兽用疫苗保护剂和佐剂讲解
04第四章 灭活剂、保护剂和免疫佐剂(兽医生物制品学)
温度越高，灭活越快，灭活作用随温度上升而加速。在低温时，温 度每上升10C，细菌死亡率可成倍增加。每升高10C，金属盐类的灭菌 作用增加2-5倍，石炭酸的杀菌作用增加5-8倍。但是，如果温度超过 40C 或更高，对微生物的抗原性将有不利影响。
(五)pH
在微酸性时灭活速度慢，抗原性保持较好，在碱性时灭活速度快，但 抗原性易受破坏。灭活初期损失较快，以后逐渐减慢，尤其甲醛溶液浓度 高时，在碱性溶液中抗原性损失更大。
附：
用乙烯亚胺衍生物对病毒进行灭活，当灭活结束时，应中止灭活并 除去其残存物，以免继续作用而损害疫苗的免疫原性。采用的方法是： 在乙烯亚胺衍生物灭活的病毒液中加入过量的硫代硫酸钠或亚硫酸钠， 不论是0.05%AEI或0.02%BEI，病毒液中硫代硫酸钠最终浓度均为2%， 以中断灭活剂灭活作用。
此外，-丙内脂（-propiolactone）也是一种良好的病毒灭活剂， 它是一种不稳定的液体，于37C 2h后能自行水解为无毒物质。
注意：这里指的是甲醛的浓度，并非福尔马林的浓度！
(二) 苯酚
酚类是以羟基取代苯环上的氢而形成一类化合物。苯酚(phenolum)， 又称石炭酸(acidum carbolicum)，为具有特殊气味的无色结晶，易潮解， 溶于水及有机溶剂，见光则颜色变深，置于空气中易被氧化，颜色也变深， 所以应避光保存。
三、影响灭活作用的因素
(一) 灭活剂的特异性
某些灭活剂只对一部分微生物有明显的灭活作用，而对另一些微生物 则效力很差。如酚类能抑制和杀灭大部分细菌的繁殖体，5%石炭酸溶液 于数小时内能杀死细菌的芽胞。阳离子表面活性剂抗菌谱广，效力快，对 组织无刺激性，能杀死多种革兰氏阳性菌和阴性菌，但对绿脓杆菌和细菌 芽胞作用弱。
兽用疫苗保护剂和佐剂
兽医生物制品常用的保护剂
1．5%蔗糖（乳糖）脱脂乳保护剂
蔗糖（或乳糖） 5g，加脱脂乳至 100ml，充分溶解后，110~116℃高压灭菌 30~40 min。
2．明胶蔗糖保护剂
明胶 2%~3%（g/m1）、蔗糖5%（g/m1）、硫脲 1%~2%（g/m1）。先 将 12%~18%明胶液、 30%蔗糖液和 6%~12%硫脲液加热溶解， 116℃高压 灭菌30~40min；
1. 营养液： • 可修复因冻干而受损的细胞，使冻干制品含有一定量水分；
• 可促进高分子物质形成骨架，使冻干制品呈多孔的海绵状，
增加溶解度 2. 赋形剂： • 防止低分子物质的碳化和氧化，保护活性物质不受加热影响 • 使冻干制品形成多孔性、疏松的海绵状物，增加溶解度 3. 抗氧化剂： • 抑制冻干制品中的酶作用，增加生物活性物质在冻干后贮存
7．脂质分子类佐剂：脂多糖、Vit A和Vit E等脂溶性维生素
8．其他：霍乱毒素（CT）、百日咳毒素（PT）和破伤风类 毒素（TT）等；脂磷壁酸（LTA）；维生素B12等。
氢氧化铝胶 (铝胶）
合成方法:
（1）用铝粉加烧碱合成法
2Al(OH)3+12H2O+3H2SO4→Al2(SO4)3· 18H2O
兽用疫苗冻干保护剂 和佐剂
冻干保护剂（稳定剂）
保护剂：又称稳定剂（stabilizer） ，是指一类能防止生 物活性物质在冷冻真空干燥时受到破坏的物质。（指对疫 苗生产、血清制备等） 保护剂用途（不同用途加不同保护剂, 主要针对活的微生 物或细胞） ① 菌种或毒种保存：常用甘油作保护剂 ② 细胞株保存：常用二甲基亚砜(DMSO) DMSO:二甲基亚砜，一种细胞的保护剂 ③ 疫苗冷冻真空干燥制备时：加脱脂乳（或二甲基亚 砜）和蔗糖等（不同国家有不同配方） ④ 干扰素类生物活性物质的保存：加葡聚糖
兽用免疫佐剂浅谈
山东畜牧兽医2016年第37卷兽用免疫佐剂浅谈李宁王应玉（山东省威海市文登区张家产畜牧兽医工作站 264407）王亮（山东省威海市文登区畜牧兽医局）中图分类号：S851.33 文献标识码：C 文章编号：1007-1733(2016)11-0048-02免疫佐剂具有增强免疫效应的作用，与疫苗配合使用，延长免疫时间，减少免疫次数，提高免疫效果，在畜牧生产上有重要意义。
1 油乳佐剂油乳佐剂是用矿物油、乳化剂(如span-80，Tween-80)及稳定剂(如硬脂酸铝)、水按一定比例混合制备而成。
有油包水型(W/O)和水包油型(O/W)。
油乳佐剂作为储存库，抗原被包藏其中，注射体内后起到缓释作用，免疫持久。
