链霉素发酵工艺验证方案
灰色链霉菌生产链霉素的发酵工艺优化
０． ７ ５、 Ｎａ Ｃ１ ２， Ｃａ ＣＯ ０． ７， ｐ Ｈ ７． ５。
发酵 水平 徘 徊 不 前 ， 普遍存在生产成 本高、 发 酵 周 期长 、 产量 稳定 性差 等 问题 。 近年来 ， 人 们 对 无 公 害 农 产 品 的需 求 不 断 增
法， 研 究摇 瓶发 酵 中菌龄 、 接 种量 、 装液量 、 温度 、 初
１ ． ３ 培 养条件
１ ． ３ ． １ 菌种 的斜 面培 养
无菌条件下 ， 一 ８ ０ ｏ 【 ＝ 超低温冰箱保藏的孢子甘
油管 ， 取２ ０ ０ Ｉ ． Ｌ Ｌ涂 布 于斜 面 ， 置于 ３ ０℃ 的培 养 箱 中， 相对湿 度 ４ ０ ％ 一６ ０ ％， 依 菌 落 生长 情 况 培养 ７～
为２ ８℃ ， 在此条件下发酵液 中链霉素产量 约为 ８ ８ ０ Ｕ ／ ｍ Ｌ ， 较优化前提高近 １ ０ ％。
关键词
链霉 素
灰 色链 霉菌
发酵工艺 文献标 志码
优化 Ａ
中图法分类号
Ｔ Ｑ ４ ６ ５ ． ２ ；
链霉 素 （ Ｓ ｔ ｒ ｅ ｐ ｔ ｏ ｍ ｙ ｃ ｉ ｎ ） 是 一 种 由灰 色 链 霉 菌 发 酵产 生 的氨基 糖苷 类 抗 生 素 ¨ Ｊ ， 它 主要 是 与原 核 细 胞（ 如细 菌 ） 核 糖体 ３ ０ Ｓ亚单 位 结 合 ， 干 扰 细 菌蛋 白 质 的合成 ， 从 而杀 灭 细 菌或 抑 制 细 菌 生 长 Ｊ 。在 医 学上 ， 主要 用 于 治 疗 结 核 杆 菌 感 染 Ｊ ， 还 可用 于 治 疗多 种 革 兰 氏 阴性 菌 所 引 起 的 感 染 ， 如 大 肠 埃 希 菌、 克 雷 伯 菌属 、 变形 杆 菌 属 等 Ｊ 。２ ０世 纪 ５ ０—８ ０ 年代 ， 链霉 素 的大 规模 发 酵 生 产 发 展 迅 速 ， 为人 类 作 出了不 可磨 灭 的 贡献 。但 近几 十 年 来 ， 由于 链 霉 素耳 毒性 的发 现 ， 其 应 用 受 到 了极 大 限 制 Ｊ ， 致 使
链霉素的发酵工艺
链霉素的发酵工艺引言链霉素是一种广谱抗生素，对于多种细菌感染具有很高的疗效。
链霉素的制备主要通过发酵工艺进行，本文将介绍链霉素的发酵工艺流程及关键环节。
发酵工艺流程链霉素的发酵工艺通常包括以下几个步骤：1.培养基准备2.发酵罐的接种3.发酵过程控制4.分离与提取5.链霉素的纯化下面将详细介绍每个步骤。
1. 培养基准备培养基是链霉素发酵的基础，适当的培养基能够为菌株提供所需的营养物质。
常用的链霉素发酵培养基包括以下成分：•碳源：如葡萄糖、淀粉、玉米粉等。
•氮源：如酵母提取物、蛋白胨等。
•矿盐：如硫酸镁、磷酸二氢钾等。
•缓冲剂：如磷酸钠、氢氧化钠等。
•辅助物质：如抗泡剂、表面活性剂等。
将以上成分按比例配制成适当的液体或固体培养基。
2. 发酵罐的接种在发酵过程中，将培养基接种菌株，并将接种样品转移到发酵罐中。
接种时需注意保持接种器具的无菌，以避免杂菌污染。
将接种物均匀地加入发酵罐中，并控制接种量，一般为培养基总容积的2-5%。
3. 发酵过程控制发酵过程的控制是链霉素发酵的关键环节之一。
以下是常见的控制参数：•温度控制：链霉素的适宜生长温度为28-32摄氏度，需保持恒定的温度。
•pH值控制：链霉素的适宜pH范围为6.0-7.5，需通过添加酸碱来控制发酵液的pH值。
•溶氧量控制：链霉素发酵对氧气需求较高，需通过控制搅拌速度和通气量来维持适宜的溶氧量。
•发酵时间控制：链霉素的发酵时间通常为48-72小时，需控制好发酵时间，避免过度生长。
监测并控制这些参数，可以提高链霉素的产量和质量。
4. 分离与提取发酵结束后，需要将发酵液中的链霉素分离出来。
常用的分离方法包括离心、过滤、沉淀和蒸发等。
接下来，对得到的链霉素进行提取处理，一般采用溶剂提取、结晶或萃取等方法，以获得链霉素的纯度。
5. 链霉素的纯化为了提高链霉素的纯度，可以采用色谱技术进行纯化。
常见的纯化方法包括硅胶柱层析、高效液相色谱以及逆流色谱等。
纯化完成后，对得到的链霉素进行干燥，制成成品。
微生物学实验七 链霉素发酵及管碟法测定生物效价微生物发酵
实验七 链霉素发酵及管碟法测定生物效价微生物发酵（一）目的要求了解抗生素发酵的基本过程。
了解管碟法测定抗生素生物效价的基本原理。
学会管碟法测定抗生素效价方法，并学习抗生素发酵过程一些重要生理生化指标分析。
（二）基本原理链霉素是由灰色链霉菌(放线菌的一种)产生的一种氨基糖苷类抗生素，它既含有氨基糖苷，也含有氨基环醇的结构，属抗革兰氏阴性菌的抗生素。
抗生素液体发酵共分三大工序：菌种、发酵、提炼。
配合三个工序还有分析化验和有关产物测定。
菌种种子质量指标：无杂菌，全部形成孢子，摇瓶发酵效价达35000U/ml 以上(30℃，48 h 培养)，方可用于生产。
发酵抗生素发酵过程除需经常镜检排除杂菌污染外，接种12h 后，每2h 进行一次pH 、生物量、总糖、还原糖、氨基氮及抗生素效价测定。
一级种子质量指标：无杂菌，全部放线菌，菌丝粗壮整齐，无断裂；pH7.0~7.2。
二级发酵质量指标：菌丝粗壮整齐，无断裂，菌丝成网状；pH7.2；链霉素效价10000～35000U/ml 。
