实验四小白鼠骨髓染色体制备及观察
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作和观察-医学资料
可见中西医学，一个是以“功能人” 为概念 的独特 的哲学 医学理 论体系 ，一个 是以“ 解剖人 、肉体 人”为 概念的 新兴的 现代医 学科学 理论体 系，二 者都不 是以完 整人为 研究对 象的科 学，从 理论讲 二者都 不是科 学的， 势必影 响各自 发展。 事实也 证明这 一切， 中医长 期停滞 不前、 疗效也 不确实 。西医 尽管发 展到目 前的基 因分子 层次， 但疾病 发病率 居高不 下，对 绝大部 分疾病 发病原 因认识 不清、 发病机 理弄不 明白， 治疗受 到制约 ，在小 小SAR S、禽 流感面 前竟束 手无策 ，在糖 尿病、 癌症、 心脑血 管疾病 、尿毒 症等相 当多疾 病面前 更是不 得不求 助或借 助中医 治疗。 一个是 疗效不 确实， 一个是 有些甚 至相当 多疾病 无法治 疗，这 就是中 西医学 结合的 缘由。 然而， 由于二 者是两 套理论 、两股 道上跑 的车， 风马牛 不相及 ，从理 论上讲 就没有 结合的 可能， 只是形 式上的 融合罢 了。故 出现西 医对治 疗不了 的疾病 只好求 助中医 ，而中 医则往 往采用 西医诊 断中医 治疗， 以及中 西治疗 法一块 用的局 面。
遗传学实验
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作与观察
实验目的 实验原理 实验用品 实验步骤 绘图 思考题
实验目的
掌握动物骨髓染色体标本制备基 本程，了解操作步骤的原理
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是 生成各种血细胞和原始细胞，具有高 度的分裂能力，本实验采用这一材料， 通过前处理，低渗，固定，制片，染 色等步骤制得染色体标本，可观察到 许多处于分裂中期的染色体，可以进 行染色体组型分析。
实验用品
1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子
小白鼠染色体标本的制作染色与观察
小白鼠染色体标本的制作染色与观察染色体是生物体内的遗传物质DNA和蛋白质的组合体，通过对染色体的观察可以了解生物种群的遗传信息和进化变化。
染色体观察在遗传学、病理学等领域具有重要的应用价值。
本文将介绍小白鼠染色体标本的制作方法以及染色和观察的步骤。
1.小白鼠染色体标本的制作方法制作小白鼠染色体标本的过程主要包括取材、处理和固定等步骤。
（1）取材选择健康的小白鼠，尤其是发育期的小白鼠，取得其骨髓或肝脏等组织。
取材时要注意卫生和无菌操作，以保证样品的质量。
（2）处理将取得的骨髓或肝脏等组织放入离心管中，加入等体积的生理盐水悬浮液，并在其中加入适量的KCl溶液进行渗透，使细胞膜变得脆弱，易于裂解释放染色体。
（3）固定将处理后的细胞悬浮液滴到已经消毒的玻璃片上，然后迅速将玻璃片倾斜，让细胞悬浮液自然扩散开来。
待其固定后，用甲醛进行固定处理，固定时间一般为5-10分钟。
2.小白鼠染色体染色的步骤（1）裂解将固定的标本玻璃片在室温下迅速加热至约60℃的热板上，使染色体细胞裂解释放出染色体。
裂解时间一般为5-10分钟。
（2）染色将裂解后的细胞标本浸泡在浓度适当的染色液中，常用的染色液有乔治染色液、甲酸-吡啶染色液和乙酸酒精染色液等。
对于小白鼠染色体标本的染色，乔治染色液是较为常用的选择。
（3）洗涤染色后的标本需要进行洗涤步骤以去除多余的染色液和固定剂。
使用生理盐水或磷酸缓冲液进行反复洗涤，直到洗涤液清澈。
3.小白鼠染色体观察的步骤在染色体标本制作和染色之后，我们可以通过显微镜进行小白鼠染色体的观察，并对染色体进行测量和特征描述。
（1）显微镜观察将染色后的标本玻璃片固定在显微镜载玻片上，使用显微镜进行观察。
