稀释涂布平板法计数公式
平板菌落计数法
平板菌落计数法农资101 1031240125 周瑶实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。
实验方法1、样品稀释液的制备准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20 min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml 无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液。
放菌液时吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液，否则稀释不准确，结果误差较大。
用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。
样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。
通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10-7、10-8、10-9稀释度，测定土壤细菌数量时，采用10-4、10-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，采用l0-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，采用10-2、10-3、10-4稀释度。
稀释涂布平板法计数公式
稀释涂布平板法计数公式
稀释涂布平板法计数公式：是每克样品中的菌株数=（C÷V）×M，C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。
扩展资料：
稀释涂布平板法是微生物学实验中的操作方法之一，将含菌材料放入热培养基后再倒入平板，容易导致热敏感菌死亡，而且采用稀释平板法，由于固定在琼脂正中缺氧，影响严格好氧菌的生长，因此微生物学研究中最常用的纯血种分离方法是稀释涂布平板法。
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上形成的单一菌落，即单细胞繁殖这一培养特征而设计的计数方法，一个菌落代表单细胞；计数时，首先使检体成为均匀的系列稀释液，尽量使检体中的微生物细胞分散，作为单一细胞存在，然后取一定的稀释度、一定量的稀释液，均匀地分布在平板中的培养基内，培养后，各个细胞增殖形成菌落，通过计数菌落数，可以计算样品中的菌数。
测定细菌数量的方法
测定细菌数量的方法1、计数器测定法：即用血细胞计数器进行计数。
取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。
由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。
本法简便易行，可立即得出结果。
本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
2、电子计数器计数法:电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。
该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。
因此，要求菌悬液中不含任何碎片。
3、活细胞计数法常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。
取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。
此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。
使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。
4、比浊法比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。
细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。
5、测定细胞重量法此法分为湿重法和干重法。
湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。
此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
平板菌落计数法计算公式 例题
平板菌落计数法计算公式例题
（原创版）
目录
1.平板菌落计数法概述
2.平板菌落计数法的计算公式
3.例题及解题过程
正文
一、平板菌落计数法概述
平板菌落计数法是一种常用的微生物计数方法，其主要原理是将待测样品经过适当稀释后，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落。
每个单菌落应代表原样品中的一个单细胞，通过统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量，即可换算出样品中的含菌数。
二、平板菌落计数法的计算公式
平板菌落计数法的计算公式为：每毫升中菌落形成单位 (cfu) = 同一稀释度三次重复的平均菌落数 / 稀释倍数^5。
其中，稀释倍数指的是将待测样品稀释后的倍数，一般选择每个平板上长有 30~300 个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较为合适。
同一稀释度的三个重复对照的菌落数不应相差很大，否则表示试验不精确。
实际工作中同一稀释度重复对照平板不能少于三个，这样便于数据统计，减少误差。
三、例题及解题过程
例题：某样品经 10^4、10^5、10^6 倍稀释后，在平板上分别形成了30、300、3000 个菌落，求该样品中的含菌数。
解题过程：
1.根据题意，选择菌落数在 30~300 之间的平板进行计数，即 10^5 倍稀释度。
微生物的分离与计数
二、实验设计
（1）原理：尿素是一种重要的农业氮肥，只 有当土壤中 的 细菌将尿素分解成氨之后， 才能 被植物利用。尿素细菌能合成脲酶， 在脲酶的作用下尿素被分解成氨。 CO(NH2)2+H2O CO2+2NH3
（2）实验设计的内容包括实验方案、材料用 具、实施步骤和时间安排等。 （3）实验流程：
专题2 :微生物的培养与应用
课题1我们学习了培养基的配 制以及微生物的培养（接种技术）。 下面我们来学习如何进行细菌的分 离，获得所需要的目的微生物，并 对目的微生物进行培养计数。
