食品微生物检验技术W4305沙门氏菌检验-检验操作程序及要点-干制生化鉴定试剂盒-4-微教材
食品微生物检验技术W4305沙门氏菌检验-检验操作程序及要点-干制生化鉴定试剂盒-5-微测试
《农产品/食品质量安全检测技术》课程-微测试一、单选题1、在做沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒试验时，挑取新鲜培养的适量单菌落接至适量无菌水中，与试剂盒中的标准比浊管进行比对，制成浓度为（）菌悬液。
A、0.5麦氏B、0.6麦氏C、0.4麦氏D、0.8麦氏参考答案：A难度：低2、在做沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒试验时，最好从（）平板上挑取纯化的可疑菌落进行试验。
A．营养琼脂B．BSC．XLDD．HE参考答案：A难度：低3、沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒试验时,接种菌悬液分别至试剂盒的9个圆孔中，每孔接种量为（）；A、0.3mLB、0.2mLC、0.5mLD、0.8mL参考答案：B难度：中二、多选题1、沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒一般包括哪几项生化试验试剂？（）A、三糖铁B、靛基质C、尿素D、赖氨酸脱羧酶及其对照参考答案：ABCD难度：中三、判断题1、沙门氏菌赖氨酸脱羧酶对照管黄色，试验管紫色为阴性。
参考答案：F难度：中2、沙门氏菌甘露醇黄色为阳性；山梨醇黄色为阴性。
参考答案：F难度：低四、填空题1、沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒一般包括、、、、、、、和生化试验试剂。
参考答案：赖氨酸脱羧酶及其对照、氰化钾及其对照、靛基质、尿素、甘露醇、山梨醇、ONPG、三糖铁难度：高2、沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒检验时，在、、和实验孔中滴加2滴矿物油覆盖培养基表面，盖上盒盖；参考答案：氨基酸对照、赖氨酸脱羧酶、氰化钾对照、氰化钾难度：中五、问答题1、沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒的主要操作步骤有哪些？参考答案：接种：第一步：从铝箔袋中取出试剂盒，打开盒盖；第二步：用接种针从平板上挑取新鲜培养的适量单菌落接至适量无菌水中，与试剂盒中的标准比浊管进行比对，制成0.5麦氏菌悬液，注意菌悬液浓度不宜过大，否则可能产生假阳性结果；第三步：接种菌悬液分别至试剂盒的9个圆孔中，每孔接种量0.2mL；第四步：在氨基酸对照、赖氨酸脱羧酶、氰化钾对照、氰化钾实验孔中滴加2滴矿物油覆盖培养基表面，盖上盒盖；第五步：与三糖铁生化管一同置于36 ℃±1 ℃的恒温恒湿培养箱中培养24 h，其中ONPG 实验培养1～3h观察结果，如为阴性继续培养至24h观察结果；氰化钾实验若24h仍为阴性，可延长培养至48h观察结果；第六步：培养结束后，在靛基质实验孔中滴加2滴靛基质试剂，即刻观察结果。
沙门氏菌的检验流程及每一步检验过程的作用
沙门氏菌的检验流程及每一步检验过程的作用下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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食品沙门氏菌测试方法标准
食品沙门氏菌测试方法标准
食品沙门氏菌测试方法标准主要包括以下步骤：
1.样品采集：从待检测的食品中采集适量样品，确保样品的代表性。
2.样品处理：将采集的样品进行适当处理，如破碎、研磨等，以便后续的
检测操作。
3.增菌培养：将处理后的样品接种到选择性培养基中，进行增菌培养。
选
择性培养基可以抑制其他微生物的生长，促进沙门氏菌的增殖。
4.分离培养：将增菌培养后的样品划线接种到鉴别培养基上，进行分离培
养。
鉴别培养基可以进一步筛选出沙门氏菌，并对其进行鉴别。
5.生化鉴定：对分离培养得到的沙门氏菌进行生化鉴定，以确定其是否为
