注射用水微生物限度检查方法验证

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GMP质量体系注射用水检验操作规程

GMP质量体系注射用水检验操作规程GMP质量体系是指药品生产质量管理体系，也称为药品GMP体系。

注射用水是医药生产过程中必须使用的一种原辅材料，其质量对于药品的安全性和有效性有着重要的影响。

为了确保注射用水的质量，需要建立相应的检验操作规程。

一、检验目的注射用水的检验目的是评价其是否符合注射用水的质量标准，以确保其在药品生产过程中的安全性和有效性。

二、检验范围注射用水的检验范围包括以下几个方面：1.外观检查：主要检查注射用水的色泽、透明度等外观特征。

2.pH值测定：使用酸碱度测定仪测定注射用水的pH值。

3.水分含量测定：采用滴定法或称重法测定注射用水的水分含量。

4.电导率测定：使用电导仪测定注射用水的电导率。

5.微生物限度测定：采用菌落计数法或其他方法测定注射用水中细菌菌落的数目。

三、检验仪器和试剂1.外观检查：肉眼2.pH值测定：酸碱度测定仪、标准pH溶液3.水分含量测定：烘箱、天平、无水甘油4.电导率测定：电导仪、标准电导液5.微生物限度测定：菌落计数器、琼脂培养基、无菌培养皿四、检验操作1.外观检查（1）取一定量的注射用水样品放置在透明容器中，观察其色泽和透明度。

（2）注射用水的色泽应无明显变色，透明度应为透明。

（3）记录观察结果。

2.pH值测定（1）取一定量的注射用水样品置于容器中。

（2）将酸碱度测定仪插入样品中，等待其稳定显示pH值。

（3）记录pH值。

（4）根据注射用水的质量标准判断其是否合格。

3.水分含量测定（1）将一定量的注射用水样品放置于烘箱中，温度设定为105°C，时间设定为2小时。

（2）取出样品，放置在无水甘油中冷却至室温。

（3）取样品的质量，使用以下公式计算水分含量：水分含量（%）=（初始质量-最终质量）/初始质量×100%。

（4）根据注射用水的质量标准判断其水分含量是否符合要求。

4.电导率测定（1）取一定量的注射用水样品放置于电导仪中。

（2）等待电导仪显示稳定的电导率值。

纯化水和注射用水微生物限度试验

纯化水和注射用水微生物限度试验1目的测试纯化水和注射用水中的细菌、霉菌和酵母菌的数量。

2测试依据2005版药典。

3测试要求纯化水：细菌、霉菌和酵母菌总数不得超过100cfu/ml。

注射用水；细菌、霉菌和酵母菌总数不得超过10cfu/100ml4工作环境100级洁净条件下局部100级单向流空气区域内，按无菌操作要求进行。

5器具和试剂取水容器、平皿、薄膜过滤器、滤纸、手提消毒锅、镊子。

营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基氯化钠蛋白胨缓冲液。

6取水样在制水装置的储水桶的出水口、回水口和用水终端处分别取样，纯化水各点取100ml，注射用水也分别各取100ml.7过滤、接种和培养用氯化钠蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，取纯化水1 ml加氯化钠蛋白胨缓冲液到100ml，混匀后过滤，用镊子取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基面上，用同法制备滤膜二张，分别贴于玫瑰红钠琼脂培养基和酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基上，细菌培养30℃，48小时，霉菌和酝母菌25℃培养72小时。

注射用水：将三个采样点采取的水样各100ml，分别过滤制备滤膜，菌面朝上分别贴于营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基上，细菌在30℃培养48小时，霉菌和酵母菌在25℃培养72小时。

8计数和报告用放大镜观察逐片计数，纯化水以每1ml供试品的菌落数为报告数，注射用水以100ml供试品的菌落数为报告数。

PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的配制1用途稀释液,冲洗液.2配方蛋白胨1.0g/l ,氯化钠4.3 g/l ,磷酸二氢钾3.5 g/l,磷酸氢二钠7.23 g/l。

3用法取本品质16.2xx,加蒸馏水(PH为6.6)1000ml,加热完全溶解后,校正PH值7.02,滤清、分装、灭菌。

倘若PH值偏差，用,磷酸二氢钾或磷酸氢二钠调节至7.02(灭菌后会降低0.02)。

联系电话。

微生物限度检验

微生物限度检验1概述：微生物限度检查方法包括直接接种法和薄膜过滤法。

饮用水，纯化水，注射用水、及其他完全溶解并能通过滤膜的样品，采用薄膜过滤法进行检查；精制卡介菌多糖核酸等其他不完全溶解或无法通过滤膜的样品，采用直接接种法进行检查。