油乳佐剂在灭活疫苗生产中用广泛。
1.1 弗氏佐剂分为弗氏不完全佐剂(FIA)和弗氏完全佐剂(FCA)。
弗氏不完全佐剂(FIA)是将矿物油(石蜡油)和乳化剂(羊毛脂、Tween-80)混合制成油包水型(W/O)佐剂，弗氏完全佐剂(FCA)是在弗氏不完全佐剂(FIA)的基础上加入灭活的分枝杆菌或卡介苗。
1.2 其它油乳佐剂 除了FCA和FIA，基于矿物油的佐剂还有白油Span佐剂、Specol佐剂、MontanideISA50、ISA 206等。
除了矿物油，其他油脂也可以制成油乳佐剂，比较常用的有植物油(如花生油)、角鲨烯和角鲨烷等。
2 矿物质类佐剂矿物质佐剂属于传统佐剂之一，主要指铝盐和钙盐佐剂，包括氢氧化铝胶、硫酸铝钾胶、磷酸铝、磷酸钙等，矿物质类佐剂能吸附和沉淀抗原，与抗原形成复合物，形成凝胶状态，注入动物体内后形成抗原储存库，缓慢释放抗原，较长时间刺激免疫系统，主要增强机体的体液免疫应答。
铝盐佐剂已有70多年的应用历史，在人用生物制品广泛应用。
3 微生物佐剂某些微生物菌体、组分、代谢产物能够活化免疫细胞，加强免疫效应，对特异性和非特异性免疫都有明显的增强作用。
3.1 微生物菌体 分枝杆菌、乳酸菌类、短小棒状杆菌、葡萄球菌、链球菌、百日咳杆菌。
新型兽用疫苗佐剂的研发
新型兽用疫苗佐剂的研发近年来，随着兽用疫苗的广泛应用，科学家们不断致力于疫苗的研发和改进。
而疫苗佐剂作为疫苗的重要组成部分，对于提高疫苗的免疫效果至关重要。
本文将介绍新型兽用疫苗佐剂的研发。
疫苗佐剂是指用于增强疫苗免疫效果的辅助物质。
它能够在疫苗注射后，激活免疫系统，增强免疫反应，提高疫苗的免疫效果。
疫苗佐剂的研发一直是兽用疫苗研究的热点领域之一。
传统的兽用疫苗佐剂主要是采用铝盐类佐剂，如氢氧化铝和磷酸铝。
这些佐剂在提高疫苗免疫效果的也存在一些缺点。
铝盐类佐剂只能提高疫苗的体液免疫效果，对于细胞免疫效果的提升有限。
铝盐类佐剂在体内会积聚，可能引起免疫系统的炎症反应。
科学家们开始致力于研发新型兽用疫苗佐剂，以改善疫苗的免疫效果。
目前，新型兽用疫苗佐剂的研发主要集中在以下几个方面：1. 油水乳化佐剂：油水乳化佐剂是一种将水相和油相乳化的佐剂。
它的主要作用是增加疫苗抗原的稳定性，延长免疫效果，并提高疫苗的抗体产生水平。
油水乳化佐剂在提高疫苗的体液和细胞免疫效果方面都表现出良好的效果。
2. 细胞活化剂：细胞活化剂能够激活免疫系统，增加免疫细胞的数量和活性，提高疫苗的免疫效果。
目前，一些生物活性物质如脂多糖等被应用于兽用疫苗佐剂中，以提高疫苗的免疫效果。
3. 蛋白质佐剂：蛋白质佐剂可以增加疫苗抗原的稳定性，并提高免疫细胞对抗原的吸附、处理和表达。
一些天然的蛋白质佐剂如卵黄蛋白等已经被广泛应用于兽用疫苗的研究中。
4. 基因佐剂：基因佐剂是一种将表达抗原的基因导入到宿主体内的佐剂。
这种佐剂可以直接激活宿主的免疫系统，提高疫苗的免疫效果。
目前，一些基因佐剂如带有表达抗原的质粒已经开始应用于兽用疫苗的研究中。
随着基因工程和纳米技术的发展，新型兽用疫苗佐剂的研发也逐渐向着基因佐剂和纳米佐剂方向发展。
这些新型佐剂的应用将为兽用疫苗的研究和应用带来更多可能性。
新型兽用疫苗佐剂的研发是提高兽用疫苗免疫效果的关键。
科学家们需不断努力，通过研究和实验，进一步改进和创新兽用疫苗佐剂，以应对日益复杂和多变的兽用疫情。
新型兽用疫苗佐剂的研发
新型兽用疫苗佐剂的研发随着社会经济的发展，人们对于动物健康和兽医保健的关注度越来越高。
兽用疫苗作为预防和控制动物疾病最有效的手段之一，其研发和应用也受到了广泛的关注。
而疫苗佐剂作为疫苗中不可或缺的一部分，其研发和应用更是不可忽视的重要环节。
本文将从新型兽用疫苗佐剂的研发角度进行探讨，为兽用疫苗技术的发展提供一些思路和建议。
一、兽用疫苗佐剂的作用和意义疫苗佐剂是指在疫苗中起到增强免疫效果的物质，其作用是提高疫苗的免疫原性、免疫强度和免疫持久性。
通过疫苗佐剂的配合，可以增加疫苗的有效性，降低疫苗的剂量和次数，提高疫苗的接种效果，并且可以减少免疫耐受性和不良反应，提高免疫效果的持续时间。
疫苗佐剂在兽用疫苗中的应用具有重要的意义。
二、现有兽用疫苗佐剂的局限性目前，兽用疫苗佐剂的种类较为单一，主要包括脂多糖类、矿物油类和乳化剂等。
这些佐剂能够提高疫苗的免疫效果，但也存在着一些局限性。
