血红蛋白电泳实验报告
蛋白电泳实验的实验报告
实验名称:蛋白质电泳实验实验日期:2022年3月15日实验地点:实验室实验目的:1. 掌握蛋白质电泳的基本原理和操作方法;2. 了解不同蛋白质在电泳过程中的迁移规律;3. 学习利用电泳技术对蛋白质进行分离和鉴定。
实验原理:蛋白质电泳是一种基于蛋白质在电场中迁移速度不同的分离方法。
蛋白质分子在电场中受到电场力的作用,带电的蛋白质分子向与其电荷相反的电极移动。
蛋白质分子在电泳过程中的迁移速度取决于其分子大小、形状、电荷量和电泳介质等因素。
在电泳过程中,不同蛋白质分子会因迁移速度不同而在凝胶上形成不同的区带,从而实现分离和鉴定。
实验器材与药品:1. 器材:电泳槽、电源、垂直板凝胶电泳装置、微量移液器、镊子、剪刀、紫外灯、凝胶成像系统等;2. 药品:SDS-PAGE凝胶、丙烯酰胺、N,N'-亚甲基双丙烯酰胺、过硫酸铵、TEMED、考马斯亮蓝G250、Tris-HCl缓冲液、SDS、牛血清白蛋白、分子量标准蛋白等。
实验步骤:1. 准备SDS-PAGE凝胶:按照试剂盒说明书配制丙烯酰胺、N,N'-亚甲基双丙烯酰胺、过硫酸铵、TEMED等试剂,加入Tris-HCl缓冲液,混匀后倒入垂直板凝胶电泳装置,制作SDS-PAGE凝胶。
2. 制备样品:将待测蛋白质样品与SDS、Tris-HCl缓冲液等试剂混合,制备成蛋白质样品。
3. 加样:将制备好的蛋白质样品加到SDS-PAGE凝胶的样品孔中,加入分子量标准蛋白作为对照。
4. 电泳:将加好样的SDS-PAGE凝胶放入电泳槽中,加入Tris-HCl缓冲液,接通电源,进行电泳。
5. 取样:电泳结束后,关闭电源,取出SDS-PAGE凝胶。
6. 染色:将SDS-PAGE凝胶放入考马斯亮蓝G250染色液中,染色一段时间。
7. 冲洗:将染色后的SDS-PAGE凝胶放入脱色液中,冲洗至背景清晰。
8. 成像:将处理好的SDS-PAGE凝胶放入凝胶成像系统,观察并记录电泳图谱。
血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验
血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验
血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验是一种常用的实验方法,用于研究血红蛋白分子的电泳行为。
本实验旨在通过制备醋酸纤维薄膜,并在其上进行血红蛋白电泳分析,探究血红蛋白在电场中的迁移行为。
首先,我们需要准备实验所需的材料和试剂。
主要包括醋酸纤维薄膜、血红蛋白样品、电泳缓冲液、电泳槽、电源等。
实验开始前,首先需要制备醋酸纤维薄膜。
将醋酸溶液倒入培养皿中,然后将玻璃片浸入溶液中,使其完全浸泡。
接下来,将浸泡过的玻璃片取出,放置在通风处晾干。
待玻璃片完全干燥后,即可得到醋酸纤维薄膜。
制备好醋酸纤维薄膜后,接下来是样品的准备。
将血红蛋白样品溶解在适量的电泳缓冲液中,并轻轻摇匀,使其充分溶解。
准备工作完成后,我们可以开始进行实验了。
首先,将电泳槽中注满电泳缓冲液,然后将醋酸纤维薄膜小心地放置在电泳槽中,并确保其完全覆盖电极。
接下来,取一定量的血红蛋白样品,滴在醋酸纤维薄膜上。
然后将电泳槽盖子盖好,确保样品不会受到外界干扰。
在实验过程中,需要设置合适的电压和时间参数。
一般来说,电压设置为常数值,而时间则根据实验需要进行调整。
当实验开始后,血红蛋白分子会在电场的作用下开始迁移。
实验结束后,可以观察到血红蛋白在醋酸纤维薄膜上的迁移情况。
根据迁移的位置和距离,可以分析血红蛋白分子的电泳行为,并得出相应的结论。
总之,血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验是一种简单而有效的实验方法,可以用于研究血红蛋白分子的电泳行为。
通过该实验,我们可以更深入地了解血红蛋白的性质和特点,为相关领域的研究提供有力支持。
血红蛋白电泳的意义和判断高级版
全自动毛细管电泳法进行血红蛋白检测 Capillarys 2 / Minicap
Capillarys 2
Minicap
毛细管电泳法原理
Peltier温控桥
消耗5ml溶血素)
Capillarys/Minicap血红蛋白检测标本要求
抗凝管采血 (EDTA, heparin, citrate). 如果需 要对输血患者采血, 需要在输血前采集血液.
使用去除血浆后的红细胞(隔夜或5000 rpm,5 分钟离心后样品) + 4°C以上, 标本最多存放 7天.
