马铃薯茎尖脱毒及组培快繁技术
马铃薯脱毒试管苗快繁技术
马铃薯脱毒试管苗快繁技术马铃薯是我国重要的经济作物之一，但是也受到各种病毒的威胁，其中普通马铃薯Y 病毒和葡萄叶病毒对产量和品质的影响尤为严重。
因此，马铃薯脱毒试管苗快繁技术应运而生，成为解决马铃薯病毒问题的有效途径。
马铃薯脱毒技术主要应用于普通马铃薯Y病毒、葡萄叶病毒、马铃薯卷叶病毒和马铃薯花叶病毒等病毒的控制。
试管苗快繁技术是指将受病毒侵染的母株去除外在病毒污染，通过组织培养技术培养出无病毒的试管苗，再进行大规模繁殖。
该技术有以下优点：一、保证马铃薯品种的纯度和优质性马铃薯试管苗快繁技术可以去除试管苗体内外病毒，降低病毒对马铃薯产量和品质的影响，保证马铃薯品种的纯度和优质性。
二、促进马铃薯种薯产业的发展和壮大马铃薯试管苗快繁技术可以大规模繁殖马铃薯健康种苗，提高种薯产量和品质，促进马铃薯种薯产业的发展和壮大。
三、降低耕地污染和农业用药量马铃薯试管苗快繁技术可以去除病毒，降低马铃薯的病害发生率，从而减少对土壤和水的污染，降低农业用药量，保护生态环境。
四、提高农民收益马铃薯试管苗快繁技术可以提高马铃薯产量和品质，增加农民的收益，改善农民的生活水平。
一、选择底薯并进行消毒。
选用优质种薯作为材料，切割成小块，进行消毒处理，去除外在污染细菌。
二、组织培养获得试管苗。
采取组织培养技术，将马铃薯底薯比如去除病毒后得到的组织块，放在含有营养物质的试管中，在适宜的温度、光照和湿度下培养，最终获得无病毒的马铃薯试管苗。
三、快速繁殖无病毒试管苗。
将无病毒马铃薯试管苗通过快繁技术进行扩繁，获得大量无病毒的马铃薯试管苗，再进行与土壤直接接触的育苗培育。
四、田间移栽。
无病毒的马铃薯试管苗经过特殊处理后，移栽到田间进行培育，获得无病毒的马铃薯种质资源。
总之，马铃薯脱毒试管苗快繁技术是一项有效的马铃薯病毒控制技术，可以保证马铃薯种质资源的纯度和优质性，为马铃薯种薯产业的发展和壮大提供了有力支撑，也对保护生态环境和提高农民收益具有重要意义。
马铃薯茎尖脱毒及组培快繁技术研究
配 置 成 ５ ０ ｇ Ｌ的 溶 液 待 用 。 当两 个 品 种 的种 薯 芽 长 ０ ／ ｍ
到 ２ ３ｃ ～ ｍ时 ． 选 生 长 健 壮 的 芽 ， 清 水 冲 洗 芽 部 表 挑 用
面 污 物 ．在 无 菌 操 作 室 采用 ｌ 种 不 同 的方 法 进 行 表 面 ２ 消 毒 ， 最 近 制 作 的蒸 馏 水 冲洗 四 五 次 ， 表 面 消 毒 剂 用 将 彻 底 清 除 ， 同表 面消 毒 剂 处 理 时 间 见 表 １ 不 。
２１ ０２年第 １ ６期
马铃 薯茎 尖脱毒及组培快 繁技术研究
田 成 津
（ 海 大 通 县 农 业 生 态 环境 与 可再 生 能 源 工作 站 ， 海 大通 青 青 ８ ００ ） １ １０
摘 要 ： 以下寨 ６ ５和青薯 １８为实验 对 象， 用不同培养基 ， ６ 采 对马铃薯 两个 品种进 行脱毒及组培 ， 对培养 基及 关键技 术措 施进行 了分析 ， 结果表 明 ： 与青 薯 １ ８ 不 同培 养 中生长表现不 同， ６在 下寨 ６ ５茎尖组织在 Ｍ Ｓ中加入 Ｂ ２ Ａ ｍ／ ｇ Ｌ的培养基 中生长表现 突出， 而青薯 １８茎尖组织在 Ｍ ６ ｓ中加入 Ｂ ２ｍ ／ Ａ ｇ Ｌ的培养基 中成苗率较 高。 同等条件下 ， 在 加入 ＩＡ ．０ ｇＬ的培养基宜用于下寨 ６ 脱毒苗 的组织快繁 ，加入 ＩＡ０ ３ ｍ ／ Ａ ５ ｍ ／ ０ ５ Ａ ． ０ ｇ Ｌ的培 养基宜用于青薯 １８脱毒 ６
厂化生产提供帮助 。
１ 材 料 和 方 法
１ １ 供 试 材 料 ．
１２ １ 催 芽 于 １ 月 中 旬 左 右 ， 拣 表 皮 光 滑 、 常 ． ． １ 挑 正 薯 形 、 小 均 匀 、 病 害 和 无 损 伤 薯 块 ， 置 在有 供 暖 的 大 无 放 房 间 ， 内温 度 ２ 室 ４℃ 左 右进 行 催 芽 。 催 芽 前 薯 块 正 处 在 于 休 眠期 ， 用 ０ ０ ～ ０ １ ｇ Ｌ的 Ｇ ３ 处 理 薯 块 ， 采 ．５ ．０ ／ ｍ Ａ来 浸 没 于 Ｇ ３溶 液 中 １￣ ２ ｉ ， Ａ ０ ０ ｎ 以打 破 休 眠 ［。 ｍ ４ ］ １２ ２ 种 薯 处 理 ．． 采 用 Ｍ 培 养 基 ， 入不 同 配 比的 激 Ｓ 加 素 ， 备 Ｂ 、Ａ 、Ａ 、Ｂ 准 ＡＮ Ａ Ｇ 。ＩＡ和 ＩＡ 由 于 激 素 在 培 养 基 中 Ａ，
马铃薯茎尖脱毒及脱毒苗快繁技术操作规程
