流式细胞仪操作规程-SOPdoc资料

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流式细胞仪操作规程

流式细胞仪操作规程流式细胞仪是一种用于单个细胞分析的高通量仪器，广泛应用于生物医学研究、药物开发和临床诊断等领域。

为了确保流式细胞仪的正常运行和准确结果的获取，需要制定一套规范的操作规程。

以下是流式细胞仪操作规程的一些基本要点：一、实验前准备：1.确保流式细胞仪处于稳定状态，并将其连接到电源并打开电源。

2.检查仪器的液氮箱和压力容器，确保液氮和气源充足。

3.准备实验所需的标本样品和相应试剂。

4.检查流束对齐和测量准备：校准激光、确定流速、检查流束质量控制。

二、流式细胞仪样品制备：1.使用无菌技术制备样品，并严格遵循相关操作规范。

2.样品的准备应考虑到细胞的数量和稳定性，避免细胞聚集、损伤或死亡。

3.样品的制备应注意避免氧化和污染的发生，以确保结果的准确性。

三、样品装载和分析：1.使用无菌技术将样品加载到流式细胞仪中，并确保样品注射器和管道清洁和无气泡。

2.对于多个样本的分析，应注意正确的样品顺序和识别，以避免混淆。

3.设置合适的仪器参数和测量条件，例如流速、激发和发射光源、滤光片设置和增益调节等。

4.开始样品分析之前，应进行负空白检测和仪器的系统背景校正。

5.开始实验后，密切观察结果窗口，并根据需要进行相应的数据记录和保存。

四、实验后操作：1.实验结束后，关闭流式细胞仪和相关辅助设备，并进行正常关机程序。

2.将仪器和试剂的残留物清洁干净，并按照相关操作规范进行废弃物的处理。

3.维护仪器的常规保养，例如清洁仪器表面、更换滤光片、标定仪器等。

4.及时记录和整理实验数据，并进行必要的数据分析和结果解释。

五、安全注意事项：1.在操作过程中，应遵守相关的生物安全和化学安全规范，例如穿戴好实验室服装、戴手套、戴眼镜等。

2.对于辐射性或有毒性样品的操作，应采取额外的防护措施，例如使用密封容器、穿戴防护服等。

3.在使用激光和其他高能源光源时，注意防护眼睛和暴露部位，避免直接观察激光光源。

总结：流式细胞仪是一种复杂的仪器，需要严格的操作规范来确保实验结果的准确性和数据的可靠性。

流式细胞仪操作规程

FACSCalibur流式细胞仪操作规程一、编号：YQ0606二、标题：FACSCalibur流式细胞仪操作规程三、关键词：流式细胞仪操作规程四、目的：保证流式细胞仪的安全及有效操作五、背景知识：流式细胞术（Flow CytoMeter，FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。

六、原理待测细胞染色后制成单细胞悬液，用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。

流式细胞仪通常以激光作为发光源。

经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。

这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。

光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。

这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过A/D转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。

计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，液可以打印出来，还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。

检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。

单参数数据以直方图的形式表达，其X轴为测量强度，Y轴为细胞数目。

一般来说，流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数，这视其模数转换器的分辨率而定。

对于双参数或多参数数据，既可以单独显示每个参数的直方图，也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。

流式细胞仪操作规程-SOP

流式细胞仪操作规程目录1：淋巴细胞亚群测定及绝对计数2：活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的检测3：HLA-B27测定4：CD55／CD59测定5：干细胞检测和绝对计数6：白血病免疫分型测定7：淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定8：细胞周期分析9：活化血小板检测10：血小板抗体测定11：红细胞抗体测定12：粒细胞抗体测定淋巴细胞亚群测定(流式细胞仪)医院检验科操作规程文件号：200 年月日起实施第1版(共3页)本规程每2年复审一次复审日期：年月日复审人：规程编写者：审批者：批准日期：年月日文件分发部门和／或个人院档案室保管者：检验科主任：检验科实验室：淋巴细胞亚群测定方案（Protocol）1.选参数点击点击4色3色点击（命名，点击save）2.画图结果此图为CD45圈门如果做绝对计数，则填写Flow-Count的浓度选中cell/ul即可活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的测定HLA-B27测定现HLA-B27抗原表达与强直性脊柱炎有高度的相关性，超过90%的强直性脊柱炎患者HLA-B27抗原表达阳性，而正常人群中仅5-10%的认为阳性。

由于强直性脊柱炎症状与许多疾病相类似，临床上难以确诊，因此HLA-B27检测在疾病的诊断中具有重要意义，HLA-B27的检测是该疾病诊断和鉴别诊断中的一个重要指标。

方案（Protocol）1.选参数点击点击键入文件名，点击Save 2.画图结果1.positive (+)X-Mean=2.negative(-)X-Mean= X-Mean=CD55/CD59测定方法流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)原理：双色直接免疫荧光法。