观察过程中可以选择不同倍数的镜头以获得更详细的图像。
（2）测量和特征描述通过观察染色体在显微镜下的形态和结构，我们可以测量染色体的长度、形状等参数，并对染色体的特征进行描述，如染色体数量、着丝点的位置等。
总结：小白鼠染色体标本的制作染色与观察是一项重要的生物实验技术，可以帮助我们了解生物的遗传特征和疾病的发生机制。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
旋化程度或染色体长短大致一样。在所观察细胞 周围，没有离散单个或多个染色体存在，以免影 响计数。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
第9页
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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四、试验步骤(continued)
6.离心：1200rpm离心5分钟后弃去上清液， 7.固定：加8ml固定液并用吸管轻轻吹匀，室温下静 置20分钟，每10分钟时吹打一次。 8.离心：1200rpm离心6分钟，弃上清液。
9.离心：加1.5mL固定液，吸管吹打成细胞悬液。
一、试验目标
1. 经过小白鼠骨髓细胞染色体制备，初 步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体 方法 2.熟悉染色体形态、种类及小白鼠等动 物染色体数目及特点
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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二、试验原理
骨髓细胞是含有旺盛分裂能力细胞，从这些分裂细胞 中，可观察处处于分裂中期染色体，能对一个动物染色体 形态特征、数目进行准确观察和分析。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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几个动物染色体形态特征
动物名称 染色体数
染色体类型
x染色体形态
y染色体形态
青蛙 小白鼠
பைடு நூலகம்
26
中央、亚中央着丝粒染色 中央着丝粒染色体 中央着丝粒染色体
体
，介于6～7号
，介于8～9号
40
全部为近端着丝粒染色体 大小介于5～6号 大小介于19～20号
大白鼠
42
中央、亚中央近端着丝粒 近端着丝粒染色体 近端着丝粒染色体
10.滴片：用吸管吸收细胞悬液，滴在预冷载玻 片上，室温晾干
11.染色：10% Giemsa染液染色30分钟
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察ppt课件
9．在干净、湿冷的载玻片上以高距离滴2～3 滴上层细胞悬液，气干或在酒精灯上文火 烘干。注意在滴片时要有一定的高度（大 于40cm），使细胞膜破裂后易于使染色体 散开，并尽量使滴片上的细胞分布均匀， 不要重叠。
10．气干，染色。 在一块洁净的玻板上，将玻片标本有细胞的一面 朝下用牙签架空于玻板上。 11．用滴管将配好的染液充满于玻板与载玻片之间 的空隙中，注意载片上有细胞面的进行染色并在 滴加染液时注意排除气泡。视室温而定，染色15 分钟。 12．染色后，轻轻揭起玻片，倾斜玻片在自来水管 下细水流冲洗数秒，冲掉染液，擦干玻片标本底 面和四周，显微镜观察和分析。注意不要搞错沾 有细胞的一面。选择染色较好、较分散、形态清 晰的细胞分裂相，进行显微观察。
小鼠骨髓细胞染色体 标本的制备与观察
实验目的：
