《动物毒理实验》课件：实验一 小鼠经口急性毒性试验
经口急性毒性试验
经口急性毒性试验※<(一)目的>化学毒物经口急性毒性试验是研究化学物毒性效应的基本试验。
奉实习的目的是学习急性毒性试验的实验设计原则，学会经口灌胃技术、随机分组方法，掌握主要的LD50计算方法和急性毒性分级标准。
※<(二)原理>选择健康的实验动物，根据体重按随机分组的方法，依据LD50计算的设计原则将动物分成数个染毒组。
一次或24h内多次给予受试物后，了解动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因，观察受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死剂量(LD50)，并根据LD50值将受试物进行急性毒性分级。
※<(三)内容>1．健康小鼠或大鼠的选择，性别的辨认。
2．称重、编号和随机分组方法。
3．受试化学物溶液的配制。
4．小鼠和大鼠经口灌胃操作技术．5．毒性体征的观察、LD50计算和毒性分级※<(四)材料和试剂>1.实验动物健康成年小鼠或大鼠若干只。
2.器材灌胃针(大鼠、小鼠适用)、注射器(0.25，1.2，5m1)、吸管(0. 1，0.2，0.5，1，2，10ml)、容量瓶(10，25，50ml)、烧杯(10，25，50ml)、滴管、电子天平(感应量1／10000g)、动物体重秤、外科剪刀、镊子。
3.试剂受试物(由指导教师自定)，苦味醒酒精饱和液，o．5％品红溶液或其他染色剂．※<(五)操作步骤>1．健康动物的选择。
2．性别辨认。
3.动物称重、编号和分组；(1)称重；称量大、小鼠体重的秤，其感应量需在0.1g以下，并经过校正。
称量时注意轻抓轻放动物，避免激惹，等动物安静后记录体重读数，以g表示。
(2)编号：以染色法编号。
用苦味醒酒精饱和液为染料。
以黄色为个位数号码，红色为十位数号码。
一股以头部为1号，按顺时针依次右前肢为2号，右腰为2号，右后肢为4号，尾根部为5号，右后肢为s号，左腰为7号，左前肢为8号，后背为9号，10号为在头部染红色标记，11号在右前肢染红色和黄色标记各一，依次类推。
经口急性毒性试验
受试物的配制
1、受试化学物的量取 (1)、称量法--固体化学物 (2)、吸量法--液体化学物 2、受试化学物的稀释 (1)、等浓度稀释法 (2)、等容量稀释法
寇氏法
Karber法或平均致死量法，是依据剂量对数与死亡率呈S型 曲线所包括的面积推导出死亡率为50%的剂量； 此法简单，准确率高，但实验设计要求每个染毒组实验动 物数相同，各计量组距呈等比级数，死亡率呈常态分布，最 低剂量组死亡率<20%，最高剂量组>80%。
小鼠（Mouse）
♀♂
大鼠（Rat）
实验动物的称重
➢大、小鼠秤的感应量需在0.1g以下。 ➢同一组内、同性别动物体重差异应 小于平均体重的10%。 ➢不同组间同性别动物体重均值差异 应小于5%。 ➢急性毒性实验一般使用体重为1822g的小鼠或/和180-220g大鼠。
实验动物编号的标记方法
▪ 颜料涂擦被毛编号法（常用于大小鼠）： 红色：0.5%中性红或品红溶液 黄色：3-5%苦味酸溶液（水） 80-90%苦味酸酒精饱和溶液 咖啡色：2%硝酸银 黑色：煤焦油的酒精溶液
0.1 3 30 250 >1000
1mg/kg < 22.50mg/kg < 50mg/kg 该化合物大鼠急性经口毒性为高毒
注意事项
▪ 灌胃染毒时要求动物保持空腹状态，因此染毒前应禁食 （不禁水）6～10小时。灌胃后至少2～3小时后才能喂食。 油剂比水溶液要求限制喂食的时间更长些。
▪ 相同剂量的受试物，若以不同浓度给药，死亡情况会有所 不同。常用的方法是将受试物体积固定，根据实验设计的 剂量将受试物配制成不同浓度的溶液进行灌胃。
预实验
目的是为了确定正式实验的剂量范围。
一般是采用少量动物(2~3只为一组)，拉大组距，逐渐 缩小，找出受试物0%和100%死亡剂量。
《食品毒理学》经口急性毒性试验
《食品毒理学》经口急性毒性试验一、实验目的和要求掌握给药方法；了解一次或24小时内多次给予受试化学物后，动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因，观察受试动物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死量。
二、主要仪器设备实验动物：成年昆明系实验小鼠（SPF级别）。
器材：注射器（0.25，1，2，5ml）、吸管（0.1，0.2，0.5，1，2，10ml）、容量瓶（10，25，50ml）、烧杯（10，25，50ml）、滴管、灌胃针12号、动物体重秤、解剖剪刀、镊子、手术手套，口罩。
试剂：受试化合物（氯化钡溶液，20mg/mL）。
三、实验原理氯化钡是强电解质，可完全电离出钡离子，导致钡离子在小鼠血液内部引发急性低钾血症，故小鼠会出现肌无力和发作性软瘫，心肌应激性减低，各种心律失常和传导阻滞，由于肌无力，严重中毒的小鼠还会出现呼吸困难乃至死亡等症状。
四、实验内容1．健康动物的选择和性别鉴定。
2．实验动物称重、编号和随机分组。
3．受试化学物溶液的配制。
4．小鼠灌胃操作技术。
（1）预实验，取小白鼠、称重、随机分为5组，每组3只，以灌胃的方式给予等体积、不同剂量的氯化钡溶液，摸索小鼠接近100%和0%死亡的剂量范围。
（2）小鼠随机分为5组，每组3只，以灌胃的方式给予等体积、不同剂量的氯化钡溶液。
小鼠灌胃法：将钝头的12号注射针（适用于小鼠），安装在适当容积的注射器上，吸取所需的受试物溶液，左手抓住动物双耳后至背部的皮肤（小鼠仅抓住耳后、颈部的皮肤，用无名指、小手指和大鱼际肌将其尾根部压紧），将动物固定成垂直体位，腹部面向操作者。
注意使动物的上消化道固定成一直线。
右手持注射器，将针头由动物口腔侧插入，避开牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。
若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即可深入至胃部。
如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免操作穿破食管，甚至误人气管，导致动物立即死亡。
经口急性毒性试验.