2设备、仪器及用具2.1 设备净化工作台、生物安全柜、恒温培养箱(30～35℃)、霉菌培养箱(23～28℃)，恒温水浴锅、电热恒温鼓风干燥箱(180℃～300℃)、电冰箱、高压蒸汽灭菌器、365nm紫外灯、显微镜、集菌仪、薄膜过滤装置等。

2.2 用具2.2.1 玻璃器皿用前应洗涤干净,无残留抗菌物质。

于180℃干热灭菌2小时以上或250℃干热灭菌30分钟以上（仅适用于玻璃器皿或不锈钢用具），或高压蒸汽121℃湿热灭菌30min,50～60℃烘干备用。

2.2.3 无菌衣、帽、口罩、手套（洗净后配套,用牛皮纸包严）、移液管、试管、接种环、孔径0.45UM且直径50的微孔滤膜灭菌,备用。

也可用一次性无菌口罩、手套。

2.2.3 酒精灯、乙醇棉球、打火机、实验记录纸等。

2.2.4经灭菌处理的用具存放时间不超过48小时，否则需重新灭菌后方可使用。

3稀释液 PH7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液。

4培养基及试液4.1 细菌检查用酪蛋白大豆营养琼脂培养基。

4.2 霉菌、酵母菌检查用沙氏培养基、（玫魂红钠琼脂培养基）、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（YPD）。

4.3 大肠埃希菌检查用胆盐乳糖(BL)培养基、MUG培养基、营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基、靛基质试液、磷酸盐葡萄糖胨水培养基、枸橼酸盐培养基。

4.4 大肠菌群检查用乳糖胆盐发酵培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基。

4.5稀释液 0.9%氯化钠溶液或PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液4.6 培养基制备应注意:4.6.1 配制的培养基应测定PH值，确保灭菌后培养基的PH值符合相关培养基的要求。

(整理)注射用水纯化水检验规程

上海普济医疗器械制造有限公司注射用水(纯化水)检验指导书文件编号: PJ/JG-001版本：B修改状态：0受控状态：发布日期：实施日期：编写: 校对: 核准:1、引用标准中华人民共和国药典2010年版、GB14233.2-2005、GB14233.1-20082、检测仪器a)恒温水浴锅：b)干烤箱:c)恒温培养箱：d)电子天平：e)PH计：f)霉菌培养箱：3、检查要求及检测规程3.1 性状取适量本品，置试管中，目视观察应为无色澄明液体，无臭、无味。

3.2酸碱度测定3.2.1 纯化水: 取本品10ml，加甲基红指示液2滴，不得显红色，另取10ml，加溴麝香草酚蓝指示液5滴，不得显蓝色。

3.2.2 注射用水:取本品100mL,加饱和氯化钾溶液0.3mL, 按PJ/SG026-011 1/0《pHS-3C型酸碱度计操作规程》测定供试溶液的PH值，记录检测结果。

正常范围应为5.0~7.0。

3.3 硝酸盐1) 取30mL试管两只。

其中1支加本品5ml，作为测定管；另1支中加标准硝酸盐溶液0.3mL，加无硝酸盐的水4.7mL，作为标准管。

2) 置两管于冰水浴中冷却，向两试管中各加入10%氯化钾溶液0.4mL与0.1%二苯胺硫酸溶液0.1mL，摇匀。

缓缓滴加硫酸5ml，摇匀，将两支试管于50℃水浴中放置15分钟。

3) 比较两管的颜色，样品管不得比标准管更深。

（0.000 006%）。

3.4亚硝酸盐1) 取30mL试管两只，其中一管加入本品10mL，作为测定管；另一管加入标准亚硝酸盐溶液0.2mL，加无亚硝酸盐的水9.8mL，作为标准管。

2) 向两管中都加入对氨基苯磺酰胺的稀盐酸溶液（1→100）1mL与盐酸萘乙二胺溶液（0.1→100）1mL。

3) 比较两管的颜色，样品管不得比标准管更深。

（0.000 002%）3.5氨纯化水取两支50ml纳氏管，其中一管加入50ml本品，作为测定管；另一管加氯化氨溶液（浓度31.5μg/ml）1.5ml，加无氨水48ml，作为标准管。

