[精选]血清清蛋白、γ球蛋白的分离、提纯与鉴定实验报告资料
血清蛋白的分离、提纯与鉴定
血清清蛋白、γ-球蛋白的分离、提纯于鉴定一、实验目的：1、掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法2、掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法3、掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法4、掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法5、了解柱层析技术二、实验原理：蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。
对于不同的蛋白质，其分子量、溶解度及等电点等都有所不同。
利用不同蛋白质在这些性质上的差别，利用相应的物理方法可分离纯化不同蛋白质。
A.盐析法：在蛋白质溶液中加入大量中性无机盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化膜减弱乃至消失。
同时，加盐后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，从而破坏了蛋白质的胶体性质，导致蛋白质溶解度降低，蛋白质分子之间易于聚集沉淀，进而使蛋白质从水溶液中沉淀析出。
B.凝胶层析：利用蛋白质与无机盐类之间分子量的差异。
当溶液通过SephadeG-25凝胶柱时，溶液中分子直径大的蛋白质不能进入凝胶颗粒网孔，而分子量小的无机盐能进入凝胶颗粒的网孔中，因此在洗脱过程中，小分子的盐会被阻滞而后洗脱出来，从而达到去盐的目的。
C.离子交换层析:离子交换层析是指流动相中的离子和固定相上的离子进行可逆的交换，利用化合物的电荷性质及电荷量不同进行分离。
D.纯度鉴定（醋酸纤维素薄膜电泳）：血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。
它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。
由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。
因此电泳时可将它们分离为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。
三、材料与方法A材料样品：人混合血清试剂：葡聚糖凝胶（G-25)层析柱、DEAE纤维离子交换层析柱、饱和硫酸铵溶液、醋酸铵缓冲溶液、20%磺基水杨酸、1%BaCl溶液、氨基黑染色液、漂洗液、pH8.6巴比妥缓2冲溶液、电泳仪、电泳槽B实验步骤盐析（粗分离）→葡聚糖凝胶层析（脱盐）→DEAE纤维素离子交换层析（纯化）→醋酸纤维素薄膜电泳（纯度鉴定）具体操作流程示意：（一）盐析+凝胶柱层析除盐：（二）离子交换层析（纯化）：（三）醋酸纤维素薄膜电泳：1、点样（如下图）：-点样线尽量点得细窄而均匀,宁少勿多2、电泳：①薄膜粗面向下②点样端置阴极端③两端紧贴在滤纸盐桥上，膜应轻轻拉平电压：110V时间：50min3、染色和漂洗：电泳完毕后，关闭电源，将膜取出，直接浸于染色液中5min。
实验三血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定七年制
的结构分析提供了基础。
序列和结构分析结果解读
根据氨基酸序列，对血清γ-球蛋白的一级结构进 行了深入分析，确定了其基本组成。
利用计算机模拟技术，对血清γ-球蛋白的高级结构进 行了预测，揭示了其可能的折叠方式和空间构象。
一级结构分析 高级结构预测
实验态度培养
实验过程中需严谨细致，实事求是记录数据，培养了我们 的科学态度和实验精神。
团队合作意识
实验操作需要小组成员密切配合，增强了我们的团队协作 意识和沟通能力。
实验不足与改进
在实验过程中，我们也发现了一些不足之处，如样品处理 过程中可能存在的误差、层析柱的平衡问题等，需要在今 后的实验中加以改进和完善。
结果讨论与展望
实验意义
输标02入题
本实验成功分离、纯化了血清γ-球蛋白，为进一步研 究其功能和作用机制提供了材料。
01
未来可以深入研究血清γ-球蛋白与其他蛋白质的相互 作用，以及其在生理和病理过程中的作用，以期为相
关疾病的诊断和治疗提供新思路。
04
03
未来研究方向
05
结论
实验总结
实验原理
本实验基于蛋白质分离纯化的基本原理，通过离子交换层 析和凝胶过滤层析技术，实现了血清γ-球蛋白的分离和纯 化。
03
通过比较肽段的序列信息与数据库中的蛋白质序列， 可以鉴定出蛋白质的身份。
序列分析和结构预测的方法
01
序列分析通过测定蛋白质中每个氨基酸的排列顺序，确定蛋白 质的一级结构。
02
结构预测则基于已知的氨基酸序列，利用计算机模拟技术预测
蛋白质的三维结构。
这些方法对于理解蛋白质的功能和作用机制具有重要意义。
血清γ-球蛋白分离、纯度鉴定与浓度检测
生物化学实验报告班级：学号：姓名：实验室：评分━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━日期：实验一：血清γ-球蛋白分离、纯度鉴定与浓度检测实验目的：1、熟悉盐析法分离蛋白质的原理和基本方法2、掌握凝胶层析法脱盐分离蛋白质的原理和基本方法3、掌握醋酸纤维素薄膜电泳法进行纯度鉴定的原理和基本方法4、掌握分光光度计检测蛋白质含量的原理和基本方法实验原理：1.盐析法:盐析法是在蛋白质溶液中，加入无机盐至一定浓度或达饱和状态，可使蛋白质在水中溶解度降低，从而分离出来。
蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化膜减弱乃至消失。
此外，中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，蛋白质分子之间聚集而沉淀。
2.凝胶层析法脱盐：在葡聚糖凝胶柱中，蛋白质与盐的分子量不同，当样品通过层析柱时，分子量较大的蛋白质因为不能通过网孔而进入凝胶颗粒，沿着凝胶颗粒间的间隙流动，所以流程较短，向前移动速度较快，最先流出层析柱;反之，盐的分子量较小，可通过网孔而进入凝胶颗粒，所以流程长，向前移动速度较慢，流出层析柱的时间较后。
分段收集蛋白质洗脱液，即可得到脱盐的蛋白质。
3.醋酸纤维素薄膜电泳：血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。
它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。