目录1 茎尖脱毒技术操作规程 (1)1.1 设备条件 (1)1.1.1 试剂配置室 (1)1.1.2 洗涤及灭菌室 (2)1.1.3 无菌室 (2)1.1.4 培养室 (2)1.2 材料的选择 (2)1.3 类病毒和病毒的检测 (2)1.3. 1 类病毒的检测 (2)1.3.2 病毒检测 (9)1.3.3 脱毒材料热处理 (13)1.4 培养基的制备 (13)1.4.1 培养基母液配制 (13)1.4.2 培养基配制 (15)1.5 外植体灭菌 (17)1.6 茎尖剥离前消毒 (17)1.7 茎尖剥离与接种 (17)1.8 培养 (17)1.9病毒检测筛选脱毒苗 (17)1.10 品种典型性鉴定 (18)2 脱毒苗快繁技术操作规程 (18)2.1 茎切段培养基繁殖 (19)2.1.1 扩繁前的准备工作 (19)2.1.2 茎切段和接种 (19)2.1.3 培养 (19)2.2 扦插苗扩繁 (21)2.2.1 培养基础苗 (21)2.2.2 基础苗移栽 (21)2.2.3 基础苗剪切 (21)2.2.4 基础苗切段后的管理 (22)2.2.5 扦插苗 (22)2.2.6 扦插苗管理 (23)马铃薯茎尖脱毒及脱毒苗快繁技术操作规程1 马铃薯茎尖脱毒技术操作规程马铃薯健康种薯的生产方法主要有利用茎尖脱毒快繁技术生产无病毒种薯、田间系选生产良种和实生种子生产无毒实生薯等，其中植物茎尖分生组织培养脱毒技术（即茎尖脱毒）在实际的农业生产中应用最为广泛并取得了巨大成功。
茎尖脱毒技术是根据病毒在植物体内分布不均和茎尖分生组织带毒少的原理，结合使用钝化病毒的热处理方法，通过剥离茎尖分生组织进行培养获得脱毒植株。
这一技术具有周期短、效率高、能与组织培养快速繁殖相结合等特点。
目前除一些类病毒外，绝大多数植株病毒都可以通过茎尖脱毒技术进行脱除。
经茎尖分生组织培养获得的植株经病毒检测并确认其不带病毒后可进一步利用，对仍带有病毒的株系进行淘汰或再脱毒。
20.项目七 马铃薯茎尖培养脱毒技术
• 三、脱毒苗的保存方法
• 无毒苗要很好的保存，可以在生产上经济有效地发挥作 用。常用的瓶苗继代保存需要在培养基中加入一些生长 延缓剂。
• 但无病毒植株并没有获得额外的抗病性，它还可能被同 一病毒或不同病毒感染。
• 低温保存是在苗长到2cm左右时，放在4℃冰箱内的暗处 保存，可保存一年。而在液氮低温-196℃中保存，细胞 的代谢完全停顿，可以长期保存。
• 一、马铃薯脱毒苗ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ段组培技术
• 目前多应用茎段组织培养技术来快速繁殖脱毒苗，茎段组 织培养是指带有腋芽或叶柄、长数厘米的茎节段进行离体 培养。
• （一）茎段培养的培养基
• 在实践中，一般茎段培养用的培养基仍然是MS培养基， 但不像茎尖培养严格，为了降低成本，有时有机成分和微 量元素可酌减，只用大量元素和少数微量元素，并用白糖 代替蔗糖，琼脂改用0.5%等。
• 马铃薯茎尖培养一般常采用半固体（琼脂培养基）培养， 但去掉琼脂的液体培养基培养效果更好。
马铃薯茎尖培养培养基的成分表（mg/l)
成分 硫酸镁 磷酸二氢钾 硝酸钙 硫酸铵 硝酸钾 氯化钾 盐酸吡哆醇 马铃薯
蔗糖 琼脂
含量 125 200 100 100 1000 35
1 10% 90000 0.6%
• 已知感染马铃薯的病毒有18种，类病毒有1种。
• 在我国已发现7种专门寄生于马铃薯的病毒，即马铃薯X病 毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯 S病毒(PVS)、马铃薯 M病毒(PVM)、马铃薯A病毒(PVA)、马铃薯奥古巴花叶病毒 （又叫黄斑花叶病毒，简称PAMV）和马铃薯卷叶病毒 (PLRV)。
• 马铃薯由于具有高产、生育期短、适应性广、抗灾害能力 强、营养丰富、用途广泛等优势，在世界范围内广泛种植， 已成为世界第四大粮食作物。
马铃薯脱毒与快繁技术
67《农机市场》 2024年第2期马铃薯是泸水市片马镇的主要粮食作物之一。
2023年，全镇马铃薯种植面积813.3亩，占全镇粮食作物播种面积4435.59亩的18%，实现总产886700 kg，平均单产1090.3 kg/亩。
主要种植品种是中甸红、合作88。
为实现马铃薯高产稳产，增加马铃薯种植收益，近年来，片马镇积极推行马铃薯的脱毒与快繁技术，以促进当地马铃薯种植产业的良好可持续健康发展。
1. 马铃薯脱毒技术1.1 建立无菌体系1.1.1 材料选择与处理马铃薯外植体材料的来源可分为三种；一是将大田中处于生长季节的马铃薯植株移植至温室内，并将新生长出的嫩芽收集为外植体。
二是从大田中的马铃薯植株上切取一部分的茎段，扦插于营养液中培植一段时间后，将新生长出的嫩芽收集为外植体备用。
三是将马铃薯块茎放置在室内使其自然发芽，在收集嫩芽为外植体时先将室内温度提升至38℃处理15d后再进行。
