粪便细菌学规范
粪便检验
粪便检验1、正常人粪便中脂肪总量为2～5g，如果超过6g，则称为脂肪泻，多见于腹泻、梗阻性黄疸及胰腺外分泌功能减退等。
2、粪便检验时，将少许粪便以生理盐水稀释并涂成薄膜片，厚度以能透视纸上字迹为宜。
3、粪便采集后应于1h内检验完毕，否则会因PH改变及消化酶作用等，使有形成分分解破坏及病原菌死亡而导致结果不准确。
4、夏科-莱登结晶呈菱形，无色透明，两端尖长，大小不等，折光性强。
多见于阿米巴痢疾及过敏性肠炎的粪便中。
5、正常粪便中无红细胞，下消化道炎症、痔疮、直肠息肉、肿瘤及其他出血性疾病时可见到多少不等的红细胞。
因此A选项的说法错误。
6、在细菌性痢疾时，常可见到较多的吞噬细胞。
吞噬细胞可作为诊断急性细菌性痢疾的依据，也可见于急性出血性肠炎或偶见于溃疡性结肠炎。
7、正常粪便中可见多种结晶，如草酸钙、磷酸钙、碳酸钙等结晶，一般无临床意义。
夏科-莱雷登结晶多见于阿米巴痢疾及过敏性肠炎的粪便中。
8、柏油样便：上消化道出血，超过50ml时粪便呈黑色或褐色，质软有光泽，柏油样。
服用铋剂、活性炭排出黑色便，但无光泽，隐血试验为阴性。
9、胆道梗阻时，进入肠道的胆汁减少或缺如，粪胆素生成减少甚至缺如，使粪便呈灰白色。
粪便颜色改变及可能的原因：鲜红色：肠道下段出血，如痔疮、肛裂、直肠癌等；暗红色（果酱色）：阿米巴痢疾；白色或灰白色：胆道梗阻、钡餐造影；绿色：乳儿的粪便中因含胆绿素而呈现绿色；黑色或柏油色：上消化道出血、服（食）用铁剂、动物血、活性炭及某些中药。
10、通常情况下，正常粪便中有大量的细菌，均为肠道的正常菌群，偶可见到白细胞，主要是中性分叶核粒细胞。
正常粪便中较少见淀粉颗粒，无红细胞。
可见多种结晶，如草酸钙、磷酸钙、碳酸钙等结晶，一般无临床意义。
正常人粪便胆红素在肠道细菌的作用下转化为尿（粪）胆原，尿胆原除部分被肠道重吸收进入肠肝循环外，大部分在结肠被氧化为粪胆素，并随粪便排出体外。
11、邻联甲苯胺法灵敏度高，血红蛋白的最小检出量为0.2～1mg/L。
粪便检验技术要求
粪便检验技术要求1 标本采集、转运和贮存1.1 实验室应向患者提供标本采集说明(口头或书面)和符合要求的标本采集容器。
应使用一次性、有盖、可密封、洁净、干燥、不渗漏、不易破损、开口和容量适宜的容器。
用于细菌培养检查的标本应使用无菌容器，且有明显标识。
1.2 应尽可能选取附着黏液、脓液、血液的新鲜异常粪便（宜多个部位留取，蚕豆大小），并避免尿液和异物（如卫生纸、花露水、强力清洁剂、除臭剂等）污染。
采集后的标本宜在 1 h 内（夏季）或2 h 内（冬季）送检。
1.3 粪便隐血试验宜连续 3 天每天送检标本（适用时），每次采集粪便 2 个部位的标本送检（置于同一标本容器中）。
不可使用直肠指检标本。
1.4 进行细菌检查的标本应在发病初期和使用抗生素前采集，腹泻患者标本应在急性期（3 天内）采集。
进行厌氧菌培养的标本应尽快送检，必要时在床旁接种。
1.5 查原虫滋养体的标本应留取含脓血的稀软粪便，排便后立即检查，冬季需要采取保温措施送检；查蛲虫卵时，在子夜或早晨排便前用肛拭子在肛周皱襞处采集标本；查血吸虫毛蚴时，应至少采集 30 g 新鲜粪便；查寄生虫虫体及虫卵计数时，应收集 24 h 粪便。
2 理学检查粪便理学检查至少包括粪便颜色和性状等。
实验室应规定粪便理学检查指标描述和报告的规范用语。
3 化学和免疫学检查3.1 粪便隐血试验3.1.1 粪便隐血试验检测方法有化学法和免疫法，不同方法的灵敏度和特异性存在差异，实验室在选用新方法前应明确其分析性能。
当一种方法的检测结果与临床不符时，宜采用另一种方法进行验证。
3.1.2 应按试剂说明书要求的比例使用稀释液或等渗盐水对标本进行稀释。
当明显柏油样标本的检测结果呈阴性时，应调整稀释倍数后再次进行检测。
3.1.3 使用试带进行粪便隐血试验，试带应在密闭、防潮的条件下保存，在有效期内使用。
3.1.4 检测临床标本前应至少进行阴性和弱阳性水平的室内质控并保证结果在控。
应按说明书规定的时间和标准进行结果判断。
粪大肠菌群检测标准