由于血浆中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。
因此可以将它们分离为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。
4.分光光度计是应用分光光度法（即比色法）测定物质含量的装置。
通常需要加入某种显色剂，以产生有色化合物，其颜色深浅与待测化学成分的含量成正比，据此对待测物浓度进行测定。
分光光度计的工作原理及分光光度法的计算根据Lambert-Beer定律导衍而得Abs（吸光度）=KCL K:摩尔吸收系数 C:吸光物质浓度 L-溶液厚度实验操作：1.硫酸铵分段盐析:血清2.0 ml,加入PBS2.0ml,一边摇一边缓慢加入饱和硫酸铵2.0 ml,混匀后室温下静置10分钟，3000rpm离心10分钟。
11.6生化实验报告血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定及电泳分析
11.6⽣化实验报告⾎清γ-球蛋⽩的分离纯化与鉴定及电泳分析⾎清γ-球蛋⽩的分离纯化与鉴定及电泳分析【实验⽬的】1、了解蛋⽩质分离提纯的总体思路。
2、掌握盐析法、凝胶层析法和离⼦交换层析的实验原理及操作技术3、掌握电泳法分离纯化蛋⽩质的⽅法。
【实验原理】1、蛋⽩质的粗提——盐析法胶体的盐析是加盐，盐中的带电粒⼦使蛋⽩质周围的⽔化膜减弱，胶粒溶解度降低，形成沉淀析出的过程，是胶体的聚沉现象的⼀种。
向蛋⽩质溶液中加⼊某些浓的⽆机盐[如(NH4)2SO4或Na2SO4]溶液后，可以使蛋⽩质凝聚⽽从溶液中析出，这种作⽤就叫做盐析。
盐析不能使蛋⽩质变性，可以复原。
利⽤这个性质，可以采⽤多次盐析的⽅法来分离、提纯蛋⽩质。
蛋⽩质在⽔溶液中的溶解度取决于蛋⽩质分⼦表⾯离⼦周围的⽔分⼦数⽬，亦即主要是由蛋⽩质分⼦外周亲⽔基团与⽔形成⽔化膜的程度以及蛋⽩质分⼦带有电荷的情况决定的。
蛋⽩质溶液中加⼊中性盐后，由于中性盐与⽔分⼦的亲和⼒⼤于蛋⽩质，致使蛋⽩质分⼦周围的⽔化层减弱乃⾄消失。
同时，离⼦强度发⽣改变，蛋⽩质表⾯的电荷⼤量被中和，蛋⽩质溶解度更加降低，之蛋⽩质分⼦之间聚集⽽沉淀。
由于各种蛋⽩质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋⽩质不同，从⽽使之从其他蛋⽩中分离出来。
简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加⼊蛋⽩质溶液，使蛋⽩质表⾯电荷被中和以及⽔化膜被破坏，导致蛋⽩质在⽔溶液中的稳定性因素去除⽽沉淀。
由于清蛋⽩的亲⽔性⽐球蛋⽩⼤，且清蛋⽩的分⼦⽐球蛋⽩⼩，所以清蛋⽩需要⾼浓度的盐溶液才能够发⽣盐析，低浓度的时候球蛋⽩发⽣盐析。
盐析法分离蛋⽩质：各种蛋⽩质的颗粒⼤⼩、亲⽔程度、pI不同，盐析所需的盐浓度也不⼀样。
调节盐浓度可使不同的蛋⽩质沉淀，从⽽达到分离的⽬的。
常⽤中性盐：硫酸铵、硫酸钠等。
硫酸铵：温度系数⼩，溶解度⼤，蛋⽩谱⼴，盐析效果好，不易引起变性。
可⽤硫酸/氨⽔按需要调节pH值。
本实验中清蛋⽩分⼦⼩，亲⽔性强，在饱和硫酸铵溶液中可沉淀析出，⽽球蛋⽩分⼦⼤，亲⽔性弱，在半饱和硫酸铵溶液中即可沉淀析出。
血清γ球蛋白的提纯实验报告
血清γ球蛋白的提纯实验报告实验目的：1.学习血清γ球蛋白的提纯方法。
2.掌握蛋白质提纯的基本原理和技术。
3.了解蛋白质提纯实验的步骤和注意事项。
实验原理：血清γ球蛋白是一种重要的免疫球蛋白，具有重要的免疫调节和抗体介导细胞毒性等功能。
通过蛋白质提纯可以从复杂的混合物中分离纯化目标蛋白，得到高纯度的蛋白样品，以便进行后续的研究。
本实验采用离子交换层析和凝胶过滤两步骤进行血清γ球蛋白的提纯。
离子交换层析是利用蛋白质在不同离子强度下的吸附和洗脱特性进行分离的方法。
凝胶过滤则是利用分子量差异对蛋白进行分离的方法。
实验步骤：1.制备离子交换层析柱。
将离子交换树脂均匀填充到柱子中，并用合适的缓冲液进行均衡。
2.样品制备。
将血清样品稀释至适当浓度，并进行预处理，去除杂质。
3.样品加载。
将样品加载到经均衡的离子交换层析柱中，利用吸附和洗脱特性进行分离。
4.收集目标蛋白。
根据吸附和洗脱的条件，收集目标蛋白的洗脱峰。
5.凝胶过滤。
将洗脱的目标蛋白溶液进行凝胶过滤，利用分子量差异进一步分离。
6.收集纯化的目标蛋白。
根据凝胶过滤的结果，收集纯化的目标蛋白样品。
实验结果：通过离子交换和凝胶过滤两步骤的操作，我们成功地得到了血清γ球蛋白的纯化样品。
通过电泳和Western blot等方法对纯化样品进行验证，确认目标蛋白的纯度较高。
实验分析：本实验采用离子交换层析和凝胶过滤两步骤进行血清γ球蛋白的提纯，这两种方法在分离蛋白质中具有广泛的应用。
离子交换层析适用于不同电荷性质的蛋白质的分离，而凝胶过滤则适用于不同分子量的蛋白质的分离。
在实验过程中，需要注意选择合适的缓冲液、控制流速和洗脱条件，以确保蛋白质的稳定和纯化效果。
此外，对于目标蛋白的纯度要求较高的实验，可以结合其他纯化方法如亲和层析等进行进一步提纯。
实验总结：通过本次实验，我们学习并掌握了血清γ球蛋白的提纯方法，了解了蛋白质提纯的基本原理和技术。
实验结果表明，通过离子交换层析和凝胶过滤两步骤的操作，可以获得较高纯度的目标蛋白样品。
血清蛋白、-球蛋白的分离纯化与鉴定
血清清蛋白.γ-球蛋白的分别纯化与判定（一）血清清蛋白.γ-球蛋白的分别与纯化【目标请求】1．懂得蛋白质分别提纯的总体思绪.2．控制盐析法.分子筛层析.离子交流层析等试验道理及操纵技巧.【试验道理】血清中含有清蛋白和各类球蛋白（α-β-γ-球蛋白等）,因为它们所带电荷不合.相对分子质量不合,在高浓度盐溶液中的消融度不合,是以可运用它们在中性盐溶液中消融度的差别而进行沉淀分别,此法称为盐析法.本试验运用不合浓度硫酸铵分段盐析法可将血清中清蛋白.球蛋白初步分别.在半饱和硫酸铵溶液中,血清清蛋白不沉淀,球蛋白沉淀,离心后清蛋白重要在上清液中,沉淀的球蛋白加少量水可使其从新消融.用盐析法分别而得的蛋白质含有大量的硫酸铵,会妨害蛋白质的进一步纯化,是以必须去除,经常运用的有透析法.凝胶过滤法等.本试验采取凝胶过滤法,该法是运用蛋白质与无机盐类之间相对分子质量的差别除去粗成品中盐类.脱盐后的蛋白质溶液再经DEAE纤维素层析柱进一步纯化.DEAE纤维素为阴离子交流剂,在pH 6.5的前提下带有正电荷,能吸附带负电荷的α-球蛋白和β-球蛋白（pl分别为4.9.5.06和5.12）,而γ-球蛋白（pl7.3）在此前提下带正电荷,不被吸附故直接从层析柱流出,此时收集的流出液即为纯化的γ-球蛋白.进步醋酸铵溶液的浓度到0.06 mol/L,DEAE纤维素层析柱上的ß-球蛋白及部分a-球蛋白可被洗脱下来.