安捷伦高效液相色谱法
安捷伦1260高效液相色谱仪原理
安捷伦1260高效液相色谱仪原理安捷伦1260高效液相色谱仪（Agilent 1260 HPLC）是一种常见的分析仪器，广泛应用于化学、生物、制药等领域进行化合物分离、纯化和定量分析。
该仪器采用高效液相色谱技术，通过对样品中的化合物进行分离，实现对样品成分的定性和定量分析。
安捷伦1260高效液相色谱仪的原理是基于液相色谱技术。
液相色谱是一种基于溶液作流动相的色谱法。
液相色谱通过将待分析样品在固定相上的分离，使各组分在固定相上表现出不同的分离能力，从而实现对样品中化合物的分离和定量分析。
在安捷伦1260高效液相色谱仪中，溶液经过一系列操作后，首先进入进样器。
进样器能够控制样品的精确进样，并通过自动进样器或手动操作实现。
进样器通过调整进样方式和进样量，可以适应不同类型的样品。
样品通过进样器进入液相色谱柱。
液相色谱柱是用于样品分离的核心部件。
在液相色谱柱中，样品中的化合物根据它们与固定相相互作用的差异进行分离。
常用的液相色谱柱有反相柱、离子交换柱、尺寸排斥柱等。
选择合适的柱型对于获得准确、可靠的分离结果非常重要。
在安捷伦1260高效液相色谱仪中，色谱柱端部连接到一个梯度泵。
梯度泵可以提供稳定的流速，并控制溶剂流动速率，以实现不同的分离条件。
梯度泵可以通过调整流速和流速曲线，调整洗脱曲线的特性，以实现对样品的分离。
在柱后，固定相与待分离化合物的相互作用得到解除，化合物逐一从色谱柱洗脱出来。
洗脱出的化合物通过检测器进行检测。
常用的检测器有紫外检测器、荧光检测器、阳离子检测器等。
检测器根据样品属性的不同，通过检测样品的吸光度、荧光强度或离子浓度等信息来对待测样品进行定性和定量分析。
最后，检测器输出的信号通过数据系统进行收集、处理和分析。
安捷伦1260高效液相色谱仪配备了强大的数据系统，可以实现自动化控制和数据处理功能。
仪器操作者可以通过数据系统实现对仪器的远程监控和控制，以及对实验过程的数据采集和分析。
安捷伦1260高效液相色谱仪具有高精度、高灵敏度和高分辨率等特点。
安捷伦高效液相色谱操作程序(校正曲线制作和样品测定)
安捷伦高效液相色谱操作程序（校正曲线制作和样品测定）安捷伦高效液相色谱操作程序(校正曲线制作和样品测定) 1. 将手动进样阀放置至Load状态，微量注射器吸取所需量的溶液后插入手动进样阀的进样口。
2. 切换手动进样阀，由Load状态改变为Inject状态进样。
3. 当实时色谱图中的色谱峰完全出现后，点击RunControl，在下拉菜单中点击Stop Run/Inject/Sequence，结束一次进样的测定。
打印色谱图。
4. 按1~3的步骤，注射浓度不同的标准溶液获得相应的色谱图。
5. 点击View，下拉后点击Data Analysis。
6. 点击图标，将标准定量方法确定为外标法ESTD。
7. 点击欲进行校正曲线制作所需色谱图的第一张图号。
8. 点击Calibration，下拉后点击Add Peaks。
9. 在Default Amount框中输入相应的含量(浓度)后点击OK。
10. 将不准备定量的信号峰浓度均改为0。
11. 点击Calibration Table中的OK，从表格中删去这些峰信号。
返回CalibrationTable，进行待测峰确认。
12. 在Calibration Table框中的Compound下方输入化合物的英文名称，在RT下方根据色谱图中的保留时间数据输入相应的值。
13. 点击欲进行校正曲线制作所需色谱图的第二张图号。
14. 点击Calibration，下拉后点击Add Levels，在Default Amount框中输入相应的含量(浓度)后点击OK。
15. 重复8.和9.的步骤，直到输入完成所需制作校正曲线的相应色谱图数据，完成多点校正曲线的制作。
点击Calibration Table框中的OK，存储校正曲线数据。
16. 按1~3的步骤，注射样品溶液，获得的色谱图由校正曲线自动给出相应成分的含量。
打印色谱图。
安捷伦高效液相色谱仪操作流程及注意事项
安捷伦高效液相色谱仪操作流程及注意事项下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
安捷伦高效液相色谱仪（Agilent HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、生物、环境等领域。
其操作流程和注意事项如下：
操作流程：
1. 准备样品溶液：根据分析目的选择适当的溶剂，将样品溶解或稀释至所需浓度。
2. 准备色谱柱：根据分析需求选择合适的色谱柱，并按照柱床规定的要求进行预处理，如洗涤、调pH等。
3. 连接系统：将色谱柱安装在仪器上，连接好进样器、泵、检测器和废液收集器等组件，确保连接紧密无漏。
4. 设置方法参数：根据分析需求，设置泵的流速、进样器的进样量、检测器的波长和灵敏度等方法参数。
5. 系统平衡：启动泵和检测器，运行空白试验，确保色谱柱和系统内部达到平衡状态。
6. 样品进样：将样品进样器插入样品瓶中，抽取足够的样品并注入进样器，按下进样按钮进行进样。
7. 进行分离：启动泵，使流动相通过柱床，样品分离过程中不断采集检测器的信号。
8. 数据处理：分析和处理检测器输出的信号，得出对应的峰面积、峰高度等结果，进行数据分析和解释。
注意事项：
- 严格按照使用手册和方法要求操作仪器，遵循操作规程，避免误操作和事故发生。
- 确保色谱柱、进样器及连接部分的密封性良好，防止泄漏和污染。
- 选择适当的溶剂和流动相，避免与柱材和样品相互作用，影响分析结果。
- 定期检查和维护仪器，如泵的排气、封头的更换、泄漏点的处理等，确保仪器正常运行。
- 样品处理过程中，注意避免光线、温度和湿度的影响，尽量保持稳定的分析环境。
- 使用仪器前，需提前熟悉相关方法和仪器操作，做好实验前的准备工作。