粪大肠菌群检测标准
粪大肠菌群检测是评价消化道微生物菌群组成和功能的重要指标，常用于评估肠道健康和消化功能。
以下是一般粪大肠菌群检测的参考标准：
1. 总菌群量：正常情况下，粪便样本中的大肠菌群数量应该在10^7~10^9 CFU/g之间。
2. 菌群多样性指数：通常使用菌群多样性指数（如Shannon指数）评估菌群的多样性程度。
正常情况下，指数应该在较高水平。
3. 优势菌群和病原菌：粪大肠菌群检测还可以确定主要的优势菌群种类和比例，以及是否存在潜在的病原菌。
正常情况下，优势菌群应该是益生菌（如双歧杆菌、乳酸菌等），而病原菌应该是少量或不存在。
4. 菌群平衡和稳定性：正常的粪大肠菌群应该具有良好的平衡和稳定性。
如果菌群失调或不稳定，可能会导致肠道问题和消化不良等症状。
需要注意的是，粪大肠菌群检测的标准可能因不同的实验室和研究领域而有所差异。
因此，具体的标准应根据实验室或临床医生的建议进行参考。
粪大肠菌群标准
粪大肠菌群标准粪大肠菌群是指存在于人体肠道内的一类细菌群，主要包括大肠杆菌、变形杆菌、肠球菌等。
这些细菌在人体内起着重要的生理功能，如有助于食物消化、维持肠道内微生态平衡等。
然而，当粪大肠菌群失衡时，可能会引发一系列肠道疾病，甚至对整体健康造成影响。
因此，对粪大肠菌群的标准进行科学规范是十分必要的。
首先，粪大肠菌群的标准应当包括对正常范围的界定。
根据相关研究表明，正常人体内的粪大肠菌群数量应当在一定范围内，超出范围可能会引发疾病。
因此，科学界需要对正常范围进行准确的界定，以便在临床实践中进行参考。
其次，粪大肠菌群的标准还应当包括对致病菌的检测和识别。
在粪便样本中，可能存在一些致病菌，如沙门氏菌、大肠杆菌O157等。
这些致病菌的存在可能会对人体健康造成严重威胁，因此，标准应当包括对这些致病菌的检测和识别方法，以便及时采取相应的措施。
另外，粪大肠菌群的标准还应当包括对影响因素的分析。
人体内的粪大肠菌群受到多种因素的影响，如饮食习惯、生活环境、用药情况等。
因此，标准应当对这些影响因素进行综合分析，以便更好地了解粪大肠菌群的变化规律。
除此之外，粪大肠菌群的标准还应当包括对异常情况的处理建议。
一旦发现粪大肠菌群异常，标准应当给出相应的处理建议，如调整饮食结构、使用益生菌等。
这些处理建议应当科学可行，有助于恢复粪大肠菌群的平衡。
综上所述，粪大肠菌群的标准对于人体健康具有重要意义。
科学界应当加强对粪大肠菌群的研究，制定科学合理的标准，以便更好地维护人体健康。
同时，人们在日常生活中也应当注重饮食卫生，保持健康的生活方式，以减少粪大肠菌群失衡带来的健康风险。
临床微生物SOP粪便标本细菌学检验标准操作规程
1.目的规范粪便标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2．适用范围粪便培养。
3．标本标本类型粪便、直肠拭子。
标本采集3.2.1 自然排便采集自然排便后，挑取其脓血、黏液部分2～3 g，液体粪便取絮状物2～3ml，盛于灭菌容器内，或置于保存液（运送培养基）、增菌培养基中送检。
3.2.2 直肠拭子如不易获得粪便时，或排便困难病人及婴儿，可用直肠拭子采取，即以无菌棉拭用保存液或生理盐水湿润后，插入肛门内4～5cm（幼儿2～3cm）轻轻转动取出，插入卡-布(Cary- Blair）运送培养基内或无菌容器内送检。
3.2.3 粪便标本应立即送检，室温保存不能超过2小时，如不能及时送检可以放人磷酸盐甘油（）或转运培养基，但不能超过24小时。
培养艰难梭菌的标本保存于-20℃以下。
培养沙门菌和志贺菌的标本应放置磷酸盐甘油溶液中保存。
(100mg/L)试剂。
保存弯曲杆菌和弧菌的标本，需加CaCl2标本拒收标准3.3.1 粪便标本放置时间超过2小时。
3.3.2 送检的粪便标本混有尿液。
3.3.3 直肠拭子未置于运送培养基中。
4. 试剂、仪器革兰染液、氧化酶试剂、麦康凯平板。
SS平板、TCBS平板及相关生化试剂等。