将醋酸铵溶液的浓度进步至,则清蛋白被洗脱下来,此时收集的流出液即为较纯的清蛋白.经DEAE纤维素阴离于交流柱纯化的清蛋白.γ－球蛋白液往往体积较大,样品德量分数较低.为便于判定,常需浓缩.浓缩的办法许多,本试验选用聚乙二醇透析浓缩的办法.血清清蛋白.γ-球蛋白分别纯化后,选用醋酸纤维薄膜电泳法判定其纯度.【试剂与器材】1.试剂.（1）饱和硫酸铵溶液：称取固体硫酸铵850g参加1000mL蒸馏水中,在70~80℃下搅拌促熔,室温中放置留宿,瓶底析出白色结晶,上清液即为饱和硫酸铵液.（2）醋酸铵缓冲液：称取醋酸铵23.12g,加蒸馏水800mL,用稀氨水或稀醋酸调pH至,定容至1000mL.(不得加热)（3）醋酸铵缓冲液：取上液用蒸馏水稀释5倍.（4）醋酸铵缓冲液：取上液用蒸馏水稀释3倍.（上述3种缓冲液要确保浓度和pH的精确性,稀释后要重调pH）（5）300g/L三氯乙酸（6）纳氏试剂（7）葡聚糖凝胶G-25（8）DEAE纤维素（9）新颖血清（10）聚乙二醇（11）双缩脲试剂2.器材离心计心情刻度离心管pH试纸抽滤瓶黑.白反响板透析袋铁架台×20cm）移液枪布氏漏斗造就皿【操纵办法】1. 硫酸铵盐析（1）取刻度离心管1支,参加mL新颖血清,边摇边迟缓滴入饱和硫酸铵液mL.混匀后室温下放置10min,4000r/min离心10min.用滴管当心吸出上清液置于试管中,即为粗清蛋白液.（2）离心管底部的沉淀参加0.8mL蒸馏水,振荡消融,即为粗球蛋白液.2.凝胶柱层析脱盐（1）凝胶的处理：量取30mLSephade G-25醋酸铵缓冲液,置于滚水浴中1h,并经常动摇负气泡逸出.掏出冷却,待凝胶下沉后,倾去含有细微悬浮物的上层液.×醋酸铵缓冲液,将上述处理过的凝胶粒悬液持续注入层析柱内,直至所需凝胶床高度距层析柱上口约3~4cm为止.装柱时应留意凝胶粒装填平均,凝胶床内不得有界面和蔼泡,凝胶床面应平整.打开下口夹,调节柱下端螺旋夹流速2mL/min,用2倍柱床体积的醋酸铵缓冲液均衡.封闭下口夹.（3）上样与洗脱：打开下口夹,使床面上的缓冲液流出,待液面降到凝胶床概况时,封闭出水口.用滴管汲取盐析所得清蛋白溶液,在距离床面1mm处沿管内壁轻轻迁移转变加进样品,切勿搅动床面.然后打开下口夹,使样品进入床内,直到与床面平齐为止.立刻醋酸铵缓冲液冲洗柱内壁,待缓冲液进入凝胶床后再加少量缓冲液.如斯反复2次,以洗净内壁上的样品溶液.然后再参加适量缓冲液于凝胶床上,调流速10滴/min,开端洗脱.用小试管收集流出的液体,每管收集20滴,收集10管后封闭出水口.（4）检测蛋白质与NH4+：取诟谇反响板各一块,按洗脱液的次序每管取1滴,分别滴入反响板中,在黑色反响板中加300g/L三氯乙酸溶液（或用双缩脲试剂检测）2滴,消失白色混浊或沉淀即示有蛋白质析出,并记载各管白色混浊程度.于白色反响板中加人奈氏试剂溶液l滴,不雅察NH4消失的情形.归并含有蛋白质的各管,即为已脱盐的清蛋白溶液,γ-球蛋白的收集同清蛋白的操纵.3.离子交流层析柱纯化（1）DEAE纤维素处理：量取 DEAE-纤维素20mL,加0.5mol/L HCl 溶液50mL,搅拌后放置20min,虹吸去除上清液(也可用布氏漏斗抽干),再用蒸馏水反复洗数次直至pH 4.0 为止.加等体积 0.5 mol/LNaOH 溶液,搅拌后放置20min,虹吸去除上清液,同上用蒸馏水反复洗至pH<7为止.醋酸铵缓冲液40mL 放置30min.待装柱.×醋酸铵缓冲液均衡.调流速20滴/min,将脱盐后的γ-球蛋白溶液上柱,办法与上述脱盐法雷同.同样用300g/L三氯乙酸溶液或双缩脲试剂检讨有无蛋白质流出.收集不被纤维素吸附的蛋白质即为纯化的γ-球蛋白溶液.DEAE纤维素层析柱不必再生,可直接用于血清蛋白.（3）清蛋白的纯化：将脱盐后的清蛋白溶液上柱后,用醋酸铵缓冲液洗脱,流出约6mL后.将柱上的缓冲液液面降至与纤维素床概况平齐.再改用醋酸铵缓冲液洗脱,并用300g/L三氯乙酸溶液或双缩脲试剂检讨流出液是否含有蛋白质.流出液中有蛋白质时,立刻收集,即为纯化的清蛋白液,留作纯度判定用.4.蛋白溶液浓缩将待浓缩的蛋白质溶液放入较细的透析袋中,置入造就皿内.透析袋四周撒上聚乙二醇.经由一准时光后即可不雅察到显著的浓缩现象.该浓缩样品留作纯度判定.以上物资在运用后可以经由过程加温及吹风而收受接管.【要点提醒】1.装柱时,不克不及有气泡和分层现象,凝胶悬液尽量一次加完.2.加样时,切莫将床面冲起,亦不要沿柱壁参加.不克不及搅动床面,不然分别带不整洁.3.流速不成太快,不然分子小的物资来不及集中,随分子大的物资一路被洗脱下来,达不到分别目标.4.在全部洗脱进程中,始终应保持层析柱床面上有一段蒸馏水,不得使凝胶干结.（二）血清清蛋白.γ-球蛋白的判定——醋酸纤维素薄膜电泳【试验目标】1.控制电泳的基起源基础理;2.熟习醋酸纤维素薄膜电泳的办法和运用.【试验道理】蛋白质是两性电解质,在统一pH情形下,混杂蛋白质中各类成分带电量不合.分子大小不合,在统一电场中泳动的速度不合,导致雷同的时光迁徙的距离不合而把它们离开.血清中含有多种蛋白质,用醋酸纤维素薄膜电泳可分为五个区带,γ-球蛋白的等电点为7.3,在pH8.6的巴比妥缓冲液中,带的负电荷起码,是以在电场中比其它蛋白质移动速度慢.而清蛋白等其它蛋白质的等电点均小于7.3（pl分别为4.9.5.06和5.12）,是以在电场中比γ-球蛋白移动速度快.本试验分别全血清中各类蛋白质成分,同时判定前次试验清蛋白.γ-球蛋白的提纯成果.【试剂与器材】1.试剂（1）巴比妥缓冲液（pH8.6,离子强度0.06）：称取巴比妥纳12.76g,巴比妥1.66g,蒸馏水消融并定容至1000mL.（2）染色液：氨基黑10B 0.25g,用甲醇50mL.冰醋酸10mL.水40mL消融.（3）漂洗液：甲醇或乙醇45mL,冰醋酸5mL,水50mL,混匀.2.器材电泳仪电泳槽醋酸纤维薄膜造就皿滤纸点样器吸量管竹镊子吹风机【操纵办法】1.取醋酸纤维薄膜3张,在薄膜的无光泽面的1.5cm处用铅笔轻轻整洁条线.2.将薄膜浸入pH8.6的巴比妥-巴比妥钠缓冲液中,浸泡约30min(膜上没有白色斑痕).3.将完整浸透的薄膜轻轻掏出,平铺在滤纸上,用滤纸吸去过剩的缓冲液.分别用点样器蘸取正常血清.清蛋白和γ-球蛋白溶液点在点样线上(光滑面).4.薄膜的无光泽面向下,两头紧贴在电泳槽支架上的滤纸条上（点样端在阴极）.薄膜应位正,平直无曲折,加上槽盖均衡5分钟后通电电泳,调电流0.5mA/cm膜宽（几条薄膜就是通几毫安的电流,是按横向盘算的）,通电时光约40~60min.5.电泳停止后,封闭电源,将薄膜浸于氨基黑10B染色液中染色5min,掏出后用漂洗液漂洗4~5次,每次约5min,待布景无色为止.【成果处理】依据脱色后薄膜上消失的黑点,对清蛋白.γ-球蛋白与正常血清比较,剖析样品的纯度.【思虑题】假如电泳成果证实γ球蛋白的分别后果不睬想,应从哪些方面剖析？。
11.6生化实验报告血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定及电泳分析
11.6⽣化实验报告⾎清γ-球蛋⽩的分离纯化与鉴定及电泳分析⾎清γ-球蛋⽩的分离纯化与鉴定及电泳分析【实验⽬的】1、了解蛋⽩质分离提纯的总体思路。
2、掌握盐析法、凝胶层析法和离⼦交换层析的实验原理及操作技术3、掌握电泳法分离纯化蛋⽩质的⽅法。
【实验原理】1、蛋⽩质的粗提——盐析法胶体的盐析是加盐，盐中的带电粒⼦使蛋⽩质周围的⽔化膜减弱，胶粒溶解度降低，形成沉淀析出的过程，是胶体的聚沉现象的⼀种。
向蛋⽩质溶液中加⼊某些浓的⽆机盐[如(NH4)2SO4或Na2SO4]溶液后，可以使蛋⽩质凝聚⽽从溶液中析出，这种作⽤就叫做盐析。
盐析不能使蛋⽩质变性，可以复原。
利⽤这个性质，可以采⽤多次盐析的⽅法来分离、提纯蛋⽩质。
蛋⽩质在⽔溶液中的溶解度取决于蛋⽩质分⼦表⾯离⼦周围的⽔分⼦数⽬，亦即主要是由蛋⽩质分⼦外周亲⽔基团与⽔形成⽔化膜的程度以及蛋⽩质分⼦带有电荷的情况决定的。
蛋⽩质溶液中加⼊中性盐后，由于中性盐与⽔分⼦的亲和⼒⼤于蛋⽩质，致使蛋⽩质分⼦周围的⽔化层减弱乃⾄消失。
同时，离⼦强度发⽣改变，蛋⽩质表⾯的电荷⼤量被中和，蛋⽩质溶解度更加降低，之蛋⽩质分⼦之间聚集⽽沉淀。
由于各种蛋⽩质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋⽩质不同，从⽽使之从其他蛋⽩中分离出来。
简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加⼊蛋⽩质溶液，使蛋⽩质表⾯电荷被中和以及⽔化膜被破坏，导致蛋⽩质在⽔溶液中的稳定性因素去除⽽沉淀。
由于清蛋⽩的亲⽔性⽐球蛋⽩⼤，且清蛋⽩的分⼦⽐球蛋⽩⼩，所以清蛋⽩需要⾼浓度的盐溶液才能够发⽣盐析，低浓度的时候球蛋⽩发⽣盐析。
盐析法分离蛋⽩质：各种蛋⽩质的颗粒⼤⼩、亲⽔程度、pI不同，盐析所需的盐浓度也不⼀样。
调节盐浓度可使不同的蛋⽩质沉淀，从⽽达到分离的⽬的。
常⽤中性盐：硫酸铵、硫酸钠等。
硫酸铵：温度系数⼩，溶解度⼤，蛋⽩谱⼴，盐析效果好，不易引起变性。
可⽤硫酸/氨⽔按需要调节pH值。
本实验中清蛋⽩分⼦⼩，亲⽔性强，在饱和硫酸铵溶液中可沉淀析出，⽽球蛋⽩分⼦⼤，亲⽔性弱，在半饱和硫酸铵溶液中即可沉淀析出。
生化实验报告模版
生物化学实验报告姓名：郭玥学号： 3120100021专业年级： 2012级护理本科组别：第8实验室生物化学与分子生物学实验教学中心【实验报告第一部分（预习报告内容）：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：XX】实验目的：1、掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法2、掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法3、掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法4、掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法5、了解柱层析技术实验原理：1、蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。
2、不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。
利用这些性质的差别，可分离纯化各种蛋白质。
3、盐析法：盐析法是在蛋白质溶液中，加入无机盐至一定浓度或达饱和状态，可使蛋白质在水中溶解度降低，从而分离出来。
蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化膜减弱乃至消失。
中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，蛋白质分子之间聚集而沉淀。
4、离子交换层析:离子交换层析是指流动相中的离子和固定相上的离子进行可逆的交换，利用化合物的电荷性质及电荷量不同进行分离。
5、醋酸纤维素薄膜电泳原理：血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。
它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。
由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。
因此可以将它们分离为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。
实验材料：人混合血清葡聚糖凝胶（G-25)层析柱DEAE纤维离子交换层析柱饱和硫酸铵溶液醋酸铵缓冲溶液 20%磺基水杨酸1%BaCl溶液氨基黑染色液2漂洗液 pH8.6巴比妥缓冲溶液电泳仪、电泳槽实验流程：盐析（粗分离）→葡聚糖凝胶层析（脱盐）→DEAE纤维素离子交换层析（纯化）→醋酸纤维素薄膜电泳（纯度鉴定）实验步骤：（一）盐析+凝胶柱层析除盐：（二）离子交换层析（纯化）：（三）醋酸纤维素薄膜电泳：1、点样（如下图）：-点样线尽量点得细窄而均匀,宁少勿多2、电泳：①薄膜粗面向下②点样端置阴极端③两端紧贴在滤纸盐桥上，膜应轻轻拉平电压：110V时间：50min3、染色和漂洗：电泳完毕后，关闭电源，将膜取出，直接浸于染色液中5min。
实验二 血清γ球蛋白的分离纯化与鉴定
二、血清γ球蛋白的分离纯化与鉴定
清蛋白 血 清 球蛋白 β γ pI=7.3 9%～11% 12%～18% >150kD α1 pI=4.9 60%～70% 2%～3.5% 69kD
α2
pI<6
4%～7%
分离依据：蛋白质理化性质的共性和个性
共性：
*生命大分子：透析、超滤、超离心、凝胶层析 *蛋白质溶液有胶体性质：稳定因素为水化膜和电荷→ 盐析/有机溶剂沉淀 *两性电解质和等电点：pH>pI，蛋白质带负电；反之带 正电→电泳、离子交换层析 *有一定的功能：抗原性→免疫沉淀
血清电泳结果
清蛋白（albumin，A）：38～48g/L
球蛋白（globulin，G）：15～30g/L
A/G：正常值1.5～2.5
电泳鉴定
清蛋白 1 2
γ 加样线
对照
纯化γ蛋白 加样线 样品
注意事项
1.盐析：滴加硫酸铵时边摇边逐滴加入 2.离心：小试管离心，加套管配平。（参考视频） 3.层析：上样（转圈滴加）；防止柱床液层干涸；收集