沙门氏菌。
常用的生化鉴定方法包括API 20E、三糖铁试验等。
6.血清学鉴定：对生化鉴定为沙门氏菌的菌株进行血清学鉴定，以确定其
具体血清型。
常用的血清学鉴定方法包括玻片凝集试验、试管凝集试验等。
7.药敏试验：对分离得到的沙门氏菌进行药敏试验，以确定其对不同药物
的敏感性，为临床治疗提供参考。
需要注意的是，食品沙门氏菌测试方法标准可能因不同国家和地区而有所差异。
因此，在实际操作中，应根据当地的标准和法规进行相应的调整和操作。
微生物检测系列之沙门氏菌检验技巧及详解
微生物检测系列之沙门氏菌检测过程详解及注意事项
严烨
沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一，其病原沙门氏菌属肠道细 菌科，包括那些引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。它们除可感染人外，还 可感染很多动物包括哺乳类、鸟、爬行类、鱼、两栖类及昆虫。人畜感染后可呈无症状带菌 状态，也可表现为有临床症状的致死疾，它可能加重病态或死亡率，或者降低动物的繁殖生 产力。
所以将沙门氏菌检验规定为食品致病性菌种检验中的重要项目，它的检测过程一般包括 样品前增菌、选择性增菌、选择性平板分离划线、初步生化鉴定（确定可疑菌）、生化鉴定、 血清学鉴定及血清学分型（选做）共计 7 个步骤。整个步骤完全完成至少需要 7 天时间。下 面以样品检测示例对整个检测过程进行分析梳理。
食品微生物检验技术W4306沙门氏菌检验-检验操作程序及要点-API20E-2-微课件
借助软件 进行判定
API20E生化鉴定试剂条-检验操作程序及要点
操作步骤及要点
2
系统生化鉴定试验——API20E鉴定试剂条试验操作演示
在为在每注T带3避意D个方下免菌A实孔框划悬在验中线小的液为+的管C浓一TA基度DT组D、A底不H，试V部宜、P每剂形过、L个，D成大GC阳即E气，、L性刻试泡否O实观验D，验察C、； 在将孔H分则2I中别试可NS和D.赋剂能菌孔U予条产液R中数轻生需E+试值微假充JA验1向阳满M,2孔前性底,E4中倾结S部，试加斜果和在剂入，；杯每，矿并部组即物将，中刻油阳观以 察 在吸其形性；V他成反头P管厌应紧孔仅氧以靠中充环相小+V满境应杯P管的；边1和部数缘V（值加P不相入2试是加菌剂杯，悬，部共液等）得待 1到07分位钟数观字察的结编果码；。
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微生物检验技术 课程教学团队
生化鉴定 试剂盒
沙门氏菌检验—操作程序及要点
全自动微 生物鉴定
系统
API20E生化鉴定试剂条-检验操作程序及要点
操作程序 操作步骤及要点
API20E生化鉴定试剂条-检验操作程序及要点
操作程序
1
系统生化鉴定试验——API20E鉴定试剂条试验操作程序
根据说明书，API20E的操作程序为：
从营养琼脂平板上 挑取单个可疑菌落
微生物检验技术
沙门氏菌检验——检验操作程序及要点3 ——API20E生化鉴定试剂条
主讲老师：王凤军
微生物检验技术
沙门氏菌检验——检验操作程序及要点3 ——API20E生化鉴定试剂条
主讲老师：王凤军
系统生化鉴定试验
可根据初步判断结果，从 营养琼脂平板上挑取可疑菌落，
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式沙门氏菌是一种常见的细菌引起的食源性疾病，可能会导致严重的胃肠道感染。
为了保障食品安全，确保公众的健康，我们需要进行沙门氏菌的国标检验。
下面是一份生动、全面且有指导意义的文章，详细介绍了沙门氏菌检验的国标检验步骤和接种方式。
第一步：样品准备在进行沙门氏菌检验之前，我们首先需要准备样品。
常见的样品包括食品、水、动物排泄物等，可能携带沙门氏菌。
样品应该收集自具有代表性的地点，并采取无菌采样容器进行收集。
收集样品时要注意避免污染，并确保样品的数量足够进行检验。
第二步：样品处理样品处理的目的是将潜在的沙门氏菌分离出来，并进行后续的检测。
可以采用不同的方法进行样品处理，常见的方法包括富集培养和选择性培养。