马铃薯脱毒与快繁技术胡伍军云南省泸水市片马镇人民政府农业农村综合服务中心，云南 泸水 673207作者简介：胡伍军（1977—），男，汉族，云南泸水人，本科，高级农艺师，研究方向：农业技术推广。
在培养外植体时，可使用72%多菌灵可湿性粉剂2000倍液、农用链霉素1500倍液混合均匀喷施外植体，可起到杀菌效果。
当外植体植株上携带有病毒，可采取热处理或茎尖培养的方式进行消毒。
马铃薯外植体新芽多为2cm左右，收集后用清水冲洗干净后，运用75%酒精对外植体表面灭菌处理30～60s。
随后使用0.1%升汞灭菌5～8min，最后使用无菌水冲洗3～10次，单次冲洗时间为5min，完成处理 [1]。
1.1.2 茎尖剥离与接种马铃薯外植体茎尖较小，将茎尖组织灭菌后，放置在10～40倍解剖镜下使用专用镊子剥离嫩叶组织，裸露出半圆形生长点。
保留1～2个马铃薯叶原基，并接种至空白培养基。
1.1.3 初代培养茎尖初代培养以液体培养基为主，配方为MS+IAA0.1mg/L+GA30.1mg/L，pH值为5.8。
马铃薯脱毒试管苗快繁技术
马铃薯脱毒试管苗快繁技术马铃薯是一种重要的作物，全球范围内都有大量的种植。
由于土壤中存在的病毒和细菌的侵害，马铃薯的产量和质量往往受到一定的影响。
为了解决这一问题，马铃薯脱毒试管苗快繁技术应运而生。
本文将为大家介绍马铃薯脱毒试管苗快繁技术的原理、方法和应用前景。
一、原理马铃薯脱毒试管苗快繁技术是一种利用组织培养和生物技术手段快速产生无病毒的马铃薯试管苗的技术。
它的原理主要是通过选择健康无病毒的马铃薯组织，将其进行无菌培养，促进组织再生和植株生长，最终获得大量的无病毒马铃薯试管苗。
二、方法1. 选择健康的母株：首先需要选择健康的母株作为试管苗快繁的材料。
这些母株应该是没有明显的病害和病毒感染的，以保证脱毒后的试管苗是健康的。
2. 组织培养：将选取的健康组织（例如茎、叶或芽）进行消毒处理，然后进行无菌培养。
在无菌条件下，利用培养基和植物生长调节剂促进组织再生和植株生长。
3. 病毒检测：在组织培养过程中，需要对脱毒后的试管苗进行病毒检测，确保其无病毒。
通常采用ELISA法和PCR法等技术进行检测。
4. 试管苗生根：经过病毒检测合格的试管苗，可以进行生根处理，促进其根系的形成和长成。
5. 扩繁：经过生根的试管苗可以进行扩繁，通过分株或离体再生等方法，迅速繁殖大量的无病毒试管苗。
三、应用前景马铃薯脱毒试管苗快繁技术在马铃薯种植中有着广阔的应用前景。
通过脱毒试管苗快繁技术，可以及时有效地消除马铃薯中的病毒和细菌，保证种子的健康。
这样不仅可以提高马铃薯的产量和质量，还可以减少农药的使用，对环境保护具有积极意义。
脱毒试管苗快繁技术可以加快马铃薯种苗的繁殖速度，满足市场需求。
传统的种苗繁殖需要时间较长，而脱毒试管苗快繁技术可以大大减少这一时间，提高种苗的产量和质量。
脱毒试管苗快繁技术还可以为育种工作提供良好的材料。
利用这一技术，可以快速繁殖无病毒的马铃薯试验材料，为马铃薯新品种的选育提供更多可能。
马铃薯脱毒试管苗快繁技术是一种十分重要的新技术，它将对马铃薯生产和种植起到重要的促进作用。
马铃薯脱毒试管苗组培快繁及脱毒种苗的生产技术
、
Ｔｉｓ ｅ Ｃｕ ｔ ｒ ｌＰｒ ｐ ｇ ｔｏ ｆＶｉｕ —ｒ ｅ Ｐｏ ａ ｏ Ｔｕ ｅ ｅ ｉｇ ｓ ｕ ｌ ａ ｏ ａ ａ ｉ ｎ ｏ ｒ ｓ ｆｅ ｔ ｔ ｂ ｒ Ｓｅ ｄｌ ｕ ｎ ａ ｄ Ｐｒ ｄｕ ｔｏ ｃ ｎ ｑ ｅ ｏ ｒ ｓ ｆｅ ｅ ｔ ｔ ｎ ｏ ｃ ｉ ｎ Ｔｅ ｈ ｉ ｕ ｆＶｉ — ｒ ｅ Ｓｅ ｄ Ｐｏ ａ ｏ ｕ
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贵州 农 业科 学
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［章 号 １ １６ （０）— ３０ ９３ 文 编 ］０ —０ ２ ２ ２０ ２Ｄ ３ １ ０ ００ ５０ 一 ０
ｐｒ ｄｕ ｉ ｏ ｃｔｏｎ． Ｔｈｅ ｐｒ ｏｄｕｃ ｉ ｏｃ ｅｄｉ ｇ ｃａ ｅ ｔ ｏｎ ｐｒ ｅ ｎ ｎ ｂｅ ｒ ｄｕｃ ｄ ｂｙ ４ ｙ ｒ ｏｒ ｖｉｕｓ ｔ ｅ ｅ ｅａ ｓ ｆ ｒ —ｒ ｅ ｐｏｔ ｔ ｅｅ ｉ ，ｆ ｏｒ ａ ｏ ｓ ｄｔｎｇ ａｖ ａｂｔ ｏ ｅ ｔ
ｏｒｇｉ ａｌ ｅ ｉ ｎ ｓ ｅｄ， ｓ ｃｏｎ ｏｄｇｉ ｅ ｄ ｎａ［ｓ ｄ ａｎ ｃ ｅｅ ｄ ｏｍ ｍ ｅ ｃ ａ【ｓ ｄ ｐｏｔ ｏ ｒｉ ｅｅ ａｔ ｕｎｄｅ ｔ ｓ ｒｅ ｓ ａｔｏｎ ｏｎ ｔｏｎ． Ｔ ｈｅ ｅ ｒ ｈｅ ｔ ｌｔ ｏ［ ｉ ｃ ｄｉｉ ｓ ｅｄ