1．初步掌握动物骨髓细胞染色体的制备方法。 2．了解小鼠骨髓细胞染色体的形态特点。Fra bibliotek实验原理：
染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定 形式，是染色质紧密包装的结果。染色体 是有机体遗传信息的载体，对染色体的研 究在生物进化、发育、遗传和变异中有十 分重要的作用。
谢 谢 大 家
核型分析均是以中期染色体为标准，对制 作出的染色体标本进行照相以获得染色体 的显微图像，并将其剪裁排列即成，或用 专用软件进行分析排列。 凡处于活跃增殖状态的细胞，或者经过各 种处理后，细胞就可进入分裂期此时均可 用于染色体分析。
在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的 组织之一。此时给动物注射一定剂量的秋 水仙素可使许多处于分裂的细胞停滞于中 期（ 秋水仙素可阻断纺锤丝微管的组装）， 然后采用常规空气干燥法制备染色体，即 可得到大量可供分析的染色体标本。本方 法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌 操作。
小白鼠染色体的标本制备和观察实验不足之处
小白鼠染色体的标本制备和观察实验是细胞生物学和遗传学研究中非常重要的一环。
通过观察小白鼠染色体的结构和数量，可以更好地了解其遗传特性和遗传变异。
然而，在现有的研究中，我们发现了一些实验中存在的不足之处，这些问题可能会影响实验结果的准确性和可靠性。
有必要对现有的标本制备和观察实验进行深入的评估和改进。
以下是小白鼠染色体标本制备和观察实验中存在的一些不足之处：1. 标本制备不规范：在研究中，染色体标本的制备非常重要，影响着后续的观察和分析结果。
然而，在一些实验中，我们发现染色体标本的制备过程存在一些不规范的情况，比如处理时间过长、温度控制不当等问题，这些问题可能会影响细胞的完整性和染色体的展开情况。
2. 染色体观察方法不精准：在染色体观察实验中，常用的方法包括显微镜观察和染色体计数。
然而，在一些实验中，我们发现染色体观察的方法不够精准，特别是在染色体计数过程中存在误差较大的情况，可能会影响实验结果的可靠性。
3. 样本数量不足：在一些研究中，由于样本数量有限，可能导致实验结果的稳定性和代表性不足，不能充分反映小白鼠染色体的遗传特性和变异情况。
针对以上问题，我们提出了一些改进方案：1. 规范标本制备流程：在染色体标本制备过程中，需要严格控制处理时间和温度，确保细胞的完整性和染色体的展开情况，可以采用标准的化学方法或酶切方法来提高染色体的展开度和清晰度。
2. 优化染色体观察方法：在染色体观察实验中，可以采用先进的显微镜技术和染色体计数工具，提高观察结果的准确性和精准度，也可以结合计算机图像分析技术来进行数据处理和统计分析，减少人为误差的影响。
3. 增加样本数量：为了提高实验结果的稳定性和代表性，可以增加样本的数量，尽可能覆盖不同个体和不同遗传背景的小白鼠，从而更全面地了解染色体的遗传特性和变异情况。
通过改进小白鼠染色体标本制备和观察实验中存在的不足之处，可以提高实验结果的准确性和可靠性，为细胞生物学和遗传学研究提供更可靠的数据支持。
实验小鼠骨髓染色体制备和观察
8.小鼠染色体观察： 低倍镜、高倍镜下寻找染色体分散的中
期分裂相.
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
小鼠骨髓染色体 10 ×10
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
小鼠骨髓染色体 10 ×40
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
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➢ 数目观察：小鼠2倍体细胞染色