提炼砂子孢子 (4℃±1℃冰箱保存) 第一代孢子(28℃高氏1号培养基，培养5d) 第二代孢子 (28℃高氏1号培养基，培养5d) 种子罐发酵(一级，种子培养基) 30℃±2℃培养12~16h 发酵罐发酵(二级，发酵培养基) 28~30℃，培养48h 放罐 中和、氧化、过滤 发酵液 草酸酸化 板框压滤 滤液 加NaOH 中和 板框压滤 中和滤液 上离子交换柱 板框压滤 饱和树脂 1 mol/L H 2SO 4 解 吸 解吸液 中和氧化滤液 加氨水沉淀 离心甩干，洗去氨 链霉素游离碱 (白色沉淀) 加6 mol/L H 2SO 4调pH 6.0~6.5，溶解 加NaOH 及KMnO 4 链霉素硫酸盐喷雾干燥 白色粉末(成品)衡量抗生素发酵液中抗菌物质的含量称效价。
抗生素效价测定可采用化学法或生物效价测定法。
生物效价测定有稀释法、比浊法、扩散法三大类。
链霉素发酵工艺技术
生物制药工程系毕业实习调研报告姓名：专业：班级：学号:指导老师：完成时间：目录链霉素的发酵工艺过程1、制备流程图 (1)2、链霉素详细过程 (2)3、链霉素制备注意事项 (8)4、参考文献 (8)链霉素的发酵工艺过程发酵工艺流程图：摘要：链霉菌在生产抗生素方面的特殊作用使它成为放线菌中遗传育种的核心，近年来的进展主要在于原生质体融合、脂质体的使用、质粒及其它载体的发现和克隆技术工业应用。
本文综述了链霉素生物合成途径、代谢调节机制、链霉素发酵的代谢调控育种及其进展。
关键词：链霉素；发酵；代谢调控链霉素是1944年从灰色链霉菌培养液中分离出来的一种碱性抗生素，我国于1958年以来大量生产，目前已形成了相当大的生产规模与能力。
传统工艺:链霉素早期的提取方法采用活性炭吸附法、带溶法、沉淀法、离子交换法。
目前国内外多采用离子交换法提取链霉素，其工艺流程如图:链霉素是由链霉胍、链霉糖和N-甲基-L-葡萄糖胺组成的三糖苷，属于氨基糖苷类抗生素。
链霉胍是在l，3-位置上带有2个孤基的l，3-去氧青蟹肌醇，去掉2个脒基后称为链霉胺。
链霉糖是带有支链的5’-脱氧五碳糖，在第3碳上有一个醛基。
N-甲基-L-葡萄糖胺是在第2碳上的-NH2被甲基化(-CH3NH)的L-葡萄糖胺。
这三糖连接的糖苷键都是α型的糖苷键。
链霉素发酵工业延续至今已有相当长的历史，和其它抗生素生产过程一样，它的菌体生长，产物形成等所涉及的一系列时刻变化着的生物化学和质量、能量传递过[1]使链霉素发酵表现出相当程度的不确定性。
同时又由于反应机理复杂，无合适的模型用以描述过程，使人们在其发酵操作上依赖经验甚于理论。
这给链霉素生产水平的提高带来了一定的困难，但同时又给基于理论分析提高生产提供了可能。
1 链霉素生物合成的途径及代谢调节机制1.1 链霉素的生物合成途径由D-葡萄糖和NH3合成链霉素的大致途径如图1所示[2]从图l可看出，每生成1个链霉素分子都需消耗3个葡萄糖分子、7个HN3分子、2个CO2分子和l个甲硫氨酸分子。
链霉素纯化实验报告
实验名称：链霉素纯化实验实验日期：2023年X月X日实验地点：实验室实验目的：1. 学习和掌握链霉素的提取和纯化方法。
2. 了解不同纯化步骤对链霉素纯度的影响。
3. 优化实验条件，提高链霉素的纯度和回收率。
实验材料：1. 链霉素发酵液2. 乙酸乙酯3. 无水乙醇4. 氯化钠5. 硅胶6. 重结晶溶剂（如甲醇、丙酮等）7. 分析纯试剂8. 实验器材：离心机、旋转蒸发仪、玻璃棒、漏斗、滤纸、烧杯、锥形瓶等实验方法：1. 预处理将发酵液在室温下静置，使沉淀物沉淀，取上清液备用。
2. 初步纯化将上清液用乙酸乙酯萃取，静置分层后，取下层有机相，使用旋转蒸发仪去除溶剂，得到初步纯化的链霉素。
3. 柱层析将初步纯化的链霉素用甲醇溶解，过硅胶柱，收集洗脱液。
调节洗脱液pH至6.0-7.0，以氯化钠溶液作为洗脱剂，收集目标组分。
4. 精制将收集到的目标组分用无水乙醇进行重结晶，得到精制的链霉素。
5. 分析对纯化的链霉素进行HPLC分析，测定其纯度和含量。
实验结果：1. 初步纯化通过乙酸乙酯萃取，初步纯化的链霉素纯度约为60%。
2. 柱层析经过硅胶柱层析，链霉素纯度提高至90%。
3. 精制通过重结晶，链霉素纯度达到98%以上。
4. HPLC分析HPLC分析结果显示，纯化后的链霉素纯度为98.5%，含量为1.5mg/mL。
实验讨论：1. 在初步纯化过程中，乙酸乙酯萃取效果较好，可以有效地去除发酵液中的杂质，提高链霉素的纯度。
2. 柱层析是纯化过程中的关键步骤，通过调节洗脱剂pH和氯化钠浓度，可以进一步分离和纯化链霉素。
3. 重结晶是提高链霉素纯度的有效方法，通过选择合适的溶剂和结晶条件，可以使链霉素结晶析出，从而提高其纯度。
4. 在实验过程中，应注意操作规范，避免污染和损失，以保证实验结果的准确性。
实验结论：本实验成功地从发酵液中提取和纯化了链霉素，通过乙酸乙酯萃取、柱层析和重结晶等步骤，将链霉素纯度从60%提高到98.5%，为后续研究提供了高质量的实验材料。
链霉素工艺流程设计
（3） 链霉菌是好氧菌，菌体的生产及发酵产物 的积累都要消耗氧。因此发酵过程当中需保证必 须的供氧量。 （4）根据参数的变化，以单位体积功率相等的原 则改变搅拌转速及空气流量来进行发酵容积的扩 大设计