大小鼠标记方法（单色法n>10）
双 色 法
大小鼠标记方法（双色法n<10）
红色表示十位数： 头部染红色为10
左前肢为20
左腰部为30 黄色表示个位数。 大小鼠标记方法（双色法n>10）
其它标记方法
烙印编号法：
体内埋号编号法：
耳孔编号法：
挂牌编号法：
实验动物的随机分组
表1 动物随机分组表 动物号 随机数字 除6余数 分组 动物号 随机数字 除6余数 分组 1 97 1 A 16 27 3 C 2 74 2 B 17 7 1 A 3 24 0 F 18 36 0 F 4 67 1 A 19 7 1 A 5 62 2 B 20 51 3 C 6 42 0 F 21 24 0 F 7 81 3 C 22 51 3 C 8 14 2 B 23 79 1 A 9 57 3 C 24 89 5 E 10 26 2 B 25 73 1 A 11 42 0 F 26 16 4 D 12 53 5 E 27 76 4 D 13 32 2 B 28 62 2 B 14 37 1 A 29 27 3 C 15 32 2 B 30 66 0 F
组 别 A B C D 1 2 7 26 4 5 9 27 14 8 16 鼠 号 17 10 20 19 13 22 23 15 29 25 28
E
F
12
3
24
6 11 18 21 30
具体方法如下：继续抄下随机数字分别除以A、B、C、F组的现有动物数，即： 56/7(7为A组现动物数)整除，余数为0，将A组第7只动物(25号)调配给D组；下一 个：50/6(6为A组现有动物数)余2，将A组第2只动物(4号)调配给D组；接下来 26/6(6为C组现有动物数)余2，将C组第2只动物(9号)给D组。余类推，最后调整
动物急性毒性试验-小鼠
动物急性毒性试验(Acute toxicity test,Single dose toxicity test),研究动物一次或24小时内多次给予受试物后,一定时间内所产生的毒性反应.拟用于人体的药物通常需要进行动物急性毒性试验[1].急性毒性试验处在药物毒理研究的早期阶段,对阐明药物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意义.急性毒性试验所获得的信息对长期毒性试验剂量的设计和某些药物Ⅰ期临床试验起始剂量的选择具有重要参考价值,并能提供一些与人类药物过量急性中毒相关的信息[实验目的]通过实验，培养学生科研设计能力，提高学生科研思维素质；学习药物急性毒性实验的测定方法（统计方法）及观察方法。
1、计算敌百虫半数致死量。
[实验材料]小白鼠（雌雄均可，18-22 g）、鼠笼、1ml注射器、苦味酸溶液、敌百虫等。
（计算机仿真实验）[实验方法]1. 预试验：取小鼠24只，以4只为一组分成6组，选择组间距较大的一系列剂量，各组分别灌胃给药敌百虫，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%死亡率和100％死亡率剂量的所在范围。
2. 正式试验：在预试验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用5个剂量，相邻剂量之间的比例为1：0.7。
将小鼠随机分组，每组10只小白鼠灌胃给药敌百虫。
3. 观察纪录给各种反应：潜伏期，中毒现象，开始出现死亡的时间，死前的现象，各组死亡的只数等。
通常药后要观察3-7天。
根据各组动物的死亡率，用改良寇氏法（Korbor）或简化机率单位法算出LD50和可信限。
[实验结果]在给药后1 小时内，随药物剂量的增加，小鼠中毒的潜伏期逐渐缩短，中毒症状随药物剂量的增加和作用时间的延长而逐渐加重（口吐泡沫→大小便失禁→肌肉僵直→兴奋→死亡）。
给药后3 小时内各组小鼠死亡情况见下表：组别动物数（n ）给药剂量（mg/kg）对数剂量（X）动物死亡数死亡率（P）P21 10 384 2.58 1 0.1 0.012 10 548 2.743 0.3 0.093 10 784 2.89 4 0.4 0.164 10 1120 3.056 0.6 0.365 10 1600 3.20 8 0.8 0.64i=0.15 ∑P=2.2∑P2=1.26 [结果计算]实验完毕后，清点各组死亡鼠数并计算出死亡率（P），采用改良寇氏（Korbor）法计算LD50。
小鼠的急性毒性试验
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4.结论 5.参考文献
钟子期听懂了俞伯牙的琴音——“巍巍乎若高山，荡荡乎若流水”,俞伯牙视其为知音。钟子期死后，面对江边一抔黄土，俞伯牙发出“此曲终兮不复弹，三尺瑶琴为君死”的感慨，摔琴而去， 从此，高山流水，知音难觅。
红楼里，宝钗与黛玉皆爱宝玉，宝钗看重功名，常拿一些伦理纲常来压制他的不羁与顽劣，黛玉却从未提及这些，因她懂得他的心性，她说“ 你既为我之知己，自然我亦是你之知己”, 造化弄人，木石前缘虽是虚空一场，却怀金悼玉，梦萦千古，今日读来依然荡气回肠！