VITEK 鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性细菌药敏卡（GNS）、革兰阳性细菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性细菌药敏卡（GPS）。
真菌鉴定卡(YBC）药敏纸片、ATB板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
培养箱。
接种针、接种坏、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2诊断血清。
5. 细菌鉴定和药敏质控参见《质量管理程序》。
6. 检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
涂片检查粪便标本因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法辨别是否为病原菌。
因此，粪便标本一般不作涂片检查。
只有怀疑霍乱弧菌及菌群失调所致腹泻时，才作直接涂片检查（观察动力和菌群比例）。
培养6.2.1 沙门一志贺菌培养参见《沙门菌属检验标准操作规程》、《志贺菌属检验标准操作规程》。
粪便标本的细菌学检验
（二）培养与鉴定
7.艰难梭菌 将新鲜可疑标本（黄绿色或海蓝色稀水便）立即接种环
丝氨酸-甲氧头孢菌素-果糖琼脂（CCFA）平板和厌氧血琼脂 平板上，37°C厌氧培养48小时，CCFA上观察是否有黄色粗玻 璃状外观菌落形成，挑取可疑菌落进行纯培养并进行鉴定。
（二）培养与鉴定
8.真菌培养 粪便接种于含氯霉素的沙保弱琼脂平板或显色培养基，置 25~35°C和35°C培养24~48小时，取可疑菌落进行涂片和鉴定。
（二）培养与鉴定
2.肠病原性大肠埃希菌 引起腹泻的大肠埃希菌一般有5种类型，即产毒素大肠埃
希菌（ETEC）、肠致病性大肠埃希菌（EPEC）、肠侵袭性大肠 埃希菌（EIEC）、肠出血性大肠埃希菌（EHEC）以及肠聚集性 大肠埃希菌（EAggEC）。粪便标本接种于MAC或中国蓝琼脂平 板、显色培养基及SMAC平板，35°C培养18~24小时，挑取乳糖 发酵（EIEC不发酵或迟缓发酵）菌落穿刺接种三糖铁琼脂和尿 素动力靛基质培养基进行初步生化鉴定，并进行血清学分型。 一般为检测EHEC，大便标本可增加接种于山梨醇-麦康凯琼脂 平板（含1%山梨糖醇代替乳糖），EHEC不发酵山梨醇呈无色， 而其他大肠埃希菌能发酵呈红色，借此可快速分离处EHEC。
三、标本的运送
1．标本采集后应尽快送检 室温保存≤2小时 2．特殊细菌 艰难梭菌培养标本在4℃环境≤ 24小时；弯曲菌
与弧菌的标本需加入CaCl2(100mg/L) 3．置于运送培养基中的直肠拭子保存时间室温≤ 24小时
四、标本的验收
检查申请单信息填写是否完整、正确，包括标本 采集时间、采集方式、抗生素使用情况、标本量是否 足够、标本容器有无渗漏等
二 、阴性结果报告
1．显微镜检查 对于没有典型形态的细菌涂片，可报告
实验十二 粪便标本的细菌学检验(
志贺菌属：O K ：A-D群多价血清 ：A群 痢疾志贺菌 B群 福氏志贺菌 C群 鲍氏志贺菌 D群 宋内志贺菌
三 结果判断
1.生化反应结果 2.血清学鉴定结果
四 报告方式
1.初报： 2.终报：检出ХХ，并报告药敏结果 3.阴性报告：未检出沙门,志贺菌
五 临床意义
在健康人的肠道内经常存在大量的正常菌 群。对粪便进行细菌学检查，一方面可对肠 道正常菌群进行检测，预防菌群失调；另一 方面可从大量的微生物中找出病原菌，对一 些肠道疾病进行病原学诊断并通过药敏试验 为临床治疗提供参考弧 菌可引起霍乱，志贺菌可引起细菌性痢疾， 伤寒沙门菌可引起伤寒等。多种细菌本身或 其代谢产物可引起食物中毒，如沙门菌，弯 曲菌，葡萄球菌，副溶血弧菌，蜡样芽胞杆 菌等，粪便培养对细菌性食物中毒有确诊意 义。此外，一些少见的致病菌，如嗜水汽单胞菌， 类志贺邻单胞菌等也能引起人类腹泻及感染等。
实验十二 粪便标本 的细菌学检验（二）
一
目的要求
1.掌握粪便标本的采集方法 2.掌握粪便标本的细菌学检验程序和方法