马 铃 薯 品 种 退 化 的 主 要 原 因 是 病 毒 侵 染 和 通 过 带 病 毒 种 薯 代 代 相 传 不 断 积 累 的 结 果 ， 种 植 无 病 而 毒 种 薯 可 获 得 较 高 产 量 。 铃 薯 脱 毒 种 薯 生 产 ， 指 马 是 利 用 茎 尖 分 生 组 织 培 养 或 其 它 措 施 清 除 马 铃 薯 体 内 的 病 原 ， 得 无 病 毒 （ 无 主要 危 害 病 毒 ） 试 管 苗 ． 获 或 的 并 经 扩 繁 ， 具 备 一 定 隔 离 条 件 的 基 础 上 ， 产 出 无 在 生 病 毒 微 型 薯 。 然 后 通 过 一 个 防 止 再 感 染 的 繁 育 输 送 体 系 （ 海 拔 地 区 或 与 传 染 源 相 对 隔 离 ） 级 向 下 输 高 逐 送 ， 到 生 产 者 手 中 ， 源 不 断 地 为 商 品 薯 生 产 提 供 直 源 健 康 无 病 的 种 薯 过 一 技 术 是 ２ Ｏ世 纪 ５ ０年 代 中 期 后 马 铃 薯 生 产 上 一 大 贡 献 我 国 于 ７ ０年 代 Ｉ 该 进 项技术， 目前 已在 部 分 省 市 推 广 应 用 ． 贵 州 盘 县 于 １９ ６年 建 成 马 铃 薯 脱 毒 中 心 实 验 室 及 温 网 室 ， 过 ９ 通 ５年 多 的 建 设 ， 步 建 立 起 四 年 ｛ 脱 毒 种 薯 生 产 体 初 ｝ ｌ 系 ， 已 向 农 民提 供 脱 毒 种 薯 。 将 盘 县 马 斡 薯 脱 毒 并 现 试 管 苗 组 培 快 繁 及 脱 毒 种 薯 的 生 产 技 术 介 绍 如 下
马铃薯微茎尖培养脱毒快繁技术
５１ 瓶 苗污 染 与 环 境 污 染 。① 培 养 基 及 使 用 器械 ．
灭 菌不 彻底 。② 外植 体 消毒不 彻底 或封 口不严 。③
操 作人 员不遵 操 作规程 。④ 无 菌操 作 和培 养环 境 不 清 洁 。⑤ 超净 工 作 台过滤 装置 失 效或 培养 容器 破损
以及 盖 子 口径 过大 。 ５２ 污染 的预 防措施 ．
关 键词 ：马铃 薯 ：组 织培养 ：脱毒 ；快繁
１ 脱毒前 的 准备
１１ 工 具 准 备 。７ ％ ～７ ％酒 精 、２ ． ０ ５ ％次 氯 酸 钠 溶 液 或 ０１ ～１ ． ％ ％升 汞 溶 液 、无 菌 水 、 手 表 、玻 璃
棒 、废 液缸 、解刨 刀 、镊 子 。
１ 培养 基准 备 。培 养基 ＭＳ＋ Ｎ ００ ／ ． ２ ＡＡ ．ｌ Ｌ＋ ｍｇ ６Ｂ Ｏ１ － Ａ ． ｍ Ｌ＋蔗 糖 ３ Ｌ＋琼 脂 ５ ／ （Ｈ 值 Ｏ ．５ｇ ｐ Ｌ
消毒 的无 菌纸 上吸干 水分 。
３ 茎 尖剥 离及诱 导培 养
在超 净工 作 台上 ，在 带 有适 当 光源 的解 剖镜 （ ８
～
５２１ 灭菌 。培养 基 以及 接种 过程 中使 用 的所 有 器 ．． 械 必须 在高压 灭菌 锅 里进 行灭 菌 。需注 意 ： 火菌 要 彻 底 。锅 内需 灭 菌 的培 养 基不 能堆 放 过满 。升 温和
马 铃 暮 徵 茎 尖 培 养 脱 毒 快 繁 技 术
摘 要 ：马铃 薯 生 产 中 多采 用 块 茎进 行 无性 繁
苗 ，用 清 水 洗 去 附着 于根 部 的 培养 基 ，动 作 要轻 ， 应避 免造 成伤 根 ，然后 栽入 准备 好 的基 质 中 。尽 量 不要 弄伤 植株 ，然 后把 苗周 围的基质 压 实浇透 水 。 ４３ 移栽 后 的管理 －
马铃薯脱毒种薯繁殖技术
马铃薯脱毒种薯繁殖技术马铃薯采用无性繁殖，生育期间容易被病毒侵染引起种性退化、产量下降，因此，开发和推广脱毒种薯快繁技术，从根本上抑制病毒病的发生和蔓延，是解决其种性退化、产量下降、品质变劣，留种困难的有效途径。
微型薯是利用茎尖脱毒生产的原原种，繁殖原种、一级种薯、是保证大田生产用种的主要方法。
一脱毒种薯繁殖技术1、建立繁殖基地：脱毒种薯繁殖基地应选择在土地平整、交通方便、具有排灌条件的高山区，蚜虫分布稀疏和不利于蚜虫迁飞降落区。
原种繁殖应建立在1300m高海拔冷凉地区，一级种薯繁殖基地在1200米以上海拔地区。
2、建立隔离保护区：原种基地周围建立隔离区，隔离区周围1000米内不种植茄科、十字花科、蔷薇科等作物，以防蚜虫传播。
3、催芽：微型薯一般单粒为5～10g，出苗较慢。
采用沙床催芽，沙床应选择背风向阳地方，将床底铲平后，每铺1层湿沙（湿沙以手握成团，松开后松散为宜）摆放一层微型薯，铺3～5层薯块，最后在沙子上面盖1层草苫。
苗床上起好竹拱，盖严薄膜，四周用土压好。
经8～10天，芽长达0.5厘米左右即可炼芽播种。
二脱毒种薯栽培技术1、选择地块，精细整地：繁殖种薯应选土壤肥沃，便于排灌的沙壤土。
冬前深翻保墒，播种时整地起垄，垄宽2尺，垄高6寸，每垄种2行。
2、施足底肥，集中深施：马铃薯应重施底肥，一般亩施农家肥3000公斤，尿素20公斤，二铵30公斤或薯类专用肥60公斤。