2结果不分析21单一农药对小鼠急性毒性211中毒症状212实验结果不分析表4单一急性毒性实验前后小鼠体重变化农药浓度设置mgl实验前体重g实验h后体重g百草枯精品感谢下载载乐果敌敌畏单一急性毒性实验中小鼠死亡情况农药浓度设置mgl死亡数量死亡概率x百草枯乐果精品感谢下载载敌敌畏22五种农药对小鼠癿联合急性毒性221中毒症状222实验结果不分析联合急性毒性实验中小鼠死亡情况农药组合浓度组合mgl02080406050506040802甲氰菊酯乐果甲氰菊酯敌敌畏百草枯乐果百草枯敌敌畏精品感谢下载载乐果敌敌畏乐果草甘膦敌敌畏草甘膦联合急性毒性实验前小鼠体重农药组合小鼠体重g浓度组合mgl02080406050506040802甲氰菊酯乐果甲氰菊酯敌敌畏百草枯乐果百草枯敌敌畏乐果敌敌畏乐果草甘膦敌敌畏草甘膦联合急性毒性实验后小鼠体重农药组合小鼠体重g浓度组合mgl02080406050506040802精品感谢下载载甲氰菊酯乐果甲氰菊酯敌敌畏百草枯乐果百草枯敌敌畏乐果敌敌畏乐果草甘膦敌敌畏草甘膦3
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杏花疏影小楼边，一腔笛韵委婉悠扬；山亭古寺四月间，深涧桃花兀自娇娆；暗香疏影黄昏后，东篱素菊暗香盈袖；柴门冬雪夜归人，红泥火炉绿蚁新醅……若懂得，景与物，也相宜。 彷徨失意时，一句懂得，是严冬的一场花开春暖，茫然无助时，一句懂得， 是酷暑的一阵清凉细雨，心与心的贴近，皆因一个“懂得”而欣慰，美好。
急性毒性试验设计课件
案例四
总结词
急性毒性试验在食品添加剂安全性评价中具有重要意义，能够评估食品添加剂对 人体健康的潜在风险。
详细描述
急性毒性试验广泛应用于食品添加剂安全性评价中，通过给予实验动物单次或多 次剂量的食品添加剂，观察和记录动物的毒性反应和死亡情况，能够评估食品添 加剂对人体健康的潜在风险，为食品添加剂的安全使用提供科学依据。
数据清洗
去除异常值和缺失值，确保数据质量。
数据分析
采用合适的统计方法对数据进行分析，如均值 、标准差等。
数据可视化
使用图表展示分析结果，如折线图、柱状图等。
结果报告与结论
结果总结
概述试验结果，包括毒性反应类型、剂量效应关系等 。
结论
根据试验结果，得出结论并解释其意义。
建议
根据试验结果提出建议，如进一步研究必要性、安全 使用建议等。
染毒剂量
设置不同剂量组，确保剂量范围涵盖预期毒性反 应。
3
染毒频率
确定染毒频率，如单次或多次给药。
观察与记录
观察时间
设定观察周期，包括给药前、给药后短期、 中期和长期观察。
观察指标
列出需要观察的指标，如行为变化、生理参 数、病理学检查等。
数据记录
详细记录各组动物在各个时间点的数据表现 。
数据处理与分析
观察期的设置
总结词
观察期的设置是急性毒性试验中至关重要的一环，直接 关系到试验结果的完整性和准确性。
详细描述
观察期是指从给予动物受试物开始，直至观察到动物死 亡或恢复正常的这段时间。在试验设计中，应根据受试 物的毒性作用特点、动物的种属特性以及试验目的等因 素来确定合理的观察期。同时，还需根据观察到的症状 和体征以及死亡情况等数据进行详细记录和分析，以评 估受试物的毒性作用及其对动物的影响程度。
急性经口毒性实验
（2）植物神经系统：瞳孔扩大或缩小、流涎或流泪； （3）呼吸系统：鼻孔流液、鼻翼煽动、血性分泌物、呼吸
深缓、呼吸过速、仰头呼吸、； （4）泌尿生殖系统：会阴部污秽、有分泌物、阴道或乳房
2020/4/24
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（二）剂量选择：
首先查阅与受试化学物结构及理化性质相近似 的化学物的LD50，以此值作为受试化学物的预期 毒性中值，即中间剂量组，再上下各推1-2 个
剂量组，进行预实验。
各剂量组的间距可根据LD50 计算方法要求按等 比级数或等差级数安排。
本实验用机率单位法计算LD50，要求按等比级数 排列，常用1：0.8，如敌敌畏的最高剂量为125 mg/kg，其次剂量组为125 mg/kg *0.8=100 mg/kg ，依次类推为80 、64 和51.2 mg/kg五 个剂量组。
各剂量组小鼠灌胃容量计算:
小鼠灌胃容量V ml=体重（g）×10ml/1000g
各剂量组小鼠染毒剂量:
小鼠染毒剂量= V ml ×各组的受试物浓度（mg/10ml)
2020/4/24
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（四）灌胃方法：
小鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后 皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手上，使小鼠腹 部向上，尽量使其体位垂直，注意使动物的上消化 道固定成一直线。右手持连着灌胃导针的注射器， 将灌胃针由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓 缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一 旦感觉阻力消失，即深人至胃部，一般进针深度小 鼠2.5～4cm，随后将受试物溶液注入。如遇动物挣 扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入， 以免穿破食管，甚至误入气管，导致动物立即死亡。
小鼠经口的急性毒性评价
小鼠经口的急性毒性评价食品质量与安全：张志颖指导教师：丁志刚摘要：通过霍恩法对啮齿类动物小白鼠做急性毒性实验，以氯化镁溶液为外源化学物，了解氯化镁溶液对机体是否产生毒效应。
确定外源化学物的致死剂量及其他急性毒性参数，通过观察动物中毒表现、毒作用强度和死亡情况，初步评定外源化学物的毒效应特征、靶器官、剂量—反应关系和对人体产生损害的危险性。
关键词：小白鼠氯化镁溶液霍恩法急性毒性评价1前言氯化镁常温下为白色结晶，易吸湿，100℃时失去2分子结晶水，在110℃开始失去部分盐酸而分解，强热转为氧氯化物，其PH约为<7,有刺激性，氯化镁是有毒的，其次氯化镁是低毒的。
氯化镁本身的毒性来自其本身凝血的作用，例如卤水点豆腐，就是使蛋白质凝固。
假如一定剂量的氯化镁进入血液，血液凝固，人必死无疑。
所以说氯化镁对于温血动物来说还是有一定的杀伤力。
制作豆腐时，氯化镁可以作为很好的混凝剂。
它常与硫酸镁一起凝固豆奶，由于其营养价值，氯化镁还是婴儿配方奶粉的组成部分。
2材料与方法2.1 材料试验动物：健康成年小鼠16只，雌雄各半，体重在18~25g之间。
2.2仪器与试剂试验器材：注射器、刻度吸管、容量瓶、小烧杯、滴管、灌胃针、电子天平、镊子、动物体重秤、手套。
试验试剂：受试物（氯化镁）、3%~5%的苦味酸溶液、0.5%的品红溶液。
2.3实验方法2.3.1健康动物选择2.3.2性别辨认2.3.3小鼠称重、编号和随机分组根据霍恩法将小鼠分为4个小组，每组4只。
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 随机数18 43 38 62 82 16 48 35 67 05 72 12 25 83 43 41除4余数 2 3 2 2 2 0 0 3 3 1 0 0 1 3 1 1所在组别二三二二二四四三三一四四一三一一2.3.4剂量设置（1000mg/kg、2150mg/kg、4640mg/kg、10000mg/kg）组号一二三四染毒剂量1000mg/kg 2150mg/kg 4640mg/kg 10000mg/kg27.75mg 57.587mg 122.96mg 280mg每组小鼠染毒毫克数2.3.5氯化镁溶液的配制（1）氯化镁的量取（称量法）准确称取12.6575g的氯化镁固体，加蒸馏水溶解后，倒入25ml容量瓶，混匀，再加蒸馏水定容至刻度。
急性经口毒性实验课件
实验环境： 无菌、无 尘、恒温 恒湿
实验人员： 具备相关 资质和技 能
实验方案： 制定详细 的实验计 划和操作 流程
01
02
03
04
实验操作
准备实验材料：实验动物、试剂、仪器等 实验分组：将实验动物分为对照组和实验组 给药方式：采用灌胃、注射等方式给药 观察指标：记录实验动物的体重、行为、生理指标等 数据分析：对实验数据进行统计分析，得出结论 实验报告：撰写实验报告，总结实验结果和结论
识
02
实验过程中必须佩 戴防护设备，如手 套、口罩、护目镜
等
03
实验过程中必须遵 守操作规程，避免 操作失误导致的危
险
04
实验结束后，必须 对实验场所进行彻 底清洁和消毒，避
免污染环境
实验误差控制
01 实验设计：合理设计实验方案， 减少误差来源
02 实验操作：严格按照操作规程 进行，避免操作失误
0
01. 急性经口毒性实验概述 02. 急性经口毒性实验操作步骤 03. 急性经口毒性实验注意事项 04. 急性经口毒性实验应用
实验目的
01 评估化学物质对生物体的急性毒性作用 02 确定化学物质的毒性剂量和毒性作用机制 03 为化学物质的安全使用提供科学依据 04 保护生物和环境免受有毒化学物质的危害
2
实验方法：采用动物模型进行实验， 如小鼠、大鼠等
3
实验结果：观察动物的行为、生理 指标、病理变化等
4
评价标准：根据实验结果，评估药 物的安全性，为药物研发提供依据
食品添加剂安全性评价
01
急性经口毒性实验是评价食品添加剂安全性的重要方法之一
02
实验方法：通过给实验动物喂食不同剂量的食品添加剂，观察其毒性反应
动物急性毒性试验-小鼠