Hb电泳位置取决于缓冲液PH 值
蛋白电泳至其等电点位置后, 停止泳动
At pI=pH, Hb does not have a net charge and stops migrating
电泳分离效果好, 但时间长. 需要经验丰富才能获得良好 结果及进行结果判断
21
介于普通电泳和等电聚焦电泳之间的新方法: - 通过毛细管电泳法, 即可以获得与IEF方法一样 的分辨率,同时检测结果量值Hb A2/Hb F同样精 确.
Alpha 地中海贫血
o常见区域
常见与远东地区,非洲和地中海区国家
o 临床症状: 根据Alpha基因的表达状态, 有4个不同程度的Alpha地贫症状
* 1 个基因表达沉默: 静止型 (非常难检测到, 在出生会测到Hb Bart’s 1-2% ) * 2 个基因表达沉默: 轻型alpha地贫,在出生会测到Bart’s 2-10% * 3 个基因表达沉默: 血红蛋白Hb H病, 出生时出现2-30% Bart’s,
血红蛋白电泳报告单解读
血红蛋白电泳报告单解读引言血红蛋白电泳是一种常见的临床检验方法,用于评估血红蛋白的类型、形态和数量。
通过对血红蛋白电泳报告单的解读,可以了解患者的血红蛋白异常情况,对疾病的诊断和治疗有重要意义。
报告单解读###报告基本信息在开始解读血红蛋白电泳报告单前,首先要查看报告的基本信息。
包括患者的姓名、性别、年龄等信息,以及抽血日期和实验室信息。
这些信息可以作为后续分析的依据,也有助于排除错误数据。
血红蛋白类型及其百分比在血红蛋白电泳报告单中,常常列出多种血红蛋白类型及其百分比。
这些血红蛋白类型包括正常血红蛋白、异常血红蛋白、血红蛋白病变等。
通过分析报告中不同血红蛋白类型的百分比,可以初步判断是否存在血红蛋白异常。
血红蛋白电泳图谱除了血红蛋白类型及其百分比外,血红蛋白电泳报告单还会附上图谱,展示不同血红蛋白的迁移位置和峰值高度。
通过分析图谱,可以进一步评估血红蛋白异常的情况。
正常情况下,血红蛋白A0、A2、F等迁移位置和峰值高度在一定范围内。
异常情况下,可能存在新的峰值或迁移位置的偏移,提示血红蛋白的异常表达。
血红蛋白异常的可能原因根据血红蛋白电泳报告单的结果,可以初步判断血红蛋白异常的可能原因。
一般情况下,血红蛋白异常可分为遗传性和非遗传性两类。
遗传性血红蛋白异常遗传性血红蛋白异常主要由基因突变导致,包括地中海贫血、镰状细胞性贫血等。
这些疾病的发病率较高,多为常染色体隐性遗传。
血红蛋白电泳报告单中存在异常血红蛋白的类型和百分比明显变化,且图谱出现新的峰值或迁移位置偏移,可以高度怀疑遗传性血红蛋白异常。
非遗传性血红蛋白异常非遗传性血红蛋白异常通常是由其他疾病或环境因素引起的,例如铅中毒、肾脏疾病等。
血红蛋白电泳报告单中的异常血红蛋白类型和百分比变化较小,且图谱没有明显异常,这些情况提示可能为非遗传性血红蛋白异常。
疾病诊断和治疗根据血红蛋白电泳报告单,可以帮助医生进行疾病的诊断和治疗方案制定。
疾病诊断根据报告单中的血红蛋白类型和百分比,以及图谱结果,医生可以初步确定疾病的类型。
血红蛋白电泳实验报告
实验汇报实验名称:血红蛋白电泳项目名称:两种碱性血红蛋白样品处理方法的电泳结果实验时间:2018年9月17日实验室:龙泉驿区妇幼保健院检验科实验人员:杨松报告单位:成都温伦科技有限公司一、实验目的:1、掌握生理盐水处理血红蛋白样品的方法2、掌握四氯化碳处理血红蛋白样品的方法3、掌握电泳仪实验的操作4、分析两种碱性血红蛋白样品处理方法电泳结果的不同二、实验原理:血红蛋白电泳就是利用在电场的作用下, 由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小, 形状等性质的差异, 使带电分子产生不同的迁移速度, 从而对样品进行分离, 鉴定或提纯的技术,在临床检验中, 主要用于分离各类蛋白分子。
三、实验方法:琼脂糖电泳法四、实验器械:样品:10个EDTA抗凝管抽取的病人全血样品试剂:0.9%生理盐水500ml,四氯化碳500ml,界面液250ml,美国Helena Spife3000血红蛋白电泳检测试剂盒器材:移液枪,一次性移液枪头若干,EDTA抗凝管10个,玻璃试管10个设备:美国Helena Spife3000 全自动电泳仪五、实验步骤:1、取得医院检验科EDTA抗凝管抽取的病人全血样品10个,编号为1,2,3......10。
2、将1-10号十个个样品分别用移液枪取200ul到玻璃试管中,编号为1-1,2-1,3-1,.....10-1。
3、将1-10号10个样品进行生理盐水前处理,处理方法如下:-用0.9%生理盐水混匀,3500 rpm离心10分钟.-吸走弃去清液。
-以上步骤连续进行三次。
-完全吸走弃去上清液。
-20ul制作后的样本+80ul溶血素,混匀。
-取溶血后的样本17ul加入样品孔。
4、将1-1到10-1号10个样品进行四氯化碳前处理,处理方法如下:-用0.9%生理盐水溶液5000μL与样品混合。
-3000rpm离心5分钟。
-弃去上清液,只留下红细胞。
-加入200ul 蒸馏水溶解红细胞。