比如脂多糖类佐剂容易引起动物免疫耐受性，矿物油类佐剂容易引起不良反应，乳化剂在提高疫苗效果的同时也可能影响疫苗的安全性。
需要不断地研发新型的兽用疫苗佐剂，以满足兽医保健的需求。
三、新型兽用疫苗佐剂的研发方向1. 生物佐剂的研发生物佐剂是指以微生物、酵母、藻类等天然生物质作为载体，辅助疫苗成分，增强疫苗的免疫原性和免疫效果的一种佐剂。
目前已有一些研究表明，利用生物佐剂可以提高疫苗的免疫效果，降低疫苗的不良反应，延长疫苗的免疫持续时间，因此生物佐剂的研发具有重要的意义和广阔的前景。
2. 纳米佐剂的研发纳米佐剂是指将纳米材料作为疫苗的佐剂，提高疫苗的稳定性、生物利用度和免疫效果的一种佐剂。
目前纳米技术在药物传递、肿瘤治疗等领域有着广泛的应用，因此纳米佐剂在兽用疫苗中应用也具有广阔的前景。
1. 多学科交叉研究新型兽用疫苗佐剂的研发需要集生物工程、药物制剂、免疫学、生物化学等多学科知识为一体，因此需要加强不同学科之间的交流与合作，共同研究解决兽用疫苗佐剂研发中的关键技术难题。
兽用疫苗保护剂和佐剂
兽用疫苗保护剂和佐剂
源文件
家畜用疫苗和佐剂
疫苗保护剂（vaccines）是一种生物制品，用于预防特定的传染病，
特别是传染性病毒性疾病，其核心成分是通过特定的方法培养出来的微生
物（如病毒、细菌或其他微生物），或者是受其影响的细胞组织的细胞组
织的结构，以及一种或多种被特定技术经过处理的特殊成分。
疫苗保护剂
的主要目的是刺激免疫系统，使其识别感染其中一种病毒或细菌所制造的
特殊物质，从而达到预防疾病的作用。
疫苗保护剂中的佐剂（adjuvants）是添加到疫苗中的其中一种物质，可以能够增强疫苗的作用。
疫苗保护剂的典型佐剂包括水溶性共价核酸、
油溶性混合物、羟基或其它的物质。
其作用是抑制疫苗保护剂中细胞组织
的细胞组织成分，以及使病毒蛋白的活性更高，从而增加疫苗的免疫效果。
家畜疫苗保护剂常用于特定的家畜，如家禽、家畜和动物等，以预防
它们感染病毒或细菌性疾病。
它们的作用是通过诱导免疫系统产生特异性
的抗体来防止或减轻家畜感染病毒和细菌性疾病的症状。
家畜疫苗保护剂
通常是由活的、活性免疫有力的，但毒性较低的微生物制成的，或者是由
体外特定技术处理而成的特殊细胞组织制成。
新型兽用疫苗佐剂的研发
新型兽用疫苗佐剂的研发随着现代畜牧业的发展，动物疫病成为畜牧业发展的重要限制因素之一。
为了保障动物健康，确保畜牧业的持续发展，疫苗的研发和应用显得尤为重要。
而在疫苗的研发过程中，佐剂的选择对疫苗的效果具有至关重要的作用。
近年来，随着科技的不断进步和创新，新型兽用疫苗佐剂的研发成为了畜牧业领域的研究热点之一。
一、疫苗佐剂的意义疫苗是预防动物疫病的一种重要手段，但单独的疫苗有时往往不能达到理想的预防效果。
疫苗佐剂的作用就凸显出来。
疫苗佐剂是指在疫苗中加入的一些物质，能够增强或者改善疫苗的免疫效果。
通过疫苗佐剂的应用，可以提高疫苗的有效性，扩大疫苗的免疫范围，延长疫苗的保护时间，提高对动物的免疫效果，从而更好地保护动物的健康。
二、新型兽用疫苗佐剂的研发现状目前，新型兽用疫苗佐剂的研发工作正在积极进行中，不同领域的科研人员都在不同方面进行着尝试和实验。
在疫苗佐剂的研发过程中，主要涉及到了生物制剂、化学制剂和基因工程制剂等方面的研究。
1. 生物制剂在生物制剂方面，研究人员主要从天然的生物制剂中寻找疫苗佐剂的候选物质，比如微生物多糖、植物提取物、酵母蛋白等。
这些天然的生物制剂往往具有较好的免疫增强效果，能够有效提高动物对疫苗的免疫效果，延长免疫保护时间。
目前，我国一些科研机构已经开展了一些天然生物制剂研究的工作，取得了一定的成果。
2. 化学制剂在化学制剂方面，研究人员主要从化学合成的角度出发，寻找能够有效增强疫苗免疫效果的物质。
一些新型的胺类化合物、脂质体载体和聚合物材料等，都在疫苗佐剂的研发领域有着广泛的应用。
这些化学制剂往往能够通过不同的途径，提高疫苗的免疫效果，同时也能够降低疫苗的剂量，减少对动物的刺激和损害。
现阶段，一些药企和科研机构也在积极开展化学制剂的研究工作。
3. 基因工程制剂基因工程制剂是近年来兽用疫苗佐剂研发的一个新兴领域。
通过基因工程技术，研究人员可以将某些特定的基因序列导入到疫苗中，来增强疫苗的免疫效果。
兽用疫苗保护剂和佐剂
兽用疫苗保护剂和佐剂随着人类对动物健康和养殖业的关注日益增加，兽用疫苗成为提高动物免疫力和预防疾病传播的重要手段。