发酵工艺流程图
发酵液提取及纯化工艺流程图
厂房布置图1
厂房布置图2
设备布置图
谢谢观赏！
生物提取法的评价
优点
1、需要的原料材料少且易得，并有足够数量的供应 2、设备条件要求不苛刻 3、“三废”少并且易于治理
缺点
1、分解代谢产物的调节过程中甘露糖链霉素的控制很复杂 2、无机磷的调节过程中，无机磷浓度的浓度很难控制，正常生 长所需的无机磷浓度抑制链霉素的形成 3、生物合成过程中步骤也比较复杂，需要经过多步反应
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3、越是没有本领的就越加自命不凡。 20.10.1 004:37: 5904:3 7Oct-20 10-Oct-20
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4、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的 错儿。 04:37:5 904:37: 5904:3 7Saturday, October 10, 2020
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5、知人者智，自知者明。胜人者有力 ，自胜 者强。 20.10.1 020.10. 1004:3 7:5904: 37:59October 10, 2020
2020 4:37:59 AM04:37:592020/10/10
• 11、自己要先看得起自己，别人才会看得起你。10/10/
谢 谢 大 家 2020 4:37 AM10/10/2020 4:37 AM20.10.1020.10.10
• 12、这一秒不放弃，下一秒就会有希望。10-Oct-2010 October 202020.10.10
实行放大主要依据
发酵工程制药实验链霉菌发酵
发酵工程制药实验：链霉菌发酵发酵工程制药实验是制药技术中的重要环节，通过对发酵过程的研究和实验，可以获得制造高质量药品的关键信息。
本文将介绍在实验室中进行链霉菌发酵的方法和步骤，并分析其中的关键因素。
实验目的链霉菌（Streptomyces）是一种广泛存在于自然界中、能够产生许多重要生物活性分子的细菌。
它们具有产生抗生素、抗肿瘤剂、免疫抑制剂等药物的能力，因此被广泛用于制药和医疗领域。
链霉菌的发酵实验可以帮助我们掌握其生长和代谢规律，了解影响链霉菌生长的因素如何调控，探索最优的发酵条件以提高目标产物的产量和纯度等。
因此，本实验的主要目的是：通过链霉菌发酵的实验，掌握发酵工程制药实验的基础理论和操作技巧，探索链霉菌发酵的优化条件。
实验步骤1. 配置培养基链霉菌生长需要适当的培养基，因此我们需要配置基于木质素和琼脂的培养基，其中需添加铁、镁等元素和麦芽糊精等营养成分。
将制备好的固体培养基加入烧过的三角瓶中，用自来水洗净后，用酒精灯加热瓶口和瓶颈，使其不受污染。
2. 实验前消毒和预先培养试管将消毒瓶（80%乙醇）放在洁净桌面上，将三角瓶紫外线灯消毒30分钟，然后将三角瓶横放在洁净桌面上，从洁净试管中取出玻璃珠，放入三角瓶内，用酒精灯烘干瓶口后盖上。
将预备菌株（常见的链霉菌菌株如海洋链霉菌、链霉菌菌株NRRL2234）在木质素琼脂平板上通过接种的方式进行预先培养。
3. 移液接种在曝气装置中注入适量空气使溶液震荡，将链霉菌菌液铸在劳氏肉汤培养基中，在摇床上进行培养。
培养过程中要定时观察并调节培养条件如温度、曝气速率和PH值等。
通过留取一定量的液体给种管，在适当的体积下移液接种，使样品达到合适的菌落密度。
4. 发酵条件的优化掌握适宜的链霉菌发酵条件对于产品的质量和产量至关重要。
在实验的不同时间点，进行样品的收获和检测，并结合实验室提供的分析工具和技能对链霉菌发酵进行分析和诊断，探寻出最适宜的发酵条件，从而可提高产品产量和质量，开发出更多的新药品。
链霉素发酵实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握链霉素发酵的基本原理和操作步骤。
2. 了解发酵过程中关键参数的调控对发酵效果的影响。
3. 通过实验，优化链霉素发酵培养基配方，提高发酵效率。
二、实验原理链霉素是一种重要的氨基糖苷类抗生素，由灰色链霉菌发酵生产。
发酵过程中，灰色链霉菌将葡萄糖等碳源转化为链霉素，同时产生一定的热量和二氧化碳。
发酵过程中，温度、pH值、通气量等参数对发酵效果有显著影响。
三、实验材料1. 菌种：灰色链霉菌2. 培养基：黄豆饼粉培养基、葡萄糖、硫酸铵、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠等3. 仪器：锥形瓶、移液管、pH计、生物传感仪、分析天平、发酵罐等四、实验步骤1. 菌种活化：将灰色链霉菌接种于黄豆饼粉培养基中，37℃恒温培养24小时，活化菌种。
2. 培养基配制：按照实验设计，将黄豆饼粉、葡萄糖、硫酸铵、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠等原料称量，加入适量水，搅拌均匀，制成发酵培养基。