二 实验内容
1.菌落形态观察 Mac SS 2.革兰染色 3.生化鉴定
4.血清学鉴定（玻片凝集法） 沙门菌属：O H Vi A-F多价O抗原诊断血清 O2 Ha 甲型副伤寒 O4 Hb 乙型副伤寒 O7 Hc 丙型副伤寒 O9 Hd 伤寒沙门菌
粪便标本的细菌学检验操作SOP微-004
单位及实验室名称项目汉源县人民医院检验科粪便标本的细菌学检验操作编号：LAB/SOP/HY/微-004日期：2010年5月3日版本：第一版，第0次修订第1页，共3页一、【标本采集】1.自然排便采集：选取有脓血、粘液部分的粪便2-3g，液状粪便则取絮状物，盛于灭菌的广口瓶或纸盒中，及时送检和接种。
2.直肠拭子：在无法获得粪便的情况下，可用经无菌生理盐水（或保存液）或增菌湿润的直肠拭子插入肛门4-5cm，（小儿2-3cm），轻轻转动一周，檫取直肠表面的粘液后取出，盛入无菌试管或保存液中送检。
二、【检验方法】1.直接涂片镜检：通常粪便标本可做直接镜检。
只有检查霍乱弧菌、结核分枝杆菌或疑似葡萄球菌假膜性肠炎时才需要直接涂片检查。
2.细菌的培养检查（1）痢疾杆菌及沙门氏菌培养：选取脓血、粘液样粪便直接接种于肠道菌选择培养基（如SS平板及中国兰或伊红亚甲蓝平板）各一个进行分离培养。
并同时分别接种于痢疾杆菌增菌液（GN），置35℃6h及沙门菌增菌培养基（亚硝酸盐、四硫酸盐培养基任选一种），置35℃增菌液培养16-18h后在分别转种上述平板，置35℃培养18-24h，观察有无菌落生长，可报告:“未分离出痢疾杆菌或未分离出沙门氏菌”。
若有可疑菌落应转种于双糖铁或三糖铁培养基，置35℃培养6-8h，观察结果。
（2）致病性大肠杆菌培养：将腹泻患儿的粪便标本划线接种于中国蓝或伊红亚甲蓝平板上，置35℃培养16-24h后观察菌落。
挑取可疑菌落移种于双糖、蔗糖蛋白胨水内，如符合大肠杆菌生化反应，则应挑取细菌或直接从上述平板取5-10个可疑菌落，分别于致病性大肠杆菌多价诊断血清进行玻片凝集试验。
如不凝集，可报告：“未培养出致病性大肠杆菌”；如凝集，则可报告：“培养出致病性大肠杆菌”；并与单价血清进行玻片凝集试验，进行分型鉴定。
（3）霍乱弧菌培养：①液体增菌培养：取米泔水样粪便或已接种于保存液的粪便悬液数滴至1ml，接种于10ml碱性蛋白胨水，置35℃增菌6-18h，取表面生长的菌膜做平板分离，同时选取表面生长物涂片做革兰染色，并做悬滴标本检查动力。
临床微生物SOP粪便标本细菌学检验标准操作规程
1.目的规范粪便标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2．适用范围粪便培养。
3．标本3.1 标本类型粪便、直肠拭子。
3.2 标本采集3.2.1 自然排便采集自然排便后，挑取其脓血、黏液部分2～3 g，液体粪便取絮状物2～3ml，盛于灭菌容器内，或置于保存液（运送培养基）、增菌培养基中送检。
3.2.2 直肠拭子如不易获得粪便时，或排便困难病人及婴儿，可用直肠拭子采取，即以无菌棉拭用保存液或生理盐水湿润后，插入肛门内4～5cm（幼儿2～3cm）轻轻转动取出，插入卡-布(Cary- Blair）运送培养基内或无菌容器内送检。
3.2.3 粪便标本应立即送检，室温保存不能超过2小时，如不能及时送检可以放人磷酸盐甘油（PH7.0）或转运培养基，但不能超过24小时。
培养艰难梭菌的标本保存于-20℃以下。
培养沙门菌和志贺菌的标本应放置磷酸盐甘油溶液中保(100mg/L)试剂。
存。
保存弯曲杆菌和弧菌的标本，需加CaCl23.3 标本拒收标准3.3.1 粪便标本放置时间超过2小时。
3.3.2 送检的粪便标本混有尿液。
3.3.3 直肠拭子未置于运送培养基中。
4. 试剂、仪器4.1 革兰染液、氧化酶试剂、麦康凯平板。
SS平板、TCBS平板及相关生化试剂等。
4.2 VITEK 鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性细菌药敏卡（GNS）、革兰阳性细菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性细菌药敏卡（GPS）。