-加入300ul 的四氯化碳,混合均匀,3000rpm离心5分钟。
血红蛋白电泳报告单解读
血红蛋白电泳报告单解读
血红蛋白电泳是一种常见的检查方法,可以用来检测血红蛋白的类型和数量,进而判断是否存在贫血、地中海贫血等疾病。
本报告单解读将从以下几个方面进行分析。
1. 检测项目
首先,我们需要了解这份报告单所涉及的检测项目。
从报告单中可以看出,该患者进行了血红蛋白电泳检测。
具体来说,该患者的血液样本被用于分离不同类型的血红蛋白,并通过电泳技术进行分析。
2. 表格解读
接下来,我们需要对报告单中的表格进行解读。
根据表格内容可知,该患者共检测到5种不同类型的血红蛋白:HbA、HbA2、HbF、HbS 和HbC。
其中,HbA是正常成人血液中最常见的血红蛋白类型;HbA2通常占据少量比例;HbF主要存在于胎儿和新生儿体内;而HbS和HbC则是两种比较罕见的变异型血红蛋白。
3. 结果分析
接下来,我们需要对报告单中的结果进行分析。
从表格中可以看出,
该患者的HbA、HbA2和HbF含量均在正常范围内。
但是,该患者的HbS含量为38.3%,高于正常范围(0-2%),而HbC含量为3.5%,也略高于正常范围(0-3%)。
4. 临床意义
最后,我们需要对这些结果进行综合分析,并探讨其临床意义。
根据
以上结果,可以初步判断该患者可能存在地中海贫血或镰状细胞贫血
等血液疾病。
因此,建议该患者进一步进行相关检查、诊断和治疗。
总之,通过以上对血红蛋白电泳报告单的解读分析,我们可以初步了
解该患者的血红蛋白类型和数量情况,并初步判断其可能存在的血液
疾病类型。
但是,在具体诊断和治疗方面仍需进一步检查和评估。
血红蛋白电泳实验报告
实验汇报实验名称:血红蛋白电泳项目名称:两种碱性血红蛋白样品处理方法的电泳结果实验时间:2018年9月17日实验室:龙泉驿区妇幼保健院检验科实验人员:杨松报告单位:成都温伦科技有限公司一、实验目的:1、掌握生理盐水处理血红蛋白样品的方法2、掌握四氯化碳处理血红蛋白样品的方法3、掌握电泳仪实验的操作4、分析两种碱性血红蛋白样品处理方法电泳结果的不同二、实验原理:血红蛋白电泳就是利用在电场的作用下, 由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小, 形状等性质的差异, 使带电分子产生不同的迁移速度, 从而对样品进行分离, 鉴定或提纯的技术,在临床检验中, 主要用于分离各类蛋白分子。
三、实验方法:琼脂糖电泳法四、实验器械:样品:10个EDTA抗凝管抽取的病人全血样品试剂:0.9%生理盐水500ml,四氯化碳500ml,界面液250ml,美国Helena Spife3000血红蛋白电泳检测试剂盒器材:移液枪,一次性移液枪头若干,EDTA抗凝管10个,玻璃试管10个设备:美国Helena Spife3000 全自动电泳仪五、实验步骤:1、取得医院检验科EDTA抗凝管抽取的病人全血样品10个,编号为1,2,3......10。
2、将1-10号十个个样品分别用移液枪取200ul到玻璃试管中,编号为1-1,2-1,3-1,.....10-1。
3、将1-10号10个样品进行生理盐水前处理,处理方法如下:-用0.9%生理盐水混匀,3500 rpm离心10分钟.-吸走弃去清液。
-以上步骤连续进行三次。
-完全吸走弃去上清液。
-20ul制作后的样本+80ul溶血素,混匀。
-取溶血后的样本17ul加入样品孔。
4、将1-1到10-1号10个样品进行四氯化碳前处理,处理方法如下:-用0.9%生理盐水溶液5000μL与样品混合。
-3000rpm离心5分钟。
-弃去上清液,只留下红细胞。
-加入200ul 蒸馏水溶解红细胞。
-加入300ul 的四氯化碳,混合均匀,3000rpm离心5分钟。
血红蛋白电泳实验报告
血红蛋白电泳实验报告实验报告:血红蛋白电泳实验一、引言血红蛋白(hemoglobin)是一种具有输送氧气功能的蛋白质,存在于人类和许多动物的红细胞中。
它由四个亚基构成,包括两个α亚基和两个β亚基。
血红蛋白的功能和结构与其所含的亚基类型密切相关,而异常的血红蛋白亚基组合可能导致一些血液疾病的发生。
血红蛋白电泳实验是一种常用的实验方法,用于检测血液中血红蛋白的类型和数量,以帮助诊断和监测相关疾病。
二、实验目的通过血红蛋白电泳实验,了解不同类型血红蛋白的迁移速度,并根据实验结果对血液样本进行分类和鉴定。
三、实验材料与方法实验材料:1. 血液样本2. 血红蛋白电泳试剂盒3. 相关实验设备:电泳仪、垂直电泳槽、电源等实验方法:1. 血液样本处理:将血液样本离心,取上清液得到红细胞。
2. 血红蛋白裂解:将红细胞加入裂解液,用振荡器进行充分混合。
3. 准备样品槽:将电泳槽填充足够量样品缓冲液,并插入电泳纸。
4. 样品加载:取相应量的裂解液,滴于电泳纸上。
5. 电泳:将电泳槽连接至电源,设定电压和时间。
6. 停止电泳:电泳结束后,断开电源,取出电泳纸。
7. 进行染色:用染色试剂将血红蛋白带染色。
8. 结果分析:观察电泳纸上的血红蛋白带,根据迁移速度和染色程度对其进行鉴定和分类。