3. 发酵：将活化后的菌种接种于发酵培养基中，置于发酵罐中，控制温度、pH值、通气量等参数，进行发酵实验。
4. 发酵过程监测：定时取样，测定发酵液中的链霉素浓度、pH值、残糖等指标，分析发酵过程的变化。
5. 发酵终止：当发酵液中的链霉素浓度达到预定目标时，终止发酵，收集发酵液。
6. 发酵产物提取：采用适宜的提取方法，从发酵液中提取链霉素。
五、实验结果与分析1. 发酵过程中关键参数的调控：（1）温度：发酵过程中，链霉素产量随温度升高而增加，但过高温度会导致菌体死亡，降低发酵效果。
实验结果表明，发酵温度以28-30℃为宜。
（2）pH值：发酵过程中，pH值对链霉素产量有显著影响。
实验结果表明，pH值以6.5-7.0为宜。
（3）通气量：发酵过程中，通气量对链霉素产量有显著影响。
实验结果表明，通气量以0.5-1.0L/h为宜。
2. 发酵培养基配方优化：通过正交实验，优化发酵培养基配方，结果表明，最佳培养基配方为：黄豆饼粉2.0%、葡萄糖2.0%、硫酸铵1.0%、磷酸二氢钠0.5%、磷酸氢二钠0.5%。
发酵法制备链霉素最后定稿
皖西学院生物与制药工程学院（制药设备与工程设计）课程设计班级姓名学号指导教师二○年月日皖西学院生物与制药工程学院制药设备与工程设计课程设计任务书课程设计说明书目录第一章设计资料（宋体，小三号）一、产品设计简介（宋体，四号）第3页二、设计参数和质量标准第4页第二章工艺设计与说明一、工艺流程图第5页二、工艺说明第5页第三章物料衡算与设备选型一、物料衡算第7页二、主要设备选型第9页第四章设计总结第11页附录：1.设备一览表第12页2.参考文献第13页第一章设计资料一．产品设计简介1. 筹建概况发酵厂厂区周围大气中的含尘量应在一定范围以下。
发酵工厂建在一级或二级区域中，周围没有散发大量有害气体的化工厂和产生大量灰尘的炼钢厂、炼焦厂、热电厂等。
并且与铁路及公路主要干线保持适当距离。
发酵工厂是耗能大户，并要求是二类负荷用电户。
该厂选址时注意到厂区用电能得到充分保证，并有充足水源。
六安用水主要来自于淠河，可将厂建于淠河中上游处，便于生产用水的供应。
我国规定在地震6度烈度或以下时在建设时不设防，六安属于此类地区，所以不考虑抗震设防。
2.产品方案与建设规模产品名称：链霉素生产规模：年产50吨产品主要物性：链霉素为白色或类白色粉末，无臭或微臭。
易溶于水，微溶于，不溶于、和。
抗菌范围比较广。
对革兰阴性细菌、结核杆菌和某些革兰阳性细菌都有抑制作用。
主要用于结核杆菌感染，也可用于布氏杆菌病、鼠疫等。
用于的，除外，还有、等。
本品能被植物植株吸收，对革兰氏阴性菌和阳性菌杀伤力强，预防效果明显，低温时持效期一般为7天左右，晴天3～4天。
本品适用于防治蔬菜软腐病，柑桔溃疡病，烟草野火病，黄瓜霜霉病、角斑病，辣椒炭疽病，番茄疮痂病，桃叶细菌性穿孔病，水稻拜叶枯病及其他植物细菌性病害。
使用方法：1、可喷雾（每袋加水50～100kg）、灌根或浸种；2、用于预防，每袋加水50kg（相当于200r），根据病害程度每亩用2～3袋；施药时间最好在上午10点前、下午3点后，喷药8小时内遇雨应补喷。
发酵工程制药实验-链霉菌发酵方案
实验2灰色链霉菌的活化左手拿试管菌种，右手拿接种环，先将金属环烧灼灭菌，再将接种环在空白培养左手将试管菌种放下，拿起斜面培养基。
在火焰旁用右手小指和手掌边缘拔下棉迅速将接种环伸入空白斜面， 在斜面培养基上轻轻划线，将菌体接种于其上。
划 线时由底部向上划一直线， 一直划到斜面的顶部。
注意勿将培养基划破， 不要使菌体沾污管壁。
(3)灼烧试管口，在火焰旁将棉塞塞上。
接种完毕，接种环上的余菌必须灼烧灭菌后才能放下。
(4)斜面置于28C 恒温箱中，培养 5〜6d 观察结果。
、实验目的学习制备高氏一号斜面培养基的方法以及斜面接种技术。
二、实验原理高氏一号斜面培养基是一种合成培养基，用于培养放线菌。
三、实验试剂与仪器1.菌种：灰色链霉菌;2.培养基：可溶性淀粉20g ,硝酸钾1 g ,氯化钠0.5 g ,磷酸氢二钾0.5 g ,硫酸镁0.5 g , 硫酸亚铁0.01g ,琼脂20 g ,水1000毫升，PH7.2 — 7.4 (配制时注意，可溶性淀粉要先用冷 水调匀后再加入到以上培养基中) 3.器材：天平、500mL 刻度量杯、小刀、牛角匙、玻棒、纱布、 18mL X 180mL 试管、 棉花、电炉、烧杯、记号笔、酒精灯、接种环等。
四、实验步骤 1.高氏一号培养基的制备 (1)按配方称量药品，加热搅拌至琼脂完全熔化，补水至 lOOOmL 。
趁热分装于 18mLX180mL 试管，斜面以 8mL 为宜。
(3)分装完毕后，塞好棉塞并将试管捆扎好。
高压蒸汽灭菌: 121 C 灭菌20min ，灭菌 后趁热摆斜面。
2.斜面接种 接种是将纯种微生物， 在无菌操作条件下，移植到已灭菌并适宜该菌生长繁殖所需要的 培养基中。
为了获得微生物的纯种培养，要求接种过程中必须严格进行无菌操作。
一般是在 无菌室内, 超净工作台或实验台酒精灯火焰旁进行。
基处冷却, 挑取菌落，在火焰旁稍等片刻。
塞并夹紧,实验3灰色链霉菌的摇瓶种子制备一、实验目的学习制备摇瓶种子培养基的方法以及种子扩大培养技术。
《生物制药技术》实验指导-实验一
