志贺氏菌检测
志贺氏菌胶体金法-概述说明以及解释
志贺氏菌胶体金法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述志贺氏菌胶体金法是一种用于检测志贺氏菌感染的生物学方法。
志贺氏菌是一种能够引起胃肠道感染的细菌，其中一种亚型称为志贺氏菌O157：H7是引起人类食物中毒的主要菌株之一。
志贺氏菌胶体金法基于金标记技术，通过与志贺氏菌特异性抗原的结合来实现对志贺氏菌的检测和定量分析。
志贺氏菌胶体金法的原理是利用胶体金颗粒与志贺氏菌特异性抗原之间的亲和性作用。
金颗粒具有良好的生物相容性和稳定性，其颗粒表面可以通过化学修饰等方法引入志贺氏菌的特异性抗原，使得金颗粒能够与志贺氏菌特异结合。
当志贺氏菌存在于样本中时，与其特异性抗原结合的金颗粒会出现红色或其他可见颜色的沉淀，从而实现志贺氏菌的检测。
志贺氏菌胶体金法在医学、食品安全和环境监测等领域具有广泛的应用前景。
在医学领域，该方法可以快速、准确地检测出志贺氏菌感染，为临床诊断提供重要依据。
在食品安全领域，志贺氏菌胶体金法可以用于检测和监测食品中的志贺氏菌污染，保障公众健康。
在环境监测领域，该方法可以用于水源、土壤等环境中志贺氏菌的快速检测，以指导环境卫生管理。
然而，志贺氏菌胶体金法也存在一些局限性。
首先，该方法对志贺氏菌的特异性抗原要求较高，若抗原选择不当或存在交叉反应，则可能导致误诊。
其次，该方法需要专业的实验操作和设备支持，对操作人员的技术要求较高。
此外，该方法目前还没有得到广泛推广和应用，需要进一步的研究和验证。
总而言之，志贺氏菌胶体金法是一种有潜力的志贺氏菌检测方法，其原理基于金颗粒与志贺氏菌特异性抗原的结合。
该方法在医学、食品安全和环境监测等领域具有广泛的应用前景，但同时也存在一些局限性。
进一步的研究和验证将有助于进一步完善和推广该方法。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括以下内容：文章的结构是指整篇文章的组织方式和各个部分之间的逻辑关系。
一个良好的文章结构能够使读者更好地理解整个文章的内容，提高文章的可读性和逻辑性。
志贺氏菌检测
通过检测环境中志贺氏菌的分布和数量，采取有效的消杀措施，降低疾病传播的风险。
05
志贺氏菌检测的挑战与展望
检测挑战
灵敏度与特异性
志贺氏菌检测需要高灵敏 度和特异性，以避免假阳 性或假阴性的结果，给临 床诊断和治疗带来困扰。
快速检测
在感染早期快速准确地检 测志贺氏菌对于及时治疗 和防控疾病传播至关重要。
抵抗力较强
志贺氏菌对理化因素的抵 抗力较强，在粪便、土壤、 食品等外界环境中可存活 数周至数月之久。
志贺氏菌的传播途径
粪口途径传播
志贺氏菌主要通过消化道传播， 通过污染的食物、水或与感染者 的接触而感染。
直接接触感染
志贺氏菌也可通过直接接触感染 者的分泌物或接触被污染的物品 而传播。
志贺氏菌的危害
优点
操作简便、快速。
缺点
可能出现假阳性或假阴性结果，特异性不 如细菌培养法。
分子生物学检测法
聚合酶链式反应（PCR）
通过扩增志贺氏菌的特异性基因片段，实现 快速、灵敏的检测。
优点
灵敏度高、特异性强、检测速度快。
基因芯片技术
利用芯片上固化的探针与样本中的目标基因 进行杂交，实现高通量检测。
缺点
仪器设备和检测技术要求较高，成本也较高。
简便操作
检测方法应具有简便、易 操作的特点，以便在基层 医疗机构和现场环境中广 泛应用。
技术展望
分子生物学技术
随着分子生物学技术的发展，利 用基因芯片、高通量测序等技术 有望提高志贺氏菌检测的灵敏度
和特异性。
免疫学方法
开发特异性强、灵敏度高的免疫 学检测方法，如酶联免疫吸附试 验（ELISA）、免疫荧光技术等， 将为志贺氏菌的快速检测提供有
志贺氏菌检验
1 宋内氏典型菌落
XLD
志显
2 福氏典型菌落
XLD
志显
3 鲍氏典型菌落
XLD
志显
4 痢疾典型菌落
XLD
志显
5 熟肉制品中宋内的分离效果
R&F志显
XLD
6 蔬菜制品中宋内分离效果
XLD
志显
7 鲍氏在生肉中的分离效果
XLD
志显
8 熟肉制品中福氏的分离效果
志显
（四）初 步 生 化
• 选取平板上5个或5个以上可疑菌落接种TSI、葡萄糖 半固体、营养琼脂斜面，36 ℃1 ℃培养20 h～24 h， 观察结果。
白色不透明圆形边缘不整齐直mm3mm菌落周围琼脂颜色变为紫红色宋内氏典型菌落xldxldxld熟肉制品中宋内的分离效果rf志显xld蔬菜制品中宋内分离效果xld鲍氏在生肉中的分离效果xld选取平板上5个或5个以上可疑菌落接种tsi葡萄糖半固体营养琼脂斜面36培养20h24培养物中出现以下情况可以弃去a
（二）、培养特性
1 、 需 氧 或 兼 氧 性 厌 氧 ， 最 适 温 度 37℃ ， PH7.2~7.4
2、在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、 光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小 的菌落
