流式细胞仪细胞分选的操作步骤
流式细胞仪细胞分选的操作步骤
细胞分选的简要操作步骤一、上样前的准备FACSCalibu可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。
1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。
3L 70%乙醇（用无菌蒸馏水配制）5L无菌蒸馏水5L无菌PBS2、在干净的鞘液筒中加入3L 70%乙醇。
盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗涤。
安好鞘液筒。
3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。
4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。
5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。
6、放上一支装有70 %乙醇的进样管。
7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。
9、从Acquire menu选择SortSetup。
在Sort Gate菜单中选择步骤7设定的分选门。
按液流控制键RUN。
10、在Setup 方框中打叉，点击Acquisition Control 菜单中Acquire。
11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min ），点击Pause, Abort。
12、再重复上述步骤2次，共需要1h。
13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直至洗净桶内壁残余乙醇。
14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
15、在收集管接口处安装2支新的收集管。
16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。
17、点击Acquisition Control 菜单中Acquire。
18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause Abort。
19、再重复上述步骤2次，共需要1h。
20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L无菌PBS盖紧盖子。
安好鞘液筒。
21、在收集管接口处安装2支新的收集管。
22、放上一支装有无菌PBS的进样管。
23、点击Acquisition Control 菜单中Acquire。
巨噬细胞流式分选操作步骤
巨噬细胞流式分选操作步骤
巨噬细胞是一种具有吞噬功能的白细胞，它们在免疫系统中起着重要作用。
为了研究巨噬细胞的功能和特性，科学家通常需要将它们从其他细胞中分离出来并进行染色、检测等操作。
其中，流式分选技术被广泛用于巨噬细胞的纯化和分离。
下面，我们来介绍一下巨噬细胞流式分选的操作步骤。
一、实验前的准备工作：
1. 准备受试物表面抗原特定抗体；
2. 制备含酶解物的胶体金或荧光染料；
3. 准备含有酶解物或染料的肠系膜淋巴结细胞悬液；
4. 准备细胞懒散剂和细胞培养液等实验材料；
5. 整理并检查流式细胞仪等分选设备。
二、准备分选的细胞样品：
将含有成熟巨噬细胞群体的细胞样品溶于肠系膜淋巴结细胞悬液中，将其稀释到一定的浓度，使得在细胞样品中含有合适的巨噬细胞。
三、染色和标记：
将制备好的受体抗体加入到细胞样品中，在室温下孵育一定的时间，使受体抗体特异性地结合在巨噬细胞表面，并标记出这些细胞。
四、流式细胞分选：
将标记好的巨噬细胞与胶体金或荧光染料混合，将混合物加入流式细胞仪中。
开启仪器中的激光，利用其激发不同颜色染料的发光特性，将不同类型的细胞从流动的细胞样品中分离出来，并整理在不同的收集管中，完成样品的纯化与分选。
五、结果的观察和分析：
得到纯化后的细胞群体后，可对其进行进一步的分类或实验。
通过观察和分析分选后得到的巨噬细胞的形态、数量和功能等方面的特征，来研究这些细胞在免疫系统中所扮演的角色和作用。
流式细胞仪细胞分选的操作步骤
流式细胞仪细胞分选的操作步骤细胞分选的简要操作步骤一、上样前的准备FACSCalibur可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。
1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。
●3L 70% 乙醇（用无菌蒸馏水配制）●5L 无菌蒸馏水●5L 无菌PBS2、在干净的鞘液筒中加入3L 70% 乙醇。
盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗涤。
安好鞘液筒。
3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。
4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。
5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。
6、放上一支装有70 % 乙醇的进样管。
7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。
9、从Acquire menu选择SortSetup 。
在Sort Gate菜单中选择步骤７设定的分选门。
按液流控制键RUN。
10、在Setup方框中打叉，点击Acquisition Control菜单中Acquire。
11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
12、再重复上述步骤2次，共需要1h。