富集培养是将样品放入富集培养基中，利用培养基中的营养物质以及特定条件促使沙门氏菌生长。
选择性培养则是利用培养基中的特殊抑制剂抑制其他细菌的生长，从而使沙门氏菌生长出来。
第三步：菌落鉴定在样品处理后，我们需要对培养基上的菌落进行鉴定，确认是否为沙门氏菌。
常见的鉴定方法包括形态学鉴定、生理生化鉴定和分子生物学鉴定。
形态学鉴定主要通过观察菌落的形状、颜色和大小等特征来判断细菌的种类。
生理生化鉴定则是通过检测菌落对特定物质的代谢情况来确定细菌的种类。
分子生物学鉴定是利用特定的DNA序列来识别沙门氏菌的基因，通常使用PCR技术进行检测。
第四步：抗菌药敏试验沙门氏菌的抗菌药敏性检测是为了确定对何种抗生素具有敏感性。
通过抗菌药敏试验，我们可以选择合适的药物来治疗感染。
可以使用各种常见的抗生素盘进行试验，然后观察沙门氏菌对不同抗生素的反应。
根据抗生素的抑菌效果，可确定沙门氏菌的耐药性情况。
第五步：结果分析与报告最后一步是对检验结果进行分析，并撰写检验报告。
检验结果要结合国家标准进行评估，确定样品是否合格。
如果样品中检测到沙门氏菌，还需要评估其数量以及对公众健康可能造成的风险。
在撰写报告时，需要详细记录样品的来源、处理方法、检验步骤和结果，以及相应的建议和措施。
沙门氏菌检验程序
沙门氏菌检验程序沙门氏菌是一种常见的致病微生物，能引起人类和动物的感染疾病。
因此，在食品、水源、环境等方面对沙门氏菌的检测尤其重要。
下面我们将介绍一下沙门氏菌检验的步骤和方法。
1. 样品采集对于食品、水源等样品的采集需要遵守严格的规定。
例如，食品样品需要在加工、贮存和分配之前采集，以确保沙门氏菌检验的准确性。
样品应当在采集之后尽快送到实验室进行检测。
2. 样品处理根据不同的样品类型和特性，采用不同的处理方法。
例如，对于牛奶、鸡蛋等液态食品，需要进行破坏性处理，以确保沙门氏菌的释放。
对于土壤、粪便等样品，需要进行外层细菌的去除处理。
3. 培养培养基选择含有适当氧气和营养物质的培养基，如SS（Salmonella-Shigella）培养基、XLD（Xylose-Lysine-Desoxycholate）培养基等。
将样品分别接种到不同的培养基上。
4. 培养将分别接种的培养基放入恒温箱中进行培养。
将温度设定为37°C至42°C，进行18小时至24小时的培养。
在培养过程中观察样品的生长和变化。
5. 分离取出培养好的样品进行观察。
将预处理样品浸泡在缓冲液中，将溶液过滤。
过滤的溶液留下来，转移到盘子上。
用肉眼观察菌落的形态，观察不同菌落的特点。
根据菌落的特点进行分离。
6. 鉴定在鉴定步骤中，需要进行各种化学试剂处理，如氧化氢酶测试、葡萄糖测试等。
同时需要使用专业仪器，如API试剂盒、ELISA试剂盒等。
通过这些鉴定手段，确定检测出的菌落是否为沙门氏菌。
7. 结论最后，根据检测结果得出客观和准确的结论，以便针对食品、水源或环境污染等问题采取相应的措施。
总之，沙门氏菌的检验程序是一个非常复杂和严谨的过程，需要专业的实验室和技术人员进行操作。
我们应当高度重视沙门氏菌检验的重要性，以确保我们的食品质量和健康安全。
沙门氏菌的检验方法与注意事项
沙门氏菌的检验方法与注意事项在日常微生物检验中，沙门氏菌比较常见，是一种致病性细菌，国家规定在每25g的食品样本中不能检测出沙门氏菌，所以在检验沙门氏菌时，对试剂与培养基有很高的要求，下面本文针对沙门氏菌的检验方式和注意事项作出简单介绍！一、沙门氏菌检测的原因和意义根据相关统计显示，我们国家因细菌性食物中毒的人中，有70%-80%左右的人是通过沙门氏菌造成的。
人体倘若含有过多的大量沙门氏菌的动物性食物，就会造成细菌性感染，以此在毒素的影响下产生食物中毒，造成伤寒、胃肠炎及副伤寒。
而且沙门氏菌的传播途径较多，肉、蛋和其他食物，从加工至销售的整个过程当中都极易引发感染情况，所以准确、有效检验沙门氏菌有重大意义。
二、沙门氏菌的检验（一）前增菌(无选择性)BPW（缓冲蛋白胨水）属于一种比较常见的增菌培养基，不包括任何抑制物质，有助于修复受损的沙门氏菌。
促使受损的沙门氏菌细胞复苏至相对平稳的生理状态。