3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁 平，在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。
4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。
• 若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察， 则继续培养至48 h再进行观察。
菌落特征
• MAC琼脂 ：无色至浅粉红色， 半透明、光滑、 湿润、圆形、 边缘整齐或不齐，直径2～3 mm
• XLD琼脂 ：粉红色至无色，半 透明、光滑、 湿润、圆形、边缘整齐或不齐， 直径1 ～2 mm
从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序
从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序(讨论稿)(总6页) -本页仅作为预览文档封面，使用时请删除本页-从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序一、目的本程序用于对从业人员健康体检进行沙门氏菌、志贺氏菌检测等致病菌检测的方法，以规范操作程序，保证检测数据的有效性。
二、适用范围：本方法适用于从人体粪便中沙沙门氏菌、志贺氏菌的分离、鉴定及保存的梯相关操作。
三、生物安全要求标本及相应的致病菌操作必须在BSL-2生物安全实验室的生物安全柜中进行。
四、试剂及仪器设备试剂采便盒、Cary-Blair运送培养基、亚硒酸增菌液（SF）、改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）、沙门志贺培养液、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸琼脂（XLD）、麦康凯琼脂、沙门显色培养基、结晶紫沙门培养基（YS）、三糖铁（TSI）、动力-吲哚-尿素培养基（MIU）、沙门氏菌属诊断血清、志贺氏菌属诊断血清、API20E生化试剂条、磁珠菌种保存管仪器设备恒温培养箱、微生物鉴定仪五、采样方法标本应为新鲜的或转移至Cary-Blair运送培养基的粪便或肛拭子，最优标本是转移到Cary-Blair运送培养基的粪便拭子。
肛拭子不是最佳标本，仅在病人无粪便标本时采用。
粪便标本：应采集自然排出的新鲜粪便，取稀水样、粘血样、脓血样，黏液样部分。
盛于清洁、干燥、无吸水性的无菌容器，避免混入尿液、水和其他物质。
肛拭标本：若无法获得粪便（如排便困难或婴幼儿），也可以采用肛拭子，即无菌棉拭子用生理盐水湿润后，插入肛门内4-5cm处〈儿童约2-3cm），同一方向轻轻旋转2-3周。
以目测能见到粪便为准。
插入Cary-Blair运送培养基。
标本采集后立即送至实验室进行检测，若室温保存，不能超过1h；如不能立即送检，应放入Cary-Blair运送培养基中冷藏条件下24小时内送检。
六、检验程序七、操作步骤分别标记一个XLD平板（或YS平板、麦康凯平板）和1管9ml改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）（或SF增菌液或沙门志贺培养液）。
志贺氏菌属诊断血清说明书
志贺氏菌属诊断血清学试验操作程序1.目的制定标准化的志贺氏菌属诊断血清操作程序，指导对志贺氏菌属的检测2.原理用志贺氏菌属的代表菌株制成灭活菌抗原分别或混合免疫家兔所得的血清，经吸收出去非特异性凝集素后制成，通过凝集试验原理诊断各型志贺氏菌。
3.试剂及实验设备3.1志贺氏菌属诊断血清：宁波天润生物药业有限公司生产的规格为22种的志贺氏菌属诊断血清3.2试剂保存：2~8°C避光保存，防止冻结，在有效期内使用。
3.3实验设备：玻片、吸样枪、接种环、水浴箱、玻璃管、血平板、营养琼脂、电热高温接种灭菌器。
4.程序步骤4.1将诊断血清于冰箱取出后平衡至室温。
4.2选择符合志贺氏菌属培养特性，并经初步生化检测符合志贺菌属生物特性的疑似菌落。
4.3菌群分析将经18~24h血平板上纯培养的待检菌，分别用志贺氏菌属4种多价血清做玻片凝集试验，凝集阳性时，再分别用群多价血清做玻片凝集试验，群多价血清凝集阳性时，再分别与相应的单价血清做玻片凝集试验，最终确定其血清分型。
如果志贺氏菌属4种多价血清做玻片凝集试验均为阴性，可能有以下3种可能性：①K抗原的存在，处理方法：取待检菌的纯菌落于生理盐水中制成浓度约2麦氏单位的菌悬液，置于100°C水浴中煮沸30min，泠却至室温后再用诊断血清进行玻片凝集试验；②非典型菌落，处理方法：通过在营养琼脂平板上的传代让其恢复抗原性，再用诊断血清进行玻片凝集试验；③诊断血清型以外的可送市或省CDC检测。