体，数目2n=40条。其中19对为常染 色体，一对为性染色体，染色体的核 型分为4组。雄性 XY, 雌性XX,Y染 色体最小。
➢形态特征观察：端着丝粒染色体
“U”“V”。
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五、注意事项
1．掌握好秋水仙素的浓度和处理时间； 2．离心前需要配平； 3. 小鼠骨髓要冲洗干净，以收集足够的骨髓细胞； 3．低渗处理是实验成败的关键，注意低渗时间； 4．固定液要现配现用，固定要充分； 5．载玻片要洁净并预冷，滴片要有一定的高度； 6. 细胞悬液不能太稀，要呈乳白色； 7. 烤片时温度不能太高。 8. 冲洗染液时水流要缓慢，以免细胞流失过多。
放出来。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
秋水仙素处理：秋水仙素溶液可抑制纺锤体的形 成，使正在分裂的骨髓细胞停止在细胞分裂中期， 积累大量中期分裂相细胞。
低渗作用: 使细胞充分膨胀，减少染色体间的相互 缠绕和重叠。
预固定：终止低渗作用，使细胞离心时不易破裂 ，固定维持细胞形态结构。
高距离滴片：使细胞膜易于破裂，获得中期染色 体标本，在显微镜下观察染色体的结构和数量。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
三、实验器材和试剂
• 1.器材 蜡盘、手术剪、小镊子、平皿、注射
实验四小白鼠骨髓染色体制备及观察
4、实验方法
❖ 主要实验步骤
⑴ 秋水仙素注射 ⑵ 解剖小鼠 ⑶ 离心 ⑷ 低渗 ⑸ 固定 ⑹ 制备细胞悬浮液 ⑺ 滴片 ⑻ 空气干燥 ⑼ 染色 ⑽ 水洗 ⑾ 显微镜观察结果
5、实验结果与分析讨论
实验四 小白鼠骨髓染色体制备及观察
❖ 1、实验目的与要求
⑴ 掌握动物骨髓细胞染色体制备技术 ⑵ 学会动物细胞的滴片方法 ⑶ 观察小白鼠染色体的形态特征和染色体数目
2、实验原理
❖ ⑴ 小鼠骨髓细胞 ❖ ⑵ 秋水仙素可破坏骨髓细胞分裂过程中纺锤
体的形成，把分裂细胞阻截在中期。 ❖ ⑶ 通过对小鼠骨髓细胞的低渗、固定、滴片、
❖ 绘制小鼠骨髓细胞染色体图
❖ 如果有条件时，要进行显微摄影，然后进行 组型分析
思考题
❖ 1．KCl溶液低渗处理与滴片过程在染色体制 片中有何联系，对制片结果各有何影响？
❖ 2．骨髓细胞染色体标本制作时，为什么要采 用冰片滴片？冰片滴片时滴液高度有什么要 求？为什么滴片后要马上吹散？冰片温度为 什么越冰越好？
书山有路勤为径学海无涯苦作舟专业分享敬请收藏主要实验步骤秋水仙素注射解剖小鼠离心固定制备细胞悬浮液空气干燥染色水洗显微镜观察结果书山有路勤为径学海无涯苦作舟专业分享敬请收藏5实验结果与分析讨论绘制小鼠骨髓细胞染色体图如果有条件时要进行显微摄影然后进行组型分析书山有路勤为径学海无涯苦作舟专业分享敬请收藏思考题1kcl溶液低渗处理与滴片过程在染色体制片中有何联系对制片结果各有何影响
恒温培养箱、普通离心机、显微镜、分析天平、 架盘天平、
离心管(5～10 mL)、吸管注射器(5 mL)、100 mL 烧杯、
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察PPT
结果分析
实验过程中，细胞培养和染色环节是关键，需要 严格控制实验条件，以保证染色体制备的质量。
染色体观察需要经验丰富的实验员，以确保准确 识别染色体的数目和结构。
实验结果与预期相符，证明了实验方法的可靠性 和准确性。
结果讨论与展望
本实验为小鼠骨髓细胞染色体制备与观察提供了有益 的参考，但仍需进一步优化实验条件和操作步骤，以
04
其他必要的缓冲液和盐溶液
实验仪器
显微镜
01
02
细胞培养箱
离心机
03
04
染色设备（染色缸、染色架等）
恒温水浴锅
05
06
