大肠杆菌的分离和培养

（稀释）涂布分离法
1、玻璃刮刀放在酒精溶液中待用 2、取出时要经过灼烧 稀释10-5—10-7倍， 3、一般要稀释菌液进行培养 取0.1ml不同浓度的稀释液
4、大肠杆菌的培养和分离的过程
一 配制LB培养基,并灭菌 计算称量 溶解 调pH 分装 加塞，包扎 灭菌
二 倒平板、制斜面 三 大肠杆菌的培养 四 大肠杆菌的分离 使所需细菌大量繁殖 获得单菌落，纯化菌株
划线分离法（或涂布分离法） 五 斜面接种培养
目的菌株的纯培养和菌种保存
接种环（针） 接种 菌种管 接种在 固体培养基中
三角瓶（液体培养基）
实验2：分离以尿素为氮源的微生物
1.如何设计对照？ 2.如何把液体培养基配置成固体培养基？
3.如何完成菌液稀释？ 用什么液体来稀释菌液？ 4.用什么方法来分离这种微生物？ 5.该实验简单的设计思路是什么？
大肠杆菌的培养和分离 微生物简单介绍 病毒 细菌 放线菌 真菌 原生生物
放线菌
• 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖 时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定 形态结构的子细胞群体（种群） • 菌落是鉴定菌种的重要依据
• 结构 • 异养型，兼性厌氧型，革兰氏阴性(红色)(G-) • 应用
问题1：用什么培养大肠杆菌？
水
生长因子
调节促生长 维生素，Aa，碱基等
细菌中性偏碱，霉菌中性偏酸。
如鉴定分解尿素的细菌，在培养基中添加酚红， 产生红色反应。 LB液体培养基与LB固体培养基。
加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物
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防止温度过高，葡萄糖分解碳化 。
2、灼烧灭菌法
接种环、接种针
玻璃刮刀
3、干热灭菌法
160-170 ℃下加热1-2h。
4、G6玻璃纱漏斗过滤法
5、其他 三角瓶用封口膜、超净台操作（含紫外灯、过滤风） 在接种时要速度快
3、如何分离大肠杆菌 划线分离法 （平板划线分离法） ①培养皿倒置 ②划线的末端 出现不连续的 单菌落
KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4· 7H2O 葡萄糖 尿素
1.4 g 2.1 g 0.2 g 10 g 1 g
琼脂
15 g
将上述物质溶解后，用 蒸馏水定容到100 mL
（ （ 1 ）此培养基能否用于植物组织培养？ ）下列材料或用具：①培养细菌用的培养基与培养皿， 4 ）转为固体培养基时，常采用 的 65 ）实验结束后，使用过的培养基应该进行 , （ ②玻棒、试管、锥形瓶和吸管，③实验操作者的双手。 2）培养基中加入尿素的目的是 处理后，才能倒掉。 其中需要灭菌的是： 筛选 ，这种培养基属于 ；需要消毒的是： 。 （3）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中 的 和 ，实验需要振荡培养，原因是
例1、某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而 进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、 （1）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养 提供了 和 。除此之外， 培养基还必须含有的基本成分是 和 （2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是 。 （4 20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同 3）培养 ）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了 的菌落，这说明湖水样品中有 种细菌。一般说 湖水样品的平板置于 中培养，培养的温度设定 来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越 在37℃。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另 （ 5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐 一平板上接种 细菌，这种培养基被称为 。
问题2：在培养过程中如何进行维持无菌状态？ 消毒VS灭菌
较为温和的方法，如酒精
强烈，完全无菌
芽孢为细菌的休眠体， 对不良环境有很强耐受性
灭菌消毒技术是微生物有关工作中 最普通也是最重要的技术。
灭菌消毒技术大汇总 1、高压蒸汽灭菌法
1kg/cm2、121 ℃下维持15min. 0.5kg/cm2、90 ℃下维持30min.
培养基。
• 按照微生物对营养物质的不同需求，配制出 供其生长繁殖的营养基质。
液体培养基
凝固剂 琼脂
扩大培养，工业生产
固体培养基
分离纯化，鉴定菌种，计数，保藏
选择培养基 鉴定培养基 天然培养基 合成培养基
成分 碳源 氮源 无机盐
作用
主要作能源物质 合成含N类化合物 调节渗透压等
主要来源
无机碳(CO2) 或有机碳(糖类) N2，NH3，铵，硝酸盐 尿素，牛肉膏，蛋白胨