注射用水内毒素检验方法验证方案

注射用水细菌内毒素检验方法验证方案1.0目的该方案确认制定的注射用水细菌内毒素检验方法适用于本公司微生物实验室对注射用水细菌内毒素的检验，方法能够提供一致、可信和准确的细菌内毒素检验结果。

2.0范围该方案适用于公司注射用水细菌内毒素检验方法的验证。

3.0名词定义BET：细菌内毒素测试(Bacterial Endotoxins Test)EU：内毒素单位，1EU=1IUλ：鲎试剂标示灵敏度MVD：最大有效稀释倍数4.0描述4.1验证方法：中国药典<1143>细菌内毒素检查法；4.2验证用注射用水：取注射用水检测点的新鲜注射用水；5.0接受标准注射用水细菌内毒素限度标准：＜0.25EU/ml6.0验证内容6.1验证前的准备：6.1.1验证器具准备➢将内毒素反应试管及取样三角瓶放入铬酸洗液中充分浸泡，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用纯化水反复冲洗，晾干后放入不锈钢方盘或用锡箔纸包好后再放入不锈钢方盘内，置于干热灭菌烘箱。

➢将干热灭菌烘箱温度设定为250℃，灭菌时间设定为1h，开启灭菌程序，灭菌程序结束待灭菌烘箱温度降至室温。

6.1.2主要仪器设备/试剂、对照品：设备：细菌内毒素检测仪、干热灭菌烘箱、医药冷藏箱试剂、对照品：细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素检查用水、鲎试剂细菌内毒素工作标准品：以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于干扰试验及检查法中阳性及供试品阳性溶液的制备、鲎试剂灵敏度复核试验。

细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml(用于凝胶法），且对内毒素试验无干扰作用。

6.2验证过程：6.2.1鲎试剂灵敏度复核鲎试剂灵敏度复核的目的不仅是考察鲎试剂的灵敏度是否准确，也是考察检验人员操作方法是否正确及试验条件是否符合规定。

实验室在使用一批新的鲎试剂进行细菌内毒素检查前必须进行鲎试剂灵敏度复核试验。

6.2.1.1 内毒素标准溶液的制备：取内毒素工作标准品一支，加入1ml 内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15min 。

注射用水系统验证方案

**制药公司注射用水系统验证方案目录一、概述二、验证范围与目的三、相关文件四、验证内容1．仪器、仪表的校正2.设计确认3.管道的安装确认4.注射用水储罐及管道的清洗确认。

5.注射用水储罐及管道的钝化确认。

6.注射用水输送管道的消毒确认7．运行确认8.水质监控及检验周期确实认9.注射用水储罐及管道消毒周期确实认10.管道保温循环效果验证五、偏差和漏项六、验证周期七、验证方案审批表**公司位号W-30401设备净重1850kg注射用水系统验证方案一、概述：车间生产用注射用水由***制药机械设备公司制备供给，根本工艺流程是：纯化水→3µ 过滤柱过滤→纯化水贮罐→纯化水泵→多效蒸馏水机→注射水贮罐→泵→0.22µm 除菌过滤 →使用点→注射用水贮罐〔输送注射用水到使用点的管道承受双回路循环〕。

该系统包括蒸馏水机 1 台，纯化水贮罐 1 台，纯化水泵 1 台，冷却水泵 1 台，注射水贮罐 1 台，注射水泵 1 台，列管式换热器 2 台，0.22μm 30 寸过滤柱 3 只，0.22μm 疏水性的除菌通气呼吸器 2 个。

主要设备根本状况如下： 1、多效蒸馏水机 1 台设计压力工作温度2、注射水贮罐 0.6 MPa <160℃工作压力厂家 0.3-0.55 MPa****制药机械设备公司位号 V-30403 材质不锈钢 SS316L公称容积 3000L厂家****制药机械设备公司设计压力 0.30 MPa 最高工作压力 0.25 MPa 耐压试验压力0.38 MPa温度144℃设备的使用说明书及有关档案保存在质量部。