四、实验结果与讨论实验结果显示,通过血红蛋白电泳实验,可以清晰地观察到不同类型血红蛋白的迁移带。
血红蛋白A带出现在电泳纸上最远的位置,表明它的迁移速度最快,而其他类型的血红蛋白则随着亚基结构的不同而迁移速度差异明显。
根据实验结果,我们可以将血红蛋白带分为以下几类:1. 血红蛋白A:正常血红蛋白,包括两个α亚基和两个β亚基。
2. 血红蛋白S:镰状细胞贫血患者中常见的异常血红蛋白,由两个α亚基和两个替代的βS亚基组成。
3. 血红蛋白C:血红蛋白C病患者中可见的异常血红蛋白,由两个α亚基和两个替代的βC亚基组成。
4. 血红蛋白F:胎儿血红蛋白,包括两个α亚基和两个γ亚基。
微量血红蛋白电泳
微量血红蛋白电泳
微量血红蛋白电泳是一种用于检测和分析血液中微量血红蛋白的技术。
血红蛋白是红细胞中的一种蛋白质,其主要功能是运输氧气到全身组织。
在正常情况下,血液中的血红蛋白主要是由血红蛋白A组成,而其他类型的血红蛋白如血红蛋白A2和血红蛋白F只存在于极少量。
微量血红蛋白电泳是通过电泳技术对血液样本中的血红蛋白进行分离和检测。
这种技术对于一些血液疾病的诊断具有重要意义,比如镰状细胞贫血、地中海贫血等。
通过微量血红蛋白电泳,可以明确不同类型血红蛋白的含量,进而帮助医生进行疾病诊断和治疗方案的制定。
在进行微量血红蛋白电泳之前,首先需要采集患者的血液样本。
然后将血液样本经过特殊的处理,使之成为可以进行电泳分离的样品。
接着,将样品加载到电泳槽中,通过电场作用使得不同类型的血红蛋白根据电荷和大小在凝胶中进行分离。
最后,根据血红蛋白的不同迁移速率,可以通过染色或其他方法来观察和分析血红蛋白的组成和含量。
通过微量血红蛋白电泳,可以快速、准确地分析血液样本中微量血红蛋白的情况,帮助医生进行血液疾病的诊断和治疗。
同时,这种技术还可以用于血红蛋白病的筛查和研究,对于促进血液疾病的研究和治疗具有积极的意义。
总的来说,微量血红蛋白电泳是一种重要的血液分析技术,可以帮助医生对血液疾病进行准确的诊断和治疗。
随着医学技术的不断进步,微量血红蛋白电泳将在未来发挥更加重要的作用,为血液疾病的研究和治疗提供更多的帮助。
血红蛋白实验实训报告
一、实验目的1. 了解血红蛋白的生理功能和生化特性。
2. 掌握血红蛋白的提取、分离和定量方法。
3. 熟悉实验操作技能,提高实验操作能力。
二、实验原理血红蛋白(Hemoglobin,Hb)是红细胞内的一种含铁蛋白质,主要功能是运输氧气和二氧化碳。
血红蛋白的分子量约为67000,由四个亚基组成,每个亚基包含一个血红素(Heme)基团。
血红素是血红蛋白的主要功能基团,它能够与氧气和二氧化碳结合。
血红蛋白的提取、分离和定量方法主要包括以下几种:1. 离心法:根据血红蛋白的密度不同,通过离心分离血红蛋白。
2. 电泳法:根据血红蛋白的电荷和分子量差异,通过电泳分离血红蛋白。
3. 荧光光谱法:通过荧光光谱分析血红蛋白的浓度。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:新鲜血液、生理盐水、蒸馏水、0.9%氯化钠溶液、三氯乙酸、碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铵、磷酸盐缓冲液、生理盐水、10%TCA溶液、1%Na2CO3溶液、0.1%氢氧化钠溶液、邻苯二甲酸氢钾、荧光分光光度计等。
2. 实验仪器:离心机、电泳仪、荧光分光光度计、天平、移液器、烧杯、试管、玻璃棒、滴管等。
四、实验步骤1. 血红蛋白的提取(1)取新鲜血液5ml,加入等体积的生理盐水,充分混合后离心(3000r/min,10min)。
(2)取上层红细胞沉淀,加入等体积的三氯乙酸溶液,充分混合后离心(3000r/min,10min)。
(3)取上层红细胞沉淀,加入0.9%氯化钠溶液,充分混合后离心(3000r/min,10min)。
(4)取上层红细胞沉淀,加入10%TCA溶液,充分混合后离心(3000r/min,10min)。
(5)取上层红细胞沉淀,加入1%Na2CO3溶液,充分混合后离心(3000r/min,10min)。
(6)取上层红细胞沉淀,加入0.1%氢氧化钠溶液,充分混合后离心(3000r/min,10min)。
2. 血红蛋白的分离(1)取上述提取的血红蛋白溶液,加入10%硫酸铵溶液,充分混合后离心(3000r/min,10min)。
全自动电泳系统检测血红蛋白结果分析
全自动电泳系统检测血红蛋白结果分析目的了解本市区血红蛋白病的类型及阳性发生率。
方法采用全自动蛋白电泳仪分析系统对12480 份患者标本进行测定分析。
其中阳性结果再进行基因检测。
结果在12480例患者中发现1460例,阳性发生率11.7%,其中α-地中海贫血表型阳性454例,阳性率3.2%,β地中海贫血表型阳性817例阳性率5.6%,异常血红蛋白病189例,阳性率1.3%。
结论血红蛋白电泳技术的普及和应用,能有效地筛查出高危患者,对进一步进行基因诊断和遗传咨询提供帮助。