底肥一次施足，垄中线开沟集中条施为好。
3、适时播种，合理密植：种子繁殖田应适当增加密度，以多产小薯为主，一般播种密度为4000-5000株/亩，行距1.5～1.8尺，株距6～8寸。
微型薯适宜播种期为3月上中旬，一级种薯适宜播种期为2月下旬到3月上旬。
4、土壤处理，开沟点播：每亩用3%地虫一扫光颗粒剂2～3公斤，多菌灵3～4公斤/亩，拌细土30公斤进行土壤处理。
在整好地块上沿水平开沟摆放种薯，肥料施入种薯间，然后用细土覆盖2～3寸为宜。
山西马铃薯茎尖脱毒与快速繁殖技术
农业工程技术·综合版 2022年5月刊39植保与田间管理DOI:10.16815/ki.11-5436/s.2022.14.023佳；添加少量VC 可以有效抑制褐化现象，提高茎尖存活率。
3、环境因素光照在组织培养中是非常重要的环境因素，光照时间和强度对细胞的增殖及器官分化有很大影响。
马铃薯脱毒苗喜长日照强光，光照时间以每天16 h 为宜，光照强度为2000～2500 Lx。
一定的昼夜温差有利于脱毒苗健壮生长，马铃薯脱毒苗较适宜的温度为白天18～22℃、夜间16～20℃。
培养室相对湿度45%～60%为宜，湿度过低时，培养瓶的内外差异大，会使培养基内的水分迅速丧失，不利于脱毒苗生长发育；湿度过高会造成真菌孢子快速繁殖，易引起霉菌污染。
4、生长调节剂生长调节剂对马铃薯脱毒苗的健康生长有着十分重要的影响[3]。
添加IBA、IAA 以及NAA 后，腋芽萌发期有所推迟，生长素过量时易出现愈伤组织，生根十分缓慢；继续观察可知，平均根条数增加，根系更加粗壮。
相同培养基中，顶芽生根比腋芽早，并且生长形势更好，此现象在不加任何生长添加剂的培养基中表现较明显。
马铃薯茎尖脱毒中常用的津引8号对NAA 培养基十分敏感，浓度过高时切断基会产生较多愈伤组织，进而抑制马铃薯根的初期生长，导致根部生长缓慢。
相同时间内，津引8号马铃薯茎段生长效率不明显，展开的叶片数较少。
二、马铃薯病毒检测鉴定方法马铃薯病毒可导致种质退化，引起产量急剧下降，是制约马铃薯生产的主要因素之一。
培养马铃薯幼苗经过第1次扩繁后必须展开严格的病毒检测工作，保证获取的脱毒苗质量。
目前，最为常见的病毒鉴定法有酶联免疫吸附测定法和分子生物学鉴定法。
1、酶联免疫吸附测定法（ELISA）酶联免疫吸附测定法原理是将抗原和抗体的免疫反应和酶的高效催化反应进行有机结合，通过化学手段将酶和抗体融合在一起，从而形成酶抗体。
ELISA 比传统生物学检测方法灵敏度高，但仍然存在不易检测含量极少的韧皮部病毒等缺陷[4]。
马铃薯脱毒种薯的快速繁殖技术
离条件下 ，栽植脱毒试管苗 ，由试管脱毒苗生长出 的块 茎 ，称之为脱毒原原种 。 第 三步 ，原种生 产 ：用脱毒 原原 种在 良好 隔离
条件 下的 田间继续繁殖 为一级原种 。 第 四步 ，良种 生产 ：用一 级原 种做种 薯 ，在 田 间继续 繁殖 为二 级原 种 ，以后 逐 级输 送 繁 殖 为一 、
ａ ｔ ｉｅ ｆｐａ ｔ ｔ ｂ ｉ ａｈ ｙ ． ｅｖ ｒ ｕ ｙ ｔ ｍ ｓｏ ｏ ａｏ ｓｃ ｕ ｅ ｙｉｆｃｉｇ ｏ ｉｅ ｅ ｔ ｉ ｓ ｓａ ｅ ｒｓ ｌ ｃｉｔ ｓｏ ｌｎ ｖｉ ｍｅ ａ ｏｌ ｐ ｔ ｗａ ｓ Ｔｈ ａ ｏ ｓｓ ｍｐｏ ｎｐ ｔｔ ｅ ａ ｓ ｄｂ ｅ ｔ ｆｄｆ ｒ ｎ ｒ ｅ ｒ ｅ ｕｔ ｃ ｉ ｎ ｎ ｖｕ ｓ
（ ｅ ａ ｇＩ ｔｕ ｆ ｇｉ ｌ ｒｌ ｃ ｎ ｅ ， ｅ ａ ｇ Ｈ ｉ ｎ ｊ ｎ ５ １ １ Ｃ ｉ Ｈ ｇ ｎ ｓｉ ｔ ｏ Ａ ｒ ｕ ｕ ｉ ｃ ｓ Ｈ ｇ ｎ ， ｅ ｏ ｇ ａ ｇ１ ４ ， ｈ ａ） ｎ ｔｅ ｃ ｔａＳ ｅ ｌ ｉ ０ ｎ
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第二步，原原种生产 ：将获得的核心材料 ，经
组织 培养 扩量 繁殖后 ，在 防病 防虫 网室 ， 良好 的隔
合时 ， 病毒就会在植株体内增殖 、转运和积累到块
茎中，这样世代传递 ，病毒危害就会逐年加重 ，最 终失 去种用 价植 。 目前 尚没有 发现 即能治疗 病 毒病
82.5马铃薯脱毒与快繁技术
茎尖脱毒与培养
2、茎尖消毒 • 取1厘米的茎尖，水洗干净，无菌条件下先用70％的酒精浸组织15-
20秒，再用2％次氯酸钠溶液浸泡4--5min，然后用无菌水冲洗3次。
茎尖脱毒与培养
3、接种
• 把消毒芽在解剖镜下逐层剥去幼叶，露出 圆滑的生长点，留1-2个叶原基，0.2— 0.3毫米，随即接种于MS液体培养基上， 每升加0.1-1.0mg/LNAA 、 0.51.0mg/LGA3、0.5mg/LBA，2%蔗糖， pH值5.8。