《生物制药技术》实验指导-实验一第一篇：《生物制药技术》实验指导-实验一《生物制药技术》实验指导实验一金霉素链霉菌培养基的制备（验证型）实验目的：1、学会培养基的配制2、掌握灭菌方法。
实验原理：金霉素链霉菌（Streptomyces aureofaciens）亦称“金色链霉菌”，放线菌门(Actinobacteria)，放线菌纲(Actinobacteria)，放线菌目(Actinomycetales)，链霉菌科(Streptomycetaceae)，链霉菌属(Streptomyces)。
在固体培养基上产生金色色素，故名。
其菌落为草帽型, 菌落直径一般为3～5毫米, 表面较平坦, 中间有隆起。
菌落开始为白色，长孢子后变青色。
在显微镜下可以看到短杆状的菌丝。
抗菌素工业上用以生产金霉素。
放线菌是一类介于细菌与真菌之间的单细胞微生物。
放线菌在土壤中分布最多，大多数生活在含水量较低、有机质丰富和微碱性的土壤中。
多数情况下，泥土中散发出的“泥腥味”就是由放线菌中链霉菌产生的土腥素造成的。
放线菌大都好氧，属于化能异养，菌丝纤细，分枝，常从一个中心向周围辐射生长。
因其生长具辐射状，故名放线菌。
放线菌能像真菌那样形成分枝菌丝，并在菌丝末端产生外生的分生孢子，有些种类甚至形成孢子囊，因而曾被误认是真菌。
但其菌落较小而致密，不易挑取。
不少菌种在医药、农业和工业上广泛应用，可产生抗菌素，现已发现和分离出的由放线菌产生的抗生素多达4 000多种，其中，有50多种抗生素已经广泛地得到应用，如链霉素、红霉素、土霉素、四环素、金霉素、卡那霉素、氯霉素等用于临床治疗人的多种疾病；有些可生产蛋白酶、葡萄糖异构酶；有的用于农业生产，如灭瘟素、井冈霉素、庆丰霉素等。
四环素类抗生素是由链霉菌生产或经半合成制取的一类广谱抗生素。
抗菌谱极广，包括革兰氏阳性和阴性菌、立克次体、衣原体、支原体和螺旋体。
品种主要包括金霉素、四环素和土霉素。
四环素早在1948年即开始用于临床，至今已有50余年历史。
链霉素的生产工艺
ห้องสมุดไป่ตู้
实验室条件，模拟链霉素的工业生产，首先对高产链霉菌进行复壮和筛选然后进行链霉素发酵试验，最后进行提取分离。在链霉素的发酵过程中，我们先通过斜面孢子培养，再通过摇瓶进行种子培养，同时利用正交试验确定出链霉素影响因子的作用为：玉米浆>葡萄糖>黄豆饼粉>(NH4）2SO4。从而计算出链霉素发酵生产的培养基除基础培养基外还应加入：葡萄糖4%，黄豆饼粉0.8%，玉米浆1.5%，（NH4）2SO4 0.5%。按照确定的培养基，放入7升发酵罐中进行放大培养五天，每隔24小时测量包括PH值，DO值，还原糖浓度，链霉素效价，生物量等参数。还原糖浓度、链霉素效价和生物量的测量分别采用的是DNS法，紫外分光光度法（比色法）和干重法。参数分析后得到解决以下结论：（1） 随着链霉素发酵培养中糖的消耗，链霉素的效价也是降低的。说明一次性投料，糖源供应不够。（2） PH值在5.2时，链霉素效价达到最高，将近4500U/ml。由此确定链霉素发酵培养的最适PH值最好控制在这一值上。（3） 链霉菌是好氧菌，菌体的生产及发酵产物的积累都要消耗氧。因此发酵过程当中需保证必须的供氧量。（4） 生物量与链霉素产物的量是此消彼长的关系。根据参数的变化，我们以单位体积功率相等的原则改变搅拌转速及空气流量来进行发酵容积从7升到50升发酵罐的扩大设计，结果放大后的转速由300r/min变为228r/min。试验中，我们用阳离子交换法和膜分离两种方法对链霉素发酵液的分离提取进行对比。结果发现用膜分离法进行提取后产物的效价以及产品的纯度远远高于用阳离子交换法的
液体发酵法生产链霉素
实验名称：液体发酵法生产链霉素姓名：学号：系别：实验日期：同组同学名单：摘要】本实验包含了链霉素液体的发酵以及链霉素的检测、鉴定两个部分。
通过实验结果表明，链霉素发酵液的抑菌效果大于链霉素样品。
【实验目的】1.学习链霉素液体发酵方法2.学习链霉素的检测和鉴定方法【实验材料】菌种：E. coli，放线菌5406培养基：豌豆培养基、高氏1号培养基、牛肉膏蛋白胨固体培养基其他材料：水饱和正丁醇、层析缸、滤纸、毛细管、培养皿【实验方法及步骤】1、斜面孢子的制备用接种环挑取冰箱中保藏的菌种接种于豌豆培养基斜面培养基上，于27℃恒温培养基中培养6—7d,即可得到斜面孢子。
2、母瓶培养液的制备用接种环挑取斜面培养表面上的孢子接种于灭菌的含有50ml豌豆培养基的三角瓶中，于27℃摇瓶200r/min培养72h即成母瓶培养液。
3、种子培养基的制备无菌操作取2ml母瓶培养液接种于含有100ml豌豆培养基（或者高氏1号培养基）的三角瓶中，于27℃恒温摇床200r/min培养3—4d。
4、发酵培养取4ml种子培养液接种于含有200ml豌豆培养基（高氏1号培养基）的500ml 大三角瓶中，于28℃恒温摇床200r/min培养12—15d进行链霉素发酵。
5、发酵液预处理发酵结束后，将发酵液在低温条件下 12000r/min离心，上清即为含链霉素的样品。
6、发酵液抑菌实验0.2ml大肠杆菌菌液，待其表面干燥后，均匀贴上三个小滤纸片，分别在滤纸片上加等量（5μl）的发酵液、链霉素样品、水，于37℃恒温培养24h后观察结果。