一、研究思路
筛选菌株 自然界筛选：根据它对生存环境的要求，到相应的 环境中去寻找。 实验室筛选：人为提供有利于目的菌株生长的条件 （包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其 他微生物生长。 选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微 生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长 的培养基。目的是从众多微生物中分离所需要的 微生物。
Hale Waihona Puke 统计菌落数目 测定微生物数量的方法： 1、直接计数法：最常用的显微镜直接计数。 先将待测样品制成悬液，然后取 一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显 微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内 的微生物总数。 优点：设备简单、能观察微生物的形态特征。 缺点：不能区分死菌和活菌； 难以计数微小的细菌。 一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。
四、课堂总结、点评
土壤 中尿 素分 解菌 的分 离与 计数
分离筛选微生物的 原理
人为 条件
有利于目的菌株生长 抑制或阻止其他微生物生 长
稀释涂布 平板法 显微镜直接 计数法
微生物计数方法与 原理 对照设置与重复设置 实验方案
实验设计
微生物的选择培养和计数-高中生物人教版选择性必修3
➢ 测细菌数：一般用104、105、106稀释液
➢ 测放线菌：一般用103、104、105稀释液
➢ 测真菌数：一般用102、103、104稀释液
思N考o
Image
在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数 在30～300的平板进行计数？
选择一个比较宽的范围，将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平 板上培养，以保证能从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数
四、实践：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1.培养基的制备
①原理：绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。
利用以尿素作唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。
②配方：
葡萄糖
尿素
KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O
琼脂
10.0g 1.0g 1.4g 2.1g 0.2g 15.0g
1、方法 对样品进行充分稀释，然后将菌液涂布到制备好的选择培养基 上。
2、方法步骤 ①铲取图样，将样品装入纸袋中
二、微生物的选择培养
2、方法步骤
②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇 匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等 比稀释。
1 mL
1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL
8cm的土壤层。铲去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的信封中。
பைடு நூலகம்
No 取土样时用的铁铲和取样袋在使用前
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都需要灭菌。 操作完成后，一定要洗手。
No Image
四、实践：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
2.实验设计
稀释涂布平板法计数公式
显微镜计数法即血球计数法，事先把菌液稀释到一定的倍数，然后通过血球计数板在显微镜下计数。
此法计数比较精准。
活菌计数法是将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.2ml放入无菌平皿，再倒入适量的已熔化并冷至45℃左右的培养基，与菌液混匀，冷却、待凝固后，放入适宜温度的培养箱或温室培养，长出菌落后，计数，按下面公式计算出原菌液的含菌数：每毫升原菌液活菌数=同一稀释度三个以上重复平皿菌落平均数×稀释倍数×5稀释涂布平板法是一种粗略的活菌计数法，即通过一定的稀释倍数，涂布到平板上，在适宜的条件下培养后，观察活菌数。
平板划线法是用来分离单菌落的一种方法，不是计数的方法。
如果只有一个稀释度的平均菌落数符合30~300这个范围
则以该稀释度平均菌落数除以涂布平板所用稀释液体积(0.1mL)，乘以稀释倍数作为该样品的细菌总数
如果有两个稀释度的平均菌落数符合要求
则按照两者菌落总数之比来决定
如果小于2，取两者的平均值
如果大于2，取较小的菌落总数
本题的46*10^3与295*10^2的比之为1.6
应取两者的平均值
（46*10^3+295*10^2)/0.1/2=3.775*10^5
相当于统计学里面的比较差异，
如果多比少大于2倍，则梯度浓度差异是10倍的情况下，其菌落是有很多重叠或者链接在一起的，这样就无法计算清楚是否为单菌落了，所以只有选择较小的菌落数。
来保证以上要求。
稀释平板计数法
实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。
实验器材LB液体、固体培养基1m1移液器，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。
实验步骤1．无菌器材的准备(1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。
(2) 无菌水：取6支试管，分别装入4.5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。
2．样品稀释液的制备(1) 编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。
另取6支盛有4.5m1无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