动物急性毒性试验(Acute toxicity test,Single dose toxicity test),研究动物一次或24小时内多次给予受试物后,一定时间内所产生的毒性反应.拟用于人体的药物通常需要进行动物急性毒性试验[1].急性毒性试验处在药物毒理研究的早期阶段,对阐明药物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意义.急性毒性试验所获得的信息对长期毒性试验剂量的设计和某些药物Ⅰ期临床试验起始剂量的选择具有重要参考价值,并能提供一些与人类药物过量急性中毒相关的信息[实验目的]通过实验，培养学生科研设计能力，提高学生科研思维素质；学习药物急性毒性实验的测定方法（统计方法）及观察方法。
1、计算敌百虫半数致死量。
[实验材料]小白鼠（雌雄均可，18-22 g）、鼠笼、1ml注射器、苦味酸溶液、敌百虫等。
（计算机仿真实验）[实验方法]1. 预试验：取小鼠24只，以4只为一组分成6组，选择组间距较大的一系列剂量，各组分别灌胃给药敌百虫，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%死亡率和100％死亡率剂量的所在范围。
2. 正式试验：在预试验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用5个剂量，相邻剂量之间的比例为1：0.7。
将小鼠随机分组，每组10只小白鼠灌胃给药敌百虫。
3. 观察纪录给各种反应：潜伏期，中毒现象，开始出现死亡的时间，死前的现象，各组死亡的只数等。
通常药后要观察3-7天。
根据各组动物的死亡率，用改良寇氏法（Korbor）或简化机率单位法算出LD50和可信限。
[实验结果]在给药后 1 小时内，随药物剂量的增加，小鼠中毒的潜伏期逐渐缩短，中毒症状随药物剂量的增加和作用时间的延长而逐渐加重（口吐泡沫→大小便失禁→肌肉僵直→兴奋→死亡）。
给药后3 小时内各组小鼠死亡情况见下表：组别动物数（n ）给药剂量（mg/kg）对数剂量（X）动物死亡数死亡率（P）P21 10 384 2.58 1 0.1 0.012 10 548 2.743 0.3 0.093 10 784 2.89 4 0.4 0.164 10 1120 3.056 0.6 0.365 10 1600 3.20 8 0.8 0.64i=0.15 ∑P=2.2∑P2=1.26 [结果计算]实验完毕后，清点各组死亡鼠数并计算出死亡率（P），采用改良寇氏（Korbor）法计算LD50。
急性毒性实验内容课件
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烙印法： 将铸铁号码加热后，在动物体表部位烧烙，以 破坏毛囊，留下印记。适用于大动物。
挂牌法： 用金属或塑料制成号牌，固定在动物的耳部或 系于其颈部。适用于较大动物。
PPT学习交流
19
实验动物分组
目的：减少个体差异对实验结果的影响；原则： 按统计学原则随机分组，使非处理因素最大限度地 保持一致，提高每组实验动物间的均衡性。
四 3 11 16 17 20
PPT学习交流
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随机区组设计
将动物称重，按体重顺序依次排列编号，分成若 干个区组，每一区组的动物体重相近，每一区组的 动物数即为组数。再从随机数字表上任意抄下随机 数字，依次标在每个动物的编号下，如欲将动物分 为４组，则将每一区组动物编号下的随机数字，按 顺序分别用４、３、２、１除之，根据余数大小将 动物分入各组。
PPT学习交流
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实验动物的标记
方法一：
6
按右前肢、右肋、右后肢、颈部、背中、尾根、左
前肢、左肋、左后肢，顺序编号为1～9号，不染色
为10号。在动物相同部位涂染另一种颜色染料表示
十位，两种颜色可编1～99号。
方法二：
以头部为1号，顺时针方向依次从右耳、右前肢、右
后肢、颈部、背中、尾根、左耳、左前肢、左后肢
PPT学习交流
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20只动物的完全随机分配
PPT学习交流
22
完全随机分配后各组所属动物号
PPT学习交流
23
20只动物完全随机分配的结果
PPT学习交流
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20只动物的完全随机分配
动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 随即数字 54 83 80 53 90 75 53 78 93 47 72 09 54 66 95 44 68 67 67 86 除4后余数 2 3 0 1 2 3 1 2 1 3 0 1 2 2 3 0 0 3 3 2 所属组别 二 三 四 一 二 三 一 二 一 三 四 一 二 二 三 四 四 三 三 二
实验1 环境污染物对小白鼠的急性毒性试验