7、链霉素的纸层析鉴定1)点样：在距滤纸底端1cm处一道横线，用毛细管将发酵液和标准链霉素溶液（10mg/ml）点在滤纸的横线上，每个样品之间距离1cm。
2)层析：将点好样的滤纸竖立在含有展层剂系统（水饱和的正丁醇）的层析缸中，室温下扩展10cm后取出，挥发除净溶剂。
3)显影（生物显影法）：首先将滤纸片在紫外下灭菌20min，铺一薄层牛肉膏蛋白胨固体平板，待凝固后，将灭菌的滤纸正面朝上铺在平板上，再倒一层牛肉膏蛋白胨固体，凝固后均匀涂布0.2ml大肠杆菌菌液，37℃培养20h,根据平板上样品抑菌区的位置判断抗生素的类型。
链霉素生产工艺设计
发酵工厂设计一一链霉素生产工艺设计（重点是发酵车间）一、本课程设计的性质、任务与目的本课程是生物工程专业的一门实用性和技术性很强的专业课程。
学习本课程的目的是使学生在学完生物工程专业的有关课程后，尤其是在学完《发酵工艺学》、《生物工程设备》和《发酵工厂工艺设计概论》这三门课程后，综合运用3年所学的全部知识，进行工厂的初步设计。
通过专业课程设计使学生掌握应具备的基本设计技能。
待学生走上工作岗位后既能担负起工厂技术改造的任务，又能进行车间或全厂的工艺设计。
本课程任务是：1.撰写简要设计说明书，内容包括前言、设计任务书、厂址选择、物料衡算、设备衡算及选型等；2.绘制工厂总平面布置图一张、产品工艺方案流程图一张、发酵车间发酵罐的设计图（包括俯视图和剖面图）一张。
二、基本要求：通过课程设计，应训练学生提高以下几方面的能力：1、搜集实际工业生产工艺数据，熟悉技术文献资料。
2、合理设计工艺路线，准确进行工艺过程计算和设备设计选型计算。
3、以精简的文字、清晰的图表来表达个人设计思想、设计结果。
4、树立科学、经济的设计思想，兼顾安全、劳保、环保等要求。
三、设计任务书基础数据：生产规模：4、5、6、7、9、U千吨/年（6组）产品规格：成品效价为800单位∕mg生产天数：300天/年种子培养基配比：牛肉膏6%,葡萄糖4%,KH2PO4I%,MgSO41%,接种量：8%（1,3,5,7组）或10%（2,4,6组）生产培养基配比：葡萄糖4%,黄豆饼粉0.8%,玉米浆1.5%,(NH4)2SO40.5%,豆油0.2%,KH2PO4O.O1%,CaCO30.04%倒罐率：1% 发酵装料系数：70%（1,3,5,7组）；75%（2,4,6组）发酵液收率：95%提炼总收率：70%平均发酵水平：25000单位/m1；发酵周期：8天；每天放罐数自己定。
设计内容：1.根据以上设计任务，查阅有关资料、文献，搜集必要的技术资料，工艺参数与数据，进行生产方法的选择，工艺流程与工艺条件的确定与论证。
链霉素发酵实验分析及总结
链霉素发酵实验分析及总结一、实验目的通过链霉素发酵获得链霉素，并测定相关参数；了解发酵的各个环节，综合运用本科阶段所学习的技能及知识。
二、实验材料及步骤略三、实验结果1、标准曲线的绘制管号1.002mg/ml葡萄糖浓度（ml）蒸馏水（ml）DNS（ml）葡萄糖浓度（mg/ml）OD值0 0.0 1.0 1.0 0.000 0.0001 0.1 0.9 1.0 0.100 0.0912 0.2 0.8 1.0 0.200 0.2103 0.3 0.7 1.0 0.301 0.3444 0.4 0.6 1.0 0.401 0.4395 0.5 0.5 1.0 0.501 0.5866 0.6 0.4 1.0 0.601 0.687所得的葡萄糖标准曲线回归方程为y=1.1985-0.0275，R2=0.9979.2、链霉素发酵密度、pH、氨态氮变化从表中我们可以知道：pH变化先降后生，变化曲线较为正常；密度的变化处于平稳状态；而氨态氮含量缓慢上升。
3、链霉素发酵还原糖、总糖、菌体湿重变化从图中可知：还原糖、总糖含量一直在减小，菌体湿重总体上升。
四、实验分析及感想本次发酵实验做的较为失败，没有发酵出链霉素，效价无法检测。
可能原因有以下几点：第一，实验过程中发生过空压机的“罢工”，具体多少时间也不知道导致罐内缺氧；第二，链霉菌虽然生长，但可能是因为缺乏表达活性，无法表达链霉素；第三，通过镜鉴前期菌体量在逐步增加，后4-8天菌体量基本不变，到最后菌体量有所衰减，这样的现象可能是环境导致。
实验虽然没有成功，但实验过程中我收获良多：我学会了用dns法，见习了发酵罐的用法和接种的火焰圈法。
还有发酵罐的使用注意事项，对分光光度计有了更深的认识和了解，我相信这对我以后会有很大的帮助。
还有和同学共同完成实验的经验。
链霉菌A048产几丁质酶最佳发酵工艺研究
链霉菌A048产几丁质酶最佳发酵工艺研究
链霉菌A048产几丁质酶最佳发酵工艺研究
将链霉菌A048在完全培养基中培养至对数生长末期,离心洗涤收集菌丝体,然后接种入发酵产酶培养基中,进行二步发酵工艺生产几丁质酶,几丁质酶活力比一步发酵工艺提高1.1倍,发酵周期共54 h,比一步发酵工艺缩短66h;把菌丝体与几丁质粉共固定化,接入发酵产酶培养基中培养36 h,几丁质酶活力比一步发酵工艺提高1.8倍,发酵周期缩短54 h;在二步发酵工艺中另添加0.4%纤维素,几丁质酶活力可提高4倍,比一步发酵工艺提高10倍,酶活力达18.52 U/mL.采用几丁质和纤维素双因子诱导二步发酵工艺可能是链霉菌A048生产几丁质酶的最佳工艺.