标签:血红蛋白电泳;地中海贫血;血红蛋白病血红蛋白电泳在异常血红蛋白病的检出和珠蛋白合成障碍性贫血的实验室诊断中有非常重要的作用,依据定量测出HbA1、HbA2,HbF含量,将地中海贫血进行初步分类为α地中海贫血简称α地贫或β地中海贫血简称β地贫,及异常血红蛋白病;而地中海贫血是我国南方地区最常见的遗传病之一,也是全世界最常见的遗传病之一[1],我国高发区以南方为主,尤其广东,广西,云南,贵州等省份,我市处于广西地域,为了解血红蛋白病的检出情况,对2012年1月~2013年8月12480例血红蛋白电泳结果分析如下。
1资料与方法1.1一般资料12480份送检标本来源于2010 年8 月~2013 年10月我院门诊与住院患者,年龄2~65岁,其中男性标本5663份,女性标本6817份。
1.2方法1.2.1标本要求与处理血红蛋白液(Hb)制备:采集枸橼酸钠抗凝血标本2 mL,抗凝剂与血液之比1∶9,标本离心(5 000 转/ min) 5 min,去除血浆,用10 倍生理盐水冼涤红细胞3次,后取红细胞50μl 加溶血素250 μL震荡混匀室温放置5 min后即可。
1.2.2血红蛋白电泳,采用Microtech 696PC(蓝钻) 全自动蛋白电泳仪分析系统,操作过程包括:取待测(Hb)液,点样,电泳。
变性、染色、脱色,烘干,自动扫描定量测出结果。
血红蛋白电泳结果解读
血红蛋白电泳是一种重要的血液检查,它可以帮助医生诊断血液病,
以便及时采取治疗措施。
检查结果能够提供相关的血液病细胞的信息,这样的信息是诊断血液病的关键数据。
血红蛋白电泳是一种测量血液中的血红蛋白水平,因为红细胞含有血
红蛋白,所以可以通过血红蛋白电泳来诊断血液病。
血红蛋白电泳可
以识别血液病患者血液中特殊的红细胞形态和形状,这对于进行诊断
检查是必不可少的。
正常情况下,血红蛋白电泳结果应该左右对称,
但有时候可能出现异常,如果出现异常结果,表明血液中存在特殊的
红细胞形态和形状,这可能表明血液病患者存在血液病病变。
一般来说,偏低的血红蛋白指数表明可能存在贫血的问题,它可能是
由内分泌和营养状况引起的,也可能是由甲状腺疾病、肝脏病和骨髓
疾病等疾病引起的。
如果血红蛋白指数变得高,则可能存在病毒性贫血、缺铁性贫血、单核细胞增多症等,因此在诊断时,一定要了解患
者的所有病史,以便正确判断病情。
总之,血红蛋白电泳是一种可以帮助诊断血液病的有效检查,正确解
读血红蛋白指数有助于改善患者的生活质量,帮助他们更好的掌控病情,从而达到治疗的最佳效果。
血红蛋白电泳(hemoglobin electrophoresis)(HbA2定量)
血红蛋白电泳(hemoglobin electrophoresis)(HbA2定量)实验原理血红蛋白电泳(hemoglobin electrophoresis)目的是检出和确认各种正常和异常的血红蛋白。
根据不同的血红蛋白带有不同的电荷,等电点不同,在一定的pH缓冲液中,血红蛋白的等电点小于缓冲液的pH时带负电荷,电泳时在电场中向阳极泳动,反之,Hb带正电荷向阴极泳动。
在一定电压下,经过一定时间的电泳,不同的血红蛋白所带电荷不同,分子量不同,其泳动方向和速度不同,可分离出各自的区带,同时对电泳出的各区带进行比色或电泳扫描,可进行各种血红蛋白的定量分析。
一般最常用的是pH8.6醋酸纤维薄膜电泳。
胞浆内存在糖原或多糖类物质(如粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等)中的乙二醇基(CHOH-CHOH)经过碘酸(periodic acid)氧化,转变为二醛基(CHO-CHO),与雪夫(Schiff )试剂中的无色品红结合,形成紫红色染料而沉积于细胞内多糖所在处。
该反应称为过碘酸-雪夫(P AS)阳性反应,以前也称为糖原染色。
实验方法材料:1. 缓冲液(1)pH8.6 TEB缓冲液:称取Tris10.29 g,EDTA 0.6 g,硼酸3.2 g,加蒸馏水至1000 ml。
(2)硼酸盐缓冲液:称取硼砂6.87 g,硼酸5.56 g,加蒸馏水至1000 ml。
2. 醋酸纤维薄膜、电泳仪、加样器、分光光度计、比色杯。
方法:1. 血红蛋白溶液的制备取肝素或者枸橼酸钠抗凝血3 ml,2000 rpm离心10分钟后弃去血浆;用生理盐水洗涤红细胞三次(750 rpm,离心5分钟),再2200 rpm,离心10分钟,弃去上清液;加入等量的蒸馏水;再加入0.5倍体积四氯化碳,用力振摇5分钟,2200 rpm,离心10分钟后将上层Hb液吸出备用。
2. 浸膜将醋酸纤维薄膜剪成3 cm×8 cm的纸条,浸入pH8.6 TEB缓冲液,浸透后取出,用滤纸吸干。
血红蛋白电泳检查(电泳法)
血红蛋白电泳检查(电泳法)1. 原理血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。
每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。
所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。