“退化”主要原因是病毒的侵染及其在薯块内积累。危害马铃薯的 病毒有17种之多，如X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A病毒、花叶 病毒、纺锤形块茎病毒等。马铃薯病毒可使块茎产量减少 50%~80%。
茎尖脱毒与培养
1、取材 • 茎尖是用于马铃薯脱毒快繁的常用材料。 • 在促使块茎萌发生长的过程中可结合进行热疗处理，对古巴花叶病
茎尖脱毒与培养
7、驯化
• 炼苗室温度：白天23~27℃，夜间不低于14℃。炼苗具体方法：移 植前7d左右，将长有3~5片叶、高2~3cm的试管苗，在不开瓶口 的状态下，从培养室移至温室排好。为防止强光、高温灼伤试管苗， 在温室顶上加盖一层黑色遮阳网。
茎尖脱毒与培养
8、无毒材料的保存
• 将无毒原种种在温室或防虫罩内灭过菌的土壌里，以防止蚜虫传毒 及各种 条件下的机械传毒。在大规模繁殖这些植株时，应该把它们 种植在田间隔离区内，或采用春播早留种和夏留种的方法，也可以 把经茎尖脱毒处理的无病毒植株，再通过离体培养进 行繁殖与保存。
“种薯”是指那些作为种子用的薯块。“脱毒种薯”是指种薯经过一系 列物理、化学、生物或其它技术措施清除薯块体内的病毒后，获得的经 检测无病毒或极少有病毒侵染的种薯。
马铃薯脱毒苗组培快繁技术
马铃薯脱毒苗组培快繁技术(酒泉职业技术学院秦晓萍甘肃?酒泉 730500) 摘要本论文主要从培养基的制作、脱毒苗的制取、继代培养、培养条件、瓶装苗污染控制等方面介绍了马铃薯脱毒苗快繁技术，为马铃薯快繁生产提供参考。
关键词马铃薯脱毒苗快繁技术马铃薯是我国主要的粮食、蔬菜及工业原料作物，其国民经济意义十分重要，在保证粮食安全生产方面发挥了重大作用。
随着农业产业结构的调整，我国马铃薯的种植面积和总产量也在不断的增加。
但在连年的栽培过程中，病毒或类病毒不断的侵染和积累，从而导致马铃薯种性变劣，长势逐步减弱，产量逐年降低。
马铃薯快繁是在短时间内利用组织培养技术获得大量高质量的试管苗，应用种薯脱毒技术，[1]培养无毒组培苗，在提高产量、保证品质、耐贮藏方面体现出了独特的优势。
1 培养基的制作1.1培养基的配方利用提供的母液和材料MS+0.01mg/L NAA+3%蔗糖+0.56%的琼脂，PH为5.8，配置培养基1000ml,并均匀分装到24个培养瓶，进行灭菌。
母液浓度/扩大倍数配置体积(ml) 母液吸取量(ml) 称取量(g) 大量元素 20 50 —钙盐母液 20 50 —磷酸盐溶液 20 50 —铁盐 100 10 —微量元素 100 10 — 1000有机物 100 10 —萘乙酸(NAA) 0.1mg/L 0.1 —蔗糖 3% — 30琼脂粉 0.56% — 5.6 1.2 培养基的配制1.2.1仪器、用具与试剂(1)仪器:PH试纸、电磁炉、高压灭菌锅(2)用具:移液抢、移液管、量筒、容量瓶、培养瓶、玻璃棒、洗瓶、烧杯、搪瓷缸、镊子、钥匙、称量纸、胶头滴管、抹布、卷纸、标签纸、(3)试剂:配置MS培养基的各种母液、激素母液、琼脂、蔗糖、蒸馏水、0.1mol/LHCL、0.1mol/LNaOH1.2.2 培养基制作(1)准备工作将配置好的MS培养基母液从冰箱中取出，检查是否沉淀或变色，避免使用已失效的母液。
马铃薯茎尖脱毒的方法
马铃薯茎尖脱毒的方法马铃薯茎尖脱毒的方法，在具体操作上各单位尚不完全一致，现介绍其主要的程序和方法。
一、切取茎尖从大田直接切取10~15厘米长的茎尖，或选取块茎彻底冲洗后播在装有消毒泥砂的生长箱中，用32℃催芽。
当块茎出芽长约30厘米时，切取带顶芽或侧芽的茎段约10~15厘米备用。
二、茎尖消毒茎尖先用自来水冲洗干净后，用70%的酒精浸2分钟。
再用5%次氯酸钙滤液浸泡20分钟，然后用蒸馏水冲洗3次。
三、培养基马铃薯茎尖分生组织的培养基，一般均采用ms培养基的基本配方，而在添加剂上作不同的调整。
ms培养基的配方如表11-2。
据试验，在ms培养基的基础上添加剂调整为加吲哚乙酸0.5毫克/升和6-苄基嘌呤2毫克/升的存活率高达81.7%，优于同比例高浓度的处理。
又据试验，添加6-苄基嘌呤0.5毫克/升和吲哚乙酸0.1毫克/升，再加赤霉素1毫克/升的比例适合马铃薯茎尖培养；添加6-苄基嘌呤0.1-0.3毫克/升和吲哚乙酸0.1毫克/升适合发根培养。
同时证明浓度不能过大，否则茎尖分生组织生长过旺，大量形成愈伤组织，影响芽的分化。
茎尖发芽生根后仍用ms培养基全量进行单节繁殖和增代培养。
四、培养条件经过消毒的茎尖，在超净工作台上的解剖镜下剥离，并切取0.3毫米左右，接种在培养基上。
茎尖越大，越易成活，脱毒效果越差。
反之，成活困难，脱毒效果好。
接种后培养室的温度一般为30℃左右。
也有采取白天温度29℃，晚上温度24℃变温培养的。
光照强度接种后前半月为1000~2000勒克司，后半月为3000~5000勒克司。