该制备系统 2023 年月安装阅历证合格后投入使用，且进展过再验证，验证结果说明制水系统运行稳定，水的质量符合《中国药典》注射用水质量标准，满足工艺需求。

车间干净室内的注射用水管道经重安装，本次验证在对制水局部和使用点进展性能确认前，对干净室内的注射用水管道进展材质和安装确实认。

制药用水微生物检查方法的验证

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验证方法
菌液制备 50～100cfu/ml。验证方法试验组、菌液组、供试品对照组、释剂对照组。结果判断供试品组、对照组、稀释剂对照组的菌回收率
均不低70% 。
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验证方法 ⑴按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。 ⑵对各试验菌的回收率应逐一进行验证。 ⑶验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。
7
细菌的繁殖细菌（bacterium）属于原核细胞型微生物，其特点是具有细胞壁、原始的核质，以二分裂方式繁殖。
8
细菌的形态 ⒈细菌体积微小，是无色半透明的，用肉眼直接观
察难以看到，其结构和形状须经过显微镜放大数百倍至上千倍才能观察。 ⒉一般以微米（µ m）作为测量单位。 ⒊在细菌学中，按其形态可分为球菌、杆菌、弧菌和螺杆菌。 ⒋经革兰染色法（Gram stain）可将细菌分成两大
15
霉菌菌落形态 16
霉菌在孟加拉红培养基上的形态 17
酵母菌显微镜下形态 18
微生物检查法
微生物限度检查方法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。检查方法多用平皿法、薄膜过滤法、涂抹法和 MPN 法。
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检查方法的验证
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检验结果的影响因素
⒈供试品的组分
⒉环境影响 ⒊检验方法 ⒋检验条件
抑菌剂、增溶剂、乳化剂及抗氧化剂，这些组分在一定浓度下对微生物起一定的抑制作用也可对污染菌造成损伤。不同类型的微生物及不同的存活状态对环境的抗性是不同的。
如培养基的质量、检验人员的操作误差等。
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试验全方面验证如试验环境，培养基，供试液的制备，灭菌方法等全部进行验证。当验证试验符合要求时，就可认为在该试验条件下该供试品对微生物无抑菌作用或抑菌作用可忽略不计，供试品检验结果可真实的体现。

注射用水微生物限度检查方法验证

注射用水微生物限度检查方法验证方案文件编码：注射用水微生物限度检查方法验证目录1、注射用水微生物限度检查方法验证计划2、注射用水微生物限度检查方法验证小组3、注射用水微生物限度检查方法验证方案4、注射用水微生物限度检查方法验证培训记录5、注射用水微生物限度检查方法验证附属记录6、注射用水微生物限度检查方法验证报告7、注射用水微生物限度检查方法验证合格证书注射用水微生物限度检查方法验证计划根据我公司认证领导小组的要求及验证委员会的安排，对注射用水微生物限度检查方法进行验证，具体安排如下：一、年月日—年月日，制定验证方案，由注射用水微生物限度检查方法验证小组组长负责起草。

二、年月日—年月日，验证方案讨论、修改、审批和培训。

三、年月日—年月日，验证工作实施。

四、年月日—年月日，根据验证情况与记录，书写验证报告。

五、年月日—年月日，验证报告审核批准，合格证发放。

注射用水微生物限度检查方法验证小组组长：成员：一、目的《中华人民国药典》2010版二部规定注射用水微生物限度检查采用薄膜过滤法，确认该方法适合于本公司注射用水中细菌、霉菌及酵母菌数测定。

二、适用围本公司注射用水中细菌、霉菌及酵母菌的测定。

三、容1.概述当建立微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌的计数方法验证，已确认所采用的方法适合于该产品的细菌、霉菌及酵母菌的测定。

若产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。

2.验证项目及认可标准对各试验菌的回收率逐一进行验证，试验组的菌回收率不得低于70%（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率）。

3.验证依据《中华人民国药典》2010版二部附录XI J微生物限度检查法。

4.验证方法与容4.1.验证方法采用薄膜过滤法进行细菌、霉菌及酵母菌的测定。

4.2.验证试验分3组，至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算供试品组和对照组试验的菌回收率。

001纯化水、注射用水微生物限度检查方法学的验证方案剖析

STP-ZK-YZ-FA-001－01纯化水、注射用水微生物限度检验法方法验证方案焦作市民康药业有限公司验证小组成员、培训情况列表组长部门姓名岗位中心化验室小组成员部门姓名岗位中心化验室中心化验室中心化验室方案培训人部门岗位培训人培训日期中心化验室验证方案培训情况列表部门岗位受培训人日期中心化验室中心化验室中心化验室培训效果评价目录1.目的........................................................................... 错误！未定义书签。

2.范围........................................................................... 错误！未定义书签。

3.参考文件................................................................... 错误！未定义书签。