所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。
正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。
血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。
氨基酸不同可形成不同的血红蛋白,其表面电荷不同,在电场中的泳动率不同。
本实验在碱性(PH=8.60)条件下,以琼脂糖凝胶电泳的方法进行,对红细胞洗涤后造成溶血,电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。
多余的染色液用酸性液体洗去。
待琼脂糖凝胶板干燥后,肉眼可直接判别有无电泳条带异常。
运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。
血红蛋白异常有二种类型:血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。
血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常,称之为地中海贫血。
2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备:受检者应空腹。
2.2 标本种类:抗凝血2.3 标本要求:抗凝剂选用ED TA,柠檬酸或肝素均可,避免碘乙酸。
常规静脉采血1.8ml,加入含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml的干燥。
清洁试管中,充分混匀。
3. 标本储存:储存于2-8℃冰箱中,5天。
4. 标本运输:储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。
5. 标本拒收标准:细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。
6. 试剂6.1 试剂名称:血红蛋白电泳检查试剂6.2 试剂生产厂家:法国Sebia公司6.3 包装规格:150test s6.4 试剂盒组成琼脂糖凝胶 10块溶血素 1瓶缓冲液条带 10包×2条薄滤纸1×10张氨基黑(浓缩液)1瓶×100ml点样模具滤纸 10条×1盒6.5 试剂储存条件及有效期:贮存于室温(15~30℃)或冰箱(2~8℃),不能冷冻。
血红蛋白电泳报告单
血红蛋白电泳报告单:血红蛋白电泳报告单地贫筛查结果怎么看贫血看血常规哪个项目平均血红蛋白浓度偏低篇一:血红蛋白电泳血红蛋白电泳检查(电泳法)1. 原理血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。
每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。
所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。
所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。
正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。
血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。
氨基酸不同可形成不同的血红蛋白,其表面电荷不同,在电场中的泳动率不同。
本实验在碱性(PH=8.60)条件下,以琼脂糖凝胶电泳的方法进行,对红细胞洗涤后造成溶血,电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。
多余的染色液用酸性液体洗去。
待琼脂糖凝胶板干燥后,肉眼可直接判别有无电泳条带异常。
运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。
血红蛋白异常有二种类型:血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。
血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常,称之为地中海贫血。
2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备:受检者应空腹。
2.2 标本种类:抗凝血2.3 标本要求:抗凝剂选用EDTA,柠檬酸或肝素均可,避免碘乙酸。
常规静脉采血1.8ml,加入含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml的干燥。
清洁试管中,充分混匀。
4. 标本储存:储存于2-8℃冰箱中,5天。
5. 标本运输:储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。