兽用疫苗并非一种简单的药物，它由疫苗保护剂和佐剂两部分组成。
疫苗保护剂含有致病菌或致病菌的一些组分，用于引起动物的免疫反应；而佐剂则是辅助疫苗保护剂，增强疫苗的稳定性、免疫效果以及延长免疫时间，使疫苗在动物体内发挥最大的保护作用。
兽用疫苗保护剂是兽用疫苗的关键组成部分，它由病原体或病原体的一些成分组成，通过自然免疫或人工免疫的方式引起动物的免疫反应。
疫苗保护剂的选择要根据不同的疫病特点和动物免疫途径来确定。
对于细菌性疫病，如猪鼻支原体、禽霍乱和鸡伤寒，常规的疫苗保护剂一般由灭活疫苗、减毒疫苗或次单位疫苗制成。
对于病毒性疫病，如禽流感和猪瘟，常用的疫苗保护剂则有灭活疫苗、减毒疫苗、重组蛋白疫苗以及DNA疫苗等。
随着疫苗的广泛使用，人们发现疫苗的免疫效果与疫苗保护剂的稳定性和免疫性能密切相关。
佐剂作为疫苗保护剂的辅助剂，能够增强疫苗的免疫原性、稳定性和免疫效果，提高动物的免疫力和抗体产生。
佐剂的选择要根据疫苗保护剂的特点和动物免疫途径来确定。
常见的佐剂有油佐剂、水佐剂、微球佐剂、多糖佐剂以及胆固醇佐剂等。
油佐剂是最常用的佐剂之一，由白针剂、水针剂和油水乳剂等组成。
油佐剂具有较好的免疫增强效果，能延长疫苗在机体内的留存时间，增加抗体的产生量，提高动物的免疫效果。
油佐剂的缺点是使用时需要摇晃均匀，否则易引起注射部位的红肿和坏死。
由于油佐剂的黏稠度较高，注射时需要技术要求较高。
水佐剂是由氧化铝悬浮液和胶体硅悬浮液等组成，可以增强疫苗的免疫原性和稳定性。
水佐剂对动物的刺激较小，不易引起注射部位的红肿和坏死。
水佐剂能够形成颗粒状混悬液，通过免疫细胞的吞噬作用提高免疫效果，适用于禽用和兽用疫苗的施用。
微球佐剂是由聚乳酸和聚乙二醇等微球体封装的疫苗保护剂，具有稳定性好、溶解度高、生物相容性好等特点。
微球佐剂可以根据疫苗保护剂的特点和免疫途径的不同，调整微球的药物释放速率和抗原释放量，以达到最佳的免疫效果。
新型兽用疫苗佐剂的研发
新型兽用疫苗佐剂的研发在兽医学领域，疫苗是预防和控制动物传染病的重要手段。
一些传染病的疫苗效果不佳，需要额外的佐剂来提高免疫效果。
研发新型兽用疫苗佐剂成为了兽医学界的一个重要课题。
兽用疫苗佐剂主要通过提高疫苗的免疫原性、稳定性和持久性来加强免疫效果。
目前常用的佐剂类型包括油乳剂、相乳剂、矿物沉淀剂和生物粘附剂等。
这些传统的佐剂在一些情况下效果不佳，因此需要研发新型的兽用疫苗佐剂。
一种新型兽用疫苗佐剂是纳米颗粒佐剂。
纳米颗粒佐剂具有较大的比表面积和更好的生物相容性，可有效提高免疫原性。
纳米颗粒佐剂的制备方法包括化学法、物理法和生物法等。
生物法制备的纳米颗粒佐剂受到了广泛关注。
这种方法利用生物大分子（如蛋白质、多糖等）自组装形成纳米颗粒，不仅具有良好的生物相容性，还能够激活免疫系统。
除了纳米颗粒佐剂，还有一种新型的兽用疫苗佐剂是有机小分子佐剂。
有机小分子佐剂通常具有较小的分子量和较好的生物可降解性，对生物系统的影响较小。
这种佐剂主要通过激活或调节免疫系统的信号通路来提高免疫效果。
近年来，一些有机小分子佐剂已经被应用于人类疫苗的研发，然而在兽医学领域的应用还相对较少，需要进一步研发和验证。
生物灭活剂也是一种新型的兽用疫苗佐剂。
生物灭活剂通过抑制病原微生物的生长和增殖来提高免疫效果。
这种佐剂可以通过化学方法、物理方法和基因工程方法等来制备。
生物灭活剂能够激活免疫系统并诱导免疫记忆，从而提高兽用疫苗的免疫效果。
研发新型兽用疫苗佐剂对于提高兽医学领域疫苗的免疫效果具有重要意义。
纳米颗粒佐剂、有机小分子佐剂和生物灭活剂都是目前研究的热点方向。
随着科学技术的不断发展，相信这些新型兽用疫苗佐剂将为目前的兽医学界带来更多的突破和进展。
4 第三章 灭活剂、保护剂与免疫佐剂
（五）-丙酰内酯 （－propiolactone），
又名为羟基丙酸-内酯。 性状为无色有刺激气 味的液体，潮气进入时缓缓分解成羟基丙酸， 其水溶液迅速全部分解。 水中溶解度37％（V/V），水溶液有效期 10℃保存18h，25℃保存3.5h，50℃保存 20min，密封于玻璃瓶中5℃保存较为稳定。能 与丙酮、醚和氯仿任意混合。 对皮肤。粘膜及眼有强刺激性，其液体对 动物有致癌性。是一种良好的病毒灭剂，病毒 灭活后，能保持良好的免疫原性，主要用于狂 犬病灭活疫苗的制备。
灭活疫苗/甲醛浓度/时间/温度