（二）选择性增菌TTB（四硫磺酸钠煌绿增菌液）内含有硫代硫酸钠，结合四硫磺酸钠，能够对肠道共生菌进行有效抑制，而包含四硫磺酸钠还原酶的细菌，可以在这一培养基当中生长繁殖；煌绿及胆盐能够控制大肠群菌、革兰氏阳性菌的繁殖，而伤寒沙门氏菌依旧可以生长。
SC（亚硒酸盐胱氨酸增菌液）能够对其他和伤寒沙门氏菌进行选择性增菌，其含有的亚硒酸结合蛋白胨内的含硫氨基酸，促使亚硒酸与硫的复合物生产，对细菌硫的代谢产生干扰，进而减少肠球菌、变形杆菌、大肠埃希氏菌的繁殖生长。
（三）分离培养基(选择性)①BS（亚硫酸铋琼脂）内含亚硫酸铋指示剂，可对大肠菌群、革兰氏阳性菌进行抑制，但不会对沙门氏菌的繁殖产生影响；其他沙门氏菌、伤寒杆菌可以借助葡萄糖，还原亚硫酸铋，使其形成硫酸铋，使黑色菌落附近有黑棕色的环，对光可看到金属光泽。
BS的压力和温度不可过高，避免选择性下降，需在使用前配制，放置阴暗处储存，48小时后丧失选择性，储存不合理会造成色浅，表示效果开始减弱，联合TTB、SC使用能够提高检出率。
食品微生物检验技术W4304沙门氏菌检验-检验操作程序及要点-传统鉴定-4-微教材
《农产品/食品微生物检验》课程-微教材知识讲解沙门氏菌操作程序及要点——传统鉴定沙门氏菌操作程序及要点分为检验程序和操作步骤一、检验程序根据国标，沙门氏菌的检验程序为: 检样经无菌处理后，称取25 g(mL)样品加入到225 mL BPW中36±1℃培养8~18h；取培养物1mL 接种到10mL的TTB中同时取1mL 接种到10mL 的SC中，分别于42±1℃和36±1℃培养18~24h；取培养后的增菌液分别划线接种于BS琼脂平板和XLD琼脂平板（或HE琼脂平板、显色培养基平板）中，于36±1℃培养18~24h，BS 需延长至40~48h；培养后挑取可疑菌落做生化试验。
挑取2 个以上典型或可疑菌落——接种三糖铁琼脂，赖氨酸脱羧酶试验管和对照管、供做靛基质试验的色氨酸肉汤、尿素（pH7.2)，KCN试验管和对照管，同时划线营养琼脂平板——如5项生化都符合——则直接判定为沙门氏菌——如五项中靛基质阳性——则补做甘露醇和山梨醇试验，如果两项均为阳性——为可疑沙门氏菌，但需结合血清学鉴定结果进行判定——如五项中H2S阴性——则需补做ONPG试验，ONPG阴性，同时赖氨酸脱羧酶阳性——为沙门氏菌——也可在三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验初步判断结果后，使用商品化的生化鉴定系统进行生化鉴定——判定是否为沙门氏菌——如果5项反应中有2项以上不符合——则沙门氏菌阴性——最后报告结果二、操作步骤主要分为：1、样品处理与前增菌；2、增菌；3、分离；4、传统生化鉴定试验；5、系统生化鉴定试验；6、血清学鉴定。
其中传统生化鉴定试验又分为三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验，靛基质、尿素和氰化钾试验、甘露醇、山梨醇以及ONPG试验三个部分。
本片以鸡肉为样品，演示沙门氏菌检验的样品处理和前增菌的操作过程。
1、前增菌：在无菌室内，以75%酒精擦拭样品外包装，尤其是包装的开口处，用无菌剪刀在样品封口处剪开包装袋，换用一个无菌剪刀将鸡肉样品剪碎至无菌罐内，用无菌镊子称取25 g样品至盛有225 mL BPW的样品瓶中，再转入注明样品信息、检测人员以及检测日期的均质袋中，密封，用拍击式均质器拍击2 min。
沙门氏菌检验步骤
沙门氏菌检验步骤引言：沙门氏菌是一种常见的致病菌，可以通过食物、饮水、接触传播等途径引起人类感染。
为了及时检测和预防沙门氏菌感染，科学家们开发了一系列的检验步骤。
本文将介绍沙门氏菌检验的详细步骤，以帮助读者更好地了解和应对这一疾病。
一、样本采集：沙门氏菌检验的第一步是采集样本。
常见的样本来源包括食物、粪便、尿液、血液等。
通过正确采集样本，可以保证后续检验的准确性。
二、样本处理：采集到的样本需要进行处理，以提取潜在的沙门氏菌。
处理的方法主要包括离心、过滤、稀释等。
这一步的目的是将样本中的沙门氏菌浓缩到一个较小的体积中，方便后续的培养和检测。
三、培养：处理后的样本需要进行培养，以使沙门氏菌得到生长。
常用的培养基包括MacConkey琼脂、XLD琼脂等。
将样本均匀涂布在琼脂培养基上，并在适宜的温度下孵育。