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程一、仪器介绍二、前期准备1.打开仪器电源，待仪器自检完成后，确保所有指示灯都亮起。
2.检查溶剂瓶的液位，确保足够的溶剂供给。
3.清洁好色谱柱并连接到系统中。
三、仪器启动1.打开色谱软件，选择相应的方法。
2.点击“系统”菜单，选择“启动系统”命令，系统开始进行初始化。
3.在系统初始化完成后，点击“准备”菜单，选择“准备系统”命令，系统开始进行一系列的自动化准备工作，比如冲洗和平衡柱子。
4.检查系统的压力和温度，确保在正常范围。
四、样品进样1.准备好待测样品和标准品。
2.将样品装入进样瓶中，注意不要超过瓶口。
3.将进样瓶插入样品进样系统中，按照方法设置的条件进行进样。
4.点击软件界面上的“进样”按钮，开始进样。
五、色谱柱选择1.根据待测样品的性质和分离特点，选择合适的色谱柱。
2.将色谱柱连接到色谱仪系统中。
3.检查色谱柱的压力和温度，确保在正常范围。
六、色谱条件设置根据分析方法的要求，设置好色谱条件，包括流量、温度、柱温等参数。
七、检测器设置1.根据需要选择合适的检测器，比如紫外检测器、荧光检测器等。
2.设置检测器的工作参数，如波长、增益、基线噪声等。
八、开始分析1.在样品进样后，点击软件界面上的“开始”按钮，开始进行色谱分析。
2.监控检测器输出的信号，根据需要可以对信号进行放大或调整。
九、结果解析1.根据所用方法的要求，对分析结果进行解析。
2.可以通过软件导出结果并进行后续处理。
十、仪器关机1.关闭色谱仪软件。
2.关闭色谱柱进样系统。
3.关闭色谱仪电源。
此为安捷伦1260高效液相色谱仪的操作规程，希望能对使用者提供一定的参考和帮助。
在操作过程中，应严格按照安全操作规范进行，并及时进行维护和保养，以保证仪器的正常运行。
安捷伦高效液相色谱仪的规范操作
安捷伦高效液相色谱仪的规范操作安捷伦高效液相色谱仪 (Agilent High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC) 是一种常用的色谱分析仪器，广泛应用于化学、生物、药学等领域中的分析和研究工作。
为了确保正确、可靠地操作 HPLC 仪器，以下是一些规范操作的步骤和注意事项。
1.仪器准备-开启仪器电源，并等待仪器自检完成。
-检查仪器的梯度系统、进样系统、柱温控制系统、检测系统等是否正常。
-检查注射器、柱、检测器等是否清洁干净，并按需更换柱筒。
2.试剂准备-准备所需的溶剂、标准品和样品，并确保其纯度和浓度符合实验要求。
-制备规范的稀释液或内标溶液，以便进行质量控制和校准。
3.方法设置-设置流速、梯度、柱温、检测器波长等实验参数。
-设定样品进样量、进样方式和柱温控制方式。
-根据实验要求选择合适的检测器（如紫外检测器、荧光检测器等）。
4.柱的装置和平衡-根据实验需求选取合适的柱，并将柱安装在柱底座上。
-将导线连接到柱温控制系统，并设置柱温。
-选择适当的流动相溶剂，用它们预平衡柱，以确保柱达到稳定状态。
5.校正与质控-使用标准品进行系统灵敏度和线性范围的校正。
-定期进行质控分析，以检验仪器的准确性和精确性。
-根据需要，进行合适的质量控制和校正操作。
6.样品进样-根据实验要求选择合适的进样方式（如自动进样器、手动进样器等）。
-通过进样器吸取样品，并确保进样量准确无误。
-进行一定的进样准备，如过滤、稀释等。
7.开始分析-确保所有仪器参数正确设置，样品进样准备完毕，并进行柱的平衡。
-点击“开始”按钮，启动分析程序。
-监测分离曲线或结果，确保分析结果的准确性与可靠性。
8.数据分析与存储-持续监测和记录实时分析结果。
-对结果进行后处理和数据分析，如绘制色谱图、峰面积计算等。
-存储数据，以备后续分析和查阅。
9.仪器维护与清洁-使用完毕后，关闭仪器并断开电源。
-清洗注射器和柱等关键部位，以防止残留的样品引起交叉污染。
安捷伦高效液相操作方法
安捷伦高效液相操作方法
安捷伦高效液相操作方法（Agilent High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种用于分离、定量和分析化合物的常见技术。
下面是一般的HPLC操作方法：
1. 样品准备：将待测试的样品准备成溶液状。
可以用溶剂、酸或碱来溶解固体样品，并用适当的容器过滤以去除杂质。
2. 选择合适的柱：根据待测样品的性质和分离要求选择合适的色谱柱。
常见的柱包括反相柱、阳离子交换柱、阴离子交换柱等。
3. 设置流动相：准备好适合待测试样品的流动相。
流动相一般由溶剂和缓冲液组成，根据需要可以调整溶剂比例和缓冲液pH值。
4. 建立方法：设置进样样品量、流速、柱温等参数。
根据待测样品的特性，选择合适的检测波长进行检测。
5. 运行实验：将样品注入进样器，并设置流动相的流速。
开始运行实验，记录数据。
6. 数据分析：根据实验结果进行数据分析和解释。
可以通过峰高、峰面积、保留时间等指标对样品进行定量分析。
7. 清洗和维护：在实验结束后，定期清洗HPLC系统的各个部件，以保持仪器的良好运行状态。
可以用纯水、有机溶剂等进行清洗。
以上是一般的HPLC操作方法，具体的操作步骤和条件可能因不同的仪器和样品而有所不同。
在进行HPLC实验时，应根据实际情况进行调整和优化，确保准确的分离和分析结果。
安捷伦高效液相色谱仪的规范操作
安捷伦高效液相色谱仪的规范操作1. 目的：明确安捷伦高效液相色谱仪的规范操作，确保数据的准确性。
2. 范围：适用于安捷伦高效液相色谱仪。
3. 职责：检验人员对此负责。
4.操作规程：4.1 系统组成本系统由1个溶剂二元输送泵（分主/A泵和副/B泵）、手动进样阀、柱温箱、检测器、化学工作站和电脑等组成。
4.2 准备4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。
4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。