13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL 无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直至洗净桶内壁残余乙醇。
14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
15、在收集管接口处安装2支新的收集管。
16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。
17、点击Acquisition Control菜单中Acquire。
18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
19、再重复上述步骤2次，共需要1h。
20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L 无菌PBS，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
21、在收集管接口处安装2支新的收集管。
22、放上一支装有无菌PBS的进样管。
流式细胞仪操作方法
一、样品制备1、取样（大约1×106 cells），离心弃上清，以PBS洗两遍，逐滴加入1ml 70%的冷乙醇固定细胞，﹣20℃冻存过夜。
分析时，离心弃上清，以PBS洗两遍，加入100μl的Rnase（GenScript试剂A），37℃水浴30min，然后再加入400μl的PI染液（GenScript试剂B），在4℃避光条件下孵育30min后即可上FCM检测。
每个样品至少获取2×104cells，二、上流式测细胞1.1、打开液流抽屉，确认气压阀处于减压状态；打开金属挡板；取出鞘液桶，倒掉废液，将鞘液桶加至2/3满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFLow），拧紧鞘液桶盖，安上金属挡板，保证管路畅通无扭曲。
检查废液桶，将废液桶的气路和液路的快速连接阀打开，倒掉废液（加鞘液一定要倒废液）向废液桶中倒入400ml浓度为10%的次氯酸钠溶液，合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
1.2、依此接通电源、打开稳压器电源（指示灯由bypass变Ac putput）、变压器电源，稳定5分钟。
将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY。
如果需要打印，打开打印机电源。
打开电脑（密码：BDIS），等待屏幕显示出标准的苹果标志（先开仪器，后开电脑主机）。
1.3、将压力阀置于加压位置，轻拍过滤器，使气泡位于滤器的上方，打开管路开关，将过滤器中的气泡排除，关闭管路开关。
若滤器管路中有气泡，打开连接头，挤出鞘液，以排除气泡。
关闭液流抽屉。
执行仪器PRIME功能一次，以排除Flowcell中的气泡（反向压力使鞘液从进样针中流出）。
结束后自动STANDBY，5分钟后即可进行试验。
2.1、从苹果画面中选取CELLQuest，最大化，选散点图标，打开，Plot type选择Acq-analysis，X参数和Y参数分别取FSC-H、SSC-H（选择散点图主要是确定所需细胞的细胞群）。
流式细胞术操作规程
流式细胞术操作规程
《流式细胞术操作规程》
流式细胞术是一种用于研究细胞表型和功能的重要技术。
在进行流式细胞术时，操作规程的严谨性和标准化是非常重要的。
以下是流式细胞术操作规程的一般步骤：
1. 样品准备：首先，需要准备好待测的细胞样品。
这包括细胞的培养和收集，以及必要的处理和染色。
2. 仪器准备：在进行流式细胞术之前，需要确保流式细胞术仪器的正常运行。
这包括检查流式细胞仪和细胞分选仪的通电和冷却系统，以及其它相关设备的准备。
3. 校准仪器：在进行流式细胞术之前，需要对流式细胞仪进行校准，以确保其准确测量样品中细胞的特定参数。
4. 样品测量：将准备好的细胞样品加入流式细胞仪，并进行测量。
测量完毕后，需要对数据进行分析和记录。
5. 数据分析：对测量得到的数据进行分析，包括确定细胞的表型和功能，以及对其它相关参数进行分析和比较。
6. 结果解释：根据数据分析的结果，进行结果的解释和报道，并对相关实验现象进行讨论和总结。
在进行流式细胞术时，需要严格遵守操作规程，以确保实验结果的准确性和可靠性。
此外，对于一些特殊的实验操作，可能
还需要根据具体情况进行相应的调整和改进。
流式细胞术的操作规程是一个很重要的研究工具，它可以帮助研究人员进行高效、准确的实验，从而为科学研究和医学诊断提供更为可靠的数据和方法。
流式细胞仪操作方法
—、样品制备1、取样（大约lx cells ）,离心弃上清，以PBS 洗两遍，逐滴加入1 ml 70%的 冷乙醇固定细胞，-20°C 冻存过夜。
分析时，离心弃上清，以PBS 洗两遍，加入 100|j 啲Rnase （GenScript 试剂A ）, 37°C 水浴30min,然后再加入400』的PI 染 液（GenScript 试剂B ）,在4°C 避光条件下孵ff30min 后即可上FCM 检测。
每个样品至少获取2xl04cells, 二、上流式测细胞1」、打开液流抽屉，确认气压阀处于减压状态；打开金属扌当板；取出鞘液桶， 倒掉废液，将鞘液桶加至2/3满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS 或FACSFLow ）,拧紧鞘液桶盖，安上金属扌当板，保证管路畅通无扭曲。
检查废液 桶，将废液桶的气路和液路的快速连接阀打开，倒掉废液（加鞘液一定要倒废液） 向废液桶中倒入400ml 浓度为10%的次氯酸钠溶液，合上压力阀。
确实盖紧桶盖, 检查所有管路是否妥善安責。
1.2、 依此接通电源、打开稳压器电源（指示灯由bypass 变Ac putput ）、变压 器电源，稳定5分钟。