4.4玻片凝集试验法取18~24h血平板上纯培养的待检菌，用生理盐水制成2麦氏单位的菌悬液，取诊断血清20μL于洁净玻片上，然后取20μL待检菌悬液与血清混匀，轻轻摇动玻片，1min内呈现明显凝集者为阳性，呈均匀浑浊者为阴性，每次凝集试验均应以生理盐水作为阴性对照试验。
若与福氏志贺氏菌单价血清呈现凝集可参照福氏志贺氏菌诊断抗原表（见附表）及生化特性做菌型诊断。
5.质量控制志贺氏菌属4种多价血清选择福氏志贺氏菌属为阳性对照株；选择大肠埃希菌ATCC25922为阴性对照菌株。
志贺氏菌检测
志贺氏菌的检验（国标法）一、增菌称取检样25g ,加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎lmin ,或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培育6〜8h。
培育时间视细菌生长状况而定，当培育液消失稍微混浊时即应中止培育。
二、分别和初步生化试验取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各1个，于36工培育18~24h e志贺氏菌在这些培育基上呈现无色透亮不发酵乳糖的菌落。
挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。
一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培育18~24h ,分别观看结果。
下述培育物可以弃去：a.在三糖铁琼脂斜面上呈扩散生长的培育物；b.在18~24h内发酵乳糖、蔗糖的培育物;C.不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培育物；d.产气的培育物；e.有动力的培育物；f.产生硫化氢的培育物。
凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体），无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。
三、血清学分型挑取三糖铁琼脂上的培育物，做玻片凝集试验。
先用4种志贺氏菌多价血清检查，假如由于K抗原的存在而不消失凝集，应将菌液煮沸后再检查；假如呈现凝集，则用Al、A2、B群多价和D群血清分别试验。
如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。
福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表10可先用群因子血清检查，再依据群因子血清消失凝集的结果，依次选用型因子血清检查。
4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1~15各型因子血清检查。
假如鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3~12型多价血清及各型因子血清检查。
四、进一步的生化试验在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即：葡萄糖镀西蒙氏柠檬酸盐赖氨酸和鸟氨酸脱竣酶pH7.2尿素KCN生长水杨昔和七叶昔的分解除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培育物均为阴性结果。
志贺氏菌检测
志贺氏菌检测志贺氏菌检测1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱：36℃±1℃；冰箱：2℃～5℃；膜过滤系统；厌氧培养装置：℃±1℃；电子天平：感量0.1g；显微镜：10×～100×；均质器；振荡器；无菌吸管：1ml（具刻度）、10ml（具刻度）或微量移液器及吸头；无菌均质杯或无菌均质袋：容量500ml；无菌培养皿：直径90mm；pH计或pH比色管或精密pH试纸；全自动微生物生化鉴定系统。
2 培养基和试剂志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素：见附录中1。
麦康凯（MAC）琼脂：见附录中2。
木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD）琼脂：见附录中3。
三糖铁（TSI）琼脂：见附录中4。
营养琼脂斜面：见附录中5。
半固体琼脂：见附录中6。
葡萄糖铵培养基：见附录中7。
尿素琼脂：见附录中8。
β-半乳糖苷酶培养基：见附录中9。
氨基酸脱羧酶试验培养基：见附录中10。
糖发酵管：见附录中11。
西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录中12。
粘液酸盐培养基：见附录中13。
蛋白胨水、靛基质试剂：见附录中14。
志贺氏菌属诊断血清。
生化鉴定试剂盒。