沙门氏菌通常在37摄氏度下生长，因此需要将培养基放置在恒温箱中。
四、形态鉴定：沙门氏菌在琼脂培养基上形成典型的菌落，通过观察菌落的形态特征可以初步判断是否为沙门氏菌。
沙门氏菌的菌落通常呈现灰白色、凹陷的特点。
此外，还可以通过显微镜观察菌体形态，沙门氏菌的形态为革兰氏阴性杆菌。
五、生化试验：形态鉴定只能初步判断是否为沙门氏菌，为了进一步确诊，需要进行生化试验。
常用的生化试验包括气体产物检测、酶反应检测等。
通过观察沙门氏菌在不同培养基中的反应情况，可以准确判断是否为沙门氏菌。
六、分子检测：生化试验可以初步确诊沙门氏菌感染，但为了提高检测的敏感性和准确性，科学家们还开发了分子检测方法。
这些方法主要包括PCR、实时荧光PCR等。
通过检测沙门氏菌特有的基因序列，可以快速准确地诊断沙门氏菌感染。
七、药敏试验：沙门氏菌感染对抗生素的敏感性存在一定的差异，因此药敏试验是非常重要的一步。
通过将沙门氏菌培养在含有不同抗生素的培养基中，观察菌落的生长情况，可以确定沙门氏菌对抗生素的敏感性，从而指导临床治疗。
结论：沙门氏菌感染是一种常见的疾病，及早检测可以帮助医生采取有效的治疗措施。
沙门氏菌的检验步骤
沙门氏菌的检验步骤沙门氏菌是一种常见的食物中毒细菌，它可以引起沙门氏菌属感染。
所谓的沙门氏菌属包括两个物种：Salmonella enterica和Salmonella bongori。
这两个物种又包含了超过2,500种不同的血清型。
为了检测食物或其他样本中是否存在沙门氏菌，通常需要进行以下步骤：1.样本收集：收集来自可疑食物或其他可能被污染的样品，如肉、蛋、奶制品、水果、蔬菜或动物粪便。
确保采集样品的方法是无菌的，以避免污染。
2.前处理：对样本进行适当的前处理，以提高沙门氏菌的检测效果。
这可能包括样品的预处理、样品的培养基中添加抑菌剂等。
3. 培养：将样品接种于适宜的培养基上，如XLD（Xylose Lysine Deo某ycholate Agar）或SS（Salmonella Shigella Agar）等。
这些培养基可以选择性地识别并培养Salmonella属的细菌。
4.孵育：将培养皿放入恒温培养箱，通常是在37℃左右，孵育时间一般为24至48小时。
5.形态特征观察：观察培养基上菌落的形态特征，如形状、颜色、大小等。
沙门氏菌通常形成呈灰白色、圆形、凹陷的菌落。
6.血清型鉴定：对沙门氏菌进行血清学鉴定以确定其血清型。
这通常涉及到使用抗体和相应的血清反应，以确定菌株的亚型。
7.生化测试：对阳性菌落进行生化测试，如甲烷糖发酵试验和硫化氢产生试验，以进一步确认其鉴定。
8.PCR检测：PCR是目前常用的沙门氏菌检测方法之一、它利用聚合酶链反应（PCR）技术，检测样品中的沙门氏菌DNA。
9.分子的子类型分析：通过分子生物学技术，如基因测序、脉冲场凝胶电泳（PFGE）或肽核酸类似程序分析（AFLP），确定沙门氏菌的亚型。
总之，沙门氏菌的检验步骤包括：样本收集、前处理、培养、孵育、形态特征观察、血清型鉴定、生化测试、PCR检测和分子的子类型分析。
这些步骤的目的是确认样品中是否存在沙门氏菌，并确定其类型和亚型，以便采取相应的预防和控制措施。
食品微生物检验技术W4304沙门氏菌检验-检验操作程序及要点-传统鉴定-5-微测试
《农产品/食品质量安全检测技术》课程-微测试一、单选题1、沙门氏菌检验时，取BPW培养物1mL 接种到10mL的TTB中于（）℃±1℃培养18~24h？A、36B、28C、41.5D、42参考答案：D难度：低2、沙门氏菌检验时需挑取（）个以上典型或可疑菌落接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基（）A．1B．2C．3D．4参考答案：B难度：低3、沙门氏菌检验时用到的色氨酸肉汤是来做哪个生化试验的？A、三糖铁B、赖氨酸脱羧酶C、氰化钾D、靛基质参考答案：D难度：中二、多选题1、沙门氏菌检验的5项生化试验包含以下哪几个？（）A、三糖铁B、靛基质C、尿素D、VP参考答案：ABC难度：中三、判断题1、沙门氏菌检验室将接种后的TTB增菌液和SC增菌液都置于36 ℃培养18 h～24 h。