真菌鉴定卡(YBC）药敏纸片、ATB板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
培养箱。
4.3 接种针、接种坏、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO24.4 诊断血清。
5. 细菌鉴定和药敏质控参见《质量管理程序》。
6.检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
6.1 涂片检查粪便标本因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法辨别是否为病原菌。
因此，粪便标本一般不作涂片检查。
只有怀疑霍乱弧菌及菌群失调所致腹泻时，才作直接涂片检查（观察动力和菌群比例）。
粪便标本细菌学检验
粪便标本细菌学检验1.检验目的：规范粪便标本细菌学检验，确保检验结果准确可靠。
2．适用范围粪便培养3. 标本采集3.1 标本采集3.1.1 自然排便采集法自然排便后，挑取脓血、粘膜部分的粪便2～3g，液体粪便取絮状物置于大便培养管或增菌液中送检。
3.2.2 直肠肛管法用大便培养用的肛管直接插入肛门成人4～5cm，幼儿2～3cm，轻轻在直肠内旋转数次，目的是使直肠表面粘液能通过肛管孔进入肛管内。
然后拔出放入大便培养管中送检。
4. 检验步骤4.1 接种4.1.1 普通培养：取脓性或病理部分大便按照分区划线的方法接种，接种麦康凯、SS平板，外观正常的大便多点挑取标本后按照分区划线的方法接种麦康凯平板。
必要时加种血平板。
4.1.2 霍乱弧菌的培养：直接取患者粪便，接种于碱性蛋白胨水增菌液。
增菌6-8小时候按照分区划线的方法接种4号平板，同时再次转种碱性蛋白胨水。
再次6-8小时后最后一次转种4号平板。
4.2 培养：SS平板、麦康凯平板、4号平板置于35℃培养箱培养18-48h，碱性蛋白胨水增菌液35℃培养箱培养6-8h4.4 结果观察4. 4.1 从培养箱中取出经过18-24h的培养物，按顺序排好。
4. 4.2 挑取可疑菌落，先做生化反应，同时分纯。
4号平板上菌落，应先在营养琼脂上分纯，再做氧化酶试验，否则会出现假阴性结果。
4. 4.3 如生化特性符合志贺或沙门菌属特征，做相应的血清凝集。
4. 4.3.1 如果凝集，报告某血清型。
4. 4.3.2 如不凝，加热后离心沉淀再做凝集。
4. 4.3.3 把生长特性、染色结果、初步生化结果记录在登记本上。
4. 4.4 如可疑弧菌菌落，氧化酶阳性，先做霍乱弧菌O1、O139血清凝集。
如凝集按传染病报告CDC。
4. 4.5 药敏：选用氨苄西林、复方磺胺、左旋氧氟沙星、头孢噻肟四种药敏纸片，KB法做药敏。
4.4.6 必要时保留菌种。
5. 结果报告：5.1 阴性结果报告：“未检出志贺、沙门菌；未检出霍乱弧菌”。
粪大肠菌群标准
粪大肠菌群标准粪大肠菌群是指存在于人体肠道内的一类细菌群，它们对人体健康具有重要影响。
粪大肠菌群标准是衡量人体肠道健康状况的重要指标之一。
在临床医学和生物学研究中，粪大肠菌群标准的检测和分析具有重要意义。
本文将对粪大肠菌群标准进行详细介绍，以便读者对其有更深入的了解。
粪大肠菌群标准的检测方法主要包括定量PCR、荧光原位杂交（FISH）、16S rRNA基因测序等。
这些方法可以准确地检测和分析粪大肠菌群的组成和数量，从而为临床诊断和研究提供重要依据。
通过检测粪大肠菌群标准，可以了解肠道微生态平衡的状况，及时发现和预防肠道相关疾病的发生。
粪大肠菌群标准的参考范围是指健康人群粪便中正常存在的大肠菌群数量和种类。
一般来说，粪大肠菌群标准的参考范围是10^7～10^9CFU/g，主要包括埃希菌、变形杆菌、大肠杆菌等。
当粪大肠菌群数量超出正常范围，或者某些致病菌的数量异常增多时，就可能导致肠道菌群失衡，引发肠道疾病。
粪大肠菌群标准与肠道健康密切相关。
良好的粪大肠菌群标准可以维持肠道内微生态的平衡，有利于食物消化吸收、免疫功能调节等。