4 操作步骤增菌以无菌操作取检样25g（ml），加入装有灭菌225ml志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均质器以8000r/min～10000r/min均质；或加入装有225ml 志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1min～2min，液体样品振荡混匀即可。
于℃±１℃，厌氧培养16h～20h。
分离取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于36℃±1℃培养20h～24h，观察各个平板上生长的菌落形态。
宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌。
若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48h再进行观察。
志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表1。
志贺氏菌检验
志贺氏菌检验志贺氏菌属于肠杆菌科，是一种革兰氏阴性菌，会引起肠道感染，引发肠炎，当人出现连续性腹泻、腹痛等症状的时候，就需要考虑是否感染志贺氏菌。
志贺氏菌的传播途径主要是食物和水，比如沙拉、土豆、金枪鱼、虾、奶制品等，在密闭以及不卫生的条件下志贺氏菌会迅速传播，而且经常出现在人员比较密集的地方，比如餐厅、食堂等地。
食源性志贺氏菌的传播主要是因为从事食品工作的人员感染了志贺氏菌，并且将其传播到食物上所引起的，另外，保存食物的温度不当，也可能引起志贺氏菌。
志贺氏菌检验是临床上检验肠道感染疾病的一个重要途径，在检测过程中常用的方法有以下几种。
一、生化鉴定法常规的生化鉴定方法是志贺氏菌检验过程中的常用方法，需要对细菌进行增殖培养、分离、生化试验、血清学检验等步骤来完成，步骤比较繁琐，而且耗时较长，每一次一般只能检验一个样品，但是检测的结果比较准确，检测稳定性较高，假阳性率低。
二、免疫学检验方法免疫学是检验志贺氏菌最快速、准确的方法，特异性较强，而且灵敏度很高，主要的免疫学检验方法有以下几种：第一，酶联免疫法。
这种方法的灵敏度很高，而且简单快速，检测过程比较稳定，可以进行自动化操作，是志贺氏菌检测过程中最快速的一种方法。
但是，使用酶联免疫法进行检验的时候，影响检测结果的因素较多，而且假阳性率高，所以还需要采用其他的方法进行配合检验。
第二，SPA协同凝集法。
这种方法是使用已知标准血清吸附到含Ａ蛋白的金黄色葡萄球菌表面之后，让金黄色葡萄球菌成为吸附抗体的载体，再根据吸附的结果来诊断是否感染志贺氏菌的一种方法。
三、分子生物学方法分子生物学是建立在很多其他的检测技术基础上的，敏感度高、检测快速，而且特意性高，是生物技术革命的一个重要产物，目前在志贺氏菌的检测过程中十分常见。
志贺氏菌的分子生物学检测方法有以下几种：第一，聚合酶链式反应法，比如常规PCR、多重PCR法、实时荧光PCR法和恒温荧光PCR法等。
以恒温实时荧光PCR法为例，这种方法的原理是利用环介导等温扩增反应为原理进行测量的方法，灵敏度很高，与传统的荧光测量方法相比，灵敏度高出2～5个数量级，而且测量十分迅速，荧光反应的时间较短，一般30-60分钟就可以完成荧光反应。
志贺氏菌检测标准
志贺氏菌检测标准志贺氏菌是一类常见的细菌，它造成了许多消化系统疾病。
为了确保消费者的安全，食品厂商和相关组织都需要进行志贺氏菌的检测。
本文将详细介绍有关志贺氏菌检测的标准，以确保消费者的健康和安全。
第一步骤：选择适当的样本检测开始前，需要选择适当的样本。
这可以是从环境，食品或水源中收集得到的，以确定是否存在志贺氏菌。
通常，人们从肉类，奶类以及其他易受污染的食品等选择样本进行检测。
选择适当的样本对于获得准确的结果非常重要。
第二步骤：采集样本在进行检测前，样本需要采集。
采集需采取规范化程序，以确保采集的样品实际上代表了被检测对象的状况。
采集过程需要避免污染样品，否则可能影响检测结果。
第三步骤：样本处理样品处理是保证测试数据准确性的关键，它可以消除干扰物质和旁边生物。
对于厨房和医疗设施，在处理志贺氏菌样品时应该采取严格的操作。
操作过程应精确规范，以保证样品不与其他样品的任何形式发生交叉污染。
第四步骤：实验室测试在实验室中进行测试是一种保证分析的准确性的方式。
志贺氏菌检测一般使用PCR或者培养方法进行。
不同的实验室可能采用不同的实验操作方法，因此测试数据包括实验的操作条件和环境条件等因素可能会有所不同。
第五步骤：分析测试结果在分析测试结果时，需要考虑到数据的相对稳定性和准确性问题。
分析的结果应包括相关的质量控制数据，以便能够确定测试是否正确进行。
正确的数据分析必须满足比如重复性，标准色谱的基本要求，因此必须引入知识和技术。
总之，通过以上五个步骤，我们可以实现对志贺氏菌的高效检测，并确保消费者的食品安全。