蛋白样品时用载玻片加磺柳酸检测；凝胶再生。
4.浓缩：G-200干胶用纸条少量多次加入，液层高<0.5ml；
用过的G-200干胶倒入收集烧杯，回收利用。
5.电泳：区分正反面；血清点一次，纯化蛋白点3-5次；
点样面朝下，在负极。（参考视频）
预实验结果
凝胶层析原理
大分子：垂直向下运动
流程短
小分子：垂直向下运动 不定向扩散
流程长
交联葡聚糖凝胶
多聚葡萄糖与环氧丙 烷交联而成，网状结 构。珠状颗粒，商品 名为Sephadex G系列。
血清清蛋白及γ-球蛋白的分离
血清清蛋白及γ-球蛋白的分离、纯化与鉴定目的要求1．1．熟悉蛋白质分离纯化的总体思路。
2．2．掌握盐析、离心、层析、浓缩、电泳等技术在蛋白质分离纯化中的综合作用。
3．3．学会设计和制定分离纯化蛋白质的方法。
实验原理血清中蛋白质按电泳法一般可分为五类：清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白，其中γ-球蛋白含量约占16％，100ml血清中约含1.2g左右。
首先利用清蛋白和球蛋白在高浓度硫酸铵溶液溶解度的差异而进行沉淀分离，此为盐析法。
半饱和硫酸铵溶液可使球蛋白沉淀析出，清蛋白则仍溶解在溶液中，经离心分离,沉淀部分即为含有γ-球蛋白的粗制品。
用盐析法分离而得的蛋白质中含有大量的中性盐，会妨碍蛋白质进一步纯化，因此首先必须去除。
常用的方法有透析法、凝胶层析法等。
本实验采用凝胶层析法，其目的是利用蛋白质与无机盐类之间分子量的差异。
当溶液通过SephadexG--25凝胶柱时，溶液中分子直径大的蛋白质不能进入凝胶颗粒的网孔，而分子直径小的无机盐能进入凝胶颗粒的网孔之中．因此在洗脱过程中，小分子的盐会被阻滞而后洗脱出来，从而可达到去盐的目的。
脱盐后的蛋白质溶液尚含有各种球蛋白，利用它们等电点的不同可进行分离。
清蛋白、α－球蛋白、β-球蛋白的PI<6.0；γ－球蛋白的PI为7.2左右。
因此在PH6.3的缓冲溶液中，各类球蛋白所带电荷不同。
经DEAE(二乙基氨基乙基)纤维素阴离子交换层析柱进行层析时，带负电荷的α－球蛋白和β-球蛋白能与DEAE纤维素进行阴离子交换而被结合；带正电荷的γ－球蛋白则不能与DEAE纤维素进行交换结合而直接从层析柱流出。
因此随洗脱液流出的只有γ－球蛋白，从而使γ－球蛋白粗制品被纯化。
其反应式如下：用上述方法分离得到γ－球蛋白是否纯净，单一。
可将纯化前后的γ－球蛋白进行电泳比较而鉴定之。
提高醋酸铵溶液的浓度到0.06 mol/L，DEAE纤维素层析柱上的ß-球蛋白及部分a-球蛋白可被洗脱下来。
11.6 生化实验报告 血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定及电泳分析
血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定及电泳分析【实验目的】1、了解蛋白质分离提纯的总体思路。
2、掌握盐析法、凝胶层析法和离子交换层析的实验原理及操作技术3、掌握电泳法分离纯化蛋白质的方法。
【实验原理】1、蛋白质的粗提——盐析法胶体的盐析是加盐，盐中的带电粒子使蛋白质周围的水化膜减弱，胶粒溶解度降低，形成沉淀析出的过程，是胶体的聚沉现象的一种。
向蛋白质溶液中加入某些浓的无机盐[如(NH4)2SO4或Na2SO4]溶液后，可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出，这种作用就叫做盐析。
盐析不能使蛋白质变性，可以复原。
利用这个性质，可以采用多次盐析的方法来分离、提纯蛋白质。
蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。
蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。
同时，离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，蛋白质溶解度更加降低，之蛋白质分子之间聚集而沉淀。
由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。
简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。
由于清蛋白的亲水性比球蛋白大，且清蛋白的分子比球蛋白小，所以清蛋白需要高浓度的盐溶液才能够发生盐析，低浓度的时候球蛋白发生盐析。
盐析法分离蛋白质：各种蛋白质的颗粒大小、亲水程度、pI不同，盐析所需的盐浓度也不一样。
调节盐浓度可使不同的蛋白质沉淀，从而达到分离的目的。
常用中性盐：硫酸铵、硫酸钠等。
硫酸铵：温度系数小，溶解度大，蛋白谱广，盐析效果好，不易引起变性。
可用硫酸/氨水按需要调节pH值。
本实验中清蛋白分子小，亲水性强，在饱和硫酸铵溶液中可沉淀析出，而球蛋白分子大，亲水性弱，在半饱和硫酸铵溶液中即可沉淀析出。
血清γ-球蛋白的分离纯化实验报告
血清γ-球蛋白的分离纯化实验报告血清γ-球蛋白的分离纯化一、目的与要求1、掌握分离纯化蛋白质的基本原理和基本过程。
2、熟悉盐析、离心、层析、电泳等生化基本技术在蛋白质分离纯化中的综合应用。
3、学会设计和制定分离纯化蛋白质的实验方案，技术路线，质量监控和保证措施。
二、实验原理血清蛋白有300多种，可粗略的分为清、球蛋白两大类，γ球蛋白只是球蛋白中的一个亚类。
欲用常规方法获得，可先用半饱和硫酸铵从血清中盐析出球蛋白，接着用葡萄糖凝胶G-25脱去球蛋白中的盐分最后用DEAE纤维素阴离子交换柱便可直接从脱盐的球蛋白溶液中分离纯化出γ球蛋白,其反应机理如下：C2H5H纤维素-O-(CH2)2-N(C2H5)2纤维素-O-(CH2)2-N+……H2PO4H++H2PO4DEAE纤维素离子交换柱COOHC2H5α、β、γ球蛋白NH2COOH经过盐析和脱盐的球蛋白液纤维素-O-(CH2)2-N+…α和βGPH6.3NH2交换到柱上的α和β-球蛋白H2PO4COOHγ-球蛋白NH3+被DEAE柱分离纯化的γ-球蛋白被柱层析交换结合的α球蛋白和β球蛋白，可通过增加洗脱液的离子强度或降低洗脱的pH值（也可两者同时改变），使其分部洗脱下来而被纯化。
纯化前后的γ球蛋白可用电泳方法进行比较鉴定。
三、仪器和材料仪器：离心机，1.5×40cm层析柱，层析架或滴定台，核酸-蛋白检测仪，部分收集器，紫外分光光度计，色谱柱，电泳槽，电泳仪。
材料：马血清，SephadexG-25×200g，DEAE-32×200g。
四、实验步骤（一）分离纯化步骤1、取3mL,4℃预冷血清，加入3mL4℃预冷的饱和硫酸铵。
边滴边摇。