4.人员职责................................................................... 错误！未定义书签。

5.文件确认................................................................... 错误！未定义书签。

6.验证仪器校准的确认............................................... 错误！未定义书签。

7.验证内容................................................................... 错误！未定义书签。

8.结论........................................................................... 错误！未定义书签。

注射用水验证方案

注射用水验证方案注射用水是指供给医疗机构和个人进行注射和溶剂制剂等操作使用的水。

它对于保障病人的健康和安全至关重要，因此需要进行严格的验证和监测。

下面将介绍一种注射用水验证方案，以确保注射用水的质量和纯净度。

首先，需要建立一个合适的注射用水质量标准，以确定注射用水的质量要求。

这可以参考国家药典或行业标准，包括对微生物限度、化学物质残留和含量、有机物含量等指标的要求。

同时，需要考虑到不同类型的药物制剂对注射用水质量的特殊要求。

其次，建立一套合适的注射用水生产工艺。

这包括源水处理、净化、消毒等环节。

源水处理可以通过多种方法实现，如过滤、气浮、净化膜等，以去除悬浮物、细菌、病毒等杂质。

净化环节可以采用离子交换、反渗透、臭氧消毒等技术，以去除溶解物、细菌、有机物等。

消毒环节可以采用紫外线辐射、臭氧消毒、电解消毒等方法，以确保水质的无菌性。

然后，制定符合标准的注射用水取样和检测方法。

取样要求按照一定的频率和数量进行，以保证样品的代表性。

检测方法可以采用物理、化学和生物学方法，包括pH值、电导率、溶解氧、微生物检测等。

对于特殊要求的药物制剂，还需要进行特殊的检测，如重金属、有机污染物等。

对注射用水进行监测和记录。

监测可以分为常规监测和定期复查。

常规监测可以通过自动监测设备进行，以确保水质的稳定性。

定期复查可以通过委托第三方实验室进行，以验证监测结果的准确性。

监测结果需要记录并保存一定的时间，以备查和追溯。

建立一个注射用水质量管理体系。

包括注射用水生产和监测的标准化管理，人员培训和考核，设备和仪器的维护和校准等。

同时，还需要建立问题处理和质量改进的机制，以及风险评估和控制措施，以确保注射用水质量的稳定和持续改进。

最后，建立注射用水的调查和追溯机制。

一旦发现注射用水质量问题，需要立即进行调查并采取相应的措施，以确保病人的安全。

同时，还需要对注射用水的历史记录进行追溯，以找出问题的根源，避免类似问题再次发生。

总之，注射用水验证方案是一个综合性和系统性的体系工程，需要建立一套完整的管理制度和技术措施，以确保注射用水质量的安全和可靠。

纯化水、注射用水微生物检验方法确认

纯化水、注射用水微生物检验方法学验证方案（VP）文件编号：VP—JY-0026—01项目名称：纯化水、注射用水微生物检验方法学验证目录1 引言 (4)1.1 验证实施进度计划 (4)1.2 概述 (4)2 验证所需设备清单 (4)3 验证人员、职责 (4)3.1 项目验证小组成员 (4)3。

2 验证变更 (4)3。

3 验证培训 (4)4 验证目的 (5)5 验证内容 (5)5。

1 培养基配制 (5)5.2 菌种 (5)5。

3 菌液的制备 (5)5。

4 薄膜过滤法检测微生物 (6)5。

5 结果评价 (7)6 验证过程中的偏差及处理 (7)7 验证结果的评定与结论 (7)8 附件 (8)1 引言1。

1 验证实施进度计划实施时间计划安排在年月日至年月日。

1。

2 概述通过验证以确认R2A适用于薄膜过滤法检验纯化水、注射用水微生物。

根据培养基及验证菌的特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。

若符合，则R2A可用于薄膜过滤法检验纯化水、注射用水微生物。

2 验证所需设备清单2。

1。

XG1。

D脉动真空灭菌器2。

2. MJ—250—I型霉菌培养箱 (20～25℃）2.3. LPH—250生化培养箱 (30～35℃)2.4. WG11-230BE电热鼓风干燥箱2。

5. 微波炉3 验证人员、变更及培训3。

1 项目验证小组成员项目验证小组由中心化验室微生物检验员、质检员、化验室主任、质量管理部经理等组成，由化验室主任任项目验证组组长，验证小组成员见附表1，具体分工、职责如下：3。