当然，我们在使用志贺氏菌检测标准时，需要时刻关注其技术竞争力和检测过程的规范化，这将为消费者提供一个安全的健康环境，成为维护人民健康的重要保障。
沙门氏菌和志贺氏菌的检测
H抗原：为不稳定的蛋白质抗原，加热或用乙 醇处理均被破坏。沙门菌H抗原有两个相,第一 相特异性较高称特异相,用小写英文字母a、b、 c表示，直至z，z以衙用z加阿拉伯数字表示， 如z1、z2、z3等，第二相抗原为沙门菌共有， 称非特异相，直接用1、2、3表示。同时有第 一相和第二相H抗原的细菌称为双相菌，仅有 一相者称单相菌。H抗原是定型的依据，其刺 激机体产生的抗体以IgG为主，与相应的抗血 清呈絮状反应。
沙门氏菌和志贺菌检测
熊长辉
概述 肠道感染细菌
肠道感染细菌是通过粪-口传播途径进行传播的一 类细菌。 主要包括 肠杆菌科细菌、霍乱弧菌、副溶血性弧
菌、幽门螺杆菌等。
肠杆菌科 中与医学有关的包括： 埃希菌属、志贺
菌属、沙门菌属、变形杆菌属等。
肠杆菌科共同特性
相似的形态染色 G 小杆菌，有鞭毛(痢疾杆菌外) 菌毛，某些有荚膜，无芽胞
斜面红色、底层黄色，出现部分黑色或全部黑 色 斜面红色、底层黄色，无黑色 斜面、底层均黄色，出现部分黑色或全部黑色
除沙门菌外，变形杆菌、柠檬酸盐菌、志贺菌 等也可出现上述反应。 • 吲哚试验：阴性
志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖， 不产生H2S。 大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不 产生H2S 。 沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖、蔗糖，大多数产生 H2S ，多数产气。 下面照片所示2-3-4，可能是大肠杆菌、沙门氏菌还是志贺氏 菌？
1）正常凝集价 正常人由于隐性感染或预防接种，血清中通常可含 有一定水平的凝集抗体，正常的凝集价可因不同地区而有差异 一般情况下，伤寒沙门菌O抗体的凝集价应在1∶80以上，H抗体 凝集价在1∶160以上，引起副伤寒沙门菌H抗体凝集价在1∶80以 上才有诊断意义 2）动态观察 有时单次效价不能定论，可在病程中逐周检查。若效 价逐次增加或恢复期效价比初次≥4倍者有意义
志贺氏菌检测新国标要求厌氧条件增菌的解决方案.
志贺氏菌新国标要求厌氧条件增菌的解决方案最新发布的志贺氏菌国标GB_4789.5-2012(食品安全国家标准_食品微生物学检验_志贺氏菌检验方法即将于2012年7月17日实施,新国标中关于增菌部分有重大改变,要求在厌氧条件下增菌过夜,由于增菌通常在500mL三角瓶或均质袋中进行,这就对所有检测志贺氏菌的政府检测机构和企业提出更高的硬件要求。
由于志贺氏菌是兼性厌氧菌,此次国标变更增菌方法为厌氧条件下增菌,目的是想在增菌时抑制部分好氧菌的生长,提高志贺氏菌的检出率,提出灵敏度。
很多微生物工作者在讨论用什么方法来实现厌氧增菌,由于增菌时可采用三角瓶、试剂瓶或均质袋,放在何种容器中进行增菌,要根据样品容量、增置设备的承受能力等各种因素进行综合考虑。
现本人给广大有检测志贺氏菌需求的客户推荐几种解决方案:1 大培养空间的方案—各种大型厌氧工作站,如英国DWS公司的A35新型厌氧工作站(带触摸屏:适合每日检测量大于50个样品/以上的检测机构和企业。
可以方便转入三角瓶(瓶子高度要求小于185mm和均质袋,内部培养空间至少可以放置60个500mL三角瓶,提供精确的温度、湿度和气体控制,触摸屏控制系统。
2中等培养空间的方案—各种紧凑型厌氧培养箱,如DG250厌氧工作站:适合每日检测量20-30个左右的检测机构和企业。
提供精确的温度、湿度和气体控制。
3最小培养空间的方案—各类厌氧罐系统,如Jar Gassing system(厌氧罐气体控制系统:适合每日检测量小于10个的检测机构。
样品放入厌氧罐中(可选放一个瓶子或4个瓶子的厌氧罐,通过抽真空和充混合气体,将内部的氧气降至1%左右,然后通过混合气体中的氢气,在钯催化条件下将微量的氧气反应生成水,达到厌氧条件。
此方案只提供抽真空和充气系统及厌氧罐,客户需要将厌氧罐放入其它培养箱中培养。
志贺氏菌检测流程
志贺氏菌属检验的标准操作程序【目的】指导检验伤寒、副伤寒沙门氏菌。
【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
【标本的采集】由受检者将采便用已蘸有甘油盐水的棉棒自行插入肛门内，轻轻转动，然后取出，插入带有编号的塑料试管中，交给检验科人员。
【检验程序】采便→立即划线接种SS平板→培养后挑取可疑菌落接种三糖铁斜面及半固体培养基→生化学试验→血清学试验→报告检验结果。
【操作步骤】1. 分离培养采便后立即用采便棒划线接种SS琼脂平板。
36±1℃培养18-24小时，挑取无色半透明的光滑菌落分解乳糖或迟缓分解乳糖的光滑菌落，接种三糖铁斜面及半固体，36±1℃培养18-24小时。