禽霍乱氢氧化铝灭活疫苗 0.1%甲醛 37℃ 7~12h 禽霍乱油乳剂灭活疫苗 0.1%甲醛 37℃ 12h 山羊传染性胸膜肺炎氢氧化铝0.1%甲醛16~18℃ 48h 兔出热组织灭活疫苗 0.4%甲醛 37℃ 12~24h 牛、羊伪狂大病灭活疫苗0.15%甲醛4~10℃ 7d 破伤风明矾沉降类毒素 0.4%甲醛 38℃21~31d 口蹄疫灭活疫苗 0.05%AEI或0.02%BEI 20~37℃ 7~20h
甲醛溶液是甲醛气体的水溶液，又称福尔马林。 常用的甲醛溶液约含37％甲醛气体（重量计），为无 色透明液体，有辛辣窒息味，对眼、鼻粘膜有强烈刺 激性，较冷温度下久贮易变混浊，形成三聚甲醛沉淀， 虽加热可变清，但会降低其灭活性能，故一般商品甲 醛溶液加10％～15％甲醇，以防止其聚合。
甲醛的灭活作用机理
（四）灭活温度
通常情况下，灭活作用随灭活温度上升而加速。 在低温时，温度每上升10℃，细菌死亡率可成倍 增加。每升高10℃，金属盐类的灭菌作用增加 2~5倍，石炭酸的杀菌作用增加5~8倍。 但是，如果温度超过40℃ 或更高，对微生物 的抗原性将有不利影响。
兽用疫苗常用免疫佐剂
健康养殖·防控畜牧业环境 2021.0556摘 要：本文对常用的铝盐佐剂、油乳型佐刑、微生物及微生物成分佐剂、植物性来源的佐剂、纳米佐剂、细胞因子类佐剂和其它佐剂的研究概括及机理进行简要叙述，旨在为开发研制低毒高效的免疫佐剂提供参考。
关键词：兽用疫苗；佐剂；免疫应答1 前言佐剂是一种免疫增强剂，佐剂本身不可以让机体产生免疫应答，但是将佐剂使用在疫苗中可以诱发机体针对特定的抗原产生更高效、更长期的免疫反应，能够减少抗原的用量，使疫苗对机体的保护作用增强并能降低疫苗成本。
有效的使用佐剂对兽用疫苗的生产和销售产生一定的影响。
2 铝盐佐剂铝盐佐剂是最早发现的疫苗佐剂。
常用的铝佐剂有磷酸铝佐剂、氢氧化铝胶佐剂、硫酸铝佐剂等。
铝盐佐剂通过刺激机体产生Th2反应，增强机体的体液免疫应答，但不参与细胞免疫。
铝盐佐剂也有一定的不足，会增加过敏风险，冷冻后的铝盐佐剂会使疫苗效力降低。
3 油乳型佐刑油乳型佐剂包括水包油类乳剂、油包水类乳剂和皂角普类佐剂。
最早应用于疫苗的油乳佐剂是弗氏佐剂，依据其是否含有灭活的牛分枝杆菌成分，但其只可以应用于大型动物疫苗中，针对宠物不能使用在疫苗中。
MF59是具有生物相容性的水包油乳液佐剂，具有毒副作用小、稳定性好、易于质量监控等优点，主要应用于流感疫苗中。
4 微生物及微生物成分佐剂人们很早就发现了真菌、细菌、病毒以及植物中的一些成分利用靶向模式识别受体，激活先天免疫，具有较强的佐剂活性。
脂多糖由脂质A、核心多糖和0抗原组成，是存在于革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种特有的化学物质。
脂质A是毒性主要成分，但也是LPS的活性分子，人们用通过科研攻关，去掉了有毒成分，佐剂的功能活性基团保留下来。
霍乱毒素是很好的黏膜免疫佐剂，在疫苗中添加霍乱毒素能够诱使机体产生细胞免疫和极强的体液免疫。
葡聚糖通过促进巨噬细胞分泌IL-6和和TNF-cx等细胞因子，在多种兽用疫苗中得到应用。
5 植物性来源的佐剂5.1 蜂胶蜂胶中含有脂肪酸、维生素、多糖等多种生物活性物质，刺激机体自身免疫系统，实现免疫细胞数量的增加和免疫器官的发育，增强T淋巴细胞的活性，增进机体免疫功能。
兽用疫苗保护剂和佐剂讲解
②抗原寻的（antigen targeting）
指抗原传递给免疫系统中适当效应细胞的效率。包括 吸引巨噬细胞到达组织部位、活化吞噬细胞、促进抗原 与细胞受体的结合等有重要作用。
③免疫调节（immune modulation） 是指任何可以修饰的免疫效应细
（二）病毒的保护剂 ① 5%蔗糖 脱脂乳； ② 马立克814活细胞疫苗:保存液氮.稳定剂为10%二 甲基亚砜和50%犊牛血清的199液。 注意: 微生物保护剂缓冲液的组成比例，不同厂家有 不同的配方。
兽医生物制品常用的保护剂
1．5%蔗糖（乳糖）脱脂乳保护剂
蔗糖（或乳糖）5g，加脱脂乳至100ml，充分溶解后，110~116℃高压灭菌 30~40 min。
一些常用的冷冻干燥保护剂
分类
保护剂
复合物 糖类 盐类 醇类 酸类 聚合物
脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等 蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等 乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等 山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等 柠檬酸、酒石酸、氨基酸等 葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等
• 注意:佐剂和免疫增强剂的关系?
•
有时佐剂也是免疫增强剂.
作用特点：
① 明显增强抗原性微弱的物质诱导机体产生 特异性免疫应答。
② 用最少的抗原和最少的接种次数，产生足 够的免疫应答。
免疫佐剂作用机理
作用方式
① 改变正常免疫机能，吸引大量巨噬细胞以吞噬抗原； ② 改变抗原的构型，使抗原物质降解，并加强其免疫原性； ③ 延长抗原在组织内的贮存时间，使抗原缓慢降解和缓释，
常见动物疫苗的免疫佐剂
结合 ，从而诱发肌体产 生长期 、高效 的特 异性免疫反应 ，提
高 肌 体 保 护 能 力 。 随 着 分 子 生 物 学 技 术 的迅 速 发 展 ，研 制
这类佐剂 不与抗原混合 ，分 别在不同部位注射也 可 现
良好 效 果 ，又 称 其 为 中枢 性 佐 ｉ ｆ ０ ，又 可 分 为 微 生 物 与 非微 生 物佐 剂 … 。
非 特 异 性 地 通 过 物 理 的 或 化 学 的 方 式 与 特 异 性 免 疫 反 应 物 质
长时 间 ，以便缓慢 释放抗原 ，形成持 续地刺激免疫系统 ，而
形 成 坚 强 免 疫ຫໍສະໝຸດ 。如 ：油 佐 剂 （ Ｓ Ｐ Ｏ Ｍ 白油 ） 、盐类 铝胶 佐 剂 不 融合佐剂等 … 。
２ ． ２ 非 贮存 型 佐 剂
品的研制与推广应 用等工作 ，现发表论文 １ ２ ０篇 ，其 中国家级刊物 ８ Ｏ余篇 。
和促进 组织再生作 用 ，具 有广谱抗 微生物 作用 ，研 究证 明 ，
应 用 蜂 胶 作 为 机 体 的免 疫 增 效 削 ，能 显著 提 高 机 体 内抗 体 含 量 ，增 强 吞 噬 细 胞 的 乔 噬 能 力 。蜂 胶 的 用 法 是 将 蜂 胶 用 水 ～ 酒 精 乳 化 或 用 聚 乙烯 乙二 醇 ，稀 释 蜂 胶 效 果 更 好 ，但 国 内 常
１ ． ２ 非微 生 物物 质
按 分 子量 大 小 和 性 质 可 分 为 以下 四类 。
即它 的作用机 制是抗原被油包 围形成微 结构 内，使之
１ ． ２ ． １ 高分子物质 核酸 、人Ｔ合成多核苷酸 、聚丙稀酸 、丙稀酸等。
１ ． ２ ． ２ 低 分 子 物 质
存而缓慢释放 ，刺激 机体免疫细胞而 ｍ现免疫应答 ，产生抗
灭活剂、保护剂与免疫佐剂 ppt课件
灭活剂、保护剂与免疫佐剂
ppt课件
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本章内容
第一节 灭活剂
第二节 保护剂
第三节 免疫佐剂
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第一节 灭活剂
1
灭活与灭活剂概念
2 常用灭活剂的灭活机理与应用
3 影响灭活作用的因素
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3
第一节 灭活剂
一
灭活与灭活剂 灭活:
是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力和致病 性，但尽可能不影响其免疫原性，被灭活的微生物主 要用于生产灭活疫苗；或指破坏 诊断血清或待检血 清中的补体活性，以避免补体对诊断试验的干扰作用。
静置沉淀，弃上清后加入约5倍量软 化水，搅拌洗涤、弃上清，如此3～ 5次，检查至硫酸盐合格为止。 用铜纱筛滤过，用布袋脱水过夜， 收存于容器内，可约得600kg铝胶。
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第三节
注意事项
免疫佐剂
氢氧化铝吸附力较强，所以要用软化水或去离子水 洗涤。
氢氧化铝胶为两性化合物，过酸或过碱都会失去胶
（2）用明矾加碳酸钠合成法
2KAl(SO4)2+3Na2CO3+3H2O→2Al(OH)3+3Na2SO4+3CO2↑ （3）用三氯化铝与氢氧化钠合成