【实验过程】 取体重20±2g的小白鼠40只，随机分成5组，每组8只，雌雄各半 。分组灌胃给药。放回鼠笼中饲养。观察7天，记录死亡率。计算 LD50。 [结果评定] 依据实验动物中毒症状、死亡时间、LD50，初步判断该受试 化合物的毒性大小及毒性特征。 [注意事项] 1．正确捉拿动物，且防止咬伤。
小白鼠的固定法及给药法
一般多用手固定。右手将鼠尾捏住，并且提起，使鼠两前肢着地， 然后左手的拇指和食指捏住头颈部皮肤，再用左手的其余三指和手 心夹住尾部以资固定。
灌胃法：
左手握住鼠，使头颈部充分伸直，右 手持尖端为钝圆行的金属注射针，将 针头自齿列间或口角插入口中，贴着 上颚徐徐插入食道，如无阻力而且动 物安静，即表示操作正确，可注入药 液，灌注量为0.1－0.25ml/10g
实验1
环境污染物对小白鼠的急性毒性试验
意义和目的
测定外来化合物的急性毒性，求出LD50，是毒理学的基础工作之一 ，也是研究任何一个外来化合物毒性效应的基本试验。
外来化合物经口给予实验动物的方法是毒理学中重要的基本技术之 一。 通过该试验学习外来化合物毒性试验的动物分组方法，测定LD50 的试验设计原则和计算方法。
十二烷基苯磺酸钠
分子式：C18H29NaO3S
分子量：348.48 HLB值：10.638 经TG验证，分解温度为450℃，失重率达60%。 CAS号：25155-30-0 简称： SDBS、LAS 性状：固体，白色或淡黄色粉末
溶解性：易溶于水，易吸潮结块
毒性：无毒 LD50：1260 mg/kg(大鼠经口)
实验原理
急性经口毒性试验 Acute Oral Toxicity Test
急性经口毒性试验Acute Oral Toxicity Test
首选健康成年小鼠(18g～22g)和大鼠(180g～220g) 每组10只，雌雄各半。
原则上应设对照组，方法：经口灌胃法一次染毒，染毒后继续禁食3h～4h
试验前动物要在试验环境中至少适应3～5d时间，观察期限一般为17d。
对死亡动物进行尸检。
观察期结束后，处死存活动物并进行大体解剖，如有必要，进行病理组织学检查。
亚慢性经口毒性试验Subchronic Oral Toxicity Test
首选大鼠，每一剂量组实验动物至少应有20只，雌雄各半，一般设三个染毒组和一个对照组。
方法：连续染毒3个月（90d），有时侯可根据需要染毒6个月（181d），每周7d染毒。
在全程染毒结束后继续观察一段时间(一般不少于28d)。
染毒开始前至少要有7d 时间使实验动物适应实验室饲养环境
检测指标：●每日一次临床观察●临床血液生化检查
●每日测量一次饲料消耗量,每周测体重一次●尿液检查
●眼科检查●大体解剖
●血液学检查●病理组织学检查。
《动物毒理实验》课件：实验一 小鼠经口急性毒性试验
实验一 小鼠经口急性毒性试验
一、实验目的
1. 学习外源化学物急性毒性试验的 设计原则，了解实验基本程序；
▪ 注完药液后轻轻抽出灌胃针； ▪ 小鼠一次最大灌胃量为：0.4ml/10g.bw。
注意事项
▪ 保定时：一定要固定好动物，使动物头不 要随意摆动，但不能挤捏颈部。
▪ 灌胃器针头弧度面向前从动物右嘴角处插 入，灌胃动作要轻柔。不能虐待动物，尤 其是大鼠，否则，容易被其咬伤。
▪ 插入灌胃针时，如果遇到阻力，不能用力 继续进针，应停止进针，等待其自动吞咽 时，迅速进针。否则，容易损伤动物食道。
5. 中毒症状观察和结果记录
▪ 染毒后认真观察中毒发生、发展过程，中 毒反应的特点和毒作用靶器官。
▪ 准确结果：观察24 h。
观察指标（1）
中毒症状
对于了解受试化学物的急性毒性特征及该化合物毒性作 用的靶器官非常重要；
临床中毒反应和死亡时间可为中毒机制提供线索； 神经毒性：染毒后立即惊厥、共济失调等； 迟发性死亡：化合物有肝、肾毒性； 植物神经兴奋：腹泻、竖毛等；
可能的中毒表现： 兴奋，活动增加、骚动、窜跑、跳跃、呼吸加深加快； 抑制，活动减少、呆立、静卧、步态不稳、呼吸困难等； 刺激症状：搔鼻、尖叫、出汗、流涎、眼耳鼻等的出血。
观察指标（2）
体重 观察期间的体重变化可以反映动物中毒
后的整体变化，应3-5天测量一次； 体重减轻：可能是动物食欲下降、摄食
量减少；也可能是化合物干扰代谢系统，影 响食物吸收、利用；
经口急性毒性实验课件PPT
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实验步骤
实验动物
预实验
确定大致的 LD0和LD100
组数和剂量
秤体重 编号 分组 （随机数字表法）
灌胃操作
中毒症状观察和死亡纪录 计算LD50
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确定组距的方法
lgLD100 – lgLD0 d = n-1
式中：d---为组距 n---为设计时确定的剂量组数
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急性毒性实验记录