(2) 稀释用1m1移液器吸取0.5m1己充分混匀的菌悬液(待测样品)，至10-1的试管中，此即为10倍稀释。
将10-1试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。
用1m1移液器在10-1试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。
吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸入管底，吹时离开液面。
混匀后吸取至10-2试管中，此即为100倍稀释。
……其余依次类推，整个过程如图所示。
3．平板接种培养平板接种培养有浇注平板培养法和涂布平板培养法两种方法。
菌落总数cfu计算方法例子
菌落总数cfu计算方法例子菌落总数(CFU)计算方法本文将介绍常用的菌落总数(CFU)计算方法，并提供一些例子供参考。
1. 简介菌落总数是微生物检测中常用的指标之一，用于评估样品中的微生物数量。
一般使用平板计数法来进行菌落总数的计算。
2. 平板计数法平板计数法是通过将待测样品均匀涂布在富养液固化培养基的培养皿上，然后在适宜的条件下进行培养，最后通过观察和计数培养皿上的菌落来确定菌落总数。
实验操作步骤1.准备所需培养基和培养皿。
2.将待测样品进行适当稀释，以确保菌落数量适中。
3.取一定体积的待测样品并均匀涂布在培养皿上。
4.将培养皿倒置放置在恒温培养箱中，进行培养。
5.培养一定时间后，取出培养皿进行菌落观察和计数。
CFU计算方法菌落形成单位(CFU)是指每个培养皿上所观察到的独立典型菌落的数量。
根据菌落的数量和所取样品的稀释倍数，可以计算出菌落总数。
计算公式为：CFU/mL = (菌落计数 × 稀释倍数) / 取样体积3. 示例下面是一些菌落总数计算的示例：示例 1假设某实验室对某种食品中的大肠杆菌进行菌落总数检测。
首先，从食品中取出1 mL的样品，然后稀释100倍。
在培养皿上观察到的菌落数量为180个。
根据上述计算公式，可以进行如下计算：CFU/mL = (180 × 100) / 1 = 18000 CFU/mL因此，该食品中的大肠杆菌菌落总数为18000 CFU/mL。
示例 2假设某实验室对某种水样进行菌落总数检测。
首先，从水样中取出1 mL进行10倍的稀释。
在培养皿上观察到的菌落数量为25个。
根据上述计算公式，可以进行如下计算：CFU/mL = (25 × 10) / 1 = 250 CFU/mL因此，该水样中的菌落总数为250 CFU/mL。
结论菌落总数(CFU)计算方法是一种常用的微生物数量评估方法，通过平板计数法及相关计算公式可以得出准确的菌落总数。
在实际检测中，应根据样品的特点选择适当的稀释倍数和取样体积，以保证计算结果的准确性。
稀释平板计数法
稀释平板计数法稀释平板计数操作方法实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。
实验器材LB液体、固体培养基1m1移液器，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。
实验步骤1．无菌器材的准备(1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。
(2) 无菌水：取6支试管，分别装入4.5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。
2．样品稀释液的制备(1) 编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。
另取6支盛有4.5m1无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
(2) 稀释用1m1移液器吸取0.5m1己充分混匀的菌悬液(待测样品)，至10-1的试管中，此即为10倍稀释。
将10-1试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。
用1m1移液器在10-1试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。
吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸入管底，吹时离开液面。
混匀后吸取0.5ml至10-2试管中，此即为100倍稀释。
……其余依次类推，整个过程如图所示。
3．平板接种培养平板接种培养有浇注平板培养法和涂布平板培养法两种方法。
稀释涂布平板法计数公式
稀释涂布平板法计数公式
稀释涂布平板法计算公式是每克样品中的菌株数=(C÷V)×M，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。
稀释涂布平板法是微生物学实验中的一种操作方法。
由于将含菌材料现加到还较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，而且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是稀释涂布平板法。
稀释涂布平板法的计数原理
稀释涂布平板法的计数原理
稀释涂布平板法是古老而又先进的定量测定生物分子的一种技术。
它是通过制
作单个孔径不一的薄膜从而在相关孔径上形成涂布技术来研究某种生物物质的固有含量。
简要来说，稀释涂布平板是一种用来测量在两个或多个平面之间溶质的技术，囊括了病毒、细胞、生物体等生物物质在多种环境中的电荷极性及污染物的微粒的的浓度。
传统的稀释涂布平板法是溶入液体内，向薄膜上均匀分布液滴，并用不锈钢小
片轻轻压制，薄膜穿过微孔针平板封闭，从而测定出液滴中含有的某种溶质和污染物的微粒，并形象地画出分布液滴的稀释系数。
换句话说，可以得到信息，说明对象之间的溶质的浓度和污染物的微粒的浓度存在差异，帮助人们快速了解物质的分布特性。
稀释涂布平板法也可以通过数学计算来准确衡量平板上的生物物质或者污染物
的含量，结合一般的实验设计，可以降低实验者在测定过程中的不确定性。
此外，它把薄膜和裸眼观察两种检测技术整合在一起，从而增加了测量精度和减少了误差，同时大大降低了分析时间。
综上所述，稀释涂布平板法具有简便、高精度、准确性、可操作性等多种优点，是测定固有含量和污染物的微粒的极佳选择，同时也是空间探测，资源分配研究和相关网络建模研究的有效手段。
稀释涂布平板法计数公式
稀释涂布平板法
操作过程：
稀释操作：
1、将分别盛有9ml水的6支试管灭菌,并按10^1到10^6的顺序进行编号
2、用移液试管吸取1ml培养的菌夜,注入10^1倍稀释的试管中.用手指轻压移夜管上的橡皮,
吹吸三次,使菌液与水充分混匀.
