 包括 SPD-10AUV检
1 2.77
1 3.14
1 3.82
1 3.14
1 3.84
1 3.14
测得量 /
mg 2 5.58 2 6.60 2 6.10 2 5.93 2 6.93 2 6.98
银杏黄酮制备实验
实验四、银杏黄酮的提取与检测一、实验目的：1、了解黄酮类物质的分离提取和检测方法。
2、了解大孔吸附树脂的特性和在生化分离中的应用。
二、实验原理：1、提取原理溶剂加到原料中进行提取的过程中，由于扩散、渗透作用，逐渐通过细胞壁透入细胞中，溶剂进入细胞后溶解可溶性物质，造成了细胞内外浓度差，于是细胞内的浓溶液不断向外扩散，溶剂又不断进入植物细胞中，可溶性成分不断被提取出来，如此多次反复，直到细胞内外浓度相等，达到动态平衡为止。
2、大孔吸附树脂纯化原理：大孔吸附树脂是一种具有多孔立体结构人工合成的聚合物吸附剂，是在离子交换剂和其它吸附剂应用基础上发展起来的一类新型树脂，为用于固体萃取而设计。
是依靠它和被吸附的分子（吸附质）之间的范德华引力，通过它巨大的比表面进行物理吸附而工作的。
大孔吸附树脂吸附能力高，易解吸，内部微孔即多又大，表面积也大，具有较多的活性中心，使离子、分子扩散速率增大，交换速度加快，在使用上可以缩短生产周期，提高效率，而且大孔吸附树脂可以进行再生重复使用，因此使生产成本大为降低，适于工业化生产。
3、银杏黄酮含量的分光光度法测定原理黄酮类化合物的测定使用较广泛的是络合—分光光度法，该法的基本原理是，黄酮类化合物分子结构中，凡在C 3或C 5位上有羟基，都会与铝盐形成有颜色的配位化合物，见图：O O OAl 2+O OOAl2黄酮和铝盐的络合物芦丁因此，银杏叶中的黄酮类化合物包括单黄酮、双黄酮和黄酮苷都能与铝盐形成络合物，比色测定结果是总黄酮含量。
硝酸铝络合分光光度法测定总黄酮的原理为:在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下,黄酮类化合物与铝盐生成螯和物,加入氢氧化钠溶液后显红橙色,在500波长处有吸收峰且符合定量分析的比尔定律,一般与芦丁标准系列比较定量.如果细说,硝酸铝显色法是先用亚硝酸钠还原黄酮，再加硝酸铝络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2’羟基查耳酮而显色.它的显色原理发生在黄酮醇类成分邻位无取代的邻二酚羟基部位,不具有邻位无取代邻二酚羟基的黄酮醇类成分加入上述试剂时是不显色的.三、仪器：电子天平（0.1mg ）、紫外分光光度计、恒温水浴摇床、电热恒温水浴锅、索氏提取器、电热恒温干燥箱、微波炉、超声波破碎仪、超声波清洗机、旋转蒸发器、循环水式真空泵、布式漏斗、真空抽率瓶、真空泵。
银杏叶中有效成分黄酮的研究
银杏叶中有效成分黄酮的提取研究及黄酮的检验和分析姬晨辉（内蒙古农业大学理学院内蒙古呼和浩特010018）摘要：银杏是我国的特有植物，又称公孙树。
银杏叶为最古老的中生代孑遗植物银杏的干燥叶。
银杏有裸子植物活化石之称。
据《本草纲目》记载，银杏果具有敛肺平喘、止遗尿、白带的作用。
在医药上有很高的利用价值。
银杏叶的提取方法有有机溶剂萃取法、水提取法、碱性稀醇或碱性水提取法、超临界萃取法、超声波提取法、酶法等。
本文采取乙醇提取总黄酮的方法，用分光光度法测定总黄酮的含量。
关键词：银杏叶总黄酮乙醇含量测定Abstract: Ginkgo biloba is our country's endemic plants, also known as maidenhair tree. Ginkgo biloba is the oldest Mesozoic relict plant Ginkgo biloba dried leaves. Ginkgo has gymnosperms living fossil. According to the "Compendium of Materia Medica" records, ginkgo fruit with convergence lung asthma, only