近年的研究表明，红细胞和白细胞膜上CD55和CD59分子的表达量和缺乏表达细胞的数量对PNH诊断和鉴别有重要意义。

血细胞(红细胞和白细胞)通过膜上的抗原分子与荧光素标记的CD55或CD59的多克隆结果: normal : abnormalv1.0 可编辑可修改干细胞检测和绝对计数v1.0 可编辑可修改方案（Protocol）同淋巴细胞亚群检测结果（Result）白血病免疫分型测定T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4检测v1.0 可编辑可修改方案（Protocol）细胞周期分析方案（Protocol）1.选参数选择Cytometer Control点击Parameters后2.画图结果（Result）。

BD FACSCalibur流式细胞术标准操作规程

BD FACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序目的：规范BD FACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序，正确使用设备，保证实验顺利进行、操作人员人身安全和设备安全。

适用范围：本规程适用于BD FACSCalibur流式细胞仪的使用操作。

责任者：操作人员：负责按照本规程操作仪器设备，对仪器进行日常维护，并作使用记录。

保管人员：负责监管仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护、保养。

科室负责人：负责对仪器设备的综合管理。

内容：1. 每日开机程序1.1 在气压阀减压的状态下检查鞘液桶，确认：1.1.1鞘液充满状态，约3L1.1.2盖紧盖子1.1.3安上金属挡板1.1.4管路畅通，无扭曲1.2. 检查废液桶，确认：1.2.1废液桶充满400ml漂白剂1.2.2管路畅通，无扭曲1.3打开流式细胞仪。

1.4打开电脑。

1.5气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。

1.6做Prime。

1.7等待机器预热5~10分钟后可开始试验。

2. 每日关机程序2.1 用3mlFACSClean洗液加入样品管中上样，将样品支撑架置于旁位，以外套管吸入1ml。

2.2 将样品支撑架置于中位，以HI RUN运行10分钟，使内管吸入约1ml。

2.3 将样品管换成蒸馏水重复1-2步。

2.4 放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。

2.5 选择Standby模式10分钟，将激光冷却后可关掉主机。

2.6 退出所有应用软件，关闭电脑。

2.7 将流式细胞仪的压力阀置于减压状态。

3. 每月维护程序3.1 将FACSClean洗液1~2L装入鞘液桶。

3.2 旁路鞘液过滤器（过滤器上的快速接口从SANLINE FILTER端断开，将鞘液白色管路液路取下联到SANLINE FILTER端口），以防伤害。

3.3 将盛有3ml FACSClean洗液的试管置于样品支架上，以HI RUN 30分钟。

3.4 将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤3，以 HI RUN 60分钟。

流式细胞仪操作规程SOP

流式细胞仪操作规程目录１:淋巴细胞亚群测定及绝对计数２:活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T得检测3:HLA-B２7测定4:CD55／CD5９测定5:干细胞检测与绝对计数６:白血病免疫分型测定7:淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFＮ—γ/IL－４测定8:细胞周期分析９:活化血小板检测１０:血小板抗体测定11:红细胞抗体测定１2:粒细胞抗体测定淋巴细胞亚群测定(流式细胞仪)医院检验科操作规程文件号:200 年月日起实施第1版(共3页)本规程每2年复审一次复审日期: 年月日复审人:规程编写者:审批者:批准日期: 年月日文件分发部门与／或个人院档案室保管者:检验科主任:检验科实验室:淋巴细胞亚群测定方案(Protocｏl) １.选参数4色点击点击3色点击(命名,点击save) 2、画图结果此图为ＣD45圈门如果做绝对计数,则填写Flow-Count得浓度选中cｅｌl/ｕl即可方法流式细胞仪(BｅckmaｎCoulteｒ,贝克曼库尔特)原理:双／三色直接免疫荧光法、荧光素标记得各种单克隆抗体加入到全血中,与白细胞膜上相应得抗原结合,经过溶血、洗涤(与固定)等步骤后,在流式细胞仪上进行分析,从而得到相应各亚群得百分数。

活化淋巴细胞表面抗原为ＣD3+/CD25+与CD3＋/ＨLA—ＤR+、CD3+／CD45RＯ+就是记忆型Ｔ细胞、CD3+/CD45RA+就是纯真型T细胞、HLＡ-B２7测定点击点击键入文件名,点击Ｓavｅ2.画图结果１、positｉvｅ(+)X－Ｍean=１７、1 2.nｅgａｔｉve(—)X—Meaｎ=1.２X－Ｍeａｎ=５、8CＤ55/CD５9测定方案(Protｏcol)(同ＨLA—B2７)结果１、RBC: normal2。

ＲＢC: aｂnｏｒｍaｌ３。

WBC干细胞检测与绝对计数方案(Prｏtocol)同淋巴细胞亚群检测结果(Resｕlt)白血病免疫分型测定Ｔ细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL－4检测正常参考值Thｌ(IFN—γ):17、３9±5。

