发酵操作流程

基因工程菌发酵操作流程

1.检查发酵车间是否达到发酵要求(所以设备处于待用状态)。

2.通知蒸汽车间按时送符合要求蒸汽。

3.种子罐基础培养基的领料及定容配制。

4.种子罐的PH、DO电极的校正安装和补料口堵头更换。

5.种子罐进料，调PH。

6.种子罐基础培养基在位灭菌，同时灭移种管道上段。

7.种子罐冷却后可连接酸、碱、消泡剂补料瓶。

8.种子罐培养基温度、PH(需进一步校准)、罐压、消泡达到发酵条

件。通知菌种室准备菌种转接。

9.无菌操作将种子罐所需MgSO4、Amp转入菌种转换罐。

10.种子罐扩增培养发酵阶段需平稳控制罐压、PH、DO、温度、消泡。

11.大罐基础培养基领料及配制。

12.大罐PH、DO电极校正安装及补料口堵头的更换。

13.大罐进料、定容、调PH；碱罐碱液的配制。

14.大罐基础培养基在位灭菌，同时对移种管道、进料管道、补料管

道、碱罐及碱管道上段的灭菌。

15.大罐基础培养基温度降至发酵温度后再次校准PH、DO。连接补

料瓶调节至发酵条件。

16.无菌操作将大罐所需MgSO4、Amp转入菌种转换罐并转入种子罐。

17.利用压力差将种子罐里的种子液移接到大罐。

18.补碱时，将管道上阀门打开。程序设为自动，控制流量。

19.补料罐补料培养基的领料定容配制。

20.补料罐补料培养基在位灭菌，同时对管道上段灭菌。

21.补料时，将管道上阀门打开。程序设为自动，设置流量。

22.诱导剂领料，在配料罐中加水配制定容。

23.将诱导剂打入种子罐，灭菌后保持罐压。

24.利用压力差将种子罐里的诱导剂移接到大罐。

25.一段时间后，大罐的PH、DO呈上升形态即为发酵结束，可放罐

离心。

芽孢杆菌发酵操作流程

1.检查发酵车间是否达到发酵要求(所以设备处于待用状态)。

2.通知蒸汽车间按时送符合要求蒸汽。

3.种子罐基础培养基的领料及定容配制。

4.种子罐的PH、DO电极的校正安装和补料口堵头更换。

5.种子罐进料，调PH。

6.种子罐基础培养基在位灭菌，同时灭移种管道上段。

7.种子罐冷却后可连接酸、碱、消泡剂补料瓶。

8.种子罐培养基温度、PH(需进一步校准)、罐压、消泡达到发酵条

件。通知菌种室准备菌种转接。

9.无菌操作将种子罐所需MgSO4、Amp转入菌种转换罐。

10.种子罐扩增培养发酵阶段需平稳控制罐压、PH、DO、温度、消

泡。

11.大罐基础培养基领料及配制。

12.大罐PH、DO电极校正安装及补料口堵头的更换。

13.大罐进料、定容、调PH；碱罐碱液的配制。

14.大罐基础培养基在位灭菌，同时对移种管道、进料管道、碱罐及

碱管道上段的灭菌。

15.大罐基础培养基温度降至发酵温度后再次校准PH、DO。连接酸、

消泡剂补料瓶调节至发酵条件。

16.无菌操作将大罐所需MgSO4、Amp转入菌种转换罐并转入种子

罐。

17.利用压力差将种子罐里的种子液移接到大罐。

18.补碱时，将管道上阀门打开。程序设为自动，控制流量。

19.发酵一定时间后，程序中PH设为手动，停止对PH、DO控制

20.一段时间后，大罐里孢子大量生长后即为发酵结束，可放罐离心。

设备操作规程

一.种子罐灭菌

1.首先排夹套水，关闭所有阀门。然后先后打开夹套排污阀、夹套进蒸汽

阀。夹套开始进蒸汽对罐体进行预热。

2.微开取样排蒸汽阀、取样进蒸汽阀，对取样管路进行灭菌。灭菌时间一

般10分钟。取样管路灭菌结束后，先后关闭排蒸汽阀、进蒸汽阀。

3.全开过滤器后端隔离阀，微开过滤器蒸汽排放阀、过滤器进蒸汽阀，对

过滤器及管路进行灭菌，每隔一段时间需打开过滤器下端排污阀排放过滤器壳内冷凝水，通过调节进出蒸汽流量的大小将过滤器壳内压力维持在0.11 MPa左右。灭菌时间一般10分钟。过滤器灭菌结束后，同时关闭过滤器后端隔离阀、过滤器进蒸汽阀，关闭阀门时过滤器壳内压力不允许跌到0，然后开启过滤器前端隔离阀通入空气，过滤器壳内压力在

0.10 MPa左右后，关闭过滤器前端隔离阀，将过滤器段保压。需注意，

因过滤器壳与管路降温时，内部压力也会损失，因此在压力损失后通入空气以便维持其保压压力。

4.在种子罐温度上升期间，要打开启尾气调节阀排放罐内冷空气然后关闭。

当罐内温度升到90℃时，打开取样进蒸汽阀和取样阀，使蒸汽从取样阀进入罐内，并打开进气路进蒸汽阀，先将进气路进蒸汽阀到过滤器蒸汽排放阀间那段管路灭透后，关闭过滤器蒸汽排放阀，打开进气隔膜阀，使蒸汽从空气管路进入罐内。

5.当温度达到设定灭菌温度121℃后，通过调节取样进蒸汽阀、进气路进蒸

汽阀、尾气调节阀的开度，使罐压保持在0.11 MPa及灭菌温度121℃。

夹套进蒸汽阀可以根据蒸汽情况微开或关闭，夹套排污阀一定要开着。

注意：尾气调节阀不能全部关闭，以保证蒸汽流通，达到有效灭菌。

6.当罐温达到121℃后，灭菌倒计时开始。此时可对种子罐接种管、移种补

料管（3000L罐）进行灭菌操作。对于种子罐接种管可全开罐体端隔离阀，微开排放阀对管路进行灭菌，灭菌时间30分钟。

7.当倒计时为0时，程序自动将灭菌开关关闭，灭菌结束。先关闭取样阀、

取样进蒸汽阀，再关闭进气路进蒸汽阀，全开过滤器前后端隔离阀，将空气通入罐内。（注意：此操作时需保持过滤器处压力高于罐体压力）调节尾气调节阀，使罐压始终高于大气压。检查所有进蒸汽阀是否关闭。