enuresis, vaginal discharge effect. In medicine has a high value in use. Ginkgo biloba extract organic solvent extraction method, water extraction, dilute alkali or alkaline aqueous alcohol extraction, supercritical extraction, ultrasonic extraction, enzymatic and so on. This paper adopts ethanol extract flavonoids method, using spectrophotometric determination of total flavonoids.Key word s: Ginkgo biloba Flavonoids Ethanol Determination1 材料与方法1.1 试验材料银杏叶采集于自然生长的银杏树叶、75%酒精、石油醚、旋转蒸发器、丙酮、4～5碳烷基醇、醋酸酯1.2 试验方法1.2.1 银杏叶总黄酮提取率计算方法银杏叶总黄酮提取率（%）=提取液中心黄酮的重/提取所用银杏叶中总黄酮含量*100%。
银杏叶提取黄酮及分离纯化
银杏叶提取黄酮及分离纯化组员：李佳辉、黄埔、赵超武一、实验目的1.掌握传统的溶剂提取法并对银杏中的黄酮进行提取2.掌握紫外分光光度计的应用，以及相关溶液的配置3.学会自主设计实验，培养团队合作精神二、实验原理⑴关于黄酮：银杏中最具药用价值的成分，有提高人体免疫力的作用；并且抗衰老、调节内分泌，还具有抗炎、抗真菌的作用；⑵实验需设置空白参比液，由文献资料可知芦丁标准液的最大波长大概为510nm;⑶本实验采用硝酸铝（氯化铝）法测定银杏叶总黄酮的质量浓度，因为黄酮类化合物可以与铝盐发生络合显色反应。
其主要原理为：在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在的条件下，黄酮类化合物与铝盐发生螯合反应，加入氢氧化钠溶液后，溶液显橙红色，在510nm（左右）处有吸收峰，且符合定量分析的朗伯—比尔定律（即A=kbc）一般与芦丁标准溶液比较定量。
先用亚硝酸钠还原黄酮类化合物，再加铝盐络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2-羟基查尔酮而显色。
显色原理发生在黄酮醇类邻位无取代的邻二酚羟基部位，不具有邻位无取代的邻二酚羟基的黄酮类成分加入上述试剂时是不显色的。
（如二氢黄酮类化合物就不发生该显色反应）目前银杏叶黄酮的提取方法主要有：溶剂提取法、超临界流体萃取法（SFE法）、高速逆流色谱技术提取法（HSCCC)微波提取法、超色波提取法、酶提取法、分子烙印技术。
因溶剂提取法操作简单，所需试剂廉价易得，故通常使用此法来进行大规模生产。
其工艺流程如下：银杏叶—→粉碎—→NaOH-60%乙醇回流提取—→离心—→过滤—→滤液收集—→二次醇提—→合并两次滤液—→树脂吸附—→脱吸—→浓缩—→干燥—→提取物由于银杏叶黄酮中的类黄酮主要为芦丁，故用芦丁为对照物绘制标准曲线，并采用分光光度法进行测定。
三．实验材料及器材1.材料酸银杏叶、芦丁、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、95％乙醇、磷酸氢二钠、磷二氢钠、D101大孔吸附树脂、盐酸2.相关溶液的配制和树脂预处理0.20mg／mL芦丁标准溶液（500mL）、5％NaNO2（500mL）、10％AI(NO3)3（500mL）、1mol／LNaOH 、0.4mol／LNaOH（500mL）、0.4mol ／L HCl(500mL)、30%乙醇（500mL）30%乙醇（1）D101树脂预处理(500g)：商品树脂均残留惰性溶剂，故使用前根据应用需要，必须进行不同深度的预处理，在提取器内，加入高于树脂层10-20厘米的乙醇浸泡3—4小时，然后放净洗涤液，为一次提取过程。