2、静置大于10min后，3500rpm离心15min，弃去上清液，将沉淀溶于少量的生理盐水。
从中取0.5mL用于测定蛋白质含量。
3、将剩余的样品上SephadexG-25柱，用0.02mol/LpH6.5的NH4AC缓冲液洗脱，每管收集3mL，用于绘制洗脱曲线，选择颜色最深（即浓度最高管）的取0.5mL留待电泳用。
东师实验1血清清蛋白与γ-球蛋白的分离与鉴定分解
综合研究性实验一：血清清蛋白与γ-球蛋白的分离与鉴定一.实验目的1.掌握盐析法分离提纯蛋白质的原理和方法；2.掌握透析法脱盐与蛋白质浓缩的方法；3.掌握凝胶过滤层析的技术方法；4.掌握利用醋酸纤维素薄膜电泳法分离与鉴定血清清蛋白的原理和方法。
二.血清清蛋白与γ-球蛋白的盐析、透析与浓缩[一]实验试剂和仪器1.试剂（1）血清（2）PBS（3）(NH4)2SO4溶液（4）双缩脲试剂（5）酪蛋白（6）蔗糖（7）蒸馏水（8）BaCl溶液2.用品与仪器（1）离心机（2）烧杯（3）移液管（4）透析袋[二]血清清蛋白与γ-球蛋白的盐析（一）蛋白质盐析的实验原理1.蛋白质分子是生物大分子，其大小恰好在胶体的范围，且分子中亲水基团多位于分子的表面，疏水基团多在分子结构内部。
因此，蛋白质分子在水中能以胶体颗粒存在，形成胶体溶液。
2.蛋白质在水中形成亲水胶体，亲水胶体颗粒有两个稳定因素：（1）胶粒上的电荷；（2）水化膜。
3.蛋白质在水溶液中呈现两性电离。
在环境的pH≠pI时，蛋白质可带正电荷或负电荷。
在某一pH条件，蛋白质带同种电荷，同电相斥，故可吸引水分子（水分子为极性分子），水分子排列围绕在蛋白质分子周围，形成水化膜，使蛋白质分子相互分割开来。
破坏这两个因素或其中某一个因素（破坏了蛋白质胶体的稳定性），易于蛋白质发生沉淀。
4.高浓度盐溶液，在水溶液中电离，其正、负离子吸引水分子，从而夺取水化膜，还可以中和部分电荷。
这样，就不同程度地去掉了上述的两个稳定因素，使蛋白质凝聚、沉淀，这就是蛋白质的盐析。
5.由于各种蛋白质的颗粒大小、带电荷多少及亲水程度的不同，对于同一种中性盐，蛋白质盐析所需最低浓度也不同。
例如：球蛋白不溶于半饱和的(NH4)2SO4溶液，γ-球蛋白不溶于1/3饱和度的(NH4)2SO4溶液，而清蛋白仅不溶于饱和的(NH4)2SO4溶液。
因而。
可以利用不同浓度的(NH4)2SO4溶液使血清或其他混合蛋白质中的这些不同的蛋白质分开。
血清清蛋白、γ-球蛋白的分离、纯化与鉴定实验报告
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的1、掌握盐析法、凝胶层析法、离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法。
2、掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法。
3、了解柱层析技术。
二、实验原理1、粗提（盐析法）：蛋白质分子能稳定存在于水溶液中是因为有两个稳定因素：表面的电荷和水化膜。
当维持蛋白质的稳定因素破坏时，蛋白质分子可相互聚集沉淀而析出。
盐在水溶液中电离所形成的正负离子可吸引水分子，从而夺取蛋白质分子上的水化膜，还可中和部分电荷使蛋白质分子聚集而沉淀，从而达到盐析沉淀蛋白质的目的。
由于血清中各种蛋白质颗粒大小、所带电荷多少及亲水程度不同，因此，利用不同浓度的硫酸铵溶液分段盐析，便可将血清中清蛋白和球蛋白从溶液中沉淀出来，达到初步分离清蛋白、球蛋白的目的。
2、脱盐（凝胶层析法）凝胶层析法利用蛋白质与无机盐类之间分子量的差异。
当溶液通过凝胶柱时，溶液中分子量较大的蛋白质因为不能通过网孔进入凝胶颗粒，沿着凝胶颗粒间的间隙流动，所以流程较短，向前移动速度较快，最先流出层析柱。
而盐的分子量较小，可通过网孔进入凝胶颗粒，所以流程长，向前移动速度较慢，较晚流出层析柱。
从而可达到去盐的目的。
3、纯化（离子交换层析法）离子交换是溶液中的离子和交换剂上的离子进行可逆的的交换过程。
带正电荷的交换剂称为阴离子交换剂；带负电荷的交换剂称为阳离子交换剂。
本实验采用的DEAE纤维素是一种阴离子交换剂，溶液中带负电荷的离子可与其进行交换结合，带正电荷的离子则不能，这样便可达到分离纯化的目的。
脱盐后的蛋白质溶液尚含有各种球蛋白，利用它们的等电点的不同可进行分离。
血清中各种蛋白质的pI各不相同，因此，在同一醋酸铵缓冲液中，各蛋白质所带的电荷不同，可以通过DEAE离子交换层析将血清清蛋白和γ-球蛋白分离出来。
血清清蛋白及γ-球蛋白的分离
血清清蛋白及γ-球蛋白的分离、纯化与鉴定目的要求1．1．熟悉蛋白质分离纯化的总体思路。
2．2．掌握盐析、离心、层析、浓缩、电泳等技术在蛋白质分离纯化中的综合作用。
3．3．学会设计和制定分离纯化蛋白质的方法。
实验原理血清中蛋白质按电泳法一般可分为五类：清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白，其中γ-球蛋白含量约占16％，100ml血清中约含1.2g左右。
首先利用清蛋白和球蛋白在高浓度硫酸铵溶液溶解度的差异而进行沉淀分离，此为盐析法。
半饱和硫酸铵溶液可使球蛋白沉淀析出，清蛋白则仍溶解在溶液中，经离心分离,沉淀部分即为含有γ-球蛋白的粗制品。
用盐析法分离而得的蛋白质中含有大量的中性盐，会妨碍蛋白质进一步纯化，因此首先必须去除。
常用的方法有透析法、凝胶层析法等。
本实验采用凝胶层析法，其目的是利用蛋白质与无机盐类之间分子量的差异。
当溶液通过SephadexG--25凝胶柱时，溶液中分子直径大的蛋白质不能进入凝胶颗粒的网孔，而分子直径小的无机盐能进入凝胶颗粒的网孔之中．因此在洗脱过程中，小分子的盐会被阻滞而后洗脱出来，从而可达到去盐的目的。
脱盐后的蛋白质溶液尚含有各种球蛋白，利用它们等电点的不同可进行分离。
清蛋白、α－球蛋白、β-球蛋白的PI<6.0；γ－球蛋白的PI为7.2左右。
因此在PH6.3的缓冲溶液中，各类球蛋白所带电荷不同。
经DEAE(二乙基氨基乙基)纤维素阴离子交换层析柱进行层析时，带负电荷的α－球蛋白和β-球蛋白能与DEAE纤维素进行阴离子交换而被结合；带正电荷的γ－球蛋白则不能与DEAE纤维素进行交换结合而直接从层析柱流出。
因此随洗脱液流出的只有γ－球蛋白，从而使γ－球蛋白粗制品被纯化。
其反应式如下：用上述方法分离得到γ－球蛋白是否纯净，单一。
可将纯化前后的γ－球蛋白进行电泳比较而鉴定之。
提高醋酸铵溶液的浓度到0.06 mol/L，DEAE纤维素层析柱上的ß-球蛋白及部分a-球蛋白可被洗脱下来。
血清γ—球蛋白的分离、纯化与鉴定资料
“盐析”破坏了蛋白质作为亲水胶体的两个稳定因素
表面电荷 水化膜