4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。
4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常4.1 将待测样品按要求前处理，准备HPLC 所需流动相，检查线路是否连接完好，废液瓶是否够用等。
4.3开机：4.3.1 打开计算机,进入中文Windows XP画面,并运行CAG Bootp Server程序。
4.3.2 打开1200 LC 各模块电源。
4.3.3 待各模块自检完成后，双击[Instrument 1 Online]图标，化学工作站自动与1200LC通讯，进入的工作站画面如下所示。
4.3.4 从[视图]菜单中选择[方法和运行控制]画面, 点击[视图]菜单中的[显示顶部工具栏]，[ 显示状态工具栏]，[系统视图],[样品视图]，使其命令前有[√]标志，来调用所需的界面。
4.3.5 把流动相放入溶剂瓶中。
4.3.6 打开冲洗阀。
4.3.7 点击[泵]图标，点击[设置泵…]选项，进入泵编辑画面。
4.3.8 设流速：5ml/min，点击[确定]。
4.3.9 点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[启动]，点击[确定] ，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。
4.3.10 点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[关闭]，点击[确定]关泵，关闭冲洗阀。
安捷伦1260操作规程
安捷伦1260操作规程安捷伦（Agilent）1260操作规程一、仪器概述安捷伦1260高效液相色谱仪是一种用于液相色谱分析的仪器，具有高灵敏度、高分辨率和高效率的特点。
该仪器由进样器、色谱柱、色谱泵、检测器等组成。
二、仪器准备1. 确保仪器的电源已连接并接通。
2. 检查进样器、色谱柱和检测器是否安装正确。
3. 检查液相色谱仪的液相系统是否已进行适当的液相填充，以及是否有足够的溶剂。
三、方法设置1. 打开色谱软件，并选择合适的方法模板。
2. 根据分析需求，在方法设置中输入样品信息、进样量、流速等参数。
3. 设置检测器的波长、增益和测量范围。
四、进样操作1. 打开进样器的盖子，将待测样品加入样品瓶中。
2. 点击软件中的进样按钮，设置样品名称和进样量。
3. 将样品瓶放入进样器，并关闭盖子。
4. 点击软件中的进样按钮，开始进样。
5. 进样完成后，从进样器中取出样品瓶，并将它放入垃圾桶中。
五、色谱柱操作1. 打开色谱柱的阀门，并将柱端与色谱柱连接。
2. 检查色谱柱是否没有泄漏，如果有泄漏，则需重新连接。
3. 检查色谱柱的温度，确保它处于合适的温度范围内。
六、液相泵操作1. 打开液相泵的电源，并连接到电脑上。
2. 设置合适的流速和梯度梯度。
3. 点击软件中的启动按钮，开始进行分析。
七、数据分析1. 使用色谱软件进行数据采集和分析。
2. 根据需要选择适当的数据处理方法，如峰面积计算、定量分析等。
3. 导出分析结果并保存。
八、仪器维护1. 分析结束后，关闭液相泵、进样器、色谱柱和检测器等设备的电源。
2. 清洗色谱柱和进样器，保持其清洁。
3. 定期检查仪器的连接线和电源线是否有松动或损坏。
九、安全操作1. 在操作仪器时，注意安全，避免接触到有害化学品。
2. 在操作过程中，严禁随意触摸仪器或移动连接线。
3. 在操作过程中，如遇到异常情况，请及时停止分析并向管理员报告。
通过以上操作规程，可以有效地使用安捷伦1260高效液相色谱仪进行样品分析。
安捷伦1260型HPLC使用操作
安捷伦1260型HPLC使用操作安捷伦1260型高效液相色谱仪（HPLC）是一种目前广泛应用于科研实验室和分析化验室的仪器，用于分离、鉴定和定量化学物质，尤其在药物研究、食品安全和环境监测等领域有着重要的应用价值。
下面将介绍如何使用安捷伦1260型HPLC进行操作。
1.准备工作-确保HPLC仪器和相关附件的电源已正常连接，并打开电源开关。
-检查溶剂瓶中的溶剂是否充足，并确保应用的溶剂完全溶解。
-测量并记录样品的重量或体积，并准备相应的样品溶液。
-在毛细管芯上安装合适的毛细管，确保毛细管没有损坏。
2.打开安捷伦1260型HPLC软件-打开计算机并登录HPLC软件。
-确保计算机与HPLC仪器连接正常，并与仪器建立通信。
-在软件界面上选择打开一个新的分析方法。
3.设置分析方法-在打开的分析方法中，设置适当的柱温、流速、柱压和波长等参数。
-根据样品的性质，选择合适的检测波长，以获得最佳的检测结果。
-设定进样器的进样体积和方法运行时间等参数，以获得期望的分析效果。
4.进样样品-使用自动进样器或手动进样器将待测样品进入HPLC系统中。
-设置进样器的洗涤方法，以确保不同样品的交叉污染风险降至最低。
-如果使用了自动进样器，将样品盘或样品架连接到进样器上，并设置自动进样的参数。
5.启动HPLC分析-在软件界面上，点击启动按钮，开始运行分析方法。
-监控仪器运行情况，确保流速、柱压等参数稳定在设定范围内。
-观察检测结果的峰形和峰高，并记录峰面积或峰高数据以便后续分析。
6.数据处理与结果分析-使用HPLC软件进行数据处理，可以进行峰识别、峰面积计算和浓度计算等操作。
-将结果数据导出并进行统计分析，如绘制色谱图、拟合曲线和计算浓度等。
-分析结果的可靠性和准确性需要通过质控样品或标准品进行验证。
7.仪器维护和清洁-定期对HPLC仪器进行维护，包括更换毛细管、清洗进样器和柱子，并检查其他配件的磨损情况。
-使用合适的溶剂进行清洗，以去除可能留在系统中的残留物。
安捷伦液相色谱上的化合物匹配结果
安捷伦液相色谱上的化合物匹配结果
安捷伦液相色谱系统通过高效液相色谱法（HPLC）对化合物进行分离和分析。