参考答案：F难度：中2、沙门氏菌氰化钾试验时无需设置空白对照。
参考答案：F难度：低四、填空题1、沙门氏菌的分离鉴定要在里的内进行。
参考答案：BSL-2实验室，生物安全柜难度：中2、沙门氏菌检验时，反应序号A1后三项全符合，直接判定沙门氏菌阳性，后三项指的是、、。
参考答案：赖氨酸脱羧酶、氰化钾、尿素难度：中五、问答题1、沙门氏菌血清学鉴定的步骤有哪些？参考答案：（1）在玻片上划出两个区域，分别标记对照和O抗原，从营养琼脂上挑取 1 环待测菌，各放1/2 环于玻片上的每一区域上部，（2）在标记为O抗原的区域下部加 1 滴O抗血清（或H抗血清），在标记为对照区域的下部加入1 滴生理盐水，作为对照。
（3）再用无菌的接种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液（4）将玻片倾斜摇动混合1min ，并对着黑暗背景进行观察，任何程度的凝集现象皆为阳性反应。
H抗血清实验步骤与O抗血清相同。
难度：中。
沙门氏菌检测标准、方法及实验关键点
．检验沙门氏菌的原因和意义：据统计我国细菌性食物中毒中70%～80%是由沙门氏菌引起的，人一旦摄入含有大量沙门氏菌(105～(106个/g)的动物性产品，就会引起细菌性感染，进而在毒素作用下发生食物中毒导致胃肠炎、伤寒和副伤寒且沙门氏菌的传播媒介众多，肉、蛋以及食品从加工到出售的过程中都十分容易发生污染。
因此对沙门氏菌的检验事关重大。
二、检测及鉴定：沙门氏菌的检测要在二级生物安全实验室及二级生物安全柜(在负压情况下防止致病微生物气溶胶飘离实验室对实验人员及环境造成污染)中进行。
沙门氏菌典型菌落形态：生化鉴定显示：API20E 生化鉴定是根据快速酶促反应及代谢产物的检测技术发展的一种细菌编码鉴定法，广泛应用于临床、食品中革兰氏阴性杆菌的快速鉴定。
限值要求：参考CAC、ICMSF、欧盟、澳大利亚和新西兰、美国、加拿大、香港、台湾等国际组织、国家和地区的即食食品中沙门氏菌限量标准及规定，《GB29921-2013食品中致病菌限量》按照二级采样方案对所有11类食品设置沙门氏菌限量规定，具体为n=5，c=0，m=0（即在被检的5份样品中，不允许任一样品检出沙门氏菌）。
三、沙门氏菌传统检测方法的关键控制点1、样品处理尽可能缩短解冻时间，使竟争菌群生长最少，并减小对沙门氏菌的损伤致病菌取样一定要均匀并具有代表性（蛋黄蛋清混匀取样）。
2、培养基及培养方面（1）没有一种培养基可疑准确无误的筛选出沙门氏菌，必须选择多种选择性培养基同时筛选，只能说显色培养基综合选择性更强。
（2）试剂和培养基的配置一定要严格按照说明书配置，是否需要高压灭菌，添加剂用量及培养基保存条件。
（3）有1%沙门氏菌乳糖发酵阳性，为了避免漏检乳糖阳性菌必须选择不依赖乳糖的培养基，目前BS 培养基认为是最适合的。
（4）BS培养基是分离沙门氏菌的高效培养基，特别适用于伤寒类的沙门氏菌，不是所有的选择性培养基都能有效分离出伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌，BS是分离伤寒类沙门氏菌的首选培养基。
沙门氏菌检验程序
沙门氏菌检验程序一、引言沙门氏菌是一种常见的细菌，可以引起人类的食物中毒，其检验程序被广泛应用于食品安全监测和疾病防控工作中。
本文将详细介绍沙门氏菌检验程序的流程和方法。
二、沙门氏菌检验程序的流程沙门氏菌检验程序主要包括样品采集、前处理、培养、鉴定和确认等步骤。
以下将逐一详细介绍每个步骤。
1. 样品采集样品采集是沙门氏菌检验程序中非常重要的一步，直接影响到后续的检验结果。
在采集样品时应注意选择合适的容器，并在采集前进行消毒处理，以避免外源性污染。
此外，还应注意采集样品的数量和位置，以保证样品的代表性和准确性。
2. 前处理前处理是为了提高沙门氏菌的检出率，通常包括以下几个步骤：•外消毒：对样品外表面进行消毒处理，可以使用酒精或其他合适的消毒剂。
•清洗：对样品进行充分清洗，以去除表面的杂质和细菌。
•细碎：对于固体样品，可以进行细碎处理，使细菌更易于检测。
3. 培养培养是沙门氏菌检验程序中的核心步骤，主要通过培养细菌来增加其数量。
培养需要使用含有适当营养成分的培养基，常用的培养基有菌落计数法和液体培养基。