但当盐浓度增加到一定浓度时，一方面大量的水同盐分子结合，使得蛋白质没有 足够的水维持溶解状态，破坏了维持蛋白质亲水胶的水化膜 另一方面加入的盐离子中和了蛋白质分子相互排斥的电荷相互聚集沉淀出来
2.常用中性盐：
盐析可用硫酸钠、氯化钠、磷酸钠和硫酸铵等 中性盐，其中运用最广的是硫酸铵。 硫酸铵的优点
结果
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
protein NH4+
-
-
-
-
-
-
+
-
++
18
+
19
±
+
20
11
12
13
14
15
16
17
protein NH4+
+
+
+
-
-
-
-
-
-
-
(四)电泳 (electrophoresis) ---鉴定
带电粒子在电场中移动的现象称为电泳 血清蛋白包括多种蛋白质，它们的等电点大都在 pH7.0以下，清蛋白的等电点为4.6，球蛋白为5-7 在PH高于它们等电点的缓冲液均带负电荷，在电 场中向正极移动 由于各种蛋白质所带电荷的数量和分子的大小有 差别，在电场中泳动的速度也不同
样品
血清
2cm 5cm
三、电泳
将点样面朝下，点样端在负极，悬于滤纸桥上，盖好电泳
槽盖，将电压调至130-160V，电流约为0.4-0.6毫安/厘米， 通电40～50分钟，待电泳区带展开约3.5cm时断电。
球蛋白提纯实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本实验旨在通过盐析法和凝胶层析法，对血清中的球蛋白进行提纯，并通过醋酸纤维素薄膜电泳法鉴定提纯后的球蛋白纯度。
二、实验原理血清中的蛋白质根据电泳法可分为五类：清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和δ-球蛋白。
其中，β-球蛋白含量约占血清总蛋白的16%，每100 mL血清中约含1.2 g左右。
不同种类的蛋白质在分子量、溶解度以及带电荷情况上存在差异，这些差异是进行蛋白质分离和提纯的基础。
1. 盐析法：利用清蛋白和球蛋白在高浓度中性盐溶液中溶解度的差异进行沉淀分离。
在半饱和硫酸铵溶液中，球蛋白沉淀析出，而清蛋白仍溶解在溶液中。
通过离心分离，沉淀部分即为含有β-球蛋白的粗制品。
2. 凝胶层析法：利用蛋白质与无机盐类之间分子量的差异进行分离。
当溶液通过Sephadex G-25凝胶柱时，分子直径大的蛋白质不能进入凝胶颗粒的网孔，而分子直径小的无机盐能进入凝胶颗粒的网孔。
在洗脱过程中，小分子的盐会被阻滞而后洗脱出来，从而达到去盐的目的。
3. 醋酸纤维素薄膜电泳法：用于鉴定提纯后的β-球蛋白纯度。
通过电泳分离蛋白质，根据其迁移率判断纯度。
三、实验材料与仪器材料：1. 血清2. 硫酸铵3. Sephadex G-25凝胶4. 醋酸纤维素薄膜5. 电泳缓冲液6. 标准蛋白质仪器：1. 离心机2. 凝胶层析装置3. 电泳装置4. 显微镜四、实验步骤1. 盐析法提纯：a. 将血清与硫酸铵溶液混合，使硫酸铵浓度达到半饱和。
b. 将混合液置于离心机中，以3000 r/min离心15分钟。
c. 取上清液，沉淀即为含有β-球蛋白的粗制品。
2. 凝胶层析法去盐：a. 将Sephadex G-25凝胶加入凝胶层析装置中，加入适量蒸馏水平衡。
b. 将粗制品加入凝胶层析装置中，让其自然洗脱。
c. 收集洗脱液，即为去盐后的β-球蛋白。
3. 醋酸纤维素薄膜电泳鉴定：a. 将去盐后的β-球蛋白与标准蛋白质混合，进行电泳分离。
γ球蛋白提纯棉实验报告
γ球蛋白提纯棉实验报告实验名称(TitleofExperimetn)血清清蛋白、γ-球蛋白的分离、提纯与鉴定实验地点实验日期(DateofExperiment)2013-12-11(LabNo.)指导老师(Instructor)批改日期(Date)合作者(Partner)总分(Total Score)教师签名(Signature)【实验报告第一部分（预习报告内容）：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：实验目的：1、掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法2、掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法3、掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法4、掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法5、了解柱层析技术实验原理：1、蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。
2、不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。
利用这些性质的差别，可分离纯化各种蛋白质。
3、盐析法：盐析法是在蛋白质溶液中，加入无机盐至一定浓度或达饱和状态，可使蛋白质在水中溶解度降低，从而分离出来。
蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化膜减弱乃至消失。
中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，蛋白质分子之间聚集而沉淀。
4、离子交换层析:离子交换层析是指流动相中的离子和固定相上的离子进行可逆的交换，利用化合物的电荷性质及电荷量不同进行分离。
5、醋酸纤维素薄膜电泳原理：血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。
它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。
由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。
因此可以将它们分离为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。
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南方医科丈修 生物化学实验报告
姓 名:
专业年级: 组 别:
生物化学与分子生物学实验教学中心
t=r
方：
主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）:
XX
实验目的：1、掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法
2掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法
3、掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法
4、掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法
5、了解柱层析技术
实验原理：1、蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。
2、不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。
利用这些性质的差别，可分离纯化
各种蛋白质。
3、盐析法：盐析法是在蛋白质溶液中，加入无机盐至一定浓度或达饱和状态，可使蛋白质在
水中溶解度降低，从而分离出来。
蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲
和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化膜减弱乃至消失。
中性盐加入蛋白质溶液后
由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，蛋
白质分子之间聚集而沉淀。
4、 离子交换层析：离子交换层析是指流动相中的离子和固定相上的离子进行可逆 的交换，利
用化合物的电荷性质及电荷量不同进行分离。
5、 醋酸纤维素薄膜电泳原理：血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4 它们在
pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。
由于血清中 各种蛋白质分子大
小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电
泳的速度也不同。
因此可以将它们分离为清蛋白（ Albumin ）、a 1-球蛋白、a
2-球蛋白、B -球蛋白、丫 -球蛋白5条区带。
实验材料：人混合血清 葡聚糖凝胶（G-25）层析柱
DEAE 千维离子交换层析柱
饱和硫酸铵溶液
实验流程：盐析（粗分离）一葡聚糖凝胶层析（脱盐）—DEAE 千维素离子交换层析（纯化）—
醋酸纤维素薄膜电泳（纯度鉴定）
实验步骤:
盐析+凝胶柱层析除盐:
醋酸铵缓冲溶液
1%BaQ 溶液
20%
磺基水杨酸
氨基黑染色液 漂洗液 pH8.6
电泳仪、电泳槽
巴比妥缓冲溶液
（二）离子交换层析（纯化）
（三）醋酸纤维素薄膜电泳:
1、点样（如下
图）
点样线尽量点得细窄而均匀，宁少勿多
2、电泳：
①薄膜粗面向下
②点样端置阴极端
③两端紧贴在滤纸盐桥上，膜应轻轻拉平
电压：110V
时间：50min
3、染色和漂洗：
电泳完毕后，关闭电源，将膜取出，直接浸于染色液中5mi n。
取出膜，尽量沥净染色液，移入漂洗液中浸洗脱色（一般更换2次），至背景颜色脱净为止。
取出膜，用滤纸吸干即可。
注意事项：
1、所用血清应新鲜，无沉淀物及细菌滋生。
2、使用时勿将各时段所应用的溶液浓度弄错。
3、上样时，滴管应沿柱上端内壁加入样品，动作应轻、慢，勿将柱床冲起。
流洗平衡时亦
应如此。
4、洗脱时应注意及时收集样品，切勿使蛋白质峰溶液流失，并注意层析柱不要流干，进入空气。
5、切勿将检测蛋白质的磺基水杨酸与检查SQ2-的BaCb混淆，因二者与相应物质生成的沉淀均为
白色。
6葡聚糖凝胶价钱昂贵，要回收再生，避免损耗，严禁倒掉！
【实验报告第二部分（实验记录）：①主要实验条件（如材料的来源、质量；试剂的规格、用量、浓度；实验时间、操作要点中的技巧、失误等，以便总结实验时进行核对和作为查找成败原因的参考依据）：②实验中观察到的现象（如加入试剂后溶液颜色的变化）；③原始实验数据。
评
分（满分20分）：XX
主要实验条件：
1、0.3mol/LpH6.5醋酸铵（NHAQ缓冲液：称取NHAC23.12g，加蒸馏水800ml溶解，滴入稀氨水或
稀醋酸液（注意混合均匀），调节pH至6.5后，补加蒸馏水至1000ml。
2、0.06mol/LpH6.5 NH 4AC缓冲液：取上液用蒸馏水做5倍稀释。
3、0.02mol/LpH6.5 NH 4AC缓冲液：取上液用蒸馏水做3倍稀释。
4、1.5mol/L NaCl-0.3mol/L NH 4AC溶液：称取NaCI87.7g 溶于0.3mol/LpH6.5 NH 4AC溶液中至
1000ml。
5、饱和硫酸铵溶液：称取固体（NH）2SO850g加入1000ml蒸馏水中，在70-80 C下搅拌促溶，室温
中放置过夜，瓶底析出白色结晶，上清液即为饱和硫酸溶液。
实验现象：
饱和硫酸铵加入到血清后有沉淀生成，沉淀呈米黄色，上清液呈淡黄色。
原始实验数据：
将3条经染色的醋酸纤维素薄膜并列，使点样线位于同一水平，以正常血清蛋白图谱为对照，观察提
纯的物质属哪种蛋白。
所得的照片如下图：
精品文档
清蛋白策一管
清蛋白第二管
Y ■球蛋白
血清清蛋白、丫 -球蛋白纯度鉴定的电泳图谱
【实验报告第三部分（结果与讨论）：①结果（定量实验包括计算）：应把所得的实验结果（如 观察现
点样线
A
象）和数据进行整理、归纳、分析、对比，尽量用图表的形式概括实验的结果；②讨论：不应是实验结果的重述，而是以结果为基础的逻辑推论。
③结论：简单扼要，说明本次实验所获得的结果。
（包括思考题）。
评分（满分45分）:
XX
结果：从电泳图谱中可以看出，清蛋白第一管和清蛋白第二管的蛋白质与血清的清蛋白电泳图谱几乎一致，可以确定管内的蛋白质为清蛋白，同理球蛋白管内的蛋白质为丫-球蛋白。
讨论：清蛋白第1、2管均含有少量杂质，丫-球蛋白管中的丫-球蛋白纯度较低，导致最终的电泳图谱与血清的电泳图谱有略微偏差。
结论：本次试验所获得的结果基本与预期试验结果相一致。
思考题：
1. 硫酸铵盐析一步,为什么是0.8ml血清加0.8ml饱和硫酸铵?
答：因为清蛋白和球蛋白的盐析浓度不一样，使用半饱和硫酸铵溶液可以使球蛋白沉淀而清蛋白不沉淀，
0.8ml血清和0.8ml饱和硫酸铵混合可以形成半饱和硫酸铵溶液从而达到分离的目的。
2. 为什么实验中DEAE千维素柱分离丫-球蛋白后不用再生,可直接用于纯化清蛋白？
答：因为缓冲液都一样并且分离球蛋白后DEAE千维素柱的成分没有发生改变，可以继续用于纯化清蛋白。
3. 应用醋酸纤维素薄膜电泳鉴定分离纯化后的血清清蛋白和丫-球蛋白的纯度，根据什么来确
定它是清蛋白还是丫-球蛋白？判定它们纯度的依据是什么？
答：根据各自的电泳图谱与正常血清蛋白图谱作对照来确定它是清蛋白还是丫-球蛋白。
判定它
们纯度的依据是染色后颜色的深浅，深的说明纯度高，浅的说明纯度低。
精品文档。