光周期10~16小时，一般为12小时。
培养室的相对湿度为50~85%。
茎尖苗可以在试管内连续进行无菌培养繁殖，待自然温度适合马铃薯生长后，将试管移出室外，揭开瓶塞进行炼苗。
然后移入消毒营养土中栽植，避免日光直射。
幼苗用纱布覆盖，以保持较高湿度和防止传毒媒介，以后再移入网室继续育苗，并移栽产生无毒种薯。
五、脱毒苗的检验脱毒苗较带毒苗均有不同程度的增产，但尚不能据以确认其为无毒苗。
马铃薯茎尖脱毒及组培快繁工作流程
【】李 浚 明． 物 组 织培 养 教 程 【 ４ 植 Ｍ】． 京 ： 中 国农 业 大 学 北
出版 社 ，１ ９ ９ １，２ ．
ＮＡ Ａ， 增 殖 系 数 为 ９—１ 。通 过 组 培 扩 繁 可 以获 得 大量 的 组 ２
０ ４ ０ 河 北 省 邢 台学 院 生 物 ・ 学 系 石 晓 云 ５０１ 化 王僧虎 张雪 辉 唐
培苗壮苗数量 是效益 的保 障。马铃薯 种植逐步走 向规模化 、
标 准 化 、 区域 化 。各 科研 单位 与 企 业 要 摸 索 创 立 出 一 套合 适 的 可规 范化 生产 马铃 薯种 薯 的 工 艺 流程 ，提 高 繁 殖 效 率 ，简
酶联 免疫 吸 附检 测 病 毒 是 根 据 病 毒 颗 粒 能 够 与 它 们 的 特 异 性 抗 体 在 离 体 情 况 下相 互 反 应 ，并 用 酶 检 测 放 大 这 个 反 应 ，最 后 测 得 病 毒 的有 无 。它 是 鉴 定 马 铃 薯 病 毒 的 比较 便捷 的方 法 ，可 以检 测 Ｐ Ｘ、Ｐ Ｙ、Ｐ Ｓ Ｖ 、Ｐ Ｒ 等 常 见 Ｖ Ｖ Ｖ 、Ｐ Ｍ ＬＶ 病 毒 ， 比较 适 合 样 品 数 量 多 时 的 病 毒 检测 。 另 外还 可 以 用指
４周 后 组 培 苗茎 芽 长 高 ，茎 变 粗 、 叶 片 增 大 、 叶 色 浓 绿 ，茎 叶表 面 有 明 显 的 细 毛 。 加 入 ２５ｇｔＰ ． ／ ＶＡ 可 以一 定 程 度 上 防 ． 止 组 培 苗 玻 璃 化 ，增 加 壮 苗 率 。 马铃 薯 是 喜 光 作 物 ，在 培 养 室 内也 要 给 予 其 充 足 的 光 照 条 件 ，光 照 强 度 为 ２０ ０～ ０ ０ ４０ ０ ｌ ｘ的条 件 下 生 长 较 好 。一 般 认 为 组 培 苗健 壮 与 否 也 与 继 代 次 数 有 很 大 的 关 系 ，增 殖 时 间 长 ， 生 长 势 下 降 ， 生 活 力 较 弱 ，
浅谈马铃薯脱毒快繁流程步奏及配方
浅谈马铃薯脱毒快繁流程步奏及配方马铃薯：(Solanumtuberosum)为茄科茄属作物．是全球重要的粮菜兼用作物。
马铃薯具有生长期短、产量高、适应性强、营养丰富、耐储运的特点，因此深受生产和消费者的喜爱。
但在马铃薯生产中普遍存在种性退化的问题，而病毒侵染是马铃薯退化的根源。
由于马铃薯是无性繁殖作物，所以病毒侵染后会世代相传，危害逐年加重。
目前，世界上公认的解决马铃薯病毒危害，防止品种退化的有效途径是茎尖离体培养。
通过茎尖离体培养培育脱毒基础苗，再通过建立合理的良种繁育体系生产优良种薯是马铃薯高产、稳产、优质的可靠保证。
一脱毒种薯繁育工艺流程马铃薯脱毒种薯繁育工艺流程如图所示。
二脱毒技术2.1 脱毒方法2.1.1 外植体选择及处理外植体的选择途径一般有3条：①在生长季节从田间挖取植株种植在无菌的盆土中，温室内栽培，取其新长成枝条的芽；②从田间切取枝条，插入营养液中生长，取新抽生枝条上的芽；③块茎在室内发芽，芽经热处理(38℃)2周后再取芽。
另外，定期给植株喷施内吸杀菌剂，如0.1％多菌灵和0.1％链霉素的混合液，可以有效提高灭菌效果。
经过上述处理之后，要比直接取自田间枝条污染少得多。
再加上茎尖分生组织又被彼此重叠的叶原基保护．只要仔细剥取，无须再进行消毒，就能得到无菌的外植体。
但为保险起见，在切取外植体之前，可以先进行简单的表面消毒，一般在5％次氯酸钠中处理8～10min即可。
虽然顶芽和腋芽都能作为外植体，但顶芽的茎尖生长要比腋芽的快，成活率也高，所以一般取顶芽作为外植体。
2.1.2 剥离茎尖和接种在超净台上的解剖镜(8～40倍)下进行茎尖剥离。
解剖时必须注意使茎尖暴露的时间越短越好．以免超净台的气流风干茎尖。
在材料下垫上一块湿润的无菌滤纸也可达到保持茎尖新鲜的目的。
在解剖镜下用解剖针将叶片和叶原基剥掉，直到露出圆亮的茎尖生长点。
将带有l～2个叶原基的茎尖切下．接种到培养基上。
要注意防止交叉污染，尤其是当芽未曾进行过表面灭菌时更要谨慎。
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马铃薯茎尖脱毒及组培快繁技术研究