2 验证变更验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写《验证方案变更申请及批准书》(附件2），报验证领导小组批准后执行。

3.3 验证培训验证过程中，确认方案以及验证中应该掌握的技能应该进行培训，培训应遵循《员工培训管理规程》.培训情况记录于附件3。

4 验证目的与适用范围4.1 验证目的根据《中国药典》2015版四部1105项下微生物检查法的规定，验证纯化水、注射用水微生物检查方法的适用性,即确认检品、所设定的检验条件及检验程序对供试品中可能存在的各类微生物无抑制作用,其方法可行有效。

纯化水、注射用水微生物检验方法确认

纯化水、注射用水微生物检验方法学验证方案（VP）文件编号：VP-JY-0026-01项目名称：纯化水、注射用水微生物检验方法学验证目录1 引言 (4)1.1 验证实施进度计划 (4)1.2 概述 (4)2 验证所需设备清单 (4)3 验证人员、职责 (4)3.1 项目验证小组成员 (4)3.2 验证变更 (4)3.3 验证培训 (4)4 验证目的 (5)5 验证容 (5)5.1 培养基配制 (5)5.2 菌种 (5)5.3 菌液的制备 (5)5.4 薄膜过滤法检测微生物 (6)5.5 结果评价 (7)6 验证过程中的偏差及处理 (7)7 验证结果的评定与结论 (7)8 附件 (8)1 引言1.1 验证实施进度计划实施时间计划安排在年月日至年月日。

1.2 概述通过验证以确认R2A适用于薄膜过滤法检验纯化水、注射用水微生物。

根据培养基及验证菌的特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。

若符合，则R2A可用于薄膜过滤法检验纯化水、注射用水微生物。

2 验证所需设备清单2.1. XG1.D脉动真空灭菌器2.2. MJ-250-I型霉菌培养箱 (20～25℃)2.3. LPH-250生化培养箱 (30～35℃)2.4. WG11-230BE电热鼓风干燥箱2.5. 微波炉3 验证人员、变更及培训3.1 项目验证小组成员项目验证小组由中心化验室微生物检验员、质检员、化验室主任、质量管理部经理等组成，由化验室主任任项目验证组组长，验证小组成员见附表1，具体分工、职责如下：3.2 验证变更验证过程应严格按照本方案规定的容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写《验证方案变更申请及批准书》(附件2)，报验证领导小组批准后执行。

3.3 验证培训验证过程中，确认方案以及验证中应该掌握的技能应该进行培训，培训应遵循《员工培训管理规程》。

培训情况记录于附件3。

4 验证目的与适用围4.1 验证目的根据《中国药典》2015版四部1105项下微生物检查法的规定，验证纯化水、注射用水微生物检查方法的适用性，即确认检品、所设定的检验条件及检验程序对供试品中可能存在的各类微生物无抑制作用,其方法可行有效。

注射用水微生物限度检查新方法

注射用水微生物限度检查新方法摘要：在符合药典要求下，对原有注射用水微生物限度需氧菌检验方法进行优化并对优化后的检验方法进行确认。

药品微生物限度检查主要是检查药品中非规定灭菌剂及原料辅料中微生物污染的情况，它主要是检测活体微生物的数量是否在规定的范围内，方法：在样品取样量不变的情况下，改变冲洗剂量查看检测结果是否有变化。

结果：验证过程顺利，利用薄膜过滤法确定纯化水、注射水以及纯蒸汽检验方法按照新方法执行对检测结果无影响。

结论：新方法在污染菌的检出率较现行方法不变的前提下，在检验效率以及费用上有显著提高。

关键词：注射用水、微生物限度、薄膜过滤法、提高效率。

引言：药品：依据《中华人民共和国药典》相关法规进行检测。

药品生产用水的质量直接影响到药品的质量，因此注射用水的质量控制，特别是微生物学指标的控制极其重要。

企业在建立微生物污染监测方法时，需要从方法的灵敏度、污染菌检出率、样本量、培养时间、费用以及技术的复杂性等方面去综合评价，找到最适宜的方法并长期追踪。

.一、抗菌药物微生物限度检查中的完整性分析检测应该在环境洁净度，局部洁净度达到百级的单向流的空气区域内进行。

在检测的过程中要求全程进行无菌操作，避免发生污染，以免干扰检测结果。

检测室要定期进行清洁，洁净检测室内设置空气净化系统，环境中的悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的数量要达到国家的洁净度标准。