作者：邱立友王明道戚元成袁培林贾新成 QIU Li-You WANG Ming-Dao QI Yuan-Chen YUAN Pei-Lin JIA Xin-Cheng 作者单位：河南农业大学生命科学学院,郑州,450002 刊名：微生物学通报 ISTIC PKU英文刊名：MICROBIOLOGY 年，卷(期)：2006 33(2) 分类号：Q936 关键词：几丁质酶链霉菌发酵工艺。
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将空白安培管洗净烘干，塞好棉花，置于消毒锅内
121℃，60分钟，间隙灭菌三次，待用。 取符合质量要求的孢子斜面一支，加入无菌脱脂牛奶5～
10ml，用2#棒轻轻将孢子刮下，用无菌吸管吸孢子牛奶悬浊液 置灭菌珠子瓶，振摇10分钟,然后用1ml 无菌吸管将珠子瓶内的 孢子牛奶悬浊液加入无菌安培管中，0.3ml/支，做好标记存置 于液氮中保存，存放有效期5年。 4.1.2 种子组洁净工作台洁净等级100级，每三个月对尘埃粒子
（≥0.5u的尘埃≤3.5粒/1L空气）、风速（≥0.35m/s）、无菌 （定点开启双碟30分钟≤1个/碟）进行测定。平时每次操作 定点放置定点开启双碟30分钟，控制杂菌菌落≤1个/碟。每 天用前紫外光消毒一小时，每三个月调换消毒剂（1/600洁 尔灭、75%酒精）。 4.1.3 孢子斜面： 取生产用之孢子沙土管或孢子冷冻管在无菌室内，用操作棒勺取 适量孢子接种于斜面培养基上，尽量将孢子涂开使长单个集落， 然后于27±1℃恒温室内培养6—7天，该生长成之孢子斜面称为原 斜面，仅作孢子传代使用，不能制备母瓶，液氮冷冻孢子接出原 斜面。根据质量情况可酌量考虑制作母瓶，有效使用期在2—4℃ 冷藏中不超过10天。斜面外观除了个别不正常集落以外，应大部 份为白色，丰满梅花型，馒头型、圆型之集落，将原斜面孢子， 挑选2—3只正常集落点种第一代，用第一代传代斜面同样点种第 二代传代斜面，第一第二代孢子斜面，培养条件均为27±l℃恒温 室内培养6～7天，第一、第二代斜面 有效使用期为14天，均可制作母瓶，孢子斜面传到第二代为止， 不再传第三代，挖块制作过母瓶之剩余孢子斜面，应保留在冷藏 库中一个月，以备检用。 斜面培养基配制法：
链霉素发酵工艺验证方案
1. 目的： 确认链霉素发酵系统工艺流程，确认种子工艺、小小罐工艺、小 罐工艺、中罐工艺、大罐发酵工艺，验证该发酵系统工艺的稳定 性和可靠性及制备 的发酵液能否达到中间体规格要求。 2. 范围： 此方案包括一个50吨大罐链霉素发酵液的生产过程。 2.1 验证地点： 403车间发酵工段： 2.2 验证对象： 2.2.1 原斜面 2.2.2 代1、代2斜面 2.2.3 母瓶 2.2.4 子瓶 2.2.5 小小罐 2.2.6 小罐 2.2.7 中罐 2.2.8 大罐 2.3 验证步骤： 确定验证方案，确定验证计划，内容、步骤，以便准确验证链霉 素发酵系统。 3. 验证措施概要： 3.1 生产记录： 原斜面：冷藏期≤10天
原材料 葡萄糖 黄豆饼粉 碳酸钙 硫酸铵
配比% 3.5～5.5 3.0～4.5 0.5～0.8 0.5～0.8
氯化钠 磷酸二氢钾 消后质量规格：
0.25～0.5 0.04～0.07
C (g/ml) N (mg/100ml) P (ug/100ml)
3.8～4.8 130～155 130～155
4.1.4 子瓶： 取符合种子质量标准之母瓶，在无菌操作条件下，用吸管接入已 准备好的子瓶培养基中，每瓶接种量约3ml，瓶数按需而定（母 瓶接子瓶前做无菌试验斜面二支，分别培养于27℃，37℃恒温 室，母瓶接子瓶后，吸管做无菌试验斜面一支，在37℃恒温室培 养），接种后子瓶送 27±l℃恒温室培养30—44小时，菌丝阶段在II～III初，长好后， 留五瓶继续培养，作质量分析，其中三瓶在120及144小时分别取 样测定效价，一瓶测粘度及氨氮，一瓶接无菌斜面二支作无菌试 验（分别培养于27℃，37℃恒温室）及观察菌丝形态，（新菌株 要加测C及PH）其他瓶冷藏于2～4℃冰库中备用有效冷藏期为7 天，如在保存期间发现有化稀现象或有染菌嫌疑，即停止使用， 改用其他批号种子，放摇瓶种子应同时准备有2～3批瓶存备用。 制得的子瓶应菌丝稠粘，目检无菌丝团颗粒，米黄色，无异味。 不化稀（比母瓶厚）。效价：120小时≥7000u／ ml，144小时 ≥7500u／ ml。 子瓶原材料及配比如下：
外观无菌 外观集落:白色丰满、正常 代1或代2斜面：冷藏期≤14天 外观无菌 外观集落：白色丰满、正常 母瓶：无菌斜面及外观无菌 菌丝粘稠、色泽米黄、无颗粒状菌丝 效价68小时≥1700u/ml 效价96小时≥3500u/ml
效价120小时≥6700u/ml 冷藏期≤5天 菌龄50~64小时 菌丝II—III 子瓶：无菌斜面及外观无菌 菌丝粘稠、色泽米黄、无颗粒状菌丝 效价120小时≥7000u/ml 效价144小时≥7500u/ml 冷藏期≤7天 菌龄30~44小时 菌丝II—III 小小罐：菌丝II—III 镜检无菌