流式细胞仪SOP

一. 流式细胞术概述流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。

它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析, 在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞,分选纯度＞95%。

在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。

国内使用的流式细胞仪主要由美国BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(简称B-D公司)两个厂家生产。

流式细胞仪主要有两型:临床型（又称小型机、台式机）和综合型（又称大型机、分析型）。

BECKMAN-COULTER 公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL,BD公司最新产品为FACS Vantage 和FACS Calibur。

EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型;EPICS ALTRA和FACS Vantage是综合型，除具备检测分析功能外,还具有细胞分选功能,•多用于科学研究。

二.流式细胞仪主要技术指标1．流式细胞仪的分析速度：一般流式细胞仪每秒检测1000～5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。

2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。

3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～0.5μm。

4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，一般流式细胞仪能够达到<2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。

5．流式细胞仪的分选速度：一般流式细胞仪分选速度＞1000个/秒，分选细胞纯度可达99%以上。

流式细胞仪使用规范

流式细胞仪使用规范流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种常用的细胞分析仪器，广泛应用于细胞学、免疫学、生物学、医学等领域。

流式细胞仪可以对细胞进行快速、准确的多参数分析，能够检测和分离不同细胞类型、测定细胞数量、评估细胞活性以及研究细胞表面标记物等。

为了保证流式细胞仪的正常使用，以下是一些流式细胞仪的使用规范和注意事项。

1.准备工作：a.检查仪器：确认仪器的状态，包括是否通电、通气、光源是否正常工作等。

b.清洁样品室：使用无菌纯水或适当的清洁剂擦拭样品室，确保没有杂物或污染物。

c.校准仪器：根据仪器规定进行标定和校准，确保仪器的准确性和稳定性。

2.样品准备：a.细胞处理：合理处理样品，保证单细胞悬浮状态。

可以通过胰酶消化、筛选等方法获取单细胞悬浮液。

b.细胞计数：使用合适的细胞计数仪进行细胞计数，计算出所需的细胞悬浮液浓度。

c.细胞染色：根据实验需求对样品进行适当的荧光染色或抗体标记，以便在流式细胞仪中检测和分析。

3.流式细胞仪操作：a.设置参数：根据实验设计和研究目的，设置合适的仪器参数，包括激光器选择、激发波长、检测波长、门控设置等。

b.样品加载：将样品注入流式细胞仪样品室，避免气泡的产生，并确保样品完整进入样品室。

c.数据采集：开始数据采集前，进行流式细胞仪的标定、峰位校正和峰间校正，以保证数据的准确性和可靠性。

d.数据分析：对采集到的数据进行分析和解读，根据实验要求选取合适的分析策略和软件进行数据处理。

4.清洁和保养：a.实验后清洁：实验结束后，及时清洁仪器，避免样品残留和交叉污染。

b.仪器维护：定期检查仪器的部件和附件，保证其正常工作。

如需要更换部件或常规维护，请按照厂家指南进行操作。

c.长时间停用：如果流式细胞仪长时间不使用，应按照厂家指南进行仪器的合理关闭和长期存储。

5.安全注意事项：a.避免直接接触激光线：在进行样品加载和设置参数时，避免接触激光线以避免损伤眼睛。

b.使用无菌操作：在样品加载和处理过程中，使用无菌操作和材料，避免细菌污染和交叉感染。

流式细胞仪使用规程

流式细胞仪使用程序1.目的规范流式细胞仪的相关使用操作、以及维护操作。

2.适用范围适用于本实验室使用流式细胞仪。

3.职责操作人员应熟练掌握并自觉遵守本标准操作程序。

如需获得更多信息，请参阅该仪器用户手册。

4.支持性文件流式细胞仪使用说明书。

5.操作规程5.1仪器开/关机程序5.1.1开机程序5.1.1.1 检查仪器鞘液桶和废液桶。

5.1.1.2 打开流式细胞仪。

5.1.1.3 气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。

5.1.1.4 打开电脑。

5.1.1.5 等待机器预热5—10分钟后可开始实验。

5.1.2关机程序5.1.2.1 用4ml10%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入2ml。

5.1.2.2 将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml。

5.1.2.3 将样品换成蒸馏水重复1-2步。

5.1.2.4 放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。

5.1.2.5 选择Standby模式10分钟。

5.1.2.6 关闭电脑，再关掉仪器。

5.2仪器校验和分析参数设置程序（FACSComp操作程序）5.2.1CaliBRITE Beads 的准备5.2.1.1 在装有1ml鞘液的FALCON管加一滴充分混匀CaliBRITE Beads，并标上unlabeled；若配有双激光做四色，则须在unlabeled管中再加一滴APC-beads；5.2.1.2 在另一装有3ml鞘液的FALCON管加入unlabeled-、FITC-、PE-、PerCP-、和APC-beads（若做四色）各一滴，混匀，在管壁上标上mixed（PerCP不很稳定，最好在上机前加入）；5.2.1.3 避光放置，准备上机。