将FACSCalibur 开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应 是STANDBYo 如果需要打印，打开打印机电源。
打开电脑（密码：BDIS ）,等待 屏幕显示出标准的苹果标志（先开仪器，后开电脑主机）。
1.3、 将压力阀責于加压位置，轻拍过滤器，使气泡位于滤器的上方，打开管路开关，将过滤器中的气泡排除，关闭管路开关。
若滤器管路中有气泡，打开连接 头，挤出鞘液，以排除气泡。
关闭液流抽屉。
执行仪器PRIME 功能一次，以排除 Flowce 呻的气泡（反向压力使鞘液从进样针中流岀）。
结束后自动STANDBY, 5分钟后即可进行试验。
2.1、从苹果画面中选取CELLQuest,最大化，选散点图标，打开，Plot type 选择Acq-analysis, X 参数和丫参数分别取FSC-H 、SSC-H （选择散点图主要是确定 所需细胞的细胞群）。
FACSAria流式细胞仪无菌分选的基本流程
FACSAria流式细胞仪无菌分选的基本流程一、环境和液流的消毒1、准备足量的无菌1×PBS（3L左右）和去离子水（10L左右）。
PBS和去离子水可高压灭菌，sheath桶和装DI水的5L小桶依次用75％医用酒精和无菌去离子水各涮洗三次，然后将无菌PBS和去离子水分别注入相应桶内即可。
2、房间在分选前紫外灯照射15－20分钟；用1:50新洁尔灭拖地；用75％医用酒精擦拭工作台和收集架；用75％医用酒精喷洒分选细胞收集区和上样区。
二、开机和管道的消毒1、将 Sheath液换为活性氯浓度为0.5%的次氯酸钠溶液（不要用75％的酒精），开机。
开机前，先掀起流动室和分选室的罩盖，开启电源，打开计算机并等计算机进入WINDOWS系统后，打开激光电源，运行FACSDiva软件，联机成功后，执行Fluidics startup命令。
然后从FACSDiva的sort菜单进入sort setup，选择合适的液流压力（high、 middle、low）。
一般来说，100μm的喷嘴选用Low，而70μm的喷嘴选用middle。
2、打开breakoff window，点击显示窗上的液流开关，检查液流是否正好流入废液槽中间和液流的形态是否正常。
如果出现异常，可以通过调整喷嘴的位置，改变 Breakoff 窗口的Amplitude的大小和打开Attenuation开关等来进行调整。
（具体操作可参考Instrument User’s Guide的194－200页），直至液流形态和位置符合分选要求。
3、在上样管中装入1ml 活性氯浓度为0.5%的次氯酸钠溶液,将上样管放在上样架上，点击Acquisition窗口的Load开关，运行15－20分钟后，点击Unload 开关，取下上样管。
4、将Sheath液换为无菌PBS，先后执行Fluidics shutdown和Fluidics startup程序各一次。
通过上述操作完成了环境和管道的消毒，为分选准备了无菌的环境，在后续的操作中应注意保持，以确保分选样本不被污染。
细胞流式分选
细胞流式分选细胞分选技术可以将不同种类的细胞根据其特定的属性进行分离和分析。
其中，细胞流式分选技术作为一种常用的手段，可以通过将细胞悬浮液经过流式细胞仪进行检测，再根据细胞特性进行高速分选。
该技术已经被广泛应用于许多生物医学领域，如肿瘤学、免疫学、神经学等，为细胞学研究提供了有力的工具。
一、细胞流式分选的原理细胞流式分选技术基于流式细胞仪和荧光标记技术。
首先，将细胞悬浮液加入流式细胞仪中，然后通过光学光谱仪对其进行检测，记录细胞具体的特性信息。
接着，根据细胞表面的特定标记分别用荧光染料染色，并将细胞以快速流动的方式通过激光束进行荧光检测，荧光信号被记录在荧光探测器中。
最后，细胞根据这些特征被迅速分选，实现不同类型细胞的分开操作。
二、细胞流式分选的应用细胞流式分选技术广泛用于肿瘤学、免疫学和生殖医学等领域。
以肿瘤学为例，该技术可用于分离纯化恶性肿瘤细胞，对于恶性肿瘤细胞的研究具有重要意义。
在免疫学中，该技术被用于对免疫细胞进行排序和筛选，以进行相关检测。
在某些实验中，要求使用高度纯化的单一类型细胞，因此，细胞流式分选技术也是必不可缺的技术手段。
此外，在生殖医学领域，该技术同样广泛用于人类胚胎和生殖细胞的筛选、筛查和分离。
三、细胞流式分选技术的发展随着生命科学的不断进步，细胞流式分选技术也得到了不断的升级和发展。
例如，现在的细胞流式分选仪已经不仅可以分选细胞，还能用于快速植物种子品质检测。
而流式细胞仪以及其中的荧光标记和探测器技术也在不断更新，以适应越来越多的研究需求。
未来，随着技术的进一步发展和完善，细胞流式分选技术将无疑在许多生命科学研究领域发挥更加重要的作用。
总之，细胞流式分选技术作为一项令人瞩目的细胞分离技术，在生命科学研究等许多领域具有重要作用。
其原理简单且操作便利，可以在很短时间内分离出纯化的特定类型细胞，为应用于生物和医学研究打下了坚实的基础。
随着技术的不断进步和发展，细胞流式分选技术将在未来更加普及，并为人类健康事业和细胞研究的发展带来更多的可能。
流式细胞分选步骤
流式细胞分选步骤
流式细胞分选（fluorescence-activated cell sorting, FACS）是一种通过细胞表面标记物的荧光信号将细胞分离成单个克隆的分析技术。
以下是通常的流式细胞分选的步骤：
1. 细胞准备：将待分选的细胞进行培养和增殖，直到细胞数量足够用于分选。
此外，细胞也可以来源于个体的组织或血液。
细胞样本应该处于单细胞悬浮状态，以确保每个细胞的分选准确性。
2. 细胞标记：利用适当的荧光标记物标记细胞表面的特定分子或细胞内的组分。
常用的标记物包括荧光染料和荧光抗体。
这些标记物可以用来区分不同类型的细胞或细胞的亚群。
3. 流式细胞仪设置和样品加载：将细胞样品放置在流式细胞仪中。
根据所使用的流式细胞仪和实验条件，可以设置不同的参数，如激光功率、荧光信号检测通道和仪器的灵敏度。
4. 细胞分选：根据细胞表面标记物的荧光信号，通过流式细胞仪中的高压和细胞流速控制，将目标细胞从样品中逐个分选出来。