2. 生化学试验凡是三糖铁反应符合志贺氏菌属特征者（斜面产碱或不变色，底层产酸，H2S（—），产气（—），但福氏6型产生少量气体）、无动力、革兰氏阴性杆菌、作V-P试验，苯丙氨酸，赖氨酸，柠檬酸盐，葡萄糖铵试验。
其结果全部阴性者，作血清学试验。
3. 血清学试验挑取三糖铁斜面上的培养物，按下列顺序作玻片凝集试验：四种志贺氏——→福氏————→宋内氏————→志贺氏————→志贺氏多价血清多价血清血清 2型血清 1型血清∣ + ∣ +∣ +∣ +∣—∣↓↓↓↓∣福氏菌宋内氏菌志贺氏2型志贺氏1型↓ 1-6型某型+鲍氏 7-11型某组+：组内分型血清———→鲍氏某型血清： 12-15型全部—：加热破坏K抗原，重做凝集试验16-18型福氏菌的鉴定：凡是与福氏多价血清凝集的菌株，可先用3、4，群6，群7，三种因子血清检查，根据群因子血清反应结果，再用型因子血清检查。
福氏菌抗原成分如下。
志贺氏菌的检测方法国际标准
志贺氏菌的检测方法国际标准
目前，国际上常用的志贺氏菌检测方法有以下几种：
1. PCR法：利用聚合酶链反应（PCR）技术对志贺氏菌进行检测。
该方法具有快速、准确、灵敏度高等优点。
2. ELISA法：利用酶联免疫吸附法（ELISA）对志贺氏菌进行检测。
该方法简便、快速、灵敏度高，但需要更多的实验室设备和技术。
3. 细胞培养法：将患者体液中的志贺氏菌细胞培养在适宜的培
养基上，观察细胞形态和生长状态来判断志贺氏菌是否存在。
该方法
可确诊志贺菌感染，但需要长时间的培养时间和更多的实验室设备和
技术。
4. 免疫荧光法：利用抗志贺氏菌抗体与志贺氏菌的特异抗原反
应发出荧光信号，通过显微镜观察来检测志贺氏菌的存在。
该方法准确、灵敏度高，但仍需要更多的设备和技术。
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志贺氏菌检测3.12 西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录中12。
3.13 粘液酸盐培养基：见附录中13。
3.14 蛋白胨水、靛基质试剂：见附录中14。
3.15 志贺氏菌属诊断血清。
3.16 生化鉴定试剂盒。
4 操作步骤4.1 增菌以无菌操作取检样25g（ml），加入装有灭菌225ml志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均质器以8000r/min～10000r/min均质；或加入装有225ml 志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1min～2min，液体样品振荡混匀即可。
于41.5℃±１℃，厌氧培养16h～20h。
4.2 分离取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于36℃±1℃培养20h～24h，观察各个平板上生长的菌落形态。
宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌。
若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48h再进行观察。
志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表1。
表1 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板志贺氏菌的菌落特征MAC琼脂无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐XLD琼脂粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐4.3 初步生化试验4.3.1 自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，分别接种TSI、半固体和营养琼脂斜面各一管，置36℃±1℃培养20h～24h，分别观察结果。
4.3.2 凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸（发酵葡萄糖，不发酵乳糖，蔗糖）、不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体）、不产硫化氢、半固体管中无动力的菌株，挑取其4.3.1中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验和血清学分型。
4.4 生化试验及附加生化试验4.4.1 生化试验用4.3.1中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验，即β-半乳糖苷酶、尿素、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶苷的分解试验。