吸管和移液器等定量工具
02
CATALOGUE
实验步骤
小鼠骨髓细胞的采集
01
02
03
麻醉小鼠
使用麻醉剂将小鼠麻醉， 确保其在整个采集过程中 保持安静。
采集骨髓
使用注射器抽取小鼠的骨 髓，注意抽取时要避免混 入其他组织或血液。
染色体组型分析
将染色体制成中期片，进行染色体组型分析，可以观察到染色体的配对情况、 排列顺序等特征，有助于判断染色体的结构异常。
染色体畸变分析
染色体结构畸变
观察染色体的结构畸变，如染色体断裂、倒位、缺失等， 可以分析出细胞在分裂过程中可能遇到的异常情况。
染色体数目畸变
分析染色体数目畸变，如非整倍体、多倍体等现象，有助 于了解细胞分裂过程中的异常变化。
小鼠骨髓细胞染色 体制备与观察
目录
• 实验准备 • 实验步骤 • 实验结果 • 结论与讨论
01
CATALOGUE
实验准备
实验材料
小鼠骨髓细பைடு நூலகம்胞样本
小鼠骨髓染色体制备及观察
小鼠骨髓染色体制备及观察许多化学毒物具有遗传毒性基因突变：碱基置换和移码突变。
染色体畸变（structural chromosome aberration)：是指由于染色体或染色单体断裂，造成染色体或染色单体缺失或引起各种重排，从而出现染色体结构异常颜色体数目异常：整倍性和非整倍性改变。
染色体损伤的类型：☐染色体数目的改变①非整倍体：亚二倍体或超二倍体。
②整倍性改变：染色体成倍增加。
☐染色体结构的改变1.断裂和裂隙：2.微小体；较断片小而呈圆形。
3.有着丝点环：带有着丝点部分，两端形成环状结构并伴有一双无着丝点断片。
4.无着丝点环：成环状结构。
5.插入/重复8 非特定性型变化：如粉碎化、着丝点细长化、粘着等整倍性畸变非整倍性畸变如何评价化合物的遗传毒性？鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）：是最常用的检查基因突变的方法。
检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型(his+)的能力☐评价染色体损伤的试验方法包括：常用啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE) 微核试验 体外培养细胞或者体内染色体畸变试验2、实验原理☐有丝分裂：真核细胞的染色质凝集成染色体，复制的姐妹染色单体在纺锤丝的牵拉下分向细胞的两极，从而产生两个染色体数目和遗传性相同的子细胞的一种细胞分裂的类型。
☐细胞周期：从一次有丝分裂完成时开始，到下一次有丝分裂结束时为止，成为一个细胞周期。
G1：从有丝分裂结束到DNA 复制之前；S: DNA 合成；G2：DNA 复制结束到有丝分裂开始；M ：有丝分裂期✓增殖群细胞，细胞始终保持分裂能力，持续进入分裂循环；✓不再增殖细胞，比如神经细胞；✓暂不增殖细胞，比如肝脏细胞。
端着丝粒染色体。
骨髓细胞染色体制备与观察课件
• •
8、弃上清液，仅留约0.2-0.3ml的细胞团与部分 上清液，吹均匀制成细胞悬浮液涂片观察。
注意：如果细胞分散的不好，可再按上述方法 再固定1-2次，使染色体进一步分散。 9、取预先冰冻的载玻片，滴2-3滴细胞悬浮液于 其上，立即吹气均匀打散、过火、置室温中自 然干燥。
骨髓细•
•
实验目的：掌握制备方法，计算分裂中期
染色体数目，观察端着丝点的形态特点．
实验原理：小鼠骨髓细胞中的造血干细胞
，具有高度的分裂能力，可得到较多的细胞中 期的分裂相．
骨髓细胞染色体制备与观察
•
– – –
实验用品：
材料：小白鼠（2n=42）． 用品：显微镜、冰箱、恒温箱、恒温水浴锅 、离心机、注射器、解剖剪、 镊子、移液器、载玻片、烧杯等。 药品：0.1%(W/V)秋水仙素、2%(W/V)柠檬酸 钠溶液、0.07M氯化钾溶液、 （或0.35%氯 化钾溶液）、蒸馏水、Giemsa原液，甲醇、 乙酸等。