5.2.2软件环境的设置5.2.2.1 从苹果菜单进入，选择FACSComp软件；5.2.2.2 在Sign In视窗中填入下列信息：操作者、机构、实验室主任（操作者是必须填入的，计算机将保存这些信息），点击Accept；5.2.2.3 进入Set Up视窗，在Assay Selection中，选择你需要的Assay：Lyse/Wash、Lyse/No Wash或HLA-B27 Calib；在CaliBRITE Beads Lot Ids中，根据每一种beads所对应的编码输入Lot ID；在Automatic Saving Options中，你可以选择自动保存或不保存Summary Report，你可以通过单击Location来更改文件名以及保存的位置；最后在Set Up视窗的右下角点击Run。

流式细胞仪操作规程

流式仪操作规程
1. 首次操作时务必在负责人的指导下进行。

2. 操作前需检查所有瓶中的液体，鞘液桶补满超纯水（2L），废液桶倒空，清洗液和消毒液不是空的。

3. 清洗液和消毒液配置方法：清洗液为1% BD FACS Cleaning solution(原液为10%，即稀释十倍使用)，消毒液为BD detergent solution concentrate。

4. 开机前，确保样品支架上放置的EP管内至少装500uL ddH2O。

5. 仪器启动期间，软件界面上仪器当前状态会显示黄色的灯，该过程中仪器会用鞘液冲洗液流管路，持续大约13分钟，直到显示绿灯表示仪器和软件连接完成。

6. 根据实验设计选择软件选项，进行上样。

7. 上样完毕后，用SIP程序清洗进样针，根据提示先上2ml 1% FACS Clean，再上2ml ddH2O。

8. 保证清洗液和消毒液的量，在进样针上放2ml ddH2O，轻触（不能超过3秒）仪器上电源键，仪器自动运行13min cleaning the fluidics程序后自动关机。

9. 清理桌面，写好仪器使用记录。

10.将房间卫生整顿好，垃圾带出实验室，负责人检查后方可离开。

流式细胞仪操作流程

流式细胞仪操作流程流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种广泛应用于生物医学研究领域的仪器，它能够对单个细胞进行快速、准确的细胞分析和分类。

本文将详细介绍使用流式细胞仪的操作流程。

一、实验准备在进行流式细胞仪实验之前，需要做好以下准备工作：1. 准备样品：收集和准备待分析的细胞样品，确保样品质量符合要求。

处理样品时要注意细胞的保存和处理条件，以避免样品的污染或破坏。

2. 准备反应体系：根据实验的需要，按照标准操作规程制备所需的反应液和缓冲溶液。

3. 检查和校准仪器：在使用流式细胞仪前，需要对仪器进行检查和校准，确保仪器状态良好，获得准确的实验结果。

二、仪器开机和设置1. 打开流式细胞仪电源，并等待仪器启动完成。

2. 进行仪器的初始化设置，包括选择所需的参数和实验模式等。

3. 设置流式细胞仪的激发和检测通道，根据实验需要选择适当的滤光片和荧光探针。

调整激光功率和检测灵敏度，确保后续实验过程中的信号质量。

三、样品加载和检测1. 将样品转移到适当的离心管中，并进行样品标记。

根据实验需要可以使用荧光标记物、抗体等对细胞进行特异标记。

2. 打开流式细胞仪的样品载架，将样品离心管安置在载架上，并将载架插入流式细胞仪的样品槽中。

3. 启动数据采集软件，设置样品参数和实验条件。

选择合适的采集速度和事件数目，确保获得足够的数据。

4. 开始数据采集，点击软件上的“实时运行”按钮，流式细胞仪将开始读取样品中的细胞信息，并将其转化为电子信号。

5. 采集完成后，保存数据并关闭数据采集软件。

四、数据分析1. 导出数据文件：根据实验需要，将采集到的数据文件导出到数据分析软件中进行进一步处理。

2. 进行数据筛选和清洗，去除噪音污染和非特异信号。

3. 根据实验的目的和问题，选择合适的数据分析方法，对细胞数据进行统计学和生物学分析。

4. 生成结果图表：根据数据分析结果，生成合适的图表或图像，用于展示实验结果和研究发现。

5. 结论和讨论：根据数据分析结果，撰写实验结论和讨论，解释实验结果并提出相应的科学推论。

流式细胞仪操作规范

流式细胞仪的操作规范1.CXP Cytometer：仪器操控软件，可与机器连线，收取List Mode Data，也可进行简单的Data分析。

2.CXP Analysis：离线分析软体,可进行较繁复的Data 分析,包含等高线图(Contour Plot)”、密度图(Density Plot)、岛屿图(Surface Plot)、透试图(Tomogram)、叠图(Overlay Plot)的绘制,多档案分析与批次分析。