常见的分选方法包括电子静电排序（electrostatic-charge sorting），压控破裂排序（pressure-based sorting）和电压脉冲排序（voltage-pulse sorting）。
5. 细胞收获：被分选的细胞可以在培养皿中进行培养和进一步分析，或者可以直接用于其他实验或应用中。
6. 数据分析：将流式细胞仪生成的数据进行分析和解释，以获得有关每个分选细胞的详细信息，例如荧光信号的强度和细胞亚群的比例。
需要注意的是，流式细胞分选是一个高度专业化和技术性要求较高的实验技术，操作时需要严格控制污染和合理运用对比试剂以获得理想的结果。
流式细胞仪操作规程
流式细胞仪的使用程序分子病毒实验室一．开机程序1．检查稳压器电源，打开电源，稳定 5 分钟。
2.打开储液箱，倒掉废液，并在废液桶中加入400ml漂白水原液。
打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至 4/5 满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFIow），合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
3.将 FACSCalibur 开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是 STANDBY，预热5-10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4.如果需要打印，打开打印机电源。
5.打开电脑 , 等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6.执行仪器 PRIME 功能一次，以排除 Flow cell 中的气泡。
7.分析样品时，先用 FACAFIow或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个 50ml 离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。
预设获取模式文件(Acquisition Template Files)从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个1.获取模式文件。
2.选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点图）。
从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的 x 轴和y 轴参数。
3.选取屏幕左列绘图工具中的 Histogram，同上法可绘出 Histogram （直方图）。
4.将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuestFolder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。
. 本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStationG3\BD Applications \CELLQuest \EXP 文件夹中，ACQ 用于细胞 DNA 检测， EXP用于细胞表面标志分析。
流式细胞操作流程
流式细胞操作流程
流式细胞术是一种用于分析和分类细胞的生物学技术。
以下是典型的流式细胞操作流程：
1.细胞样本准备：
•收集要分析的细胞样本，可以是细胞悬液、组织细胞悬液或血液等。
•对样本进行必要的预处理，如裂解红细胞，去除细胞碎片等。
2.标记细胞：
•使用荧光标记物（荧光染料、抗体等）标记细胞中的特定分子，以便流式仪器能够检测到这些标记。
•标记的目标可以是表面抗原、细胞器、DNA或RNA等。
3.样本染色：
•添加染色剂（荧光标记物）到细胞样本中，使其能够在流式仪器中发光。
•染色通常通过孵育样本和染色剂混合物来实现。
4.细胞固定（可选）：
•如果需要保持细胞在染色后的状态，可以进行细胞固定步骤。
5.样本混合：
•将经过标记和染色的细胞混合均匀，以确保获得代表性的样本。
6.样本注射到流式细胞仪：
•将样本通过流式细胞仪的进样口注入，使其形成单个细胞的流动流。
7.激光激发和信号检测：
•使用激光激发样本中的荧光标记物。
•流式细胞仪会检测细胞产生的荧光信号，并记录下来。
8.数据分析：
•通过计算机软件对收集到的数据进行分析。
•分析可以包括对不同细胞亚群的鉴定、数量统计、染色物的表达水平等。
9.结果呈现：
•将分析结果呈现为图表、图像或表格，以便更好地理解和解释实验结果。
流式细胞术可以用于许多研究领域，如免疫学、细胞生物学、肿瘤学等，以研究和识别不同细胞类型、表达分子的水平等。
流式细胞技术的操作方法
流式细胞技术的操作方法
流式细胞技术是一种用于分析和分类细胞的方法，通常包括以下步骤：
1. 细胞准备：从组织样本或培养细胞中收集细胞。
可以使用细胞培养、离心、切片等方法获取细胞。
2. 细胞处理：对收集到的细胞进行处理，包括洗涤、消化、染色等步骤。
洗涤可以去除细胞外的杂质，消化可以使细胞变成单细胞悬浮状态，染色可以标记特定细胞结构或分子。
3. 细胞悬浮：将处理后的细胞悬浮在缓冲液中，确保细胞以单个细胞为单位悬浮。
4. 流式细胞仪设置：根据实验需要，对流式细胞仪进行设置，包括调整流速、选择相应的激发波长和检测滤光片等。
5. 细胞分析：将悬浮的细胞通过流式细胞仪进行分析。
细胞会依次通过激光束，激光照射到细胞上时，细胞中的荧光标记物会被激发，发出特定的荧光信号。
根据细胞在不同参数上的荧光信号的强弱和分布情况，可以得到细胞的特征信息。
6. 数据分析：根据流式细胞仪得到的荧光信号，可以利用相关的软件进行数据分析，包括细胞计数、细胞分类、细胞亚群分析等。
7. 结果解读：根据数据分析的结果，解读实验结果，得出相应的结论。
需要注意的是，流式细胞技术的操作方法可能会因具体实验目的和流式细胞仪型号的不同而有所变化。