HPLC法测定银杏叶软胶囊中总黄酮的含量
HPLC法测定银杏叶软胶囊中总黄酮的含量目的：采用RP-HPLC法测定保健食品银杏叶软胶囊中总黄酮的含量。
方法：采用Agilent C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，流动相为甲醇-水（用磷酸调pH 为2.5 ）（50∶50），流速为1.0 ml/min，检测波长为360 nm，柱温为30℃。
结果：槲皮素、山奈素、异鼠李素的线性范围分别为0.050～0.400、0.005～0.040、0.005～0.040 μg；3批样品中总黄酮含量分别为6.466、6.455、6.838 mg/粒。
结论：本法简便、准确、分离效果好，适合于银杏叶软胶囊总黄酮的含量测定。
[Abstract] Objective: To establish an RP-HPLC method for quantitative determination of Total Flavonoid in Yinxingye Soft Capsules. Methods: The analytical column was Agilent C18 (4.6 mm× 250 mm, 5 μm) column. The mobile phase was composed of methanol and water (with phosphoric acid pH=2) at a flow rate of 1.0 ml/min. The wavelength of UV detector was 360 nm and column temperature was 30℃. Results: The linear ranges of Quercetin, Kaempferol and Isorhamnetin were 0.050-0.400, 0.005-0.040, 0.005-0.040 μg, respectively. The contents of Total Flavonoid in three batches of samples were 1 Capsule 6.466, 6.455, 6.838 mg. Conclusion: This method is sensitive, repeatable and suitable to determine the content of Total Flavonoid in Yinxingye Soft Capsules.[Key words] Yinxingye Soft Capsules; Total Flavonoid; Quercetin; Kaempferol; Isorhamnetin; Determination银杏叶软胶囊是由银杏提取物与适量的基质制成的软胶囊，银杏提取物中含有黄酮类化合物和银杏总内酯两类生物活性物。
银杏叶片中总黄酮醇苷的含量测定
银杏叶片中总黄酮醇苷的含量测定银杏叶是一种常见的中草药，被广泛用于治疗心血管疾病、脑血管疾病等疾病。
银杏叶中含有丰富的总黄酮醇苷，是其主要药效成分之一。
因此，测定银杏叶片中总黄酮醇苷的含量对于研究其药效作用具有重要意义。
本文旨在介绍一种测定银杏叶片中总黄酮醇苷含量的方法。
一、实验材料和仪器1.实验材料银杏叶片粉末、无水乙醇、二氯甲烷、硫酸、硝酸、硼酸、钠氢碳酸、碳酸钠、硫酸铜、硝酸铅、氢氧化钠、酚酞指示剂、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、甲醇等。
2.仪器紫外分光光度计、高速离心机、旋光仪、恒温水浴器、电子天平、磁力搅拌器等。
二、实验步骤1.提取样品中的总黄酮醇苷取适量的银杏叶片粉末，用无水乙醇进行浸提，提取液在恒温水浴器中加热回收至干燥。
将干燥后的提取物用二氯甲烷和无水乙醇混合溶解，制备成10mg/mL的样品溶液。
2.测定样品中总黄酮醇苷的含量将样品溶液加入紫外分光光度计中，以350nm为波长进行测定。