骨髓细胞染色体制备与观察
实验步骤：
预处理 低渗 取股骨 固定 冲洗骨髓 离心 离心 滴片
染色
观察
骨髓细胞染色体制备与观察
1、取健康小白鼠（约65-90天龄），腹腔注射
0.1%秋水仙素溶液0.1ml，剂量为4ml/Kg动物体 重。 2、2-3小时后，用损伤脊椎法处死小白鼠，取出 股骨，把肌肉刮净，剪下，用2%柠蒙酸钠溶液 洗净血污及残渣。 3、剪去关节头，用3-5ml2%柠檬酸钠溶液冲洗股 骨断面至粉白色，制备了骨髓细胞悬浮液。
•
•
10、用Giemsa染液,染色15-20分钟，自来水冲
洗，空气干燥。
11、在低倍镜下观察中期分裂相细胞，计算染
色体的数目，以确定其细胞2n的染色体数目。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
细胞培养：在适宜的条件下将细胞从体内分离出来进行体外培养 传代：将培养的细胞按照一定的比例进行分装使细胞能够继续生长
制备前的准备：选 择合适的细胞培养 并维持细胞生长。
细胞固定：使用固 定剂将细胞固定在 一定位置防止细胞 移动。
细胞染色：根据实 验需求选择合适的 染色剂进行染色。
观察与拍照：使用 显微镜观察染色后 的细胞并记录照片 。
小鼠骨髓细胞染色体 制备与观察
汇报人：
目录
添加目录标题
实验准备
染色体制备
观察和分析
实验结论
添加章节标题
实验准备
小鼠骨髓细胞
培养基
胰蛋白酶
秋水仙碱
实验仪器：显微镜、离心机、细胞培养皿、细胞 刮刀等
实验试剂：生理盐水、胰蛋白酶、甲醇、冰醋酸、 Giems染料等
准备实验器材：显微镜、染色剂、 细胞培养皿等
染色体测量：使用显微测微尺等工具测量染色体的长度、宽度、着丝粒位置等特征有助于分析染色体的形态和结 构。
染色体组型分析：根据染色体的数目、形态和结构特征进行染色体组型分析有助于了解小鼠骨髓细胞的遗传特征 和变异情况。
染色体核型分析：通过观察染色体的数目、形态和排列方式分析染色体的核型有助于了解小鼠骨髓细胞的染色体 异常和遗传疾病。
实验前要洗手戴手套避免手上的杂 菌污染细胞。
染色体制备过程中要控制好温度和 时间避免温度过高或时间过长导致 细胞死亡。
添加标题
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染色体制备过程中要保持细胞活性 避免细胞死亡。
染色体制备过程中要选择适当的染 色剂避免使用过多的染色剂导致细 胞死亡。
观察和分析
观察步骤：将制备好的小鼠骨髓细胞染色体放在显微镜下调整焦距观察染色体的形态和分布
小鼠骨髓细胞染色体标本制备
三、实验材料、器具和药品：
1、材料： 小白鼠 2、器具： 注射器（1ml,5ml）、5号针头、 解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片 盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉 花、量筒、天平、恒温水浴锅等。
3、药品：
0.01%秋水仙素、0.075MKCl、
固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、 Giemsa染液、0.01M磷酸缓冲液 (PH6.8)，0.85%生理盐水。
实验九
小鼠骨髓
细胞染色体标本制备
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨
髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造
血干细胞是生成各种血细胞的原始 细胞，具有高度的分裂增殖能力。
2、适当浓度秋水仙素处理分裂 增殖的骨髓细胞，能抑制细胞分裂 时纺锤丝、纺锤体的形成，而染色 体不分裂成为子染色体，使细胞不 向后期过渡，从而收集到更多的中 期分裂相。 同时秋水仙素作用能使染色体缩短、 变粗。