当化合物在液相色谱仪上运行时，它们会根据在固定相和流动相之间的分配系数差异进行分离。
分离后的化合物依次通过检测器，如紫外可见光检测器、荧光检测器或质谱检测器等，产生相应的信号。
为了确定这些信号所代表的化合物，通常需要进行化合物匹配。
化合物匹配是将检测到的信号与已知化合物的标准谱图或数据库中的谱图进行比较，以确定未知化合物的身份。
在安捷伦液相色谱系统中，化合物匹配可以通过使用安捷伦提供的软件工具来完成。
这些软件工具可以帮助用户将检测到的信号与标准谱图或数据库中的谱图进行比对，从而确定未知化合物的身份。
匹配结果通常以列表的形式呈现，包括化合物的名称、保留时间、峰面积等信息。
用户可以根据匹配结果对化合物进行定性和定量分析，了解样品中化合物的种类和浓度。
HPLC操作说明 简化版 安捷伦
高效液相色谱（HPLC）操作说明
总体原则：实验室6楼HPLC采用A泵用有机相、B泵为无机相，
最好不要再变动，多泵运用请结合文献。
1脱气
打开电脑→阀门左柠90°旋松→从上至下开四个开关→联机→启动→调动方法（方法）→关紫外灯（DAD）→ABCD四泵依次排气（调至100%）观察气泡→每瓶至少10min（流速从0.2mL/min→0.4 mL/min→0.6 mL/min→0.8 mL/min→1.0 mL/min→2 mL/min→4 mL/min逐步增加）流速稳定后，各泵的排气之间切换不用再调流速。
2连柱
流速降为1mL/min→开紫外灯→调90%甲醇+10%纯水→排气阀向右旋紧（压力110bar左右）→90%纯水+10%甲醇（压力60bar左右）→等基线平衡
3进样
纯甲醇洗进样针→按运行控制改样品信息→用样品清洗进样针→按平衡→等待就绪→插入进样针→迅速旋至load位置→迅速注射样品→迅速旋至inject位置→仪器运行→再用甲醇反复清洗进样针→单次样品运行结束后关闭报告生成表→若基线不平衡按平衡开始下次样品检测→改样品信息→进样前压力90bar左右→再次进样，依次类推
4洗柱
一般用5%甲醇洗45min左右，然后换成95%的甲醇洗30min。
如果用乙腈洗一般不要超过90%体积浓度。
流速逐渐降低，是否保存修改内容按“否”，关闭软件（右下角OFF）→从下至上关仪器开关即可→数据处理（采用脱机中操作）
注意：若调方法时不小心按了运行控制，则无法关闭。
解决方法：Ctrl+Alt+Delete任务管理处结束进程，重新启动程序。
安捷伦1260高效液相操作规程
安捷伦液相 1260 高效液相色谱操作规程1.前期工作查找资料（最好是外文文献）了解别人做该样品时常用的流动相和固定相。
如果还不清晰样品是什么物质，最起码也应该对其极性进行了解，为选择合适的流动相和固定相打好基础。
流动相选择注意事项：① 避免使用高粘度的溶剂作为流动相；② 所选用的流动相一定要与样品相溶；③ 各流动相之间可以很好的相溶；固定相选择注意事项：a. 正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或者其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对照固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
b. 反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。
反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
2.准备工作① 用于液相色谱分析的样品溶液使用前要经过0.15µm 过滤器过滤，必须达到均匀而无颗粒的状态；② 流动相一定要选用色谱级别的（最好是默克、飞世尔、时联等牌子的），并且在使用之前一定要使用0.4µm 过滤器过滤，再用超声波清洗仪脱气处理20-30min；③ 在连接柱子和色谱仪之前，阀件或者管路一定要清洗干净，（一般用异丙醇将管路清洗）3.仪器操作（一）将所选择的流动相加入相应的试剂瓶中：棕色瓶对应A 泵，该瓶中只能加双蒸水或者娃哈哈纯净水；B、C、D 泵根据需要添加。
安捷伦1290超高效液相色谱仪操作规程
安捷伦1290超高效液相色谱仪操作规程一．开机1)打开计算机，进入Windows 7 画面。
2)打开Agilent 1290 Infinity HPLC 各模块电源。
3)待各模块自检完成后，双击“LC1290(联机)”图标，化学工作站自动与Agilent 1290 Infinity HPLC 通讯。
4)从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”、“系统视图”，使其命令前有“√”标志来调用所需的界面。
5)右键点击泵下面的瓶图标，选择“瓶填充”，输入溶剂的实际体积和瓶体积。
也可输入停泵的体积。
点击“确定”。
6)从菜单“视图”中，选中“在线信号”，选中“信号窗口1”二．排气1)首先在泵模块单击右键，在方法编辑中，泵的参数设置部分，选好需要排空的通道（保证是开的）。
2)右键点击仪器状态视图中泵的图标，选择控制。
3)勾上清洗，并且输入流量、时间、比例，开启“泵”、“清洗”功能，点击“确定”，就可以排空管道。
排空的时候阀会自动切换，无需人为介入。
4)当我们发现泵头里面有气泡出不来的时候，选择开启“注入”，然后点击确定。
此时泵会用很强烈的方式朝外泵液体，并持续20 次自动停止。
三、编辑数据采集方法1)从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”，在方法编辑选项仅选择“仪器/采集”，点击“确定”，进图下一画面。
2)在“方法注释”中加入方法的信息，点击“确定”，进入下一画面。
3)选择进样方式，默认为“HipAls”。
4)设定泵参数：在“流量”处输入流量，输入溶剂比例，也可“添加”一行“时间表”，编辑梯度。
5)设定自动进样器参数、柱温箱参数、DAD检测器参数（可以开启光学单元温度控制、可以设定8通道信号等）。