一、基本开机步骤与软体主画面说明。

1. 依常规模式进入Window20000 系统。

2. 双点桌面上，即可启动机器并进入操作软体。

此时您可见到下面的画面：3.选取您自己的资料夹（请在Password 处输入密码），并按下Next 继续。

接著您能看到下面的画面：4.此时您能在左边的视窗选取您即将使用的Protocol，然后按下Finish 进入软体，或不选取任何Protocol，直接按下Finish 进入软体，您即可见到软体的工作区（workspace），如下图：工作区分成三部份：a.工具列（CXP Toolbars）:b.档案总管(Resource Explorer):利用滑鼠在做切换，让您能够看到您专属资料夹中的Worklists、Panels、Protocols、LMD Data和HST Data等档案。

若要开启档案总管中的资料时，只需利用滑鼠将这些档案直拖曳至软体的桌面上，便可打开各式档案或分析Data。

c. 工作清单编写区（Acquisition Manager）：利用工作清单工具列您可以在此处编写您即将要收集的样本内容，包括设定本次实验的染剂名称参数名、List ModeData存档的模式等等。

二、开关机开机前之准备：补充PBS（约8~9分满）和Clenz solution（约8~9分满），并倒去废液瓶中之液体。

开机：依一般程序开启您的电脑，点选桌面上的图示，即可进入软体。

流式细胞仪操作规程-SOP

WORD格式流式细胞仪操作规程目录1：淋巴细胞亚群测定及绝对计数2：活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的检测3：HLA-B27测定4：CD55／CD59测定5：干细胞检测和绝对计数6：白血病免疫分型测定7：淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定8：细胞周期分析9：活化血小板检测10：血小板抗体测定11：红细胞抗体测定12：粒细胞抗体测定WORD格式淋巴细胞亚群测定(流式细胞仪)医院检验科操作规程文件号：200年月日起实施第1版(共3页)本规程每2年复审一次复审日期：年月日复审人：规程编写者：审批者：批准日期：年月日文件分发部门和／或个人院档案室保管者：检验科主任：检验科实验室：淋巴细胞亚群测定方法流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)原理：双/三色/四色直接免疫荧光法。

荧光素标记的各种单克隆抗体加入到全血中，与白细胞膜上相应的抗原结合，经过溶血、洗涤（和固定）等步骤后，在流式细胞仪上进行分析，从而得到淋巴细胞亚群的百分数，加入Flow-Count即可得出绝对计数。

淋巴细胞表面抗原分布如下：T淋巴细胞：CD3+；B淋巴细胞：CD3-，CDl9+；辅助性T淋巴细胞：CD3+CD4；+抑制性T淋巴细胞：CD3+CD8；+NK细胞：CD3-CDl6+56+等。

根据淋巴细胞膜上CD分子表达的不同，流式细胞仪可以分辨出淋巴细胞及其各种不同的亚群，利用计算机软件计算出淋巴细胞亚群的百分数，加入Flow-Count组会自动得出绝对计数。

标本采集与处理受检者的准备检查对象生活饮食处于日常状态。

采集部位静脉采血抗凝剂EDTA或肝素抗凝血要求1．样本量1ml。

2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻或溶血的标本不能用。

3．样本白细胞计数应在4.0-10.0×109/L之间。

若>10.0×109/L，样本需要稀释，用PBS稀释；若<4.0×109/L，应分离单个核细胞。

流式细胞仪操作流程(单标)

流式细胞仪操作流程(单标)一、开机(务必按照此顺序开机)1、打开下面的小门，推上电源2、打开插线板电源开关3、开电脑4、打开流式细胞仪开关二、软件准备1、打开软件2、点击菜单栏的Cytometer，待流式细胞仪与电脑自动连接后会自动出现startup 和shutdown选项，点击startup，系统提示按确定。

（等待5～6min startup 完成后再继续）2、在出现的Browser栏中依次选择new folder——new experiment——new specimen——new tubes，按照实验组数给new specimen编号，按照每一组实验试管数给new tubes 编号。

3、在右边显示屏中拽出Global sheet，点击Dot Plot绘制散点图，点击Histogram绘制直方图。

以FITC单标抗体为例，首先绘制FSC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图1），然后绘制以FITC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图2），最后绘制以FITC-A为横坐标、count为纵坐标的直方图（图3）。

4、点击菜单栏中的populations，选择create statistics view。

三、上机操作1、将试管放置在流式细胞仪上，在左侧显示屏的Acquisition Dashboard中点击acquire data，此时流式细胞仪开始工作。

2、根据图1中细胞的位置，在Cytometer FACScanto 栏中的parameters标签中调节FSC和SSC的电压大小，使主群细胞在图1上处于居中的位置。