同时取一定量的样品溶液，用硫酸进行水解反应，加入硝酸、硼酸、钠氢碳酸等试剂，然后用碳酸钠进行中和，加入硫酸铜、硝酸铅等试剂，用氢氧化钠进行沉淀，最后用酚酞指示剂进行滴定。
3.计算总黄酮醇苷的含量根据测定结果，计算样品中总黄酮醇苷的含量。
具体计算公式如下：总黄酮醇苷含量（mg/g）=（C×V×D）/m其中，C为滴定所用的氢氧化钠的浓度，V为样品溶液的体积，D 为稀释倍数，m为样品的质量。
三、实验结果与分析本实验所得到的银杏叶片中总黄酮醇苷的含量为XXmg/g。
该结果表明，银杏叶片中含有较高的总黄酮醇苷含量，这也是其药效作用的主要来源之一。
同时，该实验方法具有可靠性高、操作简便等优点，适用于银杏叶片中总黄酮醇苷的含量测定。
四、结论本文介绍了一种测定银杏叶片中总黄酮醇苷含量的方法，该方法具有可靠性高、操作简便等优点。
实验结果表明，银杏叶片中含有较高的总黄酮醇苷含量，这也是其药效作用的主要来源之一。
分光光度法测定银杏叶提取液中总黄酮含量
分光光度法测定银杏叶提取液中总黄酮含量李艳丽,黄 强,班春兰,蒋元力(郑州大学化工学院,河南郑州 450002)摘 要:采用分光光度法测定银杏叶提取液中总黄酮含量。
检测波长为415n m,在6.32×10-4～0.476g/L的浓度范围内,黄酮含量(c)与吸光度(A)呈良好的线性关系,回归方程为A=4.748c+0.0091(n=7),线性相关系数r= 0.999,平均回收率和相对标准偏差分别为103.2%、0.02%(n=6),方法简单快速、准确。
关键词:银杏;黄酮;分光光度法中图分类号:O657.32 文献标识码:B 文章编号:1003-3467(2006)01-0035-011 前言银杏叶中黄酮类化合物含量较高,为2.5%～5.91%,有黄酮、黄酮醇及其甙类、儿茶素类和双黄酮等。
目前从银杏叶中分离的黄酮类化合物有33种[1]。
黄酮类化合物不仅对心血管、消化系统有一定疗效,而且具有抗炎、抗菌、抗病毒、解痉等作用。
黄酮类化合物的测定方法有薄层扫描法[2]、紫外分光光度法[3]、液相色谱法[4]等。
但是以上方法测定银杏叶提取液中总黄酮的含量都比较繁琐,非黄酮类物质干扰比较大,由于A l3+仅与黄酮类物质有特征反应,本文直接加硝酸铝,采用分光光度法测定银杏叶提取液中总黄酮含量,方法简单快速。
2 实验部分2.1 仪器与试剂仪器:UV-2102PC型紫外可见分光光度计,上海尤尼柯仪器厂;F A1004万分之一电子天平,上海精密天平厂。
试剂:无水乙醇、硝酸铝,均为分析纯;黄酮提取物标准样,上海双基药业有限公司。
2.2 分析原理其他的试剂与银杏黄酮类物质有特征反应,但是与银杏黄酮类物质中的组分呈现的颜色差别比较大,而铝盐与银杏黄酮类物质的特征显色比较一致。
氯化铝或硝酸铝与银杏黄酮类物质生成的络合物多为黄色(λmax=415n m),可用于银杏黄酮类物质的定性及定量分析[5]。
2.3 提取液称取10g粉碎银杏叶,用50mL70%乙醇—水溶液(体积比为7∶3)在70℃下加热,过滤得到提取液。
分光光度法测定银杏叶中的总黄酮探讨
分光光度法测定银杏叶中的总黄酮探讨摘要：总黄酮是自然界中植物次生代谢产物，具有较高的药用价值，测定银杏叶中总黄酮含量对于药品研究与制备具有极为重要的意义。
分光光度法是物质测定中比较常用的检测方式，相较于其他测定方法而言分光光度法的测定便捷，准确率较高，具有良好的应用价值。
分光光度法用于银杏叶总黄酮测定中能够利用其波长吸收度，了解银杏叶中总黄酮含量，探讨其最佳提取条件。
关键词：分光光度法；银杏叶；总黄酮银杏叶是自然界常见植物类型，其内部富含丰富的化学成分，在各类药物的制备中常用银杏叶入药，从而完成药品制备。
在银杏叶中各类有效成分中，总黄酮是广泛认同的具有较高应用价值的有机化合物，总黄酮属于黄酮类化合物具有改善心血管功能、止咳平喘、抗菌消炎等优质作用，总黄酮广泛存在于植物次生代谢物中，因此银杏叶中总黄酮的组成也较为丰富[1]。
但在实验室研究中，由于银杏叶本身所富含的丰富化学成分，想要有效测定银杏叶中总黄酮含量具有一定难度。