除宋内氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌13型的鸟氨酸阳性；宋内氏菌和痢疾志贺氏菌1型，鲍氏志贺氏菌13型的β-半乳糖苷酶为阳性以外，其余生化试验志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。
另外由于福氏志贺氏菌6型的生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌相似，必要时还需加做靛基质、甘露醇、棉子糖、甘油试验，也可做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。
生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属。
志贺氏菌属生化特性见表2。
表2 志贺氏菌属四个群的生化特征生化反应A群：痢疾志贺氏菌B群：福氏志贺氏菌C群：鲍氏志贺氏菌D群：宋内氏志贺氏菌β-半乳糖苷酶－a－－a+ 尿素－－－－赖氨酸脱羧酶－－－－鸟氨酸脱羧酶－－－b+水样苷－－－－七叶苷－－－－靛基质－/+ （+）－/+ －甘露醇－+c+ +棉子糖－+ －+甘油（+）－（+） d 注：+表示阳性；－表示阴性；－/+表示多数阴性；+/－表示多数阳性；（+）表示迟缓阳性；d表示有不同生化型。
a 痢疾志贺1型和鲍氏13型为阳性。
b 鲍氏13型为鸟氨酸阳性。
c 福氏4型和6型常见甘露醇阴性变种。
4.4.2 附加生化实验由于某些不活泼的大肠埃希氏菌（anaerogenic E.coli）、A-D（Alkalescens-D isparbiotypes碱性-异型）菌的部分生化特征与志贺氏菌相似，并能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集；因此前面生化实验符合志贺氏菌属生化特性的培养物还需另加葡萄糖胺、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验(36℃培养24h～48h)。
志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别见表3。
表3 志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D 菌的生化特性区别生化反应A群：痢疾志贺氏菌B群：福氏志贺氏菌C群：鲍氏志贺氏菌D群：宋内氏志贺氏菌大肠埃希氏菌A-D菌葡萄糖－－－－+ + 胺西蒙氏－－－－ d d柠檬酸盐粘液酸－－－ d + d 盐注1：+表示阳性；－表示阴性；d表示有不同生化型。
注2：在葡萄糖铵、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验三项反应中志贺氏菌一般为阴性，而不活泼的大肠埃希氏菌、A-D（碱性-异型）菌至少有一项反应为阳性。
4.4.3 如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，可根据4.3.2的初步判断结果，用4.3.1中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。
4.5 血清学鉴定4.5.1 抗原的准备志贺氏菌属没有动力，所以没有鞭毛抗原。
志贺氏菌属主要有菌体（O）抗原。
菌体O抗原又可分为型和群的特异性抗原。
一般采用1.2%～1.5%琼脂培养物作为玻片凝集试验用的抗原。
注1：一些志贺氏菌如果因为K抗原的存在而不出现凝集反应时，可挑取菌苔于1ml生理盐水做成浓菌液，100℃煮沸15min～60min去除K抗原后再检查。
注2：D群志贺氏菌既可能是光滑型菌株也可能是粗糙型菌株，与其他志贺氏菌群抗原不存在交叉反应。
与肠杆菌科不同，宋内氏志贺氏菌粗糙型菌株不一定会自凝。
宋内氏志贺氏菌没有K抗原。
4.5.2 凝集反应在玻片上划出2个约1cm×2cm的区域，挑取一环待测菌，各放1/2环于玻片上的每一区域上部，在其中一个区域下部加1滴抗血清，在另一区域下部加入1滴生理盐水，作为对照。
再用无菌的接种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液。
将玻片倾斜摇动混合1min，并对着黑色背景进行观察，如果抗血清中出现凝结成块的颗粒，而且生理盐水中没有发生自凝现象，那么凝集反应为阳性。
如果生理盐水中出现凝集，视作为自凝。
这时，应挑取同一培养基上的其他菌落继续进行试验。
如果待测菌的生化特征符合志贺氏菌属生化特征，而其血清学试验为阴性的话，则按4.5.1 注1进行试验。
附录培养基和试剂1 志贺氏菌增菌汤-新生霉素（Shigella broth）1.1 志贺氏菌增菌肉汤1.1.1 成分胰蛋白胨20.0g葡萄糖 1.0g磷酸氢二钾 2.0g磷酸二氢钾 2.0g氯化钠 5.0g吐温80 1.5ml蒸馏水1000mlpH 7.0±0.21.1.2 制法将以上成分混合加热溶解，冷却至25℃左右校正pH，分装适当的容器，121℃灭菌15min，取出后冷却至50℃～55℃，加入除菌过滤的新生霉素溶液（0.5μg/ml），分装225ml备用。