6)保存方法四、样品测定1)从“运行控制”菜单中，选择“样品信息”选项，输入操作者名称、在“数据文件”中选择“手动”或“前缀/计数器”、在“样品参数”中填入“样品位置”、“样品名称”。
2)点击“确定”，在“仪器”菜单选择“系统开启”。
安捷伦LC1260液相色谱操作规程及使用注意事项
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项一、操作规程㈠开机1．把经过滤、脱气的各流动相装入贮液瓶中。
2．打开计算机，打开主机各模块电源（从上至下），再双击桌面“LC1260(联机)”图标，进入化学工作站。
3．旋开排气阀（逆时针），右键单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流量设为“5mL/min”，溶剂A设为“100%”，打开泵，排出管路中的气体，直到由贮液瓶到泵入口整个管路中无气泡为止，此过程约需要5min。
4．依次切换到溶剂B、C、D，分别排气。
㈡数据采集1. 编辑样品信息：由“运行控制”进入“样品信息”，设定操作者姓名，样品数据，文件名等。
2. 编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，单击“确定”进入“方法注释”，编辑好单击“确定”。
在“选择进样源”中选择“手动进样”单击“确定”，在“设置方法”中进行参数设定。
3. 四元泵参数设定：在“流速”处输入流量，如1mL/min，在“溶剂”处依据需要选中B、C、D并输入相应的百分数，在右侧注释栏中标明各溶剂的名称；设置“停止时间”和“后运行时间”,在“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子，在“时间表”添加编辑梯度。
4. TCC（柱箱）参数设定：在“温度”左侧下面的方框内输入所需温度,并选中它,右侧选中“与左侧相同”，使柱箱的温度左右一致。
5. VWD检测器参数设定：在“波长”右侧的空白处输入所需的检测波长，在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，再设置“停止时间”和“后运行时间”。
6. 仪器曲线设置：默认即可。
7. 关闭排气阀（顺时针），冲洗色谱柱20~30min，待柱前压力基本稳定后，打开检测器灯，观察基线情况。
8. 将进样器转动手柄逆时针转到LOAD位置，在环路全量进样时（定量环体积为20uL），用50~100 uL的液相进样针将2~5倍定量环体积的样品缓慢注入进样器中，再将进样器转动手柄顺时针方向迅速转到INJECT位置，将定量环中样品引入系统中。
安捷伦液相色谱Agilent-HPLC操作规程
型号：Agilent 1200 使用日期：产地：美国责任人：Agilent 1200 高效液相色谱仪操作步骤：1.开机开机前需更换已过膜并超声脱气好的流动相，依次打开电脑及高效液相色谱仪各电源开关（从上往下），待仪器自检完毕后，打开purge阀，开泵，排空管路气泡，关闭purge阀，双击online图标，进入色谱工作站。
2.方法编辑从命令栏“Method”菜单中选择“New method”，出现DEF-LC.M，或者从“Method”菜单中选择“Edit entire method”，设置方法信息、仪器参数（包括泵、检测器）、数据采集参数等（详见《高效液相色谱仪（Agile 1200型）操作规程》），保存方法。
3.样品运行调用已编辑好的方法，等待仪器稳定。
选择样品运行模式“single”或“sequence”，编辑样品信息，如：存贮路径（path-Subdirectory）、样品名（Sample Name）、进样瓶号（Vial）、进样体积等，待online界面左上角红色的“not ready”变为绿色“ready”，且压力平稳后，即可进行样品分析。
单击START按钮，运行样品。
进样结束后，关闭检测器并按要求冲洗色谱柱。
4.数据分析数据分析在offline工作站中进行（详见《高效液相色谱仪（Agile 1200型）操作规程》）。
5.关机色谱柱冲洗结束后，在online界面关闭泵及柱温箱。
退出化学工作站及其它窗口，关闭计算机，关闭HPLC系统各电源开关（从下往上）。
按有关规定填写仪器使用记录。
注意事项：1.流动相使用前必须过滤膜，有机相必须为色谱纯，过0.45微米的有机滤膜；水相必须用Milli-Q水，过0.22微米的水相滤膜，且不能使用超过2天，以防止长菌或者藻类。
2.更换流动相时，若发现管路中有气泡，应彻底排除气泡。
3.在使用过程中，经常记录压力情况，若发现压力异常，应及时排查问题所在。
4.检测完毕后，要及时关闭DAD的灯，以保持灯的寿命。
安捷伦高效液相色谱仪操作说明
远兴生物能源有限公司安捷伦高效液相色谱仪操作说明一、校枪及样品处理1. 校枪仪器:两个小烧杯、分析天平、移液枪1000μL、100μL步骤:打开分析天平预热,一只烧杯放到称量盘上调零,一只装入纯水。
将移液枪1000μL、100μL调至950μL、50μL,分别吸取纯水称质量,如偏大或偏小,调节移液枪直至准确到0.001g。
(如枪使用过久或气密性不好,可以准备一个小烧杯装入纯水,每次先轻轻沾湿枪口,甩掉水或在用卫生纸吸取口上的水,再插上枪头使用。
)注意慢吸慢放,不要挂珠。
2. 样品处理:用1.5mL离心管取0.5mL发酵液,取出样品后,首现在离心机上离心(13000rap/min 3min)。
然后将样品稀释20倍,取950μL纯水、50μL发酵液于离心管中。
混匀后在离心机上离心(13000rap/min 3min)。
准备自动进样瓶(瓶中放上内衬管),取200μL待测液盖紧盖子。
按顺序放到自动进样盘中。
二、开机1、仪器各组件将在线脱气器、泵:四元、进样器:自动进样器(六通阀)、柱温箱、检测器:示差折光检测器开关打开。