在进行实验前，最好参考操作手册或相关文献，了解具体的操作步骤和注意事项。
t细胞分离流式分选
t细胞分离流式分选T细胞分离流式分选引言：T细胞是免疫系统中的重要组成部分，扮演着抵御病原体和肿瘤细胞的关键角色。
为了深入研究T细胞的功能和特性，科学家们开发了一种称为T细胞分离流式分选的技术。
本文将介绍T细胞分离流式分选的原理、步骤和应用。
一、原理：T细胞分离流式分选是一种利用流式细胞术和磁珠技术结合的方法，通过特异性标记和分离T细胞。
该技术基于T细胞表面的特定标记物，常用的标记物包括细胞表面受体、抗原或细胞表面分子。
通过标记物与相应的抗体或磁珠结合，可以实现对T细胞的精确分离。
二、步骤：1. 样品制备：首先需要从样品中获得T细胞，常用的样品来源包括外周血、脾脏和淋巴结等。
样品通常需要进行前处理，如红细胞溶解、组织切割等。
2. 标记物标记：将特定的标记物与T细胞表面的受体或分子结合。
标记物可以是荧光标记的抗体或磁珠，选择合适的标记物可以根据实验目的和研究需求进行。
3. 细胞分离：将标记物与T细胞结合后，可以通过流式细胞仪或磁选仪进行细胞分离。
流式细胞仪会根据标记物的荧光信号来识别和分离T细胞，而磁选仪则通过磁力将标记物结合的细胞分离出来。
4. 细胞检测和分析：分离得到的T细胞可以进行进一步的检测和分析。
常用的方法包括细胞计数、表型分析、功能检测等。
三、应用：T细胞分离流式分选技术在免疫学和临床研究中有着广泛的应用。
1. 免疫学研究：T细胞分离流式分选可以帮助研究人员深入了解T 细胞的功能和特性。
通过分离得到的T细胞，可以进行进一步的功能研究，如细胞增殖、分泌因子检测等。
2. 免疫治疗：T细胞分离流式分选可以用于免疫治疗的研究和应用。
例如，通过分离得到的特定亚群T细胞可以用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病等。
3. 临床诊断：T细胞分离流式分选在临床诊断中也有重要的应用。
例如，通过分离和检测特定的T细胞亚群，可以帮助早期诊断和监测某些疾病，如HIV感染、免疫缺陷等。
结论：T细胞分离流式分选技术是一种重要的研究工具和临床应用方法。
AriaII操作手册-分选
FACSAri aⅡ流式细胞仪一、开机准备（一）准备液路1.将流式细胞仪的上盖打开；2.开启计算机，等待所有程序载入。
3.开主机电源Mainpower（右图），从电脑桌面上双击打开FACSDiva软件，输入密码BDIS。
打开激光开关laser power（根据实验需要进行选择）；开启实验所需激光器电源。
4.确认液流车中各种液体的液面水平（鞘液、废液、去离子水、漂白剂、乙醇），倒空废液或加满其他液体（下图）。
5.从软件的Cytometer菜单上选择Fluidic Startup(射流启动)，点击OK确认。
将出现如下窗口：6．将液路和气路管道从酒精桶断开，连接到鞘液桶；完成后点Done；7．将Closed-loop 喷嘴（闭环喷嘴）插入流动室；完成后点Done；会出现右侧窗口，提示液流开启进行中；8．达到100%，移去Closed-loop喷嘴，完成后点Done；9．按照实验要求，插入直径合适的喷嘴（喷嘴直径应该是分选颗粒直径的3-6倍）；10．然后点OK，完成整个过程；11．从菜单上选择Sort(分类)sort setup,确认setup模式与喷嘴大小匹配。
（二）开液流1．打开液流窗口的液流；♦点击软件界面上（如下图）的按钮打开分选液流窗口（如下图）♦点击分选液流窗口的按钮(stream 的前面按钮)，开启液流2．打开分选仓前的门，检查液流。
液流应为一条细线落入废液槽正中(可通过调整红色标志的键)；（如果液流不稳，检查流动室中是否有气泡，将液流关闭，10秒钟后再开，排除气泡。
）3．关上分选仓前的门。
（三）设定液流断点1.调整液流震幅（Ampl），使断滴位于窗口上方1/3处。
（Ampl不要超过70，如果超过，检查流动室是否有气泡；确认鞘液压力和震动频率是否合适）；2.确认卫星液滴与大液滴融合，应该在断滴的6滴之内融合（红色箭头数起，左图的左侧合格，右侧不合格），如果没有融合，重新安装喷嘴。
二、建立实验模板1.在软件界面左侧Browser面板下，依次点击New Folder、Experiment、Specimen （均可重命名），单击Specimen左侧“+”符号，显示下方的Tube，点击左侧灰色指示箭头，使之变成绿色（当前指示）。
流式细胞仪操作规程
流式细胞仪的使用程序分子病毒实验室一.开机程序1.检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。
2.打开储液箱，倒掉废液，并在废液桶中加入400ml漂门水原液。
打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满(一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFIow),合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
3.将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY,预热5- 10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4.如果需要打印，打开打印机电源。
5.打开电脑，等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6.执行仪器PRIME功能一次，以排除Flow cell中的气泡。
7.分析样品时，先用FACAFIow或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
o做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个50ml离心管，不接通浓缩系统，扌恩下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。