5、低渗：加入4.4ml的 0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40 分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻 管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用 6、离心：离心之前加1ml固定液 并用吸管轻轻吹匀，进行预固定； 1000rpm离心10分钟后，弃去上清液。
7、固定：沿管壁慢慢加入固定液 5ml，用吸管吹打成细胞悬液后，室 温下静置15分钟，5分钟时轻轻吹打， 使细胞充分固定。 8、离心：1000rpm离心10分钟， 弃上清液。 9、再固定：同固定I。 10、再离心：同8，离心后加 0.1ml固定液，吸管吹打成细胞悬液。
四倍体荞麦体细胞中期染色体（2n=32）
二倍体荞麦体细胞中期染色体（2n=16）
小鼠骨髓细胞染色体
实验材料： 实验器材：离心管、低速离心机、吸管、 牙签、剪刀、载玻片、显微镜等。 实验试剂： 100µ g/ml秋水仙素、0.075M KCl、Carnoy固定液、Giemsa 染液、pH6.8 磷酸缓冲液、 0.85% NaCl生理盐水、0.4% KCl（低渗液）等。 小鼠腿一只
实验步骤： 1．秋水仙素注射 称出小白鼠的体重，然后按2～4µg/g体重的剂量经腹腔 注射秋水仙素，3～4h后颈椎脱臼法处死。 2．取出股骨 取出小鼠后肢的股骨，剔除附着的肌肉，剪去股骨两端关 节。 3．剪碎股骨于生理盐水 直接用手术剪将股骨剪碎于含有5 ml 0.85% NaCl的培养 皿中，反复剪碎，使骨髓细胞析出，溶液成悬液状。 4．收集细胞 用吸管反复吸打细胞，使细胞团块分散，转入两支1.5ml 离心管中。注意股骨碎片不要吸入离心管中。3000 rpm离 心10分钟收集细胞。弃去上清。（注意：可合并两支管内 沉淀）
结果与讨论： 绘制染色体图 ：（小鼠骨髓细胞染色体）
对于小鼠骨髓细胞染色体标本的制作，一般包括以下几个要 点： （重点） 1．用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂 停滞在分裂中期，使中期染色体停留在赤道面处。 2．用低渗法使将细胞膨胀， 以至于在滴片时细胞被胀破， 使细胞的染色体铺展到载玻片上。 3．空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平，经Giemsa 染色后便可观察到染色体的图像。 4．倒置染色法：在玻璃板上用牙签做支架，使标本载玻片 的标本面向下放置到支架上，然后用滴管在玻璃板和标本 载玻片之间滴加Giemsa染液，在操作时应注意，滴染液时 应尽量慢，不要有气泡，以免部分染色体不被着色。此法 一是可以节省染料，二可以避免染液快速挥发，三可以防 止染色颗粒沉淀，影响观察。
5．室温低渗 加入0.4％KCl溶液1ml，轻微吸放混匀细胞，然后 将离心管在室温下低渗20min。 6．Carnoy固定液预固定 低渗结束后在离心管中加入0.5ml Carnoy固定液进 行预固定，用吸管轻微混匀，可避免细胞结块， 室温固定5分钟后，混匀以2000 rpm离心10min。 7． Carnoy固定液重新固定 弃去上清液，沿离心管壁缓慢加入新配制的甲醇： 冰醋酸(3:1)固定液1.5ml，用滴管小心将细胞团 块打散，继续固定10分钟。 8．2000 rpm离心10分钟，留少量固定液后用滴管 小心将细胞团块打散，制成均匀的细胞悬液。
小鼠骨髓细胞染色体的制备
10. 将干净载玻片事先预浸在0 ℃冰水中，用时 取出，将载玻片倾斜45o，用吸管取细胞悬 液。滴在载玻片上1~2滴（避免重叠），立 即用力吹散，使细胞分散均匀，然后置酒 精灯上微微加热干燥。 11. 取晾干的玻片，用Giemsa染液染色5~15min ，自来水冲洗，自然干燥。 12 . 镜检：显微镜下观察染色体制片的情况。