打开计算机,进入Windows XP 画面,并运行CAC Server程序,打开色谱仪各组件电源,待显示已联上各组件的信息及各模块自检完成后,双击Instrument 1 Online ,图标打开工作站。
化学工作站自动与1200LC通讯。
流动相:将流动相(一般不主张使用偏酸、偏碱的流动相)放入溶剂瓶中,打开冲洗阀,设流速为2ml/min,单击确定,再依次单击泵→控制,选中启动,单击确定,则系统开始冲洗,至管路无气泡为止,切换管路反复操作至所需管路均无气泡。
在“控制”选项中选“关闭”,关闭泵,关闭冲洗阀。
单击泵下面瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积。
每次四元泵开始前,要打开冲洗阀阀门以5ml/min的流速冲洗10分钟,使脱气机与泵之间的流动相从冲洗阀流出,以免隔夜的流动相损伤色谱柱。
每次进样检测前,要用流动相冲洗色谱柱30分钟,达到柱温前20min流速设为0.2ml/min,达柱温后再改为0.6ml/min。
安捷伦1220高效液相色谱仪操作规程
安捷伦1220高效液相色谱仪操作规程1.目的：确保安捷伦1220高效液相色谱仪的正确使用和维护。
2.适用范围：安捷伦1220高效液相色谱仪在使用中的操作。
3.职责：化验员负责实施，品控部经理负责监督。
4.操作规程4.1工作原理HPLC由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几个部分组成，工作时储备器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经样品进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附－－解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
4.2操作步骤4.2.1开机先打开仪器电源，打开电脑桌面上的【1220联机】图标，进入软件视图介面，双击【控制】图标下的【仪器状态】图标，点视图介面上的【开启】图标，待视图介面各状态都变成绿色后，先打开【冲洗阀】排除系统中的气泡，光标移到视图菜单【梯度泵】，右键点击【方法】将【流量】改成3mL/min,溶剂A （100%）、B（100%）各放空冲洗3－5分钟后（无气泡），关闭【冲洗阀】。
将【流量】设为所需流速，用纯有机相冲洗系统30分钟，（如果使用缓冲溶液与盐做流动相需用10%的有机相+水冲冼系统30分钟后更换流动相）换上所需流动相（排气泡）平衡仪器稳定。
4.2.2方法的建立点击视图菜单中的【仪器向导】双击视图菜单中的【创建新方法】，将方法改好后，点【文件】另存为【方法】命名，点【控制】【下载方法】点查看【在线信号】看基线是否平稳。
4.2.3 序列的建立在视图菜单中点【序列】中的【编辑】，将序列中的【重复次】【样品瓶】【体积】【样品ID 】【方法】【文件名】【样品制备】（样品制备视情况设定）编好后点【文件】另存为【序列】设好文件名，保存。
4.2.4 分析样品待仪器基线平稳后，查看软件上方的方法与序列是否是你所需要运行的序列，并检查好样品瓶与洗针瓶（需要才放，视方法而定）的位置与序列中设置的是否能对号入座，如果是的话就可以点【控制】下的【序列运行】4.2.5数据分析打开电脑桌面上的【1220脱机】，点视图上的【文件】打开一个【结果集】或【数据】选中所要处理的图谱，点视图上的【文件】打开【方法】，找到【积分事件】进行谱图优，将积分变化保存到方法，点视图【分析】（如外标法）等所需峰出来后，点视图上的【定义单峰】后，点【分析单一级别校正】后点【检查校正】就能得出曲线。
安捷伦高效液相色谱法
3 分离系统——色谱柱
色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包括柱管与 固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜 及内衬光滑的聚合材料的其他金属。玻璃管耐压有 限，故金属管用得较多。一般色谱柱长5～30cm， 内径为4～5mm，凝胶色谱柱内径3～12mm，制备往 内径较大，可达25mm 以上。一般在分离前备有一 个前置柱，前置柱内填充物和分离柱完全一样，这 样可使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的固定相饱 和，使它在流过分离柱时不再洗脱其中固定相，保 证分离技的性能不受影响。
20-3高效液相色谱的固定相和流动相
（－）固定相
高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类， 可分为刚性固体和硬胶两大类。刚性固体以二氧化 硅为基质，可承受7.O×108～1.O×109Pa的高压， 可制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒。如果在二 氧化硅表面键合各种官能团，就是键合固定相，可 扩大应用范围，它是目前最广泛使用的一种固定相。 硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚 苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为 3.5×108Pa。固定相按孔隙深度分类，可分为表面 多孔型和全多孔型固定相两类。
（3）高纯度。由于高效液相灵敏度高，对流动相 溶剂的纯度也要求高。不纯的溶剂会引起基线不稳， 或产生“伪峰”。痕量杂质的存在，将使截止波长 值增加50～IOOnm。
（4）化学稳定性好。不能选与样品发生反应或聚 合的溶剂。
(5)低粘度。若使用高粘度溶剂，势必增高压力， 不利于分离。常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙 晴等。但粘度过于低的溶剂也不宜采用，例戊烷、 乙醚等，它们易在色谱柱或检测器内形成气泡，影 响分离.
