实验四细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别教学教材

位二甲基氨基苯甲醛作用形成玫瑰吲哚而成红色。 方法：接种针接种，培养12-24 h后，加入试剂显色
5、甲基红（MR）试验
培养基：葡萄糖蛋白胨水
原理：甲基红试验： 分解葡萄糖产生丙酮酸， 进一步分解为甲酸、乙酸、乳酸等使pH下降， 含甲基红指示剂的培养基变红
6、VP试验：葡萄糖蛋白胨水
原理：某些菌发酵葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸经 多脱羧、氧化等反应生成二乙酰，其与蛋白胨 中精氨酸胍基作用产生粉红色化合物
2.药敏试验：圆纸片扩散法 菌种： 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌 培养基：营养琼脂平板 方法：
• 3.消毒剂抑菌和杀菌试验 • 菌种：大肠杆菌、枯草杆菌 • 方法：与药敏试验方法是一样的（纸片扩散法）
• 将以上接好细菌的培养基置37℃培养 箱培养。
• 经18—24h培养观察细菌生长情况。 有一些生化管则需要加试剂后观察其 颜色变化，做好实验结果记录并记录 抑菌圈大小。
剂：0.5%酚红） 方法：先划斜面再穿刺
3、糖分解试验 微量发酵管：葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖 方法：用接种针挑取菌种后接入发酵管内，用报纸包好
口，置培养箱培养。发酵糖产酸：指示剂溴甲酚蓝由 紫色 黄色
4、吲哚（靛基质）试验 培养基：蛋白胨水微量管 原理：细菌分解蛋白质中的色氨酸产生吲哚，吲哚与对
原理：细菌分解尿素产生2分子NH4，使pH升高， 指示剂变红。
9、硫化氢试验 培养基：营养琼脂中含FeSO4的微量反应管 原理：凡细菌能分解含硫氨基酸，产生H2S者，
其所产生的H2S会使培养基中的醋酸铅或 FeCl3形成黑色的硫化铅或硫化铁。 10、运动力试验 培养基：半固体琼脂微量反应管
方法：穿刺接种
（三）理化因素及生物因素对微生物的影响
• 1.紫外线与杀菌试验
• 菌种： 大肠杆菌、枯草杆菌
• 方法：取营养琼脂平板2个，一个涂大肠杆菌，另一 个涂枯草杆菌。在其涂有细菌的表面贴上以剪出不 同图案的硬纸片，然后在紫外灯下距离30厘米照射 20分钟，照射完毕将硬纸片取走盖回原来平皿盖， 于37℃培养24小时观察结果。
7、枸橼酸盐（柠檬酸盐）利用试验
培养基：Simmon氏枸橼酸钠微量发酵管
原理：细菌若能以枸橼酸钠为唯一碳源，磷酸铵 为唯一氮源，则可利用枸橼酸钠产生碳酸盐， 与利用铵盐产生的NH3反应，形成NH4OH，使 培养基变碱，pH升高，指示剂溴麝香草芬蓝由 草绿色变为深蓝色。
8、脲酶
培养基：尿素微量发酵管（指示剂：酚红）
实验四
细菌的生理生化试验及肠杆菌科 的鉴别、理化因素及生物因素对
微生物的影响
一、目的要求
• 掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理、 方法、结果判定以及在诊断中的运用
• 熟悉大肠杆菌和沙门菌主要培养特性和常 规微生物学诊断方法
• 通过本实验加深理化因素及生物因素对微 生物的影响的概念
二、实验材料
• 菌种：大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球 菌、枯草杆菌、巴氏杆菌
肠杆菌科细菌的鉴别
菌种
试验 结果
三糖铁琼脂斜面
斜面/底层 产气；H2S
糖发酵
葡 萄 糖
乳 糖
蔗 糖
甘 露 醇
靛 MR VP 基
质
枸 橼 酸 盐
Байду номын сангаас
脲 酶
麦 康 凯
运 H2S 动
力
大肠杆菌
沙门菌
K/A +(-) ; -
+ -+ A=产酸（黄） K=产碱（红）
1、细菌对空气（氧气）的需要 菌种：大肠杆菌、枯草杆菌 方法：用吸管将两种菌各加入两支己溶化的葡萄糖
深层琼脂管中， 培养基：葡萄糖深层琼脂（己溶化）
2、细菌对营养的要求 菌种：大肠杆菌、巴氏杆菌 培养基：斜面（水琼脂、普通琼脂） 方法：划线的方法
4、淀粉水解试验 菌种：大肠杆菌、枯草杆菌 培养基：普通营养琼脂平板 方法：一块平板上，一边划大肠杆菌，一边划枯草杆
菌，第二天长出菌后，在菌落上滴加碘液。
5、触酶（过氧化氢酶）试验 菌种：大肠杆菌、枯草杆菌 培养基：普通营养琼脂平板 方法：一块平板上，一边划大肠杆菌，一边划枯草杆
菌，第二天长出菌后，在菌落上滴加H2O2
（二）肠杆菌科的鉴别（大肠杆菌&沙门菌）
肠杆菌科的生化试验
1、麦康凯琼脂平板 （乳糖、胆盐、指示剂：1%中性红） 方法：划线，分解乳糖 菌落变红 2、三糖铁琼脂斜面 （葡萄糖、蔗糖、乳糖、硫酸亚铁铵、指示
• 培养基：葡萄糖高层琼脂、普通琼脂斜面、 水琼脂斜面、氧化-发酵培养基（小生化管）、 普通平板、麦康凯平板、淀粉平板、三糖铁斜 面、各类生化反应管等
• 器械：砂轮、试管架、接种环、接种针、灭 菌吸管、灭菌刻度移液管、灭菌棉签、胶头、 灭菌液体石蜡、酒精灯、废报纸等
三、实验内容
（一）细菌的生理生化试验