3、从10^1倍稀释的试管中吸取1ml稀释液,注入10^2倍稀释的试管中,重复第二步的混匀
操作.以此类推,直到完成最后一支试管的稀释.
涂布操作：
1、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中.
2、取少量菌夜（不超过0.1ml）滴加到培养基表面.
3、将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃尽后,冷却8~10s.
4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面,涂布时可转动培养皿,使菌液分布均匀.
计算公式：
菌体数量cfu/g（mL）土样=同一稀释度重复的菌落平均数×稀释倍数。
例析稀释涂布平板法计数微生物的易错点
例析稀释涂布平板法计数微生物的易错点作者：杨长奎冉玲来源：《中学生物学》2017年第04期2017年高考考试大纲新增了“微生物数量的测定”的内容。
高中生物教材中有两处涉及微生物数量需要测定，一处是必修3中“探究培养液中酵母菌种群数量的变化”，运用抽样检测法，在显微镜下观察统计血球计数板上酵母菌数量并推算出培养液中酵母菌的个体数；另一处是选修1中“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”，运用稀释涂布平板法，通过统计平板上的菌落数推测出样品中活菌的大致个数。
其中，稀释涂布平板法计数微生物是考试的热点，也是学生的易错点。
1 易错点一：用实验组的平均菌落数与对照组菌落数的差值推算样品中活菌个数【例1】空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度的沉降。
某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。
实验步骤：①配制培养基；②制作无菌平板；③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；④将各组平板置于37 ℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。
回答下列问题：（1）步骤③中，实验组的操作是。
（2）若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了现象。
若将30（即36-6）个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法（填“正确”或“不正确”）。
解析：本实验的目的是了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况，应选择不同的高度放置平板，实验组的培养皿盖应揭开，使之暴露在空气中一段时间，以利于空气中微生物沉降到平板培养基表面上。
空白对照组的培养皿盖不能打开，使之不接触空气，不应该出现菌落。
若空白对照组平板出现了菌落，则说明空白对照组的平板被污染。
对照组平板出现污染，实验组平板不一定有污染或污染程度可能不一定与空白对照组的相同。
所以，用实验组获取的菌落数的平均值减去污染产生的菌落数作为实验的结果是不正确的。
人教版高中生物选修一专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学案含解析
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、研究思路1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
(2)选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
2．统计菌落数目(1)活菌计数法：常用稀释涂布平板法。
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②计算公式：每克样品中的菌株数＝(C ÷V )×M 。
C ：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。
V ：代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)。
M ：代表稀释倍数。
③统计方法：为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取其平均值。
.1.实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)同时抑制或阻止其他微生物的生长。
2．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
3．测定微生物数量的常用方法有活菌计数法和显微镜直接计数法。
稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目，但统计结果往往比活菌的实际数目低。
4．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作为唯一氮源的选择培养基分离能分解尿素的细菌。
5．鉴定分解尿素细菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，依据是否变红进行判断。
(2)显微镜直接计数法：在显微镜下直接观察和计数微生物的数量。