摘要：以下寨65和青薯168为实验对象，采用不同培养基，对马铃薯两个品种进行脱毒及组培，对培养基及关键技术措施进行了分析，结果表明：与青薯168在不同培养中生长表现不同，下寨65茎尖组织在ms中加入ba2 mg/l的培养基中生长表现突出，而青薯168茎尖组织在ms中加入ba2 mg/l的培养基中成苗率较高。
在同等条件下，加入iaa 0.50 mg/l的培养基宜用于下寨65脱毒苗的组织快繁，加入iaa 0.30 mg/l的培养基宜用于青薯168脱毒苗的组织快繁。
关键词：马铃薯；茎尖脱毒；组织快繁
我国是马铃薯生产第一大国，2008年种植面积达到573.33万hm2，鲜薯总产达8 800万t，平均单产约15.45t／hm2，总产位居世界第一[1]。
马铃薯是无性繁殖作物，体内病毒的积累可使品种种性退化、品质和产量降低，对其生产造成严重危害[2]。
因为大部分病毒不能感染马铃薯茎尖组织，通过茎尖脱毒，生产脱毒种薯用于生产是防止马铃薯退化的切实可行的措施[3]。
马铃薯脱毒及组培快繁中所用基质和培养条件等关键技术方面的报道较多，但对下寨65和青薯168报道较少，本文既通过对马铃薯下寨65和青薯168两个品种进行脱毒及组培试验研究，为西部高原地区当家品种脱毒种薯的工厂化生产提供帮助。
1 材料和方法
1.1 供试材料
采用当家品种下寨65和青薯168。
1.2 试验方法
1.2.1 催芽于11月中旬左右，挑拣表皮光滑、正常薯形、大小均匀、无病害和无损伤薯块，放置在有供暖的房间，室内温度
24 ℃左右进行催芽。
在催芽前薯块正处于休眠期，采用0.05～0.l0 mg/l的ga3来处理薯块，浸没于ga3溶液中10～20 min，以打破休眠[4]。
1.2.2 种薯处理采用ms培养基，加入不同配比的激素，准备ba、naa、ga3、iba和iaa，由于激素在培养基中用量非常少，且不易溶于水，所以采用特殊的配置方法，配置成500 mg/l的溶液待用。
当两个品种的种薯芽长到2～3 cm时，挑选生长健壮的芽，用清水冲洗芽部表面污物，在无菌操作室采用12种不同的方法进行表面消毒，用最近制作的蒸馏水冲洗四五次，将表面消毒剂彻底清除，不同表面消毒剂处理时间见表1。
1.2.3 茎尖组织培养在解剖镜下剥取大小为0.30～
0.50 mm茎尖生长点，置于不同浓度生长调节剂的ms培养基上进行培养，培养基编号为ms1～ms12，另设不加任何生长调节剂的ms 培养基作为对照（ck），植物生长调节剂配比见表2。
1.2.4 马铃薯脱毒苗培养在无菌条件下，将得到的无毒苗进行切段，每段带一叶，置于不同种类、浓度的1/2ms培养基中进行
培养，以不加任何生长调节剂的1/2ms培养基作为对照，编号为m1～m9，快繁培养基配比见表3。
2 结果与分析
2.1 不同表面消毒方法对茎尖成活率和污染的影响
从表4可以看出，在茎尖组织培养过程中，外植体在清水冲洗后，直接采用0.1 %升汞或5 %次氯酸钠消毒，都可以将污染控制在5 %以下，但需时稍长，不同程度地影响到成活率。
另外由于升汞的渗透性强，不宜彻底清洗，且对环境污染严重，建议尽量不要使用。
2.2 不同生长调节剂培养基配比对茎尖组织生长的影响
从表5可以看出，不含生物调节剂的培养基，马铃薯茎尖组织的生长非常缓慢，导致成苗率低下。
在同等条件下，kt和6-ba对马铃薯茎尖组织的生长都具有促进作用，且效果显著，就这两种物质而言，含有kt的培养基中成苗率较低。
在同等条件下加入ga3，可明显促进马铃薯茎尖组织分化，加快生长，提高成苗率。
2.3 不同生长调节剂配比对马铃薯脱毒苗快繁的影响
经过观测表明，与对照培养基相比较，培养基中加入生长调节剂后，芽萌发推迟，有效促进幼根生长。
生长调节剂浓度过大时，愈伤组织发达，生根受到抑制。
在实验中观察到下寨65对naa较为敏感，浓度稍大就会产生较大愈伤组织，生根较为缓慢，而青薯168反应较为迟钝，结果见表6。
3 结论
通过实验发现，在马铃薯脱毒技术实施过程中，采用酒精与其他两种表面消毒剂配合使用效果最好，能有效控制污染，降低对茎尖组织的影响。
剥离的茎尖组织诱导成苗是脱毒快繁的关键技术，在实验中，kt和ba均有助于茎尖组织分化成苗。
在快繁中，适当浓度的生物调节剂对马铃薯茎段生根有促进作用，但当浓度过高时只产生分生组织，不利于小苗生根，而且各品种表现有所不同。
参考文献：
[1]戴亨仁，吴建军，韦禄春，等.江西红壤区马铃薯高产、高效、优质综合栽培技术[j].江西农业学报，2010，(2)：74-76.
[2]冉毅东，王蒂，戴朝曦.用组培法诱导试管微型薯的研究［j］.马铃薯杂志，1991，5（4）：193-199.
[3]王炳君．马铃薯茎尖脱毒与微型薯生产[m]．北京：高等教育出版社，1990．
[4]张勇飞，谢庆华.几种主要的马铃薯种薯催芽方法及其操作要点[j].种子，2000，（3）：46-47.。