6. 标本拒收标准:细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。
7. 试剂7.1 试剂名称:血红蛋白电泳检查试剂7.2 试剂生产厂家:法国Sebia公司7.3 包装规格:150tests7.4 试剂盒组成琼脂糖凝胶10块溶血素1瓶缓冲液条带10包×2条薄滤纸1×10张氨基黑(浓缩液)1瓶×100ml点样模具滤纸10条×1盒7.5 试剂储存条件及有效期:贮存于室温(15~30℃)或冰箱(2~8℃),不能冷冻。
血红蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳实验报告
血红蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳实验报告实验二 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)测定蛋白质的分子量1 原理1.1聚丙烯酰胺凝胶的性能及制备原理1.1.1性能聚丙烯酰胺凝胶的机械性能好,有弹性,透明,相对地化学稳定,对pH和温度变化比较稳定,在很多溶剂中不溶,是非离子型的,没有吸附和电渗作用。
通过改变浓度和交联度,可以控制孔径在广泛的范围内变动,并且制备凝胶的重复性好。
由于纯度高和不溶性,因此还适于少量样品的制备,不致污染样品。
1.1.2 制备原理聚丙烯酰胺凝胶是用丙烯酰胺(Acr)和交联剂甲叉双丙烯酰胺(Bis)在催化剂的作用下聚合而成。
聚丙烯酰胺凝胶聚合的催化系统有化学聚合和光聚合两种。
本实验是用化学聚合。
化学聚合的催化剂通常多采用过硫酸铵(AP)或过硫酸钾,此外还需要一种脂肪族叔胺作加速剂,最有效的加速剂是N,N,N’,N’-四甲基乙二胺(TEMED)。
在叔胺的催化下,由过硫酸铵形成氧的自由基,后者又使单体形成自由基,从而引发聚合反应。
叔胺要处于自由碱基状态下才有效,所以在低pH时,常会延长聚合时间;分子氧阻止链的延长,妨碍聚合作用;一些金属也能抑制聚合;冷却可以使聚合速度变慢。
通常控制这些因素使聚合在1小时内完成,以便使凝胶的性质稳定。
1.1.3 凝胶浓度和交联度与孔径的关系凝胶浓度根据被分离的物质的分子量大小确定。
当分析一个未知样品时,常先用7.5%的标准凝胶或用4~10%的凝胶梯度来试测,而后选出适宜的凝胶浓度。
凝胶的机械性能、弹性是否适中很重要,胶太软易断裂,;太硬则脆,也易折断。
1.2 SDS-凝胶电泳法测定蛋白质分子量的原理蛋白质分子在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,它的迁移率取决于所带净电荷及分子的大小和形状等因素。
如果在聚丙烯酰胺凝胶系统中加入SDS和巯基乙醇,则蛋白质分子的迁移率主要取决于它的分子量,而与所带电荷和形状无关。
微量血红蛋白电泳
微量血红蛋白电泳微量血红蛋白电泳是一种常用的实验技术,用于检测和分析血红蛋白的各种变异型。
本文将对微量血红蛋白电泳的原理、方法和应用进行详细介绍。
微量血红蛋白电泳是一种基于蛋白质电泳原理的实验技术。
血红蛋白是红细胞中的一种重要蛋白质,负责携带氧气和二氧化碳。
在正常情况下,血红蛋白分子是稳定的,但在某些疾病或遗传突变的情况下,血红蛋白分子的结构会发生变化,导致其电泳迁移率发生改变。
微量血红蛋白电泳利用电场作用下不同血红蛋白变异型的迁移速率差异,通过电泳分离和检测来确定血红蛋白的类型和数量。
这种技术可以识别不同类型的血红蛋白变异,如地中海贫血、镰状细胞性贫血等。
第二部分:微量血红蛋白电泳的方法微量血红蛋白电泳的实验过程涉及样品制备、电泳分离和结果分析三个步骤。
1. 样品制备:首先需要采集患者的血液样品,通常使用抗凝剂抗凝后离心分离血浆。
然后将血浆中的血红蛋白进行溶解和脱氧处理,使其得到最佳电泳性能。
2. 电泳分离:将样品加载到预制的电泳胶片上,然后将胶片放入电泳槽中。
在电泳过程中,施加恒定电场,使血红蛋白分子迁移。
根据不同的电荷和大小,血红蛋白变异型会在胶片中形成不同的带状图案。
3. 结果分析:将电泳胶片进行染色和显影,观察带状图案,并用专业的图像分析软件进行定量分析。
根据不同带状图案的迁移位置和强度,可以确定血红蛋白的变异型和含量。
第三部分:微量血红蛋白电泳的应用微量血红蛋白电泳广泛应用于临床诊断和科研领域。
它可以用于以下几个方面:1. 遗传性疾病的诊断:微量血红蛋白电泳可以鉴定各种遗传性血液病,如地中海贫血、镰状细胞性贫血、血红蛋白C病等。
通过检测血红蛋白的变异型,可以帮助医生进行准确的诊断和治疗。
2. 药物研发和毒性评价:微量血红蛋白电泳可以用于评估药物对血红蛋白的影响,判断药物的安全性和毒性。
研究人员可以通过观察血红蛋白的变异型和含量来评估药物的作用机制和副作用。
3. 基因突变的研究:微量血红蛋白电泳可以用于研究不同基因突变对血红蛋白结构和功能的影响。
血蛋白实验报告
一、实验目的1. 学习醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法;2. 了解电泳技术的一般原理;3. 掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量的方法;4. 分析血清蛋白质组成及其变化。