A1C13+3NaOH→Al(OH)3↓+3NaCl
ppt课件 30
第三节
免疫佐剂
用铝粉加烧碱合成法： 2Al(OH)3+12H2O+3H2SO4→Al2(SO4)3· 18H2O A12(SO4)3· 18H2O+6NaOH→2Al(OH)3+2Na2SO4+18H2O
3.SPGA保护剂
蔗糖76.62g、磷酸 二氢钾0.52g、磷酸 氢二钾1.64g、谷氨 酸钠0.83g、牛血清 白蛋白10g、加去离 子水至1000ml，混 合溶解,过滤除菌。
兽用疫苗生产知识分享
• 生产种子 生产种子由生产企业用基础种子进行复壮、繁殖。细菌等 生产种子应作纯粹检查。病毒生产种子应作含量测定和纯净检查。
1.2 、菌（毒）种选育
• 菌种的选育 分离病原→纯粹检验→致病性鉴定和抗 原性测定→设计制成灭活疫苗→接种实验室动物→ 攻毒→用本动物进行保护率测定→以确定疫苗候选 株。
7、核酸疫苗（基因或DNA疫苗）
病原保护性抗原基因→连接细菌或 病毒DNA →直接导入动物体→表 达抗原→诱导产生免疫保护。制造
简便、成本低、安全、免疫期长、热 稳定性好，但仍未商品化生产。
（二）诊断用制品
• 1、常规免疫—血清学诊断技术 （1）凝集试验抗原： 直接凝集试验（平板法、试管法）：抗原和抗 体混合后直接发生凝集反应。 间接凝集试验（间接血凝、胶乳凝集和反相间 接血凝试验）。
• 物理学方法 利用加热、密封、抽气等物理学方法， 以驱除或隔绝培养环境或培养基中的养气，形成无氧 状态，以利于厌氧菌的生长。常用的有厌氧罐法。
含二氧化碳条件下的细菌培养
• 有些细菌特别是初次分离培养，在含有5％－10％CO2环境下 生长良好，培养时，可直接利用二氧化碳培养箱培养，按照需 要调节培养箱内二氧化碳的浓度。
• 液氮保存 有些细胞结合毒须在－196C的液氮中保存。 • 动物继代保存 虫种一般通过动物继代保存。
1.4、菌（毒）种的管理
• 生产检验用菌（毒）种实行分级管理制度，种子分 三级（原种、基础种子和生产种子）。
• 原种和由国家兽医微生物菌种保藏中心或分中心负 责保管；基础种子由菌种中心或分中心负责制备、 鉴定、保管和供应；生产种子由生产企业自行制备、 鉴定和保管。
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一些常用的冷冻干燥保护剂
分类
保护剂
复合物 糖类 盐类 醇类 酸类 聚合物
脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等 蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等 乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等 山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等 柠檬酸、酒石酸、氨基酸等 葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮 (PVP) 等
助于抗原性物质在胞内被加工，被 MHC 分子特异性的结合、保护、运输并递 呈给效应细胞。
②抗原寻的（ antigen targeting ）
指抗原传递给免疫系统中适当效应细胞的效率。包括 吸引巨噬细胞到达组织部位、活化吞噬细胞、促进抗原 与细胞受体的结合等有重要作用。
③免疫调节（immune modulation ） 是指任何可以修饰的免疫效应细
２、保护剂浓度：严格按照配方执行。 ３、保护剂配制方法：糖类不能用121℃高压灭菌处理。 ４、保护剂酸碱度（PH 值）：主要对M的影响。
三、常用的冻干保护剂（稳定剂） 明确不同种类微生物需要添加不同保护剂
（一）细菌的保护剂 ① 需氧或兼氧厌氧菌：５％蔗糖脱脂乳或５％蔗糖、 1.5％明胶； ② 厌氧性细菌：含1.5％谷氨酸钠的１％乳糖或10％脱 脂乳或7.5％葡糖血清。 注：脱脂乳：20％脱脂奶粉溶于水配制而成。
疫苗冻干保护剂组成
1. 营养液： ? 可修复因冻干而受损的细胞，使冻干制品含有一定量水分； ? 可促进高分子物质形成骨架，使冻干制品呈多孔的海绵状， 增加溶解度 2. 赋形剂： ? 防止低分子物质的碳化和氧化，保护活性物质不受加热影响 ? 使冻干制品形成多孔性、疏松的海绵状物，增加溶解度 3. 抗氧化剂： ? 抑制冻干制品中的酶作用，增加生物活性物质在冻干后贮存 期间的稳定性，如维生素C、维生素E和硫代硫酸钠等。