3、点击右侧显示屏的Polygon Gate按钮，在图1中选择要求测量的主群细胞，可见图1中出现P1，并且其中的细胞变成红色。

4、选择图2、图3，分别在左侧显示屏的Inspector-Dot Plot栏中点击P1的复选框，可见图2、3中的图象均变成红色，即要求细胞仪检测选定的细胞P1。

流式细胞仪安全操作及保养规程

流式细胞仪安全操作及保养规程1. 前言流式细胞仪是一种高端的生命分析仪器，广泛应用于医学、化学、生物学等领域，已经成为现代实验室不可或缺的仪器之一。

然而，流式细胞仪的操作较为复杂，使用过程中需要注意许多安全问题，否则会对自身和实验室环境造成潜在的危害。

为了确保流式细胞仪的正常、安全使用，特制定以下操作及保养规程。

2. 流式细胞仪操作规程2.1 准备工作在使用流式细胞仪前，应注意以下准备工作：2.1.1 带上个人防护装备在使用流式细胞仪时，需要带上一定的个人防护装备，如实验手套、口罩、眼镜等，以防范样本物质对自身的伤害。

2.1.2 样品制备精确地制备样品是获得准确、可重复的流式细胞仪数据的关键。

在制备样品时，需要注意以下事项：•样品应洁净，纯度高；•样品应稀释至适合的浓度；•样品需要避免暴露在光线下。

2.1.3 流式细胞仪清洁使用流式细胞仪前，应将设备清洗并按照操作手册正确设置。

注意声音警报器和信号灯的功效。

2.2 实验操作2.2.1 启动流式细胞仪启动流式细胞仪的前提条件是样品审核通过、清洁完毕并符合清洁过程中设定的安全警戒线。

按照以下操作步骤进行启动：1.将流式细胞仪插头插入电源插座；2.打开流式细胞仪前面板上的电源开关；3.检查设备是否能够正常通电；4.检查设备上的液晶屏是否正常显示。

2.2.2 样品操作样品操作是流式细胞仪的核心，需要遵循以下步骤：1.打开样品架门；2.将样品检测管放在样品架上，注意是否正确安装；3.关上样品架门，并设置喷雾器；4.按下样品检测管的开关，将样品进入流式细胞仪；5.启动流式细胞仪，进行检测。