二、实验原理血清蛋白是血液中的一种重要成分,主要由清蛋白、球蛋白、纤维蛋白原等组成。
醋酸纤维薄膜电泳是一种常用的分离蛋白质的方法,其原理是利用蛋白质在电场中带电荷的性质,根据蛋白质分子大小、形状和电荷量的不同,在醋酸纤维薄膜上形成不同的区带,从而达到分离的目的。
三、实验材料1. 血清样本:新鲜血液样本,分离血清;2. 醋酸纤维薄膜:厚度为0.1~0.2mm;3. 电泳缓冲液:pH8.6的Tris-Gly缓冲液;4. 染色剂:氨基黑10B;5. 显色剂:甲醇和醋酸;6. 仪器:电泳仪、电泳槽、紫外灯、分光光度计等。
四、实验步骤1. 制备样品:将血清样本用pH8.6的Tris-Gly缓冲液稀释,制成10%的蛋白质溶液。
2. 制备醋酸纤维薄膜:将醋酸纤维薄膜剪成适当大小的条状,浸泡在1%的醋酸纤维溶液中,待其完全浸透后取出,晾干。
3. 点样:用微量移液器将制备好的血清蛋白溶液点在醋酸纤维薄膜上,点样量约为1μl。
4. 电泳:将点样后的醋酸纤维薄膜放入电泳槽中,加入pH8.6的Tris-Gly缓冲液,设置电压为200V,电泳时间约为60分钟。
5. 染色:电泳结束后,取出醋酸纤维薄膜,放入含有氨基黑10B的染色液中,染色时间约为30分钟。
6. 显色:将染色后的醋酸纤维薄膜放入含有甲醇和醋酸的显色液中,观察蛋白质区带。
7. 定量分析:使用分光光度计,在波长595nm处测定蛋白质区带的吸光度,根据标准曲线计算蛋白质含量。
五、实验结果与分析1. 蛋白质区带:根据电泳结果,可以将血清蛋白质分为五个区带,分别为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白。
2. 蛋白质含量:根据分光光度计测定的吸光度,绘制标准曲线,计算各个蛋白质区带的含量。
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实验汇报
实验名称:血红蛋白电泳
项目名称:两种碱性血红蛋白样品处理方法的电泳结果
实验时间:2018年9月17日
实验室:龙泉驿区妇幼保健院检验科
实验人员:杨松
报告单位:成都温伦科技有限公司
一、实验目的:
1、掌握生理盐水处理血红蛋白样品的方法
2、掌握四氯化碳处理血红蛋白样品的方法
3、掌握电泳仪实验的操作
4、分析两种碱性血红蛋白样品处理方法电泳结果的不同
二、实验原理:
血红蛋白电泳就是利用在电场的作用下, 由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小, 形状等性质的差异, 使带电分子产生不同的迁移速度, 从而对样品进行分离, 鉴定或提纯的技术,在临床检验中, 主要用于分离各类蛋白分子。
三、实验方法:
琼脂糖电泳法
四、实验器械:
样品:10个EDTA抗凝管抽取的病人全血样品
试剂:0.9%生理盐水500ml,四氯化碳500ml,界面液250ml,美国Helena Spife3000血红蛋白电泳检测试剂盒
器材:移液枪,一次性移液枪头若干,EDTA抗凝管10个,玻璃试管10个设备:美国Helena Spife3000 全自动电泳仪
五、实验步骤:
1、取得医院检验科EDTA抗凝管抽取的病人全血样品10个,编号为1,2,3......10。
2、将1-10号十个个样品分别用移液枪取200ul到玻璃试管中,编号为
1-1,2-1,3-1,.....10-1。
3、将1-10号10个样品进行生理盐水前处理,处理方法如下:
-用0.9%生理盐水混匀,3500 rpm离心10分钟.
-吸走弃去清液。
-以上步骤连续进行三次。
-完全吸走弃去上清液。
-20ul制作后的样本+80ul溶血素,混匀。
-取溶血后的样本17ul加入样品孔。
4、将1-1到10-1号10个样品进行四氯化碳前处理,处理方法如下:
-用0.9%生理盐水溶液5000μL与样品混合。
-3000rpm离心5分钟。
-弃去上清液,只留下红细胞。
-加入200ul 蒸馏水溶解红细胞。
-加入300ul 的四氯化碳,混合均匀,3000rpm离心5分钟。
-取上面萃取后的血红蛋白液17ul 加入样品孔。
5、记录下这20个样品的样品孔编号,将样品孔放入样品板,摆放进电泳槽中,放上加样刀锋,添加界面液,放上琼脂板,掀开琼脂板保护膜,吸取多余界面液,放上碳棒,关上电泳槽的盖子,启动设备开始电泳。
6、大约30分钟后,电泳完成,取出碳棒放好,铲掉琼脂板上的盐桥,取出琼脂板,放入染色槽中进行染色脱色干燥。
7、大约30分钟后,染色脱色干燥完成,取出琼脂板,放入扫描仪中进行扫描,用PT软件进行分析数据,记录数据。
六、实验数据:
七、实验结果:
采用前处理方法二(四氯化碳)处理的血红蛋白,相对于前处理方法一(生理盐水)处理的血红蛋白,电泳结果HbA2偏高,HbA1偏低,电泳条带更加聚集。
八、参考文献:
电泳技术以及其临床应用 ISBN 7-5381-4777-2 实验室质量管理 CNAS-CL27。