而当粪大肠菌群标准异常时，就可能导致肠道疾病的发生，如肠道感染、炎症性肠病等。
因此，定期检测粪大肠菌群标准，对于维护肠道健康非常重要。
除了临床诊断外，粪大肠菌群标准的研究对于肠道微生态的科学认识也具有重要意义。
通过对粪大肠菌群标准的研究，可以深入了解肠道微生态的结构和功能，为肠道疾病的治疗和预防提供理论依据。
同时，粪大肠菌群标准的研究也为肠道微生态调节和干预提供了新的思路和方法。
综上所述，粪大肠菌群标准是衡量肠道健康的重要指标，对于临床诊断和肠道微生态研究具有重要意义。
通过检测和研究粪大肠菌群标准，可以更好地了解肠道健康状况，预防和治疗肠道疾病，促进人体健康。
因此，我们应该重视粪大肠菌群标准的检测和研究，加强对肠道健康的关注，促进肠道微生态平衡，维护人体健康。
11.2.4粪便标本细菌学检验
标本直接镜检
3.对于米泔样水样粪便的标本，采用悬滴法暗视野(或相差显 微镜)镜检，如发现细菌呈穿梭状极活泼的运动，则考虑为弧 菌感染。加入O1 群霍乱弧菌诊断多价血清或O139 血清，显 微镜下观察若运动停止则为制动试验阳性，应立即与当地卫生 防疫部门联系，并做好患者消毒隔离工作。
标本直接镜检
4.采用悬滴法镜检发现投镖式或螺旋式运动的细菌，革兰 阴性弧形、S形或螺旋形的小杆菌，提示弯曲杆菌感染。
检验。
送检指征
当腹泻患者出现以下任何一种情况时建议采集粪便标本，进行细 菌培养 重症腹泻 体温大于38.5 血便 便中有脓液 未经抗菌药物治疗的持续性腹泻患者 来自疫区的患者。
标本的采集与运送
标本的保存
不能及时培养的标本通常4 ℃ ,-6 ℃保存 培养艰难梭菌的标本应保存在-20 ℃ 以下 用缓冲盐甘油溶液保存培养沙门氏菌和志贺氏菌的标本 保存培养弯曲杆菌和弧菌的标本，需加CaCl2(100 mg / l)
分离培养
-大肠杆菌培养：挑取脓血、黏液的粪便接种于MAC或 EMB培养基
-金黄色葡萄球菌培养：接种于高盐甘露醇琼脂平板 -副溶血弧菌培养：增菌后接种与弧菌选择性培养基与SS 培养基。
分离培养
-小肠耶尔森培养：接种NYE、MAC及SS，分别置2225℃及37℃培养
-空肠弯曲杆菌：接种弯曲菌培养基，43℃微需氧培养 24-72h
检测肠道正常菌群，预防菌群失调
粪便标本中有各种正常菌群，形态上区分困难，一般不推 荐做直接涂片检查。
培养基的种类
强选择性培养基：SS 中等选择性培养基：XLD 弱选择性培养基：EMB（伊红美 蓝琼脂培养基）、MAC（麦康凯）等
分离培养
-沙门菌及志贺菌：增菌培养或直接接种于SS和MAC -霍乱弧菌：碱性蛋白胨水37℃增菌6h，挑取菌膜接种TCBS平板
大便细菌培养
大便细菌培养
大便的细菌培养由于大便组成的特殊而有其自身的特点。
肠道中有大量的细菌，其种类很多。
正常人肠道内常寄生有大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、念球菌等。
这些细菌在正常的肠腔内是不致病的。
但当肠道发生病理改变时也可以引起疾病。
常见的肠道致病菌有痢疾杆菌、沙门氏菌、霍乱弧菌、结核杆菌及嗜盐菌、变形杆菌等。
由于这些特点，所以要求在标本的采集处理及培养方法上都与其它标本有所不同。
采集大便标本一般以无菌棉纤拭取粪样，应选择含有粘液、脓液及血液的新鲜大便，置于消毒容器内，并及时送检。
同时应注意在发病初期（伤寒病人在发病两周时阳性率高）、未用抗生素之前采集，以提高阳性率。
对于痢疾，如无法获得粪便，也可采用直肠拭子，即用灭菌棉纤经生理盐水湿润后，插入肛门内4～5cm处轻轻转动后取出。
葡萄球菌所致的胃肠炎，可取粪便，亦可取呕吐物。
结核杆菌培养可取3～5g粪便，用饱和盐水漂浮法等集菌后，再置于试管内进行接种。
一般来讲，大便细菌培养的报告是比较可靠的。
它对于多种肠道疾病，如细菌性痢疾、伤寒、副伤寒、霍乱、嗜盐菌食物中毒等疾病的诊断和鉴别诊断很有意义。
粪便细菌学规范
粪便细菌学规范实验室常规检查是细菌培养，沙门氏菌、志贺氏菌、邻单胞菌和气单胞菌、副溶血性弧菌、致泻性大肠杆菌作为实验室常规培养的主要腹泻病原菌。