在培养过程中，应保持适宜的温度和湿度，并定期观察培养基上的细菌生长情况。
4. 鉴定和确认鉴定和确认是确定培养基上细菌是否为沙门氏菌的重要步骤。
常用的鉴定方法包括生化试验、血清学试验和分子生物学检测等。
通过这些方法，可以检测沙门氏菌的生物学特征和遗传特征，进一步确认其身份。
三、沙门氏菌检验程序的方法沙门氏菌检验程序的方法主要包括传统方法和快速检测方法。
以下将详细介绍这些方法的特点和应用。
1. 传统方法传统的沙门氏菌检验方法包括菌落计数法、血清学试验和生化试验等。
这些方法操作相对繁琐，结果需要较长的时间才能得出，但其结果可靠性较高，被广泛应用于食品安全监测和临床诊断。
•菌落计数法：通过培养菌落来计数菌落的数量，从而估计样品中沙门氏菌的含量。
这种方法可以判断出样品是否存在沙门氏菌，但无法确定具体的种属和品系。
沙门氏菌的检验过程及操作时的注意事项
沙门氏菌的检验过程及操作时的注意事项在我们平时的微生物检测工作中，沙门氏菌是非常常见的检测项目之一，沙门氏菌属于致病性细菌，要求在食品中每25g样品中不得检出沙门氏菌，因此对于沙门氏菌检测过程中的培养基和试剂的要求比较高，在这里跟大家讨论一下沙门氏菌的检验过程及操作时的注意事项。
01预增菌样品加入缓冲蛋白胨水（BPW）中进行预增菌，任何样品均需进行预增菌。
有盆友问啦，为什么要用BPW呢？那是因为啊，食品在加工过程中采用加热、干燥等加工工艺使得细胞存在不同程度的受损，而缓冲蛋白胨水（BPW）呢，作为非选择性的增菌培养基，较高pH的缓冲体系可以帮助受损的细胞恢复到稳定、活力满满的生理状态，此处也可使用即用型的BPW，因为它操作方便，节省时间。
02选择性增菌这里要注意啦，增菌接种前一定要把预增菌后的BPW样品溶液轻轻摇动混匀，这样做的原因是有些沙门君是懒得动的（因为有些沙门氏菌没鞭毛），它们会潜伏在溶液底层，所以我们要把增菌液“摇摆、摇摆”，让不动的沙门君们在增菌液中都漂浮起来，吸出，分别接入TTB和SC培养基中。
此步骤防止漏检的方式是采用两种不同的选择性增菌液（TTB和SC）进行增菌，是因为沙门君的家族太庞大了，血清型都有2000多种，所以得加强引诱措施，采用不同的培养温度和不同抑制性的培养基来给不同的沙门君提供安逸的环境来繁衍后代，同时尽量阻拦革兰氏阳性菌和其他大多数的肠道菌来捣乱，有些细菌还是会趁虚而入的。
咱们来说一下TTB和SC使用过程中的注意事项：TTB培养基：待基础培养基冷却至50℃以下时，加入煌绿和碘液，因为培养基中含有不溶解的CaCO3（用来中和吸收有毒性的代谢物质），会有大量的白色沉淀，在分装时应边摇匀边分装，接种后培养条件为：42℃±1℃培养18h-24h；SC培养基：千万不可高压灭菌，不可过度加热，最好是现用现配。
发现干粉或溶液变红就不要使用了。
培养基开封后建议用封口膜密封后冷藏保存，可延缓培养基变质，接种后培养条件为：36℃±1℃培养18h-24h；03分离TTB与SC增菌液在接种选择性分离培养基前，均应轻轻摇动混匀，原因同选择性增菌一样，也是为了防止不运动的沙门氏菌漏检；混匀后，用直径为3mm的接种环（也就是实验室用的10μL接种环）将TTB与SC增菌液“分别”划线接种于两种选择性平板，一种是BS琼脂，为必选的选择性分离培养基，另外一种选择性分离培养基是从XLD琼脂、HE琼脂、沙门显色培养基中选择一个即可；沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征参考下图：注意：在一种选择性琼脂培养基上不同沙门氏菌会长出不同的菌落形态，在做样品检验时要参考上图中沙门氏菌的菌落特征，将典型菌落及可疑菌落纯化后做生化和血清鉴定，避免漏检，例如：在XLD琼脂接菌培养18h-24h时，鼠伤寒沙门氏菌为粉红色菌落，呈现大的带光泽的黑色中心，大肠埃希氏菌为黄色菌落，猪霍乱沙门氏菌为淡黄色菌落，比大肠埃希氏菌的颜色略浅，易混淆，为防止漏检，XLD 琼脂平板上黄色菌落也应做生化和血清鉴定，不可忽视。
沙门氏菌实验标准操作程序
5、HE琼脂（HE）：称取75.7g HE琼脂溶于1000mL蒸馏水中，加热煮沸灭菌，冷却至55℃左右摇匀，倾注平板备用。
6、生化鉴定试剂盒
设备和材料