预设获取模式文件(Acquisition Template Files)从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个1.获取模式文件。
2.选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot,绘出一个或多个Dot Plots （点图）。
从DotPlot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y 轴参数。
3.选取屏幕左列绘图工具中的Histogram，同上法可绘出Histogram （直方图）。
4.将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuestFolder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。
. 本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP,储存于FACStationG3\BD Applications \CELLQuest \EXP 文件夹中，ACQ 用于细胞DNA 检测，EXP 用于细胞表面标志分析。
小鼠脾脏t细胞流式分选实验步骤
实验目的：通过流式细胞仪对小鼠脾脏T细胞进行分选，以探究T细胞在免疫应答中的作用及机制。
一、实验前准备1.1 实验材料准备1.1.1 小鼠脾脏组织1.1.2 10mL注射用生理盐水1.1.3 0.25胰酶液1.1.4 洗涤缓冲液（PBS）1.1.5 红细胞裂解液1.1.6 表面标记抗体：CD3-FITC、CD4-PE、CD8-APC1.1.7 流式细胞仪1.1.8 离心管、移液枪、吸头、培养皿等实验器材1.2 实验环境准备1.2.1 无菌操作台1.2.2 常温恒温器1.2.3 培养箱1.2.4 流式细胞仪操作间二、实验步骤2.1 小鼠脾脏细胞分离2.1.1 将小鼠处死并取出脾脏组织，放入含有10mL生理盐水的培养皿中，剪碎均匀。
2.1.2 加入0.25胰酶液，放入37摄氏度恒温器中消化30分钟。
2.1.3 将组织碎片过滤，用PBS洗涤，避免红细胞污染。
2.1.4 使用红细胞裂解液裂解红细胞，离心沉淀，得到细胞悬液。
2.2 细胞表面标记2.2.1 取得细胞悬液，计数并调整浓度至合适水平。
2.2.2 分别加入CD3-FITC、CD4-PE、CD8-APC表面标记抗体，进行表面标记反应，避免光照。
2.2.3 进行表面标记抗体的洗涤和离心，得到标记的细胞悬液。
2.3 流式细胞仪分选2.3.1 将标记的细胞悬液输入流式细胞仪，设置合适的参数。
2.3.2 进行T细胞的流式细胞仪分选，并收集目标T细胞子集。
2.3.3 对收集的目标T细胞子集进行进一步的分析或培养。
三、实验注意事项3.1 实验过程中要保持无菌操作，避免细胞污染。
3.2 实验中避免表面标记抗体受光照。
3.3 实验材料和仪器的准备和操作要符合实验要求，确保实验结果的准确性和可靠性。
通过上述步骤，可以对小鼠脾脏T细胞进行流式分选实验，进一步探究T细胞在免疫调节中的作用及机制，为相关研究提供重要的实验数据支持。
在实验过程中，对于小鼠脾脏T细胞的流式分选需要严格控制各个步骤，确保实验结果的可靠性和准确性。
流式细胞仪细胞分选的操作步骤
细胞分选的简要操作步骤一、上样前的准备FACSCalibur可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。
1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。
●3L 70% 乙醇（用无菌蒸馏水配制）●5L 无菌蒸馏水●5L 无菌PBS2、在干净的鞘液筒中加入3L 70% 乙醇。
盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗涤。
安好鞘液筒。
3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。
4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。
5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。
6、放上一支装有70 % 乙醇的进样管。
7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。
9、从Acquire menu选择SortSetup 。
在Sort Gate菜单中选择步骤７设定的分选门。
按液流控制键RUN。
10、在Setup方框中打叉，点击Acquisition Control菜单中Acquire。
11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
12、再重复上述步骤2次，共需要1h。
13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL 无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直至洗净桶内壁残余乙醇。
14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
15、在收集管接口处安装2支新的收集管。
16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。
17、点击Acquisition Control菜单中Acquire。
18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
19、再重复上述步骤2次，共需要1h。
20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L 无菌PBS，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