洁净检测室内不能进行阳性菌株的相关实验检测，其应在固定的阳性菌检测室进行实验检测。

（1）仪器与材料：生物安全柜（BIOBASE），1XG1.C型普通卧式压力蒸汽灭菌器（山东新华医疗器械股份有限公司）；薄膜过滤器（德国赛多利斯公司）；0.45μm无菌滤膜（泰林生物）。

验证用供试品注射用水：选取三个点位的注射用水。

三个点位的纯蒸汽。

验证用玻璃器具：电烘箱烘干，仪器中于121℃灭菌30分钟后方可使用，仪器：镊子、100ml滤杯，100ml量筒。

验证用培养基及缓冲液：胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）；沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）；沙氏葡萄糖液体培养基（SDB）；胰酪大豆胨液体培养基(TSB)；pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨(SCB)；R2A琼脂培养基(R2A)；含0.05％（v/v）聚山梨酯80 的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨。

(微生物限度)注射用水

注射用水质量检验原始记录记录编码：R-SOP02-0193-01记录版本：01
记录页码：
（一）概述及合格标准：
除另有规定外，取供试品200ml，用薄膜过滤法处理后，将滤膜菌面朝上贴于已凝固的营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基上，倒置培养。

细菌置30-35℃培养3天，霉菌、酵母菌置23-28℃培养5天，逐日观察菌落生长情况，点计菌落数。

必要时可适当延长培养时间至7天进行菌落计数并报告。

细菌、霉菌和酵母菌总数每100ml不得过10个。

（二）试剂及仪器：
营养琼脂培养基配制人：批号：
玫瑰红钠琼脂培养基配制人：批号：
洁净工作台型号：编号：
电动吸引器型号：编号：
房间温度：℃湿度： %
（三）操作：
取本品 ml，用薄膜过滤法检查。

检测数据：细菌、霉菌及酵母菌总数为。

检验结论：
检验人：复核人：
日期：日期：。

制药用水微生物限度检查

1．饮用水⑴取样于500ml玻璃瓶中加入2毫升1.5%硫代硫酸钠溶液，加盖后高压蒸汽灭菌。

（121℃，30分钟）。

取样前，先用酒精灯将水龙头烧灼消毒，然后把水龙头完全打开，放水1～3分钟后取样。

⑵细菌数检查（不得过100个/ml）①以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15ml 已融化并冷却至45℃左右的营养琼脂培养基，每个水样应倾注二个平皿，待培养基冷却后将平皿置于37℃恒温箱内培养24小时。

②菌落计数按微生物限度检查法菌落计数项进行计数。

③菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。

⑶大肠菌群（不得检出）①取10ml水样接种到10ml双料乳糖蛋白胨培养液中，取1ml水样接种到10ml单料乳糖蛋白胨培养液中，另取1ml水样注入到9ml灭菌生理盐水中，混匀后吸取1ml（即0.1ml 水样）注入到10ml单料乳糖蛋白胨培养液，每一稀释度接种5管。

对已处理过的出厂自来水，可直接种5份10ml水样双料培养基，每份接种10ml水样。

②分离培养将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，于36℃±1℃培养箱内培养18h～24h，观察菌落形态，挑取符合下列特征的菌落作革兰氏染色，镜检和证实实验。

深紫黑色，具有金属光泽的菌落；紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落；淡紫红色，中心较深的菌落。

③证实实验经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，同时接种乳糖蛋白胨培养液，置36℃±1℃培养箱中培养18h～24h，有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在。

④结果报告根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100ml水样中的总大肠菌群最可能数（MPN）值。

5管法结果见表表2 用5份10ml水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数（MPN）2.纯化水⑴测定：取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，取10ml，照薄膜过滤法，过滤，取出滤膜，菌面朝上，分别贴于营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基平板上培养，每种培养基至少制备一张滤膜。

注射用水内毒素检验方法验证方案

2.0范围该方案适用于公司注射用水细菌内毒素检验方法的验证。

➢将干热灭菌烘箱温度设定为250℃，灭菌时间设定为1h，开启灭菌程序，灭菌程序结束待灭菌烘箱温度降至室温。

细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml(用于凝胶法），且对内毒素试验无干扰作用。

实验室在使用一批新的鲎试剂进行细菌内毒素检查前必须进行鲎试剂灵敏度复核试验。

6.2.1.1 内毒素标准溶液的制备：取内毒素工作标准品一支，加入1ml 内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15min 。