注：如不立即使用，在2℃～8℃条件下可储存一个月。
1.2 新生霉素溶液1.2.1 成分新生霉素25.0mg蒸馏水1000ml1.2.2 制法将新生霉素溶解于蒸馏水中，用0.22μm过滤膜除菌，如不立即使用，在2℃～8℃条件下可储存一个月。
1.3 临用时每225ml志贺氏菌增菌肉汤（1.1）加入5ml新生霉素溶液（1.2），混匀。
2 麦康凯（MAC）琼脂2.1 成分蛋白胨20.0g乳糖10.0g3号胆盐 1.5g氯化钠 5.0g中性红0.03g结晶紫0.001g琼脂15.0g蒸馏水1000mlpH 7.2±0.22.2 制法将以上成分混合加热溶解，冷却至25℃左右校正pH，分装，121℃高压灭菌15min。
冷却至45℃～50℃，倾注平板。
注：如不立即使用，在2℃～8℃条件下可储存二周。
3 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂3.1 成分酵母膏 3.0gL-赖氨酸 5.0g木糖 3.75g乳糖7.5g蔗糖7.5g脱氧胆酸钠 1.0g氯化钠 5.0g硫代硫酸钠 6.8g柠檬酸铁铵0.8g酚红0.08g琼脂15.0g蒸馏水1000mlpH 7.4±0.2除酚红和琼脂外，将其他成分加入400ml蒸馏水中，煮沸溶解，校正pH。
另将琼脂加入600ml蒸馏水中，煮沸溶解。
将上述两溶液混合均匀后，再加入指示剂，待冷至50℃～55℃倾注平皿。
注：本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性，贮于室温暗处。
本培养基宜于当天制备，第二天使用。
使用前必须去除平板表面上的水珠，在37℃～55℃温度下，琼脂面向下、平板盖亦向下烘干。
另外如配置好的培养基不立即使用，在2℃～8℃条件下可储存二周。
4 三塘铁（TSI）琼脂4.1 成分蛋白胨20.0g牛肉浸膏 5.0g乳糖10.0g蔗糖10.0g葡萄糖 1.0g硫酸亚铁铵(NH4)2Fe(SO4)·6H2O 0.2g氯化钠 5.0g硫代硫酸钠0.2g酚红0.025g琼脂12.0g蒸馏水1000mlpH 7.4±0.24.2 制法除酚红和琼脂外，将其他成分加于400ml蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热使完全溶化，冷却至25℃左右校正pH至7.4±0.2。
另将琼脂加于600ml蒸馏水中，静置约10min，加热使完全溶化。
将两溶液混合均匀，加入5%酚红水溶液5ml，混匀，分装小号试管，每管约3ml。
于121℃灭菌15min，制成高层斜面。
冷却后呈桔红色。
如不立即使用，在2℃～8℃条件下可储存一个月。
5 营养琼脂斜面蛋白胨10.0g牛肉膏 3.0g氯化钠 5.0g琼脂15.0g蒸馏水1000mlpH 7.0±0.25.2 制法将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2ml，冷却至25℃左右校正pH至7.0±0.2。
加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。
分装小号试管，每管约3ml。
于121℃灭菌15min，制成斜面。
注：如不立即使用，在2℃～8℃条件下可储存二周。
6 半固体琼脂6.1 成分蛋白胨 1.0g牛肉膏0.3g氯化钠0.5g琼脂0.3g～0.7g蒸馏水100mlpH 7.4±0.26.2 制法按以上成分配好，加热溶解，校正pH，分装小试管，121℃灭菌15min，直立凝固备用。
7 葡萄糖胺培养基7.1 成分氯化钠 5.0g硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.2g磷酸二氢铵 1.0g磷酸氢二钾 1.0g葡萄弹 2.0g琼脂20.0g0.2%溴麝香草酚蓝水溶液40.0ml蒸馏水1000mlpH 6.8±0.27.2 制法先将盐类和糖溶解于水内，校正pH，再加入琼脂加热溶解，然后加入指示剂。
混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min。
制成斜面备用。
8 尿素琼脂8.1 成分蛋白胨 1.0g氯化钠 5.0g葡萄糖 1.0g磷酸二氢钾 2.0g0.4%酚红溶液 3.0ml琼脂20.0g20%尿素溶液100.0ml蒸馏水1000mlpH 7.2±0.2将上述成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH，分装小试管,121℃高压灭菌15min。
8.2 制法除酚红和尿素外的其他成分加热溶解，冷却至25℃左右校正pH，加入酚红指示剂，混匀，于121℃灭菌15min。