21、在收集管接口处安装2支新的收集管。
22、放上一支装有无菌PBS的进样管。
23、点击Acquisition Control菜单中Acquire。
流式细胞术标准操作规程,1200字
流式细胞术标准操作规程流式细胞术（Flow Cytometry）是一种常用的细胞学研究技术，广泛应用于细胞表型分析、细胞分选、免疫学研究等领域。
为了确保流式细胞术的准确性和可靠性，需要遵循一系列的标准操作规程。
1. 实验前准备- 确保流式细胞仪、计算机和相关设备正常工作，包括保证激光器、光学系统等的正常运行。
- 确保光谱校准及标定的准确性，包括日常监测仪器的性能、定期校准补偿参数等。
- 准备所需试剂和标记抗体，确保其质量良好并符合实验要求。
2. 样本处理- 根据实验目的选择合适的细胞来源和取样方式，并保持细胞的完整性及活性。
- 根据细胞类型和实验需要选择适当的预处理方法，如细胞固定、细胞膜穿透等。
- 对于固定样本，要避免过度固定和过度穿透，以免影响细胞染色和光学性能。
3. 样品标记- 预先优化标记抗体的浓度和反应时间，确保准确的抗原检测和最大的靶向效率。
- 避免标记抗体和细胞表面抗原的非特异性结合，应加入相应的负对照组和等位控制。
- 合理选择荧光染料和标记方法，避免光谱重叠和串扰，以确保标记物的准确检测。
4. 流式细胞仪调试及仪器设置- 根据样本类型和实验需求，选择适当的仪器设置，包括选择合适的激光器、滤光片和检测参数等。
- 对于多色染色，进行补偿设置以消除光谱重叠和仪器漂移带来的影响。
- 定期校准和检验仪器的参数，确保仪器性能和数据稳定性。
5. 流式细胞术操作- 严格控制实验要求的温度、湿度和光照等环境条件，避免对细胞和染料的影响。
- 合理设置流速和事件采集数目，以确保准确且充分的样本分析。
- 避免空管事件和双重事件的发生，及时清理堵塞和冲洗流式细胞仪采集管路。
- 对于稀有事件和低频事件，需要增加采集数目和合理的补偿设置，以提高检测敏感性。
- 及时保存数据和相应的控制实验数据，以备后续数据分析和结果验证。
6. 数据分析和结果解释- 使用专业的流式细胞术分析软件进行数据处理和结果分析。
- 对于多色染色，应进行合理的补偿和背景校正，确保数据的准确性和可靠性。
流式细胞分选操作流程
流式细胞分选操作流程流式细胞分选是个超有趣又很实用的技术呢。
一、样本准备。
咱们得先搞定样本呀。
这样本的质量可太重要啦。
如果是细胞样本的话，要保证细胞的活性。
要是细胞都半死不活的，那后面的分选可就麻烦咯。
一般要把细胞从培养瓶或者培养皿里轻柔地吹打下来，就像轻轻叫醒一个小宝贝一样。
然后把细胞收集到离心管里，给它来个离心，转速可不能太猛哦，不然细胞会被转晕的，大概1000 - 1500转每分钟就行啦。
离心完之后呢，倒掉上清液，再用合适的缓冲液把细胞重悬起来，让细胞舒舒服服地待在里面。
二、仪器准备。
接着就是我们的主角——流式细胞仪啦。
这仪器就像一个超级精密的大玩具一样。
在使用之前，得先开机预热一下，就像运动员上场前要热身似的。
然后检查一下各种管路有没有接好，有没有漏液的情况。
那些各种参数设置的地方，也要检查检查，确保都在初始状态呢。
还要校准仪器哦，这就像是给仪器定个标准，让它知道怎么准确地识别和分选细胞。
校准液就像是给仪器的小测试，看看它是不是能准确地把不同的“小颗粒”区分开。
三、设置分选参数。
现在要根据咱们想要分选的细胞特征来设置参数啦。
比如说，如果我们想分选表达某种特定蛋白的细胞，那就要把这个蛋白对应的荧光标记的检测参数设置好。
这就像是告诉仪器，你要找的是穿了某种特殊颜色衣服的小细胞哦。
要调整好不同荧光通道的电压呀，补偿呀这些参数。
这就有点像调收音机的频道一样，要调到最清晰的那个状态，这样才能准确地把目标细胞找出来。
如果参数设置得不好，可能就会把一些不是我们想要的细胞也选进来，或者把我们想要的细胞给漏掉了，那可就不好玩啦。
四、上样和分选。
一切准备就绪，就可以把我们的样本上样到流式细胞仪里啦。
看着细胞一点点被吸进去，感觉就像送小士兵去接受检阅一样。
在分选的过程中，仪器会根据我们设置的参数，把不同的细胞分到不同的收集管里。
这时候我们要时刻盯着仪器的显示屏，看看分选的情况是不是正常。
如果发现有什么不对劲的地方，就像发现小士兵走错路了一样，要赶紧调整参数或者检查一下样本或者仪器是不是出问题了。
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细胞分选的简要操作步骤
一、上样前的准备
FACSCalibur可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。
1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。
●3L 70% 乙醇（用无菌蒸馏水配制）
●5L 无菌蒸馏水
●5L 无菌PBS
2、在干净的鞘液筒中加入3L 70% 乙醇。
盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充
分洗涤。
安好鞘液筒。
3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。
4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。
5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。
6、放上一支装有70 % 乙醇的进样管。
7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。
9、从Acquire menu选择SortSetup 。
在Sort Gate菜单中选择步骤７设定的分选门。
按液流控制键RUN。
10、在Setup方框中打叉，点击Acquisition Control菜单中Acquire。