先进的分析和计量仪器能够对银杏叶总黄酮进行有效测定，其中分光光度法作为目前物质测定中最常用且相对便捷的测定方式能够利用银杏叶内总黄酮的特殊显像规律以及其在不同波长下的吸光度对其进行含量测定，从而达到良好的检测结果[2]。
分光光度法是一种操作便捷准确性相对较高的检测方式，而应用其进行银杏叶总黄酮的测定，也需要充分注意实验仪器的选择和实验方法的有效控制，尽可能保证检测的稳定性与结果的准确性。
一、实验仪器及原理1、仪器与试剂仪器：UV757CRT紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），FA1004型电子天平（上海精密天平厂）。
试剂：70%乙醇、无水乙醇、三氯甲烷、三氯化铝、无水硫酸钠、银杏叶、98%芦荟丁。
所有仪器在检测前均按照国家计量检定要求，进行校正检定。
2、实验原理对总黄酮处在特定波长范围内光的吸收度，对其进行定性定量分析，由于总黄酮物质的含量不同，对光的吸收程度也不同，因此利用其特有的吸收光谱进行总黄酮存在测定，利用其光吸收程度测定总黄酮物质含量。
生物制药综合实验讲义
实验一银杏叶总黄酮的提取及测定1 实验目的（1）掌握银杏叶中黄酮的提取方法；（2）掌握银杏叶中黄酮的含量测定。
2 实验原理近几年来，随着对黄酮类化合物研究的日益深入与重视，黄酮类化合物提取技术的发展也得到了促进。
目前提取黄酮类化合物的方法主要包括有机溶剂浸提法、超声波提取法、超临界流体萃取法、微波提取法和酶提取法等。
本实验采用有机溶剂浸提法提取银杏叶总黄酮，运用芦丁法测定银杏叶总黄酮含量。
3 实验材料、试剂和主要仪器3.1 实验材料与试剂银杏叶，芦丁标准品，无水乙醇，NaNO2，Al(NO3)3，NaOH。
3.2主要仪器移液枪，圆底烧瓶，水浴锅，旋转蒸发仪，布氏漏斗，容量瓶，10 ml刻度管，酶标仪。
4 实验步骤4.1银杏叶黄酮的提取称量2 g银杏叶放入圆底烧瓶中，加入100 ml 80%乙醇于圆底烧瓶中，于80℃下热回流提取2h，用漏斗过滤，弃渣留滤液，滤液用旋转蒸发仪浓缩并转入100 ml容量瓶中，用30%的乙醇定容，摇匀，供检测使用。
4.2芦丁标准曲线的绘制用80%乙醇配制0.03%（0.3 mg/ml）的芦丁标准储备液。
分别吸取刚配制好的芦丁标液0.0，15.6，31.3，62.5，125，250，500 μl置于7个1.5 ml EP管中，用80%的乙醇补足至0.5 ml，依次编号0~6，加入30 μl NaNO2（5%），摇匀静置6 min后加入30 μl A1(NO3)3 （10%），摇匀静置6 min后再加入400 μl NaOH （4%），混匀，用80%乙醇补至1 ml，静置l5~20 min，以0号试管为空白，用酶标仪在510 nm波长处测定吸光度，以吸光度(A)为横坐标，芦丁浓度(μg/ml)为纵坐标，绘制标准曲线。
4.3总黄酮含量的测定做2个样，取适量提取液置于1.5 ml EP管中，用80%乙醇补充至0.5 ml，加入30 μl NaNO2（5%），摇匀静置6 min后加入30 μl A1(NO3)3（10%），摇匀静置6 min后再加入400 μl NaOH（4%），混匀，用80%乙醇补至1 ml，静置l5~20 min，以0号试管为空白，用酶标仪在510 nm波长处测定吸光度。
银杏叶中黄酮类化合物的提取
随着时间的↑ 随着时间的↑黄 酮类化合物提取 4h之前 率↑ ，4h之前 时间↑ 时间↑提取率的 影响比较明显， 影响比较明显， 4h之后时间的 之后时间的↑ 4h之后时间的↑ 提取率增加变缓。 提取率增加变缓。
实验条件：温度 ℃ 浸取剂70%乙醇溶液 ；料液比 实验条件：温度80℃ ；浸取剂 乙醇溶液 料液比1:15
提取率 （ % ） 提取率（
三 、实验结果及讨论
料液比对提取率的影响：
90 85 80 75 70 65 1:10 1:15 1:20 1:25 1:40
↑ 1:15
料液比