一、标本采集与运送：1．标本采集（1）标本采集尽可能在发病早期和应用抗菌药物治疗之前。
在不同的时间采集2~3份标本可以提高致病菌的分离率。
（2）自然排便采集粪便标本时，取有脓血、粘液、组织碎片部分的粪便1～3g。
液体粪便则取絮状物，一般取1～3ml，直接装入粪便容器或保存液或运送培养基中送检。
（3）直肠拭子采集粪便标本，检查带菌者时可以采取肛拭（棉拭先用保存液或增菌培养基湿润），深入肛门内7~10cm除采样，不能及时接种时，应将标本放入保存液内。
(4)容器应清洁、带盖、广口的（不宜使用纸盒）、送检的标本中不能加入防腐剂。
2．标本运送（1）粪便标本应尽快送检，室温条件下不能超过2h。
如不能及时送检可加入pH7.0的磷酸盐甘油或转运培养基，但不宜超过24h。
使用改良Cary-Blair培养基时，不能运送培养志贺氏菌的标本。
（2）直肠拭子采集的标本必须置入运送培养基或GN肉汤中送检，转运时间不宜超过2h。
（3）高度怀疑霍乱弧菌感染的标本运送必须符合特殊标本的安全要求。
（4）直肠活检标本用粪便容器送检，内盛少量无菌蒸馏水以防止沉淀。
3．标本保存不能及时检验的标本通常4-6℃保存，用磷酸缓冲盐甘油溶液保存培养沙门氏菌和志贺氏菌的标本，保存培养弯曲杆菌和弧菌的标本，需加CaCl2(100mg/L)。
二、标本镜检粪便标本直接镜检找到大量多核白细胞，提示侵袭性致病菌感染。
如果是由肠道菌群紊乱引起的腹泻，革兰氏染色结果可以提示是酵母菌还是葡萄球菌感染。
2.革兰氏染色制备一张薄的粪便涂片，采用常规革兰氏染色方法。
镜下观察是否有大量WBC，成丛的革兰氏阳性球菌，酵母菌。
采用悬滴法镜检发现投镖式或螺旋式运动的细菌，革兰阴性弧形、S形或螺旋形的小杆菌，提示弯曲杆菌感染。
三、细菌培养及培养基的选择1．腹泻病原菌常规培养对患者粪便标本进行腹泻病原菌常规培养，包括沙门氏菌、志贺氏菌、致泻性大肠杆菌、邻单胞菌、气单胞菌，致病性弧菌。
实验五 粪标本的微生物学检验
种类
病原菌
革兰阳性菌 革兰阴性菌
真菌
金黄色葡萄球、厌氧链球菌、肠球菌、结核分枝杆菌、产气荚膜 梭菌、艰难芽胞梭菌、蜡样芽胞杆菌
伤寒杆菌及其它沙门菌、志贺菌、弯曲菌、致病大肠埃希菌、霍 乱弧菌、副溶血弧菌 、气单胞菌、邻单胞菌、小肠结肠炎耶尔森 菌
白假丝酵母菌
病毒
轮状病毒
粪便标本的检验程序
粪便标本或肛拭子标本
增菌液：本培养基含有胆盐、枸橼酸盐对革 兰氏阳性菌有抑制作用，而对革兰氏阴性 菌有增菌作用，接种标本小时内，大肠杆 菌、变形杆菌及假单胞菌在此培养基中生 长迟缓，而志贺菌、沙门氏菌生长较迅速。 故常于接种粪便～小时，再自此增菌液内 接种至平板、平板中。
• 亚硒酸盐增菌液： • 本培养基中的．亚硒酸钠可抑制革兰氏阳性菌
实验六
粪便标本的微生物学检验
• 实验目的： • 掌握粪便标本的采集与处理、常见病原菌
及一般微生物学检验程序。 • 掌握沙门氏菌和志贺氏菌的鉴定方法；熟
悉它们的生物学性状。
• 粪便标本的采集与处理：
• 自然排便采集法：自然排便后，挑取粪便～克于无菌 的容器内送检。应尽可能取有脓血、粘液的标本。
• 肛拭子法：不易获得粪便的患者或作厌氧菌培养时， 常采用此法。将无菌棉拭子用无菌生理盐水湿润后， 插入肛门约～厘米（幼儿约～厘米）处，轻轻旋转， 擦取直肠表面粘液后取出，置无菌试管内送检。除婴 幼儿外，不推荐用棉拭子做常规病原菌培养。
的生长，对革兰氏阴性菌也有毒性，但磷酸钠 有中和此毒性的作用，能使肠道致病菌迅速繁 殖。磷酸氢二钠与磷酸二氢钠有缓冲作用，有 利于肠道致病菌生长。
• 平板：是专用志贺菌、沙门菌分离培养用的一种强选择性培养基。 • 胆盐能抑制革兰氏阳性菌生长，煌绿抑制大肠杆菌的生长。促进
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粪便细菌学检验操作规范实验室常规检查是细菌培养，沙门氏菌、志贺氏菌、邻单胞菌和气单胞菌、副溶血性弧菌、致泻性大肠杆菌作为实验室常规培养的主要腹泻病原菌。