挖取清洁海滩细沙（不能污染各种有机物），用自来水漂 洗清洁，洗至漂出来的水澄清不浑浊为止，烘干、100目筛子 过筛，用磁铁充分吸尽砂内铁屑备用，挖取郊区地面二尺深处 的黄土（不能污染各种有机物），用自来水充分漂洗消毒，洗 至漂出来的水澄清为止，烘干，120目筛子过筛,用磁铁充分吸 尽土内铁屑备用。以上处理的砂和土，按土一份，砂二份比例 混合，分装于玻璃试管（12×100mm），每支装1g，用纱布棉 塞塞紧置于小铜线筐中，放消毒锅消毒，间歇灭菌三次，每次 压力0.12MPa，温度122℃，时间1小时，消毒后置电烘箱烘 干，110～120℃、4－5小时，外表明批号、日期备用，使用前 为确保无菌起见，应按以上要求再消毒烘干一次。
放罐效价≥800u/ml，残C≤3.5g/100ml，残 N≤140mg/100ml，PH≤7.5 小罐：菌丝II—III 镜检无菌 放罐效价≥1200u/ml，残C≤3.5g/100ml，残 N≤140mg/100ml， PH≤7.5 中罐：菌丝II—III 镜检无菌 放罐效价≥1800u/ml，残C≤3.5g/100ml，残 N≤140mg/100ml， PH≤7.5 大罐：放罐残糖≤2.0克/100毫升 放罐残氮≤120毫克/100毫升 放罐透光度≥40% 放罐效价≥14000u/ml 3.2 原材料： 生产过程中所用的各种原材料及其规格（见原材料一览表） 3.3 设备： 生产链霉素所及设备见设备一览表。 3.4 以上所及设备的每一部分，必须在本次验证前确保经过适当 鉴定（IQ/OQ），并且任何相关的测试装置经过校正。 3.5 人员培训，作为验证研究的一部分，涉及生产链霉素发酵的
每位职工均经GMP及有关岗位SOP培训。 4. 生产程序和流程表： 4.1 生产过程的描述： 4.1.1 我厂用于生物合成链霉素的生产菌种为灰色链霉菌，为了保
持菌种的生命活力和稳定性，将孢子保存于干燥的沙土内冷 藏在2~4℃冰库内，或者将孢子制成牛奶悬浊液，密闭冷藏 于～196℃液氮中。
每年对生产菌株进行两次自然分离，控制菌落变异率 ≤5%，并进行菌丝八代遗传稳定性考查，考查其母、子代谢及 效价单位的稳定性。
名称
配比 %
葡萄糖（注射 用）
0.8～1.2
蛋白胨
0.3～0.6
氯化钠
0.4～0.6
豌豆浸出液
12～16
琼脂（海燕牌） pH
2.0～2.8 7.0～7.4
消后规格: C (g/100ml) N (mg/100ml) P (ug/ml) pH
0.9-1.2 32-38 60-90 6.8-7.5
豌豆浸出液制备：
用。同时抽样送化验，检验质量，在使用该批豌豆浸出液时，必
须再送一次样品，测定氨氮含量与第一次相接近时可按后一次样
含量计算使用，如第二次含量与第一次不符，须再抽样复试，以
最后一次化验数据为准进行计算使用。
豌豆浸出液质量：
项目 外观 氨氮（NH2-N） 磷(PO4) 无菌状况
规格 澄清液 170～200mg/100ml 600ug/100ml左右 无杂菌
PH值维持在 4.2～4.5，加 0.5%氯仿摇匀、盖紧放 37±1 ℃恒温室
6天，粗滤除去豌豆，滤液分盛于开口的搪瓷杯中，置沸水浴
中，煮沸20分钟（去除氯仿）冷却，用滤纸过滤，去除沉淀的蛋
白质、分装于
750ml摇瓶中，每瓶装量约200ml左右，以
0.09Mpa、118～120℃的条件消毒 20分钟，冷却后放入冰箱中备
原材料 葡萄糖 黄豆饼粉 碳酸钙 硫酸铵 氯化钠
பைடு நூலகம்
配比% 3.5～5.5 2.3～3.5 0.2～0.7 0.5～0.7 0～0.2
磷酸二氢钾 豆油 玉米浆
消后质量规格：
0.045～0.07 1L
0～0.2
C (g/ml) N (mg/100ml) P (ug/100ml)
6.0～4.8 160～180 155～180
4.1.4 母瓶： 用符合质量标准的同支孢子斜面（冷藏期不超过14天）在无菌室 内用挖块法分别将孢子接种到已准备好之二只摇瓶中，编号为母I 母 II，接种后送至温度 27±l℃恒温摇瓶间内，在230±20r／ mm 摇瓶机上，培养50~64／小时，菌丝阶段 II一III初之母I用牛皮纸 包扎存放于 2～4℃冷库中，母II继续培养作质量检查，做无菌试验二支，分 别进行27℃及37℃培养。68小时取样分别测定单位粘度，氨氮消 耗、PH、 u／ml，以后每24小时取一次样测定上述项目，共计三次（68小 时，96小时，120小时三次）如母瓶质量符合要求，则母瓶可以 进罐使用，母瓶有效冷藏期为5天。制得的母瓶应菌丝稠粘，目 检无菌丝团颗 粒、米黄色、无异味不化稀无菌正常。效价：120小时≥6700u／ ml。接子瓶的母瓶制备法，用无菌操作挖一块斜面，接入一只母 瓶，在摇瓶机上培养50~64小时，取下，挑选外观正常菌丝粘 稠，色泽米黄，无颗粒状菌丝的母瓶，作为接子瓶用，接种子瓶 的母瓶不冷藏。遇特殊情况，一般冷藏不超过5天。 母瓶原材料及配比如下：
取符合质量要求的孢子斜面一支，在无菌操作下,加入 0.85%氯化钠无菌生理盐水1ml左右，用1#棒将表面孢子轻轻刮 下（防止用力过重划破琼脂）摇匀，用1ml割头无菌吸管吸 出，准确仔细地在每支无菌空白砂土管内加0.1ml孢子液（加 入时应注意将吸管伸至接近沙土处，但又不能接触沙土，也不 能使吸管口接触沙土管口及内壁）。塞紧棉塞，将沙土敲松摊 开，放在真空干燥器内（干燥器内放置氯化钙干燥剂）保持真 空度0.10MPa，抽4支时维持抽干4小时，抽5支或以上时，抽干 时间酌情增加，取出抽干的沙土孢子，敲松放在盛有无水氯化 钙的广口瓶中盖紧密封，放2～4℃冰库中保存备用。使用时采 用干接法接种。孢子沙土管有效使用期为2年。