3．设置对照(1)对照实验：指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。
(2)主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
二、实验设计1．土壤取样从富含有机质、酸碱度接近中性且潮湿的土壤取样。
稀释涂布平板法计数原理
稀释涂布平板法计数原理
稀释涂布平板法是一种常用于微生物计数的方法，它的计数原理如下：
1.准备稀释液：将待测样品按照一定比例与适当的缓冲液（如生理盐水或稀释液）混合，制备一系列稀释液，以稀释样品中的微生物数量，使其适合于后续的计数。
2.取样：从适当稀释的样品中取一定体积的样品（通常是0.1毫升或1毫升），并将其均匀地涂布在含有富养基的平板上。
3.平板孵育：将涂有样品的平板在适当的温度和环境条件下进行孵育，以促使样品中的微生物生长形成可见的菌落。
4.菌落计数：根据菌落的数量和分布，使用裸眼或放大镜对平板上的菌落进行计数。
通常，选择适当的稀释液，以确保每个平板上菌落的数量在可计数的范围内，不会太多或太少。
5.结果计算：将平板上的菌落数量乘以适当的稀释倍数，得到样品中微生物的浓度或数量。
根据需要，可以将结果报告为菌落形成单位（CFU）/毫升或其他适当的单位。
稀释涂布平板法的原理是通过将样品稀释到适当的范围，使得每个平板上菌落的数量处于可计数的范围内。
通过对菌落的计数，并根据稀释倍数进行修正，可以推算出样品中微生物的浓度或数量。
这种方法广泛应用于微生物学研究、食品卫生检验、药品生产等领域，用于评估样品中微生物的数量和质量。
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稀释涂布平板法计数公式
每克样品中的细菌数=（C△V）×M
C代表在一定稀释度下在平板上生长的菌落的平均数，V代表用于涂布平板的稀释剂的体积（ML），M代表稀释倍数。
很容易理解。
稀释包衣是为了使菌株生长到群落中。
培养的群落数量代表用于平板的稀释液中细菌的数量。
将稀释倍数乘以得到样品中细菌的数量涂布平板法
微生物实验中的一种操作方法。
因为将含有细菌的材料添加到仍然很热的培养基中，然后倒入培养皿中，很容易导致某些热敏感细菌死亡，并且稀释方法也会影响某些严格需氧细菌的生长，因为它们固定在琼脂中间并且缺氧，因此稀释涂板法在微生物学研究中更常用。
稀释板计数是根据微生物在固体培养基上形成的单个菌落的培养特性设计的计数方法，即一个菌落代表单个细胞。
计数时，首先将要测试的样品制成一系列均匀的稀释剂，并尝试使样品中的微生物细胞尽可能分散，以使单个细胞的存在（否则，菌落不仅代表将一定稀释度和一定量的稀释剂接种到板中，以使其均匀地分布在板中的培养基中。
培养后，通过单个细胞的生长和繁殖形成菌落。
样品中细菌的数量可以通过计算菌落的数量来计算。
通过这种方法计算出的细菌数就是在培养基上生长的菌落数，因此也称为存活数。
它通常用于检查某些成品（例如杀虫剂），生物产品，土壤细菌含量以及食品和水污染。
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“微生物数量测量”是2017年高考大纲中的新内容，也是教学中的重要难点。
稀释涂板法是计数微生物的常用方法，用于计数样品中活菌的数量。
当样品的稀释度足够高时，在培养基表面上生长的菌落来自样品稀释液中的活细菌。
通过计算平板上的菌落数，我们可以猜测样品中有多少种活细菌。
但是，菌落计数结果的处理常常成为学生容易出错的地方。
典型示例：在从土壤中分离产生脲酶的细菌的实验中，将10g土壤样品溶液进行梯度稀释，并将0.1mL稀释倍数为105的土壤样品溶液接种在三个中板上。
培养一段时间后，平板上的细菌菌落数分别为42、200和256。
1g土壤样品中的细菌数为。
在PEP高中生物学选修课“生物技术实践”中，有这样一条陈述：用稀释包被板法计数菌落：为了确保结果的准确性，菌落数在30到30之间通常选择300和300进行计数。
但是，如果我们理所当然地认为42、200和256个数据都在30〜300范围内，那么直接对它们求平均并乘以稀释倍数就可以得出错误的结果1.66×108。
这也是许多学生犯错误的原因。
实际上，教材中的相关表述仅说明了可计数菌落数的适当范围。
在一定稀释度下，三个平板中的菌落数不能简单地直接平均，应注意稀释度的设定和计数结果的允许差异。
为了确保准确确定有效活菌计数，必须设置三个稀释度并进行分级，并且每个梯度应设置三个重复。
为了确定土壤中细菌的数量，通常使用104、105和106倍的稀释剂进行平板培养。
为了确定放线菌的数量，通常使用103、104和105倍的稀释度。
为了确定真菌的数量，通常使用102、103和104倍的稀释度。
如果平板中的菌落数太少，必然会导致计数误差太大；相反，如果培养皿中的菌落太多，将导致计数困难。
因此，世界上菌落计数的基本原理是对稀释的平板进行计数，其中平板上有30〜300个菌落。
同时，相同稀释度重复3次的平板上菌落数的标准差应小于允许的差。
也就是说，在平板计数试验中，如果在相同稀释度下三个重复菌落的数量在30〜300之间，但是数据相差很大，则需要将其丢弃。
如果在平板上重复3次的平均菌落数少，则容许误差也小。
相反，如果平均菌落数较大，则允许误差将较大。
如果选择了适当的稀释计数，则三个重复的标准差应小于规定的允许差。
如果三个重复的标准差大于指定的允许差，则无法正确计算它们，必须重新测量。