一、标本采集与运送：1．标本采集（1）标本采集尽可能在发病早期和应用抗菌药物治疗之前。
在不同的时间采集2~3份标本可以提高致病菌的分离率。
（2）自然排便采集粪便标本时，取有脓血、粘液、组织碎片部分的粪便1～3g。
液体粪便则取絮状物，一般取1～3ml，直接装入粪便容器或保存液或运送培养基中送检。
（3）直肠拭子采集粪便标本，检查带菌者时可以采取肛拭（棉拭先用保存液或增菌培养基湿润），深入肛门内7~10cm除采样，不能及时接种时，应将标本放入保存液内。
(4)容器应清洁、带盖、广口的（不宜使用纸盒）、送检的标本中不能加入防腐剂。
2．标本运送（1）粪便标本应尽快送检，室温条件下不能超过2h。
如不能及时送检可加入pH7.0的磷酸盐甘油或转运培养基，但不宜超过24h。
使用改良Cary-Blair培养基时，不能运送培养志贺氏菌的标本。
（2）直肠拭子采集的标本必须置入运送培养基或GN肉汤中送检，转运时间不宜超过2h。
（3）高度怀疑霍乱弧菌感染的标本运送必须符合特殊标本的安全要求。
（4）直肠活检标本用粪便容器送检，内盛少量无菌蒸馏水以防止沉淀。
3．标本保存不能及时检验的标本通常4-6℃保存，用磷酸缓冲盐甘油溶液保存培养沙门氏菌和志贺氏菌的标本，保存培养弯曲杆菌和弧菌的标本，需加CaCl2(100mg/L)。
二、标本镜检粪便标本直接镜检找到大量多核白细胞，提示侵袭性致病菌感染。
如果是由肠道菌群紊乱引起的腹泻，革兰氏染色结果可以提示是酵母菌还是葡萄球菌感染。
2. 革兰氏染色制备一张薄的粪便涂片，采用常规革兰氏染色方法。
镜下观察是否有大量WBCs，成丛的革兰氏阳性球菌，酵母菌。
3.水样粪便的标本，采用悬滴法暗视野（或相差显微镜）镜检，如发现细菌呈穿梭状极活泼的运动，则考虑为弧菌感染。
加入O1群霍乱弧菌诊断多价血清或O139血清，显微镜下观察若运动停止则为抑动试验阳性。
采用悬滴法镜检发现投镖式或螺旋式运动的细菌，革兰阴性弧形、S 形或螺旋形的小杆菌，提示弯曲杆菌感染。
三、细菌培养及培养基的选择1．腹泻病原菌常规培养对患者粪便标本进行腹泻病原菌常规培养，包括沙门氏菌、志贺氏菌、致泻性大肠杆菌、邻单胞菌、气单胞菌，致病性弧菌。
此外，也包括可引起菌群失调的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和酵母菌。
粪便标本至少应接种血平皿、HE（XLD或SS）、EMB（或MAC或中国兰）等培养基。
沿海地区还需增加TCBS琼脂培养基。
补充说明：（1）SS培养基对部分志贺氏菌有抑制作用。
（2）常用的肠道选择性培养基（如SS等）对气单胞菌、邻单胞菌有抑制作用，初次分离时应接种血平皿和MAC。
（3）若用EMB（伊红美兰）、MAC（麦康凯）等培养基培养后，未检出常见致病菌，但感染性腹泻症状明显，可重新采集粪便标本接种GN 肉汤，35℃培养4-6h，再转种HE（肠道琼脂）等培养基，进一步分离培养。
（4）如怀疑沙门氏菌感染，可先用SF肉汤（亚硒酸盐增军液），以提高检出率。
（5）正常人体肠道内可以存在金黄色葡萄球菌，因此只有每克粪便细菌数达到105CFU时才有临床意义。
（6）气单胞菌能够在常规的鉴别培养基如MAC和EMB上生长，但选择性培养基更有助于检出气单胞菌。
选择性培养基：每10ml的BAP（血琼脂平板）培养基加入10mg氨苄西林（BAP-AMP）。
（7）邻单胞菌可以在一些常规鉴别培养基如MAC或HE生长，但选择性培养基更有助于检出邻单胞菌。
选择性培养基：IBB琼脂（肌醇-亮绿-胆盐琼脂）。
2．腹泻病原菌的增菌培养早期培养物传代培养后使用增菌肉汤培养，能提高低数量菌的检出率。
常用增菌液有：GN肉汤：用于沙门氏菌和志贺氏菌的增菌培养，严格保证培养4-6h 后即进行传代。
SF肉汤：主要用于沙门氏菌的增菌培养，经36℃培养24h后，接种鉴别培养基进行分离培养。
TT肉汤：主要用于沙门氏菌的增菌培养，但不包括伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌，培养12h后尽快传代。
碱性蛋白胨水