的形态。
实验十一 小鼠骨髓细胞染色体的
制备
一、实验目的
1 .掌握小鼠骨髓细胞染色体制备方法
2 .观察染色体的形态特征以及数目
二、实验原理
用适量的秋水仙素溶液注入动物体内，处于分裂 期的细胞经秋水仙素处理，由于阻断了纺锤丝的形 成，使细胞分裂处于中期，此时的染色体具有典型 的形态。骨髓中具有丰富的细胞，这些细胞具有高 度的分裂活性，经秋水仙素处理后，可使分裂期细 胞处在有丝分裂中期，再经过低渗处理、固定、滴 片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞染色体的 标本。
5. 加0.075M KCl(事先在37 ℃温箱中预热)3~4ml ，用吸管抽打均匀后，置于37 ℃温箱中低渗 处理30 min. 6. 低渗处理后，1000rpm离心10min去上清，仅 保留0.5ml上清，用吸管轻轻吹打均匀。 7. 加入新配置的卡诺固定液4~5ml，同时用吸管 轻轻吹打均匀，静置20min。 8. 1000rpm离心10min,去上清，再加入卡诺固定 液4~5ml，固定15min。 9. 1000rpm离心10min,去上清，约剩0.5ml左右上 清，用吸管吹打成悬液。
三、实验步骤
1. 取小白鼠一只，体重20g左右，在实验前3.5~ 4 h 腹腔注射0.80g/L的秋水仙素0.2毫升。 2. 实验开始时，小鼠拉颈椎处死，取两侧股骨， 用酒精纱布擦去股骨上的肌肉。 3. 针插入骨髓腔内，将骨髓腔穿通，然后用1ml 注射器插入，置于含有5ml0.85%生理盐水的 离心管，反复抽打，使骨髓腔内的骨髓细胞 全部冲洗到离心管中。 4. 在1000rpm离心10min，弃上清。
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❖ 如果有条件时，要进行显微摄影，然后进行 组型分析
思考题
❖ 1．KCl溶液低渗处理与滴片过程在染色体制 片中有何联系，对制片结果各有何影响？
❖ 2．骨髓细胞染色体标本制作时，为什么要采 用冰片滴片？冰片滴片时滴液高度有什么要 求？为什么滴片后要马上吹散？冰片温度为 什么越冰越好？
实验四 小白鼠骨髓染色体制备及观察
❖ 1、实验目的与要求
⑴ 掌握动物骨髓细胞染色体制备技术 ⑵ 学会动物细胞的滴片方法 ⑶ 观察小白鼠染色体的形态特征和染色体数目
2、实验原理
❖ ⑴ 小鼠骨髓细胞 ❖ ⑵ 秋水仙素可破坏骨髓细胞分裂过程中纺锤
体的形成，把分裂细胞阻截在中期。 ❖ ⑶ 通过对小鼠骨髓细胞的低渗、固定、滴片、
恒温培养箱、普通离心机、显微镜、分析天平、 架盘天平、
离心管(5～10 mL)、吸管注射器(5 mL)、100 mL 烧杯、
载玻片
3、实验材料
❖ 溶液配制
➢ (1)0.01％秋水仙素：称10 mg秋水仙素，溶于 100 mL生理盐水中。
➢ (2)低渗溶液：称5.59克KCl溶于1,000 mL蒸馏水 中，其浓度为0.075M。
染色等处理，可观察到小鼠染色体。 ❖ ⑷ 这种骨髓染色体制片方法简单，取材容易，
不需无菌条件，方便易行。
3、实验材料
❖ 实验动物
健康小鼠(Mus musculus 2n=40)，体重约18～ 20g，雌雄不限。
❖ 试剂
甲醇、冰乙酸、石炭酸品红、秋水仙素、KCl、 生理盐水
3、实验材料
❖ 实验器材
➢ (3)生理盐水：8.5g NaCl溶于1,000 mL蒸馏水中， 浓度为0.85％。
4、实验方法
❖ 主要实验步骤
⑴ 秋水仙素注射 ⑵ 解剖小鼠 ⑶ 离心 ⑷ 低渗 ⑸ 固定 ⑹ 制备细胞悬浮液 ⑺ 滴片 ⑻ 空气干燥 ⑼ 染色 ⑽ 水洗 ⑾ 显微镜观察结果
Hale Waihona Puke 5、实验结果与分析讨论