2.2.3 关闭流式细胞仪实验室操作完毕后，需要及时关闭流式细胞仪，避免发生紧急事故。

按照以下步骤进行：1.关闭流式细胞仪喷雾器；2.将样品架门打开，取出检测管；3.关闭前面板的电源开关；4.拔出插头，关闭电源。

2.3 安全注意事项在实验操作中，需要注意以下安全事项：•在操作流式细胞仪前，应认真阅读使用说明书和操作手册。

《流式细胞术操作规程》

《流式细胞术操作规程》一、操作准备1.准备所需材料和试剂：包括流式细胞仪、标记抗体、细胞悬液、PBS缓冲液、显微镜玻片、培养基等。

2.检查仪器：确保流式细胞仪各项功能正常，包括激光、光电倍增管等。

3.样本处理：根据实验需要，选择适当的细胞处理方法，如细胞孵育、酶解消化等，确保获取到高质量的细胞悬液。

二、细胞标记1.标记抗体的选择：根据实验需求，选择适当的标记抗体，包括单抗、荧光染料、生物素等。

2.细胞标记试剂的制备：根据实验方案，将标记抗体按照要求的浓度进行稀释，制备成相应的标记试剂。

3.细胞标记操作：将所需细胞悬液分散在适量的PBS缓冲液中，加入标记试剂，轻轻摇晃混合，静置于室温下孵育一段时间，使标记抗体与细胞表面结合。

三、流式细胞术操作1.调整流式细胞仪参数：根据实验需求，设置细胞悬液的流速、激光功率、波长和光电倍增管放大倍数等参数。

2.流式细胞术管套的准备：取一个净化过的管套，用流式细胞术管套清洁剂反复洗涤，然后用蒸馏水清洗，最后用细胞稀释液冲洗一遍。

3.样本装入：将已标记好的细胞悬液加入清洗过的流式细胞术管套中，再用细胞稀释液冲洗一下，确保样本进入流式细胞仪前不会发生凝集或沉淀。

4.样本检测：将样本放入流式细胞仪中，启动仪器开始检测。

通过选择适当的波长和参数，记录并分析细胞的标记情况，如荧光强度、细胞计数、细胞大小等。

5.数据分析：根据实验需求，使用相关软件对所得的数据进行处理和分析，生成数据图表和归纳、总结实验结果。

四、实验结束与清洁1.实验结束：在完成实验后，将仪器设置恢复到初始状态，关闭仪器和电源，清理工作台和废弃物。

2.仪器清洁：使用适当的清洗剂和纯水，清洁仪器内部和外部的各个部分，如样品流路、流式细胞仪的探头等，确保仪器干净整洁。

3.数据保存：将实验所得数据保存到与实验相关的记录文件夹中，以备后续数据分析和验证。

以上是流式细胞术的操作规程。

在进行实验前，要确保仪器的正常运行和合适的细胞标记试剂的选择，严格按照操作规程进行操作，保证实验的顺利进行和数据的准确性。

流式细胞仪使用规范

流式细胞仪使用规范BD CANTO II型流式细胞仪为高消耗精密仪器，目前尚属内部探索阶段，为了首先保证目前承担我科内部临床试验和各项科学研究的顺利进行，该仪器暂不对科室以外开展任何服务，如果确因与我科合作研究课题进行流式检测，需要填制申请表格，明确经费支出和成果所有权后，由指定老师安排检测。

现对内部人员，制定以下管理规定，请大家遵守：1、流式细胞仪由管理员负责管理以及实行分组责任制（附件1），每组的小组长负责该组成员流式细胞术培训以及样本上机，未经允许其它人员不得开启仪器；2、申请使用流式细胞仪的人员需要填写《流式细胞仪使用权限申请表》（附件2），通过科室论证后，经过严格的培训、考核以及考察期方可开通流式细胞仪使用权限（附件3）；3、每次使用前预约（附件4）、使用后登记（附件5），操作中发现的问题及时与管理员联系；无使用权限者必须在小组长协助下上机，严禁单独上机，未分组的同学逢周三、周五可预约使用流式细胞仪，管理员协助上机；4、常规消耗（鞘液、清洁液、PBS、上样管等）由登记使用的课题组年度汇总后分担；5、管理员负责流式细胞仪每月保养，使用人员操作的培训和监督；使用人员必须严格遵守流式细胞仪开机、关机步骤（附件5）；6、每次实验数据应及时采用光盘导出，禁止使用USB拷贝数据，以保证软件运行速度；管理员每月1日将会统一删除数据。

7、未经管理员允许其他人员不得拆卸仪器部件和开启流式主机系统；8、离开流式室大家关闭空调、风扇、灯等电器；9、流式室需保持环境整洁干燥，请大家勿将实验后的废弃物留于室内；管理员每周进行室内常规清洁；10、以上说明需要大家认真遵守，发现违规操作即停止使用权限1个月，发现屡犯者，停止流式细胞仪使用。

流式细胞仪管理小组2014-3-26附件1. 分组责任制细则根据课题划分小组，小组长负责该课题小组所有同学流式细胞仪使用培训以及样本上机，未获得权限的同学从流式细胞仪使用之日起，连续协助上机3个月之后经过考核可以在小组长监督下独立上机，小组长需要把握好组员的流式细胞仪使用规范。

流式细胞仪的日常操作规范

流式细胞仪的日常操作规范
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流式细胞仪的日常操作规范
一、仪器开/关机程序
1、开机程序
检查仪器鞘液桶和废液桶。

打开流式细胞仪。

气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。

打开电脑。

等待机器预热5—10分钟后可开始实验。

2、关机程序
用4ml10%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入2ml。

将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml。

将样品换成蒸馏水重复1-2步。

放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。

选择Standby模式10分钟。

关闭电脑，再关掉仪器。

二、维护保养
1、每日保养
用蒸馏水作样品，将样品支架支撑置于旁路，以外管吸入2ml
将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml.
选择Standby模式10分钟。