受试物 名称： 提供单位： 动物种属品系： 动物来源： 相对湿度： 染毒剂量： mg/kg 合格证号：
各组剂量为等比级数时简化为
lgLD50=Xm - d/2Σ(pi+1 + pi)
式中Xm为最高剂量对数；d为相邻两组剂量对数之和。
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LD50标准差和95%可信限计算方法
SlgLD50=d Σ
Pi(1 - Pi) n- 1
式中: Pi ---- 死亡率， n ---- 每组动物数
LD5095%可信区间=Lg-1(lgLD50±1.96S lgLD50
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实验动物编号的标记方法
单 色 法
大小鼠标记方法（单色法n<10）
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实验动物编号的标记方法
单色法标记原则：单 色法编大于10的号码
时，我们规定顺时针
旋转，后一位必需大 于前一位数，例如：
可以编，12，13，
14……19，但不能编 10，11，20，21，22，
30，31，32，33，等，
以此类推。100以内最 大能编89号。
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实验内容 • 试验动物的选择和性别鉴定。
• 试验动物的称重、编号以及随机分组方法。 • 急性毒性试验常用染毒途径和方法。 • 急性毒性反应的观察和LD50计算。
急性经口毒性实验PPT课件
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五、注意事项：
1.灌胃时操作要避免损伤食道或误入气管 2.正确捉拿动物，防止被咬伤且避免动物损
伤 3.灌入量计算和操作要准确，否则影响结果 4.防止操作者中毒。注意通风，不要把药品
撒到手、脸部皮肤及身体其他部位，操作过 程中要小心。
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六、实验报告应包括以下内容：
1、2、3、4、5…为小剂量组到大剂量组的顺序。 5.0----为死亡率是50%时所相当的反应率的机率单位
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LD50的95%可信限=log-1(X + 1.96 SX )
X[2(51-yy 0 i(15 ). 0(y y 4)-y2)]X3
Sx[2(5-yy1)10i(y4-y2)2]
可编辑版课件
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依次类推：五个组所需配制的受试物浓度分别为
第一组：51.2mg/10ml 第二组： 64mg/10ml 第三组： 80mg/10ml 第四组： 100mg/10ml 第五组： 125mg/10ml
各剂量组小鼠灌胃容量计算:
小鼠灌胃容量V ml=体重（g）×10ml/1000g
例如本次实验五个剂量组: 各剂量组动物给予相同单位体重体积受试物均为 10ml/kg。
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等容量稀释法
D：设计的染毒剂量， mg/kg V：动物给药量（相同单位体重体积）均为
10ml/kg X：各组需配制的受试物溶液的浓度（mg/ml）
，
X D V
如：第一组染毒剂量D=51.2mg/kg，动物按 V= 10ml/kg体重给药，配制的受试物浓度为 X=51.2mg/10ml
（2）植物神经系统：瞳孔扩大或缩小、流涎或流泪； （3）呼吸系统：鼻孔流液、鼻翼煽动、血性分泌物、呼吸
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根据实验设计要求确定最高剂量组所需受 试化学物的浓度和总体积，配制母液。
（3）等容量稀释法配制6个剂量组的染毒溶液
➢ 求母液浓度C1 绝对致死剂量为2500mg/kg，最低中毒剂
量为800mg/kg，每10g体重小鼠灌胃0.2mL C1=2500mg/kg×10g/0.2mL＝125mg/mL ➢ 求公比r
三、实验试剂和材料
1. 药物与试剂 盐酸二甲硝咪唑、苦味酸酒精 饱和溶液和中性红溶液、记号笔
2. 设备与器械 吸管、烧杯、灌胃器、电子天 平（感量0.1 g）、外科手术剪、5 mL注射器、 10 mL注射器、干棉球 3. 实验动物 成年健康小鼠，18-22g，雌雄 各半
四、实验步骤
1. 剂量选择： 查阅文献，估计预期毒性中值；
式中，K：各组剂量的比值，K＝1/r。 取母液m mL置一容器中，供最高剂量组染毒用；加入