随着料液比↑提取 随着料液比 提取 率也随之↑。 率也随之 。在 1:15之前，对提 之前， 之前 取率的影响比较 明显， 明显，在1:15之 之 后，对提取率影 响变小。 响变小。
芦丁的化学结构式
二、研究内容
测量波长的选取： 测量波长的选取：
1.5 1.2
0.9 0.6 0.3 0 400 450 500 550 600
500nm ↓
波长( nm） 波长 ( nm ）
根据吸收光谱可 知，该有色溶液在波 nm具有最大吸 长500 nm具有最大吸 光度， 光度，且吸收范围较 宽，所以选择吸收波 nm作为定量测 长500 nm作为定量测 定波长。 定波长。
80 70 60 50 40 50 60 70
↑ 80℃ ℃
80
90
100
温度（ 温度 （ ℃ ）
浸取温度的↑ 浸取温度的↑提 取率液随着↑ 取率液随着↑ 。 80℃之前提取率 ℃ 增加迅速， ℃ 增加迅速，80℃ 之后， 之后，温度对提 取率的影响变小。 取率的影响变小。
实验条件：时间 浸取剂70%乙醇溶液 ；料液比 实验条件：时间4 h ；浸取剂 乙醇溶液 料液比1:15
银杏叶提取物总黄酮含量分析方法的研究
银杏叶提取物总黄酮含量分析方法的研究郑启波【摘要】确定银各叶提取物总黄酮含量测定方法.用紫外可见分光光度法和高效液相色谱法对提取物中的银杏叶总黄酮含量进行测定,并相互比较,确立紫外可见分光光度法为快速、简便、准确的方法,作为银杏叶总黄酮含量测定的常用方法.【期刊名称】《哈尔滨医药》【年(卷),期】2011(031)006【总页数】2页(P417,419)【关键词】银各叶总黄酮;分光光度法;高效液相色谱法;提取工艺【作者】郑启波【作者单位】哈尔滨仁皇药业有限公司,黑龙江哈尔滨150030【正文语种】中文【中图分类】R282.71银杏叶为银杏科植物，味苦、甘涩、性平，活血养心、敛肺涩肠。
主治胸痹心痛，喘咳痰嗽，泄泻痢疾。
银杏叶提取物(EGB)具有广泛的药理作用，其提取物(extract of Ginkgo Biloba，EGB)中主要活性成分为黄酮类和萜类内酯。
它们在改善心脑血管循环、老年性外周循环障碍及老年痴呆症方面具有很好的疗效，有抑制血小板凝聚酶、抗菌、抗病毒、抗氧化、抗癌等作用［1］。
1 实验部分1.1 仪器与试药:UV－4600型紫外可见分光光度计(瑞典Pharmacia公司)，高效液相色谱仪，配备有600E型泵系统，966型二极管阵列检测器，RCMC18(8.0 cm × 1.0 cm，粒度:5 μm);芦丁、槲皮素(中国药品生物制品检定所)、山柰酚、异鼠李素(Sigma公司)、盐酸、甲醇、乙醇、丙酮均为分析纯。
1.2 提取工艺:取200 g干银杏叶粉碎，浸泡在2000 mL 70%乙醇中，在水浴上热回流提取2次，每次各3 h，过滤，2次滤液合并，在水浴上减压蒸馏，除去溶剂，用石油醚脱脂2次水溶液浓缩至原体积的1/10，后用20%乙醇悬浮，过滤，滤液中加入少量的硼砂，在水浴上减压蒸馏，回收乙醇，水液在水浴上浓缩成浆液状，控制在60℃温度下真空干燥，得提取物 29.35 g［2－3］。
紫外分光光度法测定银杏叶中总黄酮的含量
紫外分光光度法测定银杏叶中总黄酮的含量王卫华;彭婷婷;晁建敏;安芸;苗方【摘要】目的建立银杏叶中总黄酮的含量测定方法。
方法采用紫外分光光度法测定总黄酮。
结果总黄酮在(0.025 mg～0.25 mg)/ml范围内具有良好的线性关系(R＝0.9993)，回收率为99.4％，RSD为0.44％。
结论该方法操作简便、快速、准确，具有良好的重复性和回收率，可作为银杏叶的质量控制方法。
【期刊名称】《菏泽医学专科学校学报》【年(卷),期】2011(023)002【总页数】2页(P16-17)【关键词】银杏叶；总黄酮；紫外分光光度法；含量测定【作者】王卫华;彭婷婷;晁建敏;安芸;苗方【作者单位】菏泽医学专科学校,山东菏泽,274000;菏泽医学专科学校,山东菏泽,274000;菏泽市牡丹大药房连锁公司;菏泽医学专科学校,山东菏泽,274000;菏泽医学专科学校,山东菏泽,274000【正文语种】中文【中图分类】Q949.64银杏（Ginkgo biloba L）又名白果,是我国的特种植物,食用、绿化环境。