关闭电脑，再关掉仪器。

2、每月保养
将10%漂白剂装入鞘液桶。

旁路鞘液过滤器,以防损害。

将盛有3ml10%漂白剂的试管置于样品支架上,以HI RUN 20-30分钟。

将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤。

流式细胞仪装配操作规程

流式细胞仪装配操作规程流式细胞仪是一种广泛应用于生物学、医学和药学等领域的仪器设备，它能够对单个细胞进行快速高效的分析和排序。

流式细胞仪的装配操作是保证其正常运行和准确分析的关键步骤。

本文将详细介绍流式细胞仪装配操作规程。

一、前期准备1. 准备工具和材料：流式细胞仪装配所需的工具和材料包括螺丝刀、扳手、电工胶带、连接线缆等。

二、仪器组件装配1. 将流式细胞仪的主体部分放置在平整稳固的工作台上，确保仪器处于水平位置。

2. 首先进行电源连接。

根据仪器的电源要求，将电源线插头与电源插座相连接，确保连接牢固且接触良好。

3. 连接液路系统。

根据仪器的液路连接图，将液体进样管和出样管连接到相应的接口上，使用电工胶带进行固定，确保连接紧密且不漏液。

4. 连接气路系统。

根据仪器的气路连接图，将气源进气管和排气管连接到相应的接口上，使用扳手进行固定，确保连接紧密且不漏气。

5. 安装激光器和光学元件。

根据仪器的光学系统图，将激光器和光学元件安装到相应的位置上，并使用螺丝刀进行固定，确保光路畅通且稳定。

三、仪器调试1. 打开仪器电源，确保仪器正常启动。

2. 检查液路系统。

通过控制面板上的液路测试功能，依次检查各个液路是否通畅，排除可能存在的漏液或堵塞问题。

3. 检查气路系统。

通过控制面板上的气路测试功能，依次检查各个气路是否正常工作，排除可能存在的漏气或压力异常问题。

4. 校准光学系统。

通过仪器自带的校准功能，对光学系统进行校准，确保光路的稳定性和准确性。

5. 进行性能测试。

使用标准样品进行性能测试，检验仪器的分辨率、检测灵敏度和数据精确度等指标是否符合要求。

四、操作规范1. 在操作流式细胞仪前，必须先进行室内消毒和个人防护。

消毒工作台和操作区域，佩戴防护口罩、手套和实验服。

2. 操作过程中，严禁使用尖锐物品碰触仪器，以免造成损坏或伤害。

3. 操作前应熟悉仪器的使用说明书，了解每个功能按钮和参数设置的含义和作用。

4. 操作时应保持仪器周围环境安静，避免外界干扰对实验结果的影响。

流式细胞仪操作方法

一、样品制备1、取样（大约1×106 cells），离心弃上清，以PBS洗两遍，逐滴加入1ml 70%的冷乙醇固定细胞，﹣20℃冻存过夜。

分析时，离心弃上清，以PBS洗两遍，加入100μl的Rnase（GenScript试剂A），37℃水浴30min，然后再加入400μl的PI染液（GenScript试剂B），在4℃避光条件下孵育30min后即可上FCM检测。

每个样品至少获取2×104cells，二、上流式测细胞1.1、打开液流抽屉，确认气压阀处于减压状态；打开金属挡板；取出鞘液桶，倒掉废液，将鞘液桶加至2/3满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFLow），拧紧鞘液桶盖，安上金属挡板，保证管路畅通无扭曲。

检查废液桶，将废液桶的气路和液路的快速连接阀打开，倒掉废液（加鞘液一定要倒废液）向废液桶中倒入400ml浓度为10%的次氯酸钠溶液，合上压力阀。

确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。

1.2、依此接通电源、打开稳压器电源（指示灯由bypass变Ac putput）、变压器电源，稳定5分钟。

将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY。

如果需要打印，打开打印机电源。

打开电脑（密码：BDIS），等待屏幕显示出标准的苹果标志（先开仪器，后开电脑主机）。

1.3、将压力阀置于加压位置，轻拍过滤器，使气泡位于滤器的上方，打开管路开关，将过滤器中的气泡排除，关闭管路开关。

若滤器管路中有气泡，打开连接头，挤出鞘液，以排除气泡。

关闭液流抽屉。

执行仪器PRIME功能一次，以排除Flowcell中的气泡（反向压力使鞘液从进样针中流出）。

结束后自动STANDBY，5分钟后即可进行试验。

2.1、从苹果画面中选取CELLQuest，最大化，选散点图标，打开，Plot type选择Acq-analysis，X参数和Y参数分别取FSC-H、SSC-H（选择散点图主要是确定所需细胞的细胞群）。

流式细胞仪操作规程

流式细胞仪操作规程一、开机程序1、检查稳压器电源，打开电源，稳定 5 分钟。

2、打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入 400ml 漂白水原液。

打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至 4/5 满（一般可用超纯水，特殊情况需要用PBS），合上压力阀。

确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。

3、将 FACSCalibur 开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是 STANDBY，预热 5－10 分钟。

排出过滤器内的气泡。

4、如果需要打印，打开打印机电源。

5、打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。

6、执行仪器 PRIME 功能一次，以排除 Flow cell 中的气泡。

7、分析样品时，先用 FACAFlow 或 PBS 进行 HIGH RUN 约 2 分钟，以去除可能的管路残片。

二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1、从苹果标志中选择 CELLQuest，建一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。

2、选取屏幕左列绘图工具中的 Dot plot，绘出一个或多个 Dot Plots（点图）。

从 Dot Plot 对话框中选取 Acquisition 作为图形资料来源，并确定适当的 x 轴和 y 轴参数。

3、选取屏幕左列绘图工具中的 Histogram，同上法可绘出 Histogram（直方图）。

4、将此视窗命名后储存于 FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder\EXP 文件夹中（也可以自己取名，但每个实验人员只能建立一个文件夹），下次进行相同实验时可直接调用。

三．用 CELLQuest 进行仪器的设定和调整1、从苹果画面中选取 CELLQuest，进入 CELLQuest 后在 File 指令栏中打开合适的获取模式文件。

2、从屏幕上方 Acquire 指令栏中，选取 Connect to Cytometer（快捷键：＋B）进行电脑和仪器的连机。