m mL溶剂，稀释后的浓度为C2，C1︰C2＝1︰K，取出 m mL供第二组动物染毒用；再加入m mL溶剂，稀释后的 浓度为C3，C2︰C3＝1︰K，取出m mL供第三组动物染 毒用。依次类推，配制其它不同剂量组的试液。
可能的中毒表现： 兴奋，活动增加、骚动、窜跑、跳跃、呼吸加深加快； 抑制，活动减少、呆立、静卧、步态不稳、呼吸困难等； 刺激症状：搔鼻、尖叫、出汗、流涎、眼耳鼻等的出血。
观察指标（2）
体重 观察期间的体重变化可以反映动物中毒
后的整体变化，应3-5天测量一次； 体重减轻：可能是动物食欲下降、摄食
量减少；也可能是化合物干扰代谢系统，影 响食物吸收、利用；
（1） 动物的禁食和复食：灌胃前禁食6～10h，使 动物保持空腹状态，且不至因禁食时间过长影响肝 脏，进而影响实验结果。灌胃后至少2～3h后才能 复食，灌服油剂比水剂要求复食时间更长； （2） 灌胃体积：小鼠每10g体重灌胃0.1～0.2mL， 最多不超过0.4mL。小鼠灌胃量的极限是0.5～1mL； （3） 灌胃方法和注意事项。
实验一 小鼠经口急源化学物急性毒性试验的 设计原则，了解实验基本程序；
2. 掌握小鼠经口灌胃技术； 3. 掌握计算LD50的方法。
二、急性毒性试验原理
动物一次或24 h内多次接触外源化学 物后，观察急性毒性反应及其程度，中 毒死亡的原因及特征，了解受试动物毒 性反应的剂量－反应关系，求出LD50。
小鼠经口灌胃给药方法
➢ 保定动物：用右手将小鼠尾巴提起，置于 鼠笼或粗糙的平面上，当小鼠向前挣扎时， 用左手的拇指和食指捏住小鼠两耳后颈背 皮肤，翻转小鼠置于掌心，拉直后肢，以 小指压住小鼠尾巴即可。
▪ 在保定小鼠过程中，不要用力过大，勿握 其颈部，以免窒息死亡。
小鼠的捉拿、固定
小鼠的捉拿法
小鼠经口灌胃给药方法
（2） 配制方法的选择：等浓度稀释法和等 容量稀释法。
等浓度稀释法：将受试化学物配制成一 种浓度，不同剂量组实验动物单位体重所给 受试化学物的体积不同，剂量越高，所用的 体积越大；剂量越低，所用的体积越小。
等容量稀释法
将受试化学物配制成不同浓度，不同剂量 组实验动物单位体重所给受试化学物的体 积相同，剂量越大，受试化学物配制的浓 度越高。
➢ 给药：
以灌胃器轻轻压其头部，
使口腔与食道成一条直线;
再将灌胃针沿上腭壁轻轻
进入食道; 当灌胃针进入约3cm左右 时即达胃内。
小鼠灌胃法
灌胃时的注意事项
▪ 如果灌胃针的位置插入正确，小鼠可自行 吞服药；
▪ 灌胃针插入位置不正确，小鼠会强烈挣扎， 必须拔出重插，否则可能将药物灌入气管， 造成小鼠死亡；
预试验，求出受试化学物的0～100%或 10～90%大致致死范围，设计正式试验的剂 量和分组。
盐酸二甲硝咪唑绝对致死剂量2500mg/kg， 最低中毒剂量为800mg/kg
2. 实验动物的标记和分组 染色法，苦味酸酒精饱和溶液和中性红溶液
分组，采用随机法
3. 受试物的配制
（1） 溶剂的选择：选择原则是不与受试物 反应，最常用的溶剂为水。助悬剂：淀粉液、 明胶液等；助溶剂：吐温80、吐温60、聚乙 二醇等。
体重增加：低水平的化学毒物促进动物 生长，动物体重增长率大于对照组。
观察指标（3）
死亡数和死亡时间 十分重要的中毒机理研究信息；重
点观察和记录各个剂量组动物的死亡数； 每只动物死亡的时间（尤其是最早出现 死亡的时间）。
▪ 注完药液后轻轻抽出灌胃针； ▪ 小鼠一次最大灌胃量为：0.4ml/10g.bw。
注意事项
▪ 保定时：一定要固定好动物，使动物头不 要随意摆动，但不能挤捏颈部。
▪ 灌胃器针头弧度面向前从动物右嘴角处插 入，灌胃动作要轻柔。不能虐待动物，尤 其是大鼠，否则，容易被其咬伤。
▪ 插入灌胃针时，如果遇到阻力，不能用力 继续进针，应停止进针，等待其自动吞咽 时，迅速进针。否则，容易损伤动物食道。
5. 中毒症状观察和结果记录
▪ 染毒后认真观察中毒发生、发展过程，中 毒反应的特点和毒作用靶器官。
▪ 准确结果：观察24 h。
观察指标（1）
中毒症状
对于了解受试化学物的急性毒性特征及该化合物毒性作 用的靶器官非常重要；
临床中毒反应和死亡时间可为中毒机制提供线索； 神经毒性：染毒后立即惊厥、共济失调等； 迟发性死亡：化合物有肝、肾毒性； 植物神经兴奋：腹泻、竖毛等；
➢ 药物溶液的配制 ✓ 称取盐酸二甲硝咪唑6.25g，用生理盐水或
蒸馏水将药物溶解并稀释至50mL，即为 母液(母液浓度为125mg/mL)； ✓ 从母液中取10mL供第1组动物染毒； ✓ 在剩下的母液中加入10mL溶剂，稀释后 取10mL供第2组染毒； ✓依次类推，配制其它不同剂量组的试液。
4. 灌胃给药
√ r=
n-1
b a
=
√6-1 2500 800
r一般为1.2-1.5 n为组数
=1.25
➢ 求母液应配制的总量
设：母液浓度为C1，各组所需要的量为m mL， 母液应配制的总量M为：
各组剂量比值K＝1/r＝0.8 母液总量：M＝m/(1-K)＝ 10/(1-0.8)=50mL 受试化学物的质量为： 125mg/mL×50mL＝6.25g