（二）化学键合相色谱法（CBPC）
采用化学键合相的液相色谱称为化学键合相色谱法， 简称键合相色谱。由于键合固定相非常稳定，在使用 中不易流失，适用于梯度淋洗，特别适用于分离容量 因子k值范围宽的样品。由于键合到载体表面的官能团 可以是各种极性的，因此它适用于种类繁多样品的分 离。
安捷伦(agilent1260)高效液相色谱仪操作规程
1.目的：规范Agilent 1260高效液相色谱仪维修、保养、校正操作。
2.适用范围：本公司化验室Agilent 1260高效液相色谱仪的维修、保养。
3.有关责任：化验室精密仪器室4.引用标准：仪器说明书及Agilent化学工作者现场操作培训教材5.规程内容：5.1开机前准备5.根据实验要求配制流动相，须μm滤膜过滤，之后再进行脱气处理，使用前必须用超声波振荡l0-15min，按无机相和有机相分开别装入溶剂瓶A（装有洗盐装置，最好固定盛放无机盐水相）μm滤膜过滤。
5.若流动相中含有缓冲盐,则必须以每分钟2～3滴的速度虹吸10%的异丙醇水冲洗seal-wash，以防有盐结晶在泵头产生而损坏泵头。
5.5.打开计算机,进入Windows 系统, 从上到下依次打开各模块电源。
5.待各模块自检完成后，双击桌面上的“仪器1联机”图标，将自动进入化学工作站画面。
5.从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,也可单击工作站画面左侧的“方法和运行控制”项，进入方法和运行控制窗口。
5.打开Purge阀（逆时针），右击“泵”图标出现参数设定菜单单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。
5.设“流量”逐步增大流速至5ml/min ，A通道设到100%，单击“确定”。
5.单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“泵控制“选项选中“开”单击“确定”则系统开始Purge，直到管路内由溶剂瓶A到泵入口无气泡为止；切换B通道(B通道设到100%)继续Purge直到所有通道管路内均无气泡为止。
(查看柱前压力，若大于10Bar，则应更换排气阀内滤芯/过滤白头。
)5.将泵的流量设到0.5ml/min，若使用双泵则应设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）；再将流量设到0.8ml/min，2分钟后设定至方法所需流速，冲洗色谱柱20-30min。
5.单击泵下面的瓶图标，输入溶剂瓶A、B内流动相的实际体积（为保护泵和色谱柱，请按实际体积输入）和停泵的体积单击“确定”，如果各溶剂瓶溶剂体积小于停泵体积，泵将自动停止。
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(3)气相色谱一般都在较高温度下进行的，而 高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。 总之，高效液相色谱法是吸取了气相色谱 与经典液相色谱优点，并用现代化手段加以改 进，因此得到迅猛的发展。目前高效液相色谱 法已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重 大意义的大分子物质，例如蛋白质、核酸、氨 基酸、多糖类、植物色素、高聚物、染料及药 物等物质的分离和分析。 高效液相色谱法的仪器设备费用昂贵，操作 严格，这是它的主要缺点。
3．流动相
在液液色谱中为了避免固定液的流失。对 流动相的一个基本要求是流动相尽可能不与固 定相互溶，而且流动相与固定相的极性差别越 显著越好。根据所使用的流动相和固定相的极 性程度，将其分为正相分配色谱和反相分配 色谱。如果采用流动相的极性小于固定相的极 性，称为正相分配色谱，它适用于极性化合物 的分离。其流出顺序是极性小的先流出，极性 大的后流出。如果采用流动相的极性大于固定 相的极性，称为反相分配色谱。它适用于非极 性化合物的分离，其流出顺序与正相色谱恰好 相反。
（l）紫外检测器 （2）荧光检测器 (3) 示差折光率检测器
几乎所有物质都有各自不同的折射率，因此差示折 光检测器是一种通用型检测器。灵敏度可达10-7g· -3。主 cm 要缺点是对温度变化敏感，并且不能用于梯度淋洗。
（4）电导检测器 (5) 附属系统
它包括脱气、梯度淋洗、恒温、自动进样、馏分收集 以及数据处理等装置。其中梯度淋洗装置是高压液相色谱 仪中尤为重要的附属装置 .
柱子装填得好坏对柱效影响很大。对于细粒度的填料 （＜20μm）一般采用匀浆填充法装柱，先将填料调成匀浆， 然后在高压泵作用下，快速将其压入装有洗脱液的色谱柱 内，经冲洗后，即可备用。
4．检测系统
在液相色谱中，有两种基本类型的检 测器。一类是溶质性检测器，它仅对被分 离组分的物理或化学特性有响应，属于这 类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器 等。另一类是总体检测器，它对试样和洗 脱液总的物理或化学性质有响应，属于这 类检测器的有示差折光，电导检测器等。 现将常用的检测器介绍如下:
1．高效液相色谱法与经典液相色谱法
高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点 在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。高速是指在 分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。由于经典色 谱是重力加料，流出速度极慢；而高效液相色谱配备 了高压输液设备，流速最高可达 103cm· -1.例如分 min 离苯的羟基化合物，7个组分只需1min就可完成。对氨 基酸分离，用经典色谱法，柱长约170cm，柱径0.9cm， 流动相速度为30cm3·-1，需用20多小时才能分离出20 h 种氨基酸；而用高效液相色谱法，只需lh之内即可完 成。又如用25cm×0.46cm的Lichrosorb－ODS(5μ )的 柱，采用梯度洗脱，可在不到0.5h内分离出尿中104个 组分.
20-4高效液相色谱法的主要类型及选择
（－）液一液分配色谱法（LLPC）
在液-液色谱中,流动相和固定相都是液体,它能 适用于各种样品类型的分离和分析，无论是极性的 和非极性的，水溶性和油溶性的，离子型的和非离 子型的化合物。 1．分离原理 液液分配色谱的分离原理基本与液液萃取相同，都 是根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同， 具有不同的分配系数。所不同的是液液色谱的分配 是在柱中进行的，使这种分配平衡可反复多次进行， 造成各组分的差速迁移，提高了分离效率，从而能 分离各种复杂组分。
高效液相色谱法
(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)
概述
高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年 代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技 术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极 为广泛的化学分离分析的重要手段。它是在经 典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论， 在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏 度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度 高、操作自动化的特点。为了更好地了解高效 液相色谱法优越性，现从两方面进行比较：
1．高压输液系统
由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相 阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。 它是高效液相色谱仪最重要的部件，一般由储液罐、高压输 液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成，其中高压输液泵是 核心部件。对于一个好的高压输液泵应符合密封性好，输出 流量恒定，压力平稳，可调范围宽，便于迅速更换溶剂及耐 腐蚀等要求。常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。恒流 泵特点是在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与色谱柱 引起阻力变化无关；恒压泵是指能保持输出压力恒定，但其 流量则随色谱系统阻力而变化，故保留时间的重视性差，它 们各有优缺点。目前恒流泵正逐渐取代恒压泵。恒流泵又称 机械泵，它又分机械注射泵和机械往复泵两种，应用最多的 是机械往复泵。
HgBr
Hale Waihona Puke SiSiOH
+ SOCl
2
Si
Cl
H
2N
CH
2C
H
2N
H
2
Si
NH
CH 2CHNH 2
共价键健合固定相不易水解，并且热 稳定较硅酸酯好。缺点是当使用水溶液时， 必须限制PH在4～8范围内.