11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
12、再重复上述步骤2次，共需要1h。
13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL 无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复
操作直至洗净桶内壁残余乙醇。
14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
15、在收集管接口处安装2支新的收集管。
16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。
17、点击Acquisition Control菜单中Acquire。
18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
19、再重复上述步骤2次，共需要1h。
20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L 无菌PBS，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
21、在收集管接口处安装2支新的收集管。
22、放上一支装有无菌PBS的进样管。
23、点击Acquisition Control菜单中Acquire。
24、第一支收集管（最左）中收集15 mL PBS后取下，使PBS由左至右流入下一收集管。
重复操作至2个管都收集了15 mL PBS为止。
点击Pause，Abort。
25、在收集管接口处安装2支新的收集管。
若要分选动物细胞，则应用无菌技术，用无
菌PBS/4 % BSA缓冲液过夜包被50mL锥型管，将包被好的锥型管安置于收集接口。
26、按下述分选步骤分选样本。
二、分选细胞
1、分选前应先做预实验，优化流式细胞仪的测定条件，建立分选门，具体操作步骤见
Cellquest操作步骤说明。
根据目标细胞的含量，调整流速和样品浓度，使目标细胞通过样品室的浓度为100-300个/秒，最好在200左右。
2、进入CellQuest，从Aquire菜单连机。
3、打开CellQuest中存储的获取窗口，打开优化后存储的仪器设置条件。
4、进样针处放上样本管。
5、可以先收集一个数据资料，将此数据与用分选后的样本收集的数据比较，以确定分
选样本的纯度。
6、从Acquire menu选择Sort Setup。
7、依据样本中目的细胞的百分比及实验目的决定分选模式：在Sort Gate中选择分选用
的门，如选择No Gate（所有细胞）将只进行获取不分选；在Sort Count-中选择0进行连续分选；在Sort Mode中选择Single Cell、Recovery、Exclusion的某种模式；
在Aborted Cell中选择不显示排除细胞数。
点ＯＫ。
8、点击液流控制键RUN。
9、点击获取控制窗口Aquire。
分选结束时点击Pause，Abort。
10、取下样本管，换上1mL蒸馏水。
点击获取控制窗口Standby。
11、取下收集锥型管。
离心浓缩（300g 5min），用培养液重悬，按实验所需条件
进行培养。
三、上样后的清洗
分选结束后，为保证分选系统管路无腐蚀、无结晶、不堵塞、不染菌，必须进行管路的消毒与清洁，方法如下。
且一旦开始进行分选实验后，每周必须开机对分选管路用无菌蒸馏水按照第一部分介绍的方法进行一次充分的冲洗。
1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。
●3L 70% 乙醇（用无菌蒸馏水配制）
●5L 无菌蒸馏水
2、在干净的鞘液筒中加入3L 70% 乙醇。
盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充
分洗涤。
安好鞘液筒。
3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。
4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。
5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。
6、放上一支装有70 % 乙醇的进样管。
7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。
8、从Acquire menu选择SortSetup 。
在Sort Gate菜单中选择步骤７设定的分选门。
按液流控制键RUN。
9、在Setup方框中打叉，点击Acquisition Control菜单中Acquire。
10、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
11、再重复上述步骤2次，共需要1h。
12、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL 无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复
操作直至洗净桶内壁残余乙醇。
13、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
14、在收集管接口处安装2支新的收集管。
15、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。
16、点击Acquisition Control菜单中Acquire。
17、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
18、再重复上述步骤2次，共需要1h。
19、在鞘液筒中加入3L PBS（即鞘液），盖紧盖子。
安好鞘液筒。
20、放上一支装有PBS的进样管。
21、恢复过滤器的连接。
22、执行每日关机程序。