微生物实验室常规灭菌及培养设备
2、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）：称取23g亚硒酸盐胱氨酸增菌液溶于1000mL蒸馏水中，加热煮沸灭菌，不要过度加热，定量分装备用，勿需高压灭菌。
3、四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）：称取93.5g四硫磺酸钠煌绿增菌液溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌20min,临用前按每100ML加入碘液一支和P-73 0.1%煌绿一支，混匀后分装。现配先用，不宜久留。
沙门氏菌实验标准操作程序岗位名称检验员执行人员检验员技能要求掌握实验技能监控人员检验员监控频率实验过程检验方法对照试验作业条件在无菌室内操作作业步骤1超净工作台与无菌室紫外灯照射半小时通风半小时后进入无菌室操作
沙门氏菌实验标准操作程序
岗位名称
检验员
执行人员
检验员
技能要求
掌握实验技能
监控人员
检验员
监控频率
恒温培养箱，冰箱，电炉，天平，均质器，灭菌枪头，移液枪，无菌培养皿，精密Ph试纸，接种针。
关键控制点
1、操作台的卫生；
2、操作时房间风扇的开关，超净台的风扇开微风。
3、操作过程中注意无菌操作，冲枪后连枪头带里面的液体一并打入垃圾桶，并用酒精棉球清洗移液器枪口，切勿将液体打回原试管或三角瓶中。
注意事项
无菌操作将样品转至500 mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36℃±1℃培养8 h～18h。
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《农产品/食品微生物检验》课程-微教材
知识讲解
沙门氏菌操作程序及要点——干制生化鉴定试剂盒
检测工作中，由于沙门氏菌类型繁多，生化反应复杂多样，可根据三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验的初步判断结果，从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，用生理盐水制备成浊度适当的菌悬液，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。
干制生化鉴定试剂盒一般包括赖氨酸脱羧酶及其对照、氰化钾及其对照、靛基质、尿素、甘露醇、山梨醇、ONPG、三糖铁共8项生化试验试剂，通过接种可疑菌落悬浊液培养一定时间后，观察生化现象，结合标准从而判定鉴定结果。
由于此生化鉴定试剂盒中适配三糖铁实验现象不明显，一般将这个实验单独操作。
按照产品说明书，主要操作步骤如下：
接种：
第一步：从铝箔袋中取出试剂盒，打开盒盖；
第二步：用接种针从平板上挑取新鲜培养的适量单菌落接至适量无菌水中，与试剂盒中的
标准比浊管进行比对，制成0.5麦氏菌悬液，注意菌悬液浓度不宜过大，否则可能产生假阳性结果；
第三步：接种菌悬液分别至试剂盒的9个圆孔中，每孔接种量0.2mL；
第四步：在氨基酸对照、赖氨酸脱羧酶、氰化钾对照、氰化钾实验孔中滴加2滴矿物油覆盖培养基表面，盖上盒盖；
第五步：与三糖铁生化管一同置于36 ℃±1 ℃的恒温恒湿培养箱中培养24 h，其中ONPG 实验培养1～3h观察结果，如为阴性继续培养至24h观察结果；氰化钾实验若24h仍为阴性，可延长培养至48h观察结果；
第六步：培养结束后，在靛基质实验孔中滴加2滴靛基质试剂，即刻观察结果。
结果观察：
按照说明书进行结果观察，根据颜色反应，判读是阴性还是阳性。
如：
赖氨酸脱羧酶（对照管黄色，试验管紫色）为阳性；
氰化钾（对照管生长，试验管不生长）为阴性；
靛基质实验（黄色）为阴性；尿素（黄色）为阴性；
甘露醇（黄色）为阳性；山梨醇（黄色）为阳性；ONPG（不变色)为阴性
判定：根据标准描述进行结果判定。
拓展阅读
《GB4789.4-2010食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》
食品微生物检验论坛：/forum-1-1.html。