冻干保护剂作用机制
① 防止活性物质失去结构水及阻止结构水形成结晶而导致生 物活性物质的损伤；
② 降低细胞内外的渗透压差、防止细胞内结构水结晶，以保 持细胞的活力；
③ 保护或提供细胞复苏所需的营养物质，有利于生活力的复 苏和迅速修复自身 根据微生物种类或者用途来添加不同种 类保护剂。
（二）病毒的保护剂 ① 5% 蔗糖 脱脂乳； ② 马立克814活细胞疫苗:保存液氮.稳定剂为10% 二 甲基亚砜和50% 犊牛血清的199液。 注意: 微生物保护剂缓冲液的组成比例，不同厂家有 不同的配方。
兽医生物制品常用的保护剂
1．5% 蔗糖（乳糖）脱脂乳保护剂
蔗糖（或乳糖） 5g，加脱脂乳至 100ml，充分溶解后， 110~116℃高压灭菌 30~40 min 。
并发挥免疫系统的细胞间协同作用（巨噬细胞与 T细胞， T细胞与B细胞）。
作用机理
① 抗原递呈（ antigen presentation ） ② 抗原寻的（ antigen targeting ） ③ 免疫调节（ immune modulation ）
①抗原递呈： 指抗原分子递呈给T细胞的方法。佐剂与疫苗联合使用，有
? 注意:佐剂和免疫增强剂的关系 ?
?
有时佐剂也是免疫增强剂 .
作用特点：
① 明显增强抗原性微弱的物质诱导机体产生 特异性免疫应答。
② 用最少的抗原和最少的接种次数，产生足 够的免疫应答。
免疫佐剂作用机理
作用方式
① 改变正常免疫机能，吸引大量巨噬细胞以吞噬抗原； ② 改变抗原的构型，使抗原物质降解，并加强其免疫原性； ③ 延长抗原在组织内的贮存时间，使抗原缓慢降解和缓释，
免疫佐剂
一、佐剂概念与作用机理
1. 佐剂（新概念）：凡是可以增强抗原特异性免疫应答的物 质称为佐剂。
佐剂（旧概念）：当一种物质先于抗原或与抗原混合或同 时注射于动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗 原的特异性免疫应答,发挥其辅佐作用的物质.
以前作为佐剂使用时没有免疫原性，但现在有所改变，如 IL-2是佐剂和IL-8一类细胞因子佐剂却不一样, 具有免疫调 节和免疫增强作用,单独使用时却具有免疫原性。
DMSO:二甲基亚砜，一种细胞的保护剂 ③ 疫苗冷冻真空干燥制备时：加脱脂乳（或二甲基亚
砜）和蔗糖等（不同国家有不同配方） ④ 干扰素类生物活性物质的保存：加葡聚糖
保护剂 （protector ）的分类
分类： ?（根据其作用机理） ——渗透剂：如二甲基亚砜（DMSO ）、甘油和蔗糖等 ——非渗透剂：如聚乙烯吡咯啶酮(PVP) 和蛋白质等 ?（根据其分子量大小） ——高分子物质、低分子物质。 ?（按其化学性质） ——复合物、糖类、盐类、醇类、酸类和聚合物
2．明胶蔗糖保护剂
明胶 2%~3% （g/m1）、蔗糖5% （g/m1）、硫脲 1%~2% （g/m1）。先 将12%~18% 明胶液、 30% 蔗糖液和 6%~12% 硫脲液加热溶解， 116℃高压 灭菌30~40min ；
3．SPGA 保护剂
蔗糖 76.62g、磷酸二氢钾0.52g、磷酸氢二钾1.64g、谷氨酸钠0.83g、牛血 清白蛋白10g、加去离子水至1000ml，混合溶解，过滤除菌。
兽用疫苗冻干保护剂 和佐剂
冻干保护剂（稳定剂）
保护剂：又称稳定剂（stabilizer ） ，是指一类能防止生 物活性物质在冷冻真空干燥时受到破坏的物质。（指对疫 苗生产、血清制备等） 保护剂用途（不同用途加不同保护剂, 主要针对活的微生 物或细胞）
① 菌种或毒种保存：常用甘油作保护剂 ② 细胞株保存：常用二甲基亚砜(DMSO)
胞对抗原或表位进行加工的机制。通过这种机制，可以改变特异性免疫应答 的本质或强度。 T细胞有Th1 和Th2 两个亚类。同一抗原和不同佐剂一起使用 能够引起不同的免疫反应。因此，通过筛选特定的佐剂，可以达到诱导正确
的免疫应答的目的。
佐剂的分类
1. 按佐剂物理性质 ? 颗粒型佐剂 ? 非颗粒型佐剂 2. 按佐剂的生物学性质（即Ballanti 分类法） ? 微生物及其组分 ? 非微生物物质 3. 按佐剂在体内存留的时间 ? 贮存型佐剂（depot type adjuvant ） ? 非贮存型（non-depot type adjuvant ）