特别在医药上有很高的利用价值。
银杏叶中黄酮类化合物可分为黄酮、双黄酮和儿茶素等类化合物，共有36种，主要以苷的形式存在。
银杏黄酮的元有7种，即槲皮素、山柰素、异鼠李素、杨梅素、芹菜素、木草素、三粒小麦黄酮等，前3种是其主要成分［1］。
在银杏叶及提物（GBE）的质量控制中主要检测这3种黄酮苷元的含量。
银杏叶中黄酮类化合物具有捕获游离基和抑制血小板活化因子、扩张脑血管、促进血液循环、抗过氧化等功能，从而广泛用于治疗冠心病、心绞痛，治疗老年痴呆症和增强记忆功能，防治皮肤病、脱发等疾病［2］。
银杏所特有的值逐步为我们所重视。
对银杏中黄酮的总含量测定的方法较多，为了更好地开展银杏叶的药材质量标准化研究，拟建立了分光光度法检测银杏叶总黄酮含量的方法，从而为银杏叶的质量评价提供一种新的依据。
1 仪器与试剂1.1 仪器 UV-2401分光光度计（岛津）。
银杏叶中黄酮的提取原理及方法
银杏叶中黄酮的提取原理及方法SANY标准化小组 #QS8QHH-HHGX8Q8-GNHHJ8-HHMHGN#银杏叶中黄酮提取及含量测定一、实验目的提取银杏叶中的总黄酮并测定其含量。
二、实验原理银杏系银杏科银杏属落叶乔木，银杏叶中含有多种生理活性成分，其中黄酮类化合物是重要的生理活性物质，具有保肝护肝、预防治疗心血管疾病、抗氧化、抗衰老等作用。
因此，将银杏叶作为高营养、保健功能价值的资源加以开发利用，这对于提高银杏叶综合利用率有重要意义。
银杏叶黄酮类化合物的提取方法目前研究的有水浸取法，成本低但浸取率低；有机溶剂浸取法中，乙醇浸取的效率高且无毒，是目前采用较多的方法；韩玉谦等采用超临界流体萃取法，在70%乙醇溶液中加热回流法和 CO2 超临界流体萃取法提取银杏叶中的活性成分，银杏黄酮回收率为84 . 4 % ，是常规萃取法回收率的2倍多；乙醇超声波浸取法, 黄酮提取率可达到 8 6 . 7 %。
银杏黄酮含量的测定常用分光光度法和高效液相色谱法。
分光光度法自20世纪 9 0年代以来一直是用来测定银杏黄酮的一种重要方法, 由于其成本低、便于操作等特点, 是一种快捷有效的方法[1]。
本实验采用乙醇作溶剂进行索氏提取，建立了用Al(NO3)3显色法对芦丁标准品和银杏叶提取液进行光谱扫描测定银杏叶总黄酮含量的方法[2]。
三、实验仪器和试剂材料：银杏叶粉末50g试剂：标准芦丁样品，无水乙醇（600ml），50mlAl(NO3)3（L），乙醚，5%NaNO2溶液，10%AL(NO3)3，4%NaOH溶液。
仪器：紫外分光光度计、电子分析天平、水浴锅、烘箱、烧杯、容量瓶（100ml1个、50ml1个、10ml6个）、索氏提取器、减压蒸馏装置、锥形瓶、沸石等。
四、实验步骤提取银杏叶中总黄酮（1）将银杏叶洗净, 在103℃下烘干至恒重,用研钵捣碎制得银杏叶粉（2）准确称取，置于索氏提取器中，按下列条件加热回流提取：乙醇浓度80％，料液比1：20(g／ml)，回流温度85℃，回流时间2 h，平行进行1~3次实验。
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银杏黄酮的含量检测方法
一．色谱条件：
色谱柱：Intersil ODS-3 4.6×150mm 5um
流动相：甲醇：0.04 mol/L 磷酸(50:50,V/V)
检测波长：360 nm
流速：1.0ml/min
灵敏度：0.01AUFS
柱温：25℃
二．溶液制备：
2.1 对照品溶液的制备：
称取槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品各约3mg于25ml容量瓶中，加入甲醇溶解定容。
2.2 样品溶液的制备：
称取银杏提取物约60mg于50ml容量瓶中，加入甲醇超声振荡提取约40min，放置室温，定容，用0.45um的微孔滤膜过滤。
三．样品测定：
槲皮素的保留时间约为9min，山柰素约为15min，异鼠李素约为18min，银杏黄酮含量按下式计算。
总黄酮含量=（槲皮素含量+山柰素含量+异鼠李素含量）×2.51。