注射用水微生物限度检查方法验证

注射用水微生物限度检查方法验证1.检测方法的准确性验证：首先，应选择适当的注射用水样品，根据检测目标微生物的特性和所需的灵敏度选择合适的培养基和培养条件。

然后，通过添加已知数量的目标微生物到待测样品中，进行平行试验，并重复多次，以评估方法的准确性。

2.检测方法的灵敏度验证：为了确定方法的灵敏度，可以分别添加不同数量的目标微生物到注射用水样品中，然后使用验证方法进行检测。

通过计算检出限和灵敏度等参数，评估方法的灵敏度和可靠性。

3.检测方法的特异性验证：为了验证方法的特异性，可以将不同种类或菌属的微生物添加到注射用水样品中，并使用验证方法进行检测。

通过观察检测结果，评估方法对非目标微生物的反应情况，确定方法的特异性。

4.检测方法的可重复性验证：为了评估方法的可重复性，可以选择不同的操作人员，使用同一批次注射用水样品，采用相同的操作步骤和条件，进行重复性试验。

通过统计分析结果，评估方法的可重复性和一致性。

5.检测方法的应用性验证：6.检测方法的稳定性验证：为了评估方法的稳定性，可以将待测样品在不同的温度和时间条件下进行保存，然后使用验证方法进行检测。

通过比较结果的一致性和可靠性，评估方法的稳定性。

在进行以上验证时，需要确保所有实验人员都经过充分的培训，并严格按照验证方案进行操作。

此外，还应注意样品的收集、保存和处理方法，并进行相应的质量控制措施，以确保验证结果的准确性和可靠性。

总结而言，注射用水微生物限度检查方法的验证是为了评估方法的准确性、灵敏度、特异性、可重复性、应用性和稳定性等指标，以确保检测结果的准确性和可靠性。

这一过程对于保证注射用水的质量和安全性具有重要的意义。

欧洲药典注射用水检验规程

目的使注射用水的检验操作标准化、规范化，保证注射水的质量，从而保证产品质量。

范围适用于注射用水的检验职责由化验室起草；部门经理及相关人员审核；质量总监批准；化验员执行。

内容1编制依据EP7.02定义通常用作溶剂(散装注射用水)来溶解、稀释物质或作为非肠道注射准备用水(无菌注射用水)的药物非肠道给药的准备用水3执行标准《注射用水质量标准》。

4性状本品为无色的澄明液体。

5检查5.1硝酸盐5.1.1仪器与装置：量筒、试管、移液管、水浴锅。

5.1.2试剂与试液：标准硝酸盐溶液、10%氯化钾溶液、0.1%二苯胺硫酸溶液、硫酸。

标准硝酸盐溶液：取硝酸钾0.163g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，再精密量取1ml，加水稀释成100ml，摇匀，再精密量取20ml，加水稀释成100ml，摇匀，即得（每1ml相当于2μgNO3-）。

5.1.3测定方法：取本品5ml置试管中，于冰浴中冷却，加10%氯化钾溶液0.4ml与0.1%二苯胺硫酸溶液0.1ml，摇匀，缓缓滴加无氮硫酸5ml，摇匀，将试管于50℃水浴中放置15分钟，溶液产生的蓝色与标准硝酸盐溶液（2ppm NO3），加无硝酸盐的水4.5ml，用同一方法处理后的颜色对比，不得更深。

5.1.4结果判定：不超过0.2ppm。

5.2电导率5.2.1电导计：最低限的分辨率为0.1μS·cm-1，准确度：±3%，温度测量：±2℃。

5.2.2步骤阶段一1.用非温度补偿或温度补偿的电导仪测定水的温度和电导率，在适当的容器中测量或在线测量。

2.在表0169- 2中找到最接近的温度的值不能大于实测温度。

以相应的温度电导率值为限值。

3.如果测量电导率不大于表0169-2中的值，则水要符合表0169-2中的电导率限值。

如果电导率高于表0169-2中的值则继续进行阶段二。

表0169-2. -温度和电导率要求（非温度补偿电导率测量）温度（℃）电导率（μS·cm-1）0 0.6 5 0.8 10 0.9 15 1.0 20 1.130 1.435 1.540 1.745 1.850 1.955 2.160 2.265 2.470 2.575 2.780 2.785 2.790 2.795 2.9100 3.1阶段二4.取至少100毫升样品到一个合适的容器中，搅拌样品。