2．键合固定相的制备
（l）硅酸酯（≡Si一OR）键合固定相,它是最 先用于液相色谱的健合固定相。用醇与硅醇 基发生酯化反应： ≡Si－0H＋ROH→≡Si－OR＋H20 由于这类键合固定相的有机表面是一些单体， 具有良好的传质特性,但这些酯化过的硅胶填 料易水解且受热不稳定，因此仅适用于不含 水或醇的流动相。 （2）≡Si－C或Si一N共价键合固定相 制备反应如下
2固定相
由于液液色谱中流动相参与选择竞争，因此， 对固定相选择较简单。只需使用几种极性不同的固 定液即可解决分离问题。例如，最常用的强极性固 定液β，β′一氧二丙睛，中等极性的聚乙二醇，非 极性的角鲨烷等。 为了更好解决固定液在载体上流失问题。产生 了化学键合固定相。它是将各种不同有机基团通过 化学反应键合到载体表面的一种方法。它代替了固 定液的机械涂渍，因此它的产生对液相色谱法迅速 发展起着重大作用，可以认为它的出现是液相色谱 法的一个重大突破。它是目前应用最广泛的一种固 定相。据统计，约有3/4以上的分离问题是在化学 键合固定相上进行的。详细介绍见后。
20-2 高效液相色谱仪
高效液相色谱仪的结构示意见图，一般 可分为4个主要部分：高压输液系统，进样系 统，分离系统和检测系统。此外还配有辅助 装置：如梯度淋洗，自动进样及数据处理等。 其工作过程如下：首先高压泵将贮液器中流 动相溶剂经过进样器送入色谱柱，然后从控 制器的出口流出。当注入欲分离的样品时， 流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入 色谱柱进行分离，然后依先后顺序进入检测 器，记录仪将检测器送出的信号记录下来， 由此得到液相色谱图。
（二）流动相
由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲和力， 并参与固定相对组分的竞争。因此，正确选择流动相直接 影响组分的分离度。对流动相溶剂的要求是： （1）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好 的选择性。 （2）溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器，应 注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长。所谓溶 剂的紫外截止波长指当小于截止波长的辐射通过溶剂时， 溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透 明的，它严重干扰组分的吸收测量。表20-2列出了一些常 用溶剂的紫外截止波长。 对于折光率检测器，要求选择与组分折光率有较大差别 的溶剂作流动相，以达最高灵敏度。
3 分离系统——色谱柱
色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包括柱管与 固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜 及内衬光滑的聚合材料的其他金属。玻璃管耐压有 限，故金属管用得较多。一般色谱柱长5～30cm， 内径为4～5mm，凝胶色谱柱内径3～12mm，制备往 内径较大，可达25mm 以上。一般在分离前备有一 个前置柱，前置柱内填充物和分离柱完全一样，这 样可使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的固定相饱 和，使它在流过分离柱时不再洗脱其中固定相，保 证分离技的性能不受影响。
2．全多孔型固定相
它由直径为10nm的硅胶微粒凝聚而成。 如国外的Porasil，Zobbex、Lichrosorb系列， 上海试剂一厂的堆积硅珠，青岛海洋化工厂 的YWG系列，天津试剂二厂的DG系列等。 也可由氧化铝微粒凝聚成全多孔型固定相， 如国外的Lichrosorb ALOXT。这类固定相由 于颗粒很细（5～10μm），孔仍然较浅，传 质速率快，易实现高效、高速。特别适合复 杂混合物分离及痕量分析.
20-3高效液相色谱的固定相和流动相
（－）固定相
高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类， 可分为刚性固体和硬胶两大类。刚性固体以二氧化 硅为基质，可承受7.O×108～1.O×109Pa的高压， 可制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒。如果在二 氧化硅表面键合各种官能团，就是键合固定相，可 扩大应用范围，它是目前最广泛使用的一种固定相。 硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚 苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为 3.5×108Pa。固定相按孔隙深度分类，可分为表面 多孔型和全多孔型固定相两类。
（3）高纯度。由于高效液相灵敏度高，对流动相 溶剂的纯度也要求高。不纯的溶剂会引起基线不稳， 或产生“伪峰”。痕量杂质的存在，将使截止波长 值增加50～IOOnm。
（4）化学稳定性好。不能选与样品发生反应或聚 合的溶剂。
(5)低粘度。若使用高粘度溶剂，势必增高压力， 不利于分离。常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙 晴等。但粘度过于低的溶剂也不宜采用，例戊烷、 乙醚等，它们易在色谱柱或检测器内形成气泡，影 响分离.
用来制备键合固定相的载体，几乎都用硅胶 。利用硅胶表面的硅醇基(Si 一OH)与有机分可成键,即可得到各种性能的固定相。一般可分三类
（1）疏水基团 如不同链长的烷烃（C8和C18。）和苯基等 （2）极性基团 如氨丙基，氰乙基、醚和醇等。 （3）离子交换基团 如作为阴离子交换基团的胺基，季镀盐； 作为阳离子交换 基团的磺酸等.