卟啉

卟啉荧光素二元化合物体外清除活性氧自由基及抑制氧化损伤的作

作者：陆家政，杜一凡，韦国锋，李振中

【摘要】目的研究卟啉荧光素

二元化合物体外清除活性氧自基及抗氧化的作用。方法利用光照核黄素产生超氧阴离子自基O2-·和Fenton反应产生羟自基·OH，用分光光度法测定卟啉荧光素二元化合物体外清除活性氧自基的作用，用硫代巴比妥酸( TBA)分光光度法研究卟啉荧光素对·OH诱发卵磷脂脂质过氧化和DNA氧化损伤的抑制作用。结果卟啉荧光素二元化合物能有效清除活性氧自基，对卵磷脂脂质过氧化

和DNA氧化损伤有显著抑制作用。结论卟啉荧光素二元化合物是一种良好的

体外抗氧化剂。

【关键词】卟啉荧光素；活性氧

自基；抗氧化；体外

Abstract:Objective Study the scavenging effects of porphyrin

fluorescein hybrid on scavenging of reactive oxygen species and inhibition of oxidative damages in vitro. Methods The scavenging effects of porphyrin

fluorescein hybrid on reactive oxygen species·OH and O2-· generated by Fenton reaction and riboflavin photosensitization were investigated by the means of spectrophotometry. And the inhibition effects of porphyrin fluorescein hybrid

on lipid peroxidation in the presence of lecithin and oxidation damage of DNA

chain induced by hydroxyl radical were observed by spectrophotometry with thiobarbituric acid. Results The results showed that porphyrin fluorescein hybrid could scavenge reactive oxygen species efficiently. It could also significantly inhibit lipid peroxidation in the presence of lecithin and oxidation damage of DNA by hydroxyl radical. Conclusion The porphyrin fluorescein hybrid was an effective antioxidant in vitro.

Key words:porphyrin fluorescein hybrid; active oxygen; antioxidation; in vitro

卟啉及其衍生物作为高等植物或光合细菌叶绿素分子的结构类似物，在光合作用、生命过程中起着重要的作用。另一方面，荧光素及其衍生物在结构上具有的特殊性导致了其物理化学性质具

有某些特殊性。这类化合物在一定的介质中呈强烈的荧光，常常被用作指示剂及生物细胞染色剂，在医疗上荧光素可用于防癌的治疗，是一种防腐药和轻泻剂。某些过渡金属离子和荧光素的配合物，尤其是Cu(Ⅱ)、Zn(Ⅱ)、Co(Ⅱ)等的荧光素配位化合物具有抗癌的药理作用，而荧光素汞的配合物则具有防腐性能等［1-4］。荧光素及衍生物在生物学和医学上有极为重要的应用，目前仍是一类常用的荧光探针和诊断试剂。它是基于这类分子很强的荧光发射能力及其发光特性随环境而变化的特征。叶芳贵等［3］利用DNA 对荧光素(FL)中性

红(NR) 分子间荧光能量转移的抑制作用,以荧光素中性红为荧光探针,考察该探针与DNA 的结合反应,建立了准确测定DNA 的新方法。但卟啉荧光素二元化合物体外抗氧化作用的研究尚未见报道,本实验主要研究卟啉荧光素二

元化合物对活性氧自基的清除作用及对卵磷脂和DNA体外脂质过氧化抑制作用。

1 材料与方法

材料与仪器

卟啉荧光素二元化合物本实验室合成［1］，并以元素分析、UV vis、IR、1H NMR和ESI MS进行了表征；

硅胶G(柱层析用，青岛海洋化工厂)；CH2Cl2(AR,广州化学试剂厂)，在使用前按常规方法提纯；氯化硝基四氮唑兰(NBT)；芦丁标准品、蛋氨酸、鲱鱼精DNA；核黄素(VB2)、番红花红(Safranine T)、2硫代巴比妥酸(TBA)；三氯乙酸(TCA)；所用试剂均为分析纯。

Shimadzu UV3101 PC 光谱仪；

光照箱，自制, 35 cm×30 cm ×25 cm，光源为纯稀土节能灯，灯功率45 W,欧姆龙

公司；HH S8数显恒温水浴锅，低温

超速离心机。

方法

超氧阴离子自基的产生及清除活性测定

采用光照核黄素［5-7］的方法,用mol·L-1、pH=的PBS缓冲液为溶剂,配制×10-6 mol·L-1核黄素，mol·L-1蛋氨酸，×10-5 mol·L-1氯化硝基四氮唑兰(NBT)。分别取上述3种溶液各mL,加入各种浓度的卟啉荧光素(样品)溶液mL，空白

管以mL缓冲液代替样品溶液。置于光照箱中光照30 min，取出后以缓冲溶液为参比，于590 nm处测定溶液的吸光度。清除率按下式计算：A0为空白管的吸光度，A样为样品管的吸光度。

羟自基的产生及清除活性测定［4,8］

采用亚铁离子催化过氧化氢产生羟自基( Fenton反应)，该反应产生的羟自基可使番红花红褪色，针对这一特点来研究卟啉荧光素对羟自基的清除能力。取mol·L-1、pH 的磷酸缓冲溶液mL, 40 μg·mL-1番红花红mL, mmol·L-1 EDTA Fe (Ⅱ) (新鲜配制) mL, 不同浓度的卟啉荧光素(样品) mL，3% H2O2 mL (新鲜配制),混合后在37 ℃水浴中反应30 min, 在520 nm 处测定吸光度，以A样表示。空白组以mL蒸馏水代替样品，测定吸光度A0，对照组以mL蒸馏水代替H2O2 和样品，测定吸光度A，用mL蒸馏水代替番红花红、EDTA Fe (Ⅱ) 、H2O2 、样品，用mL磷酸盐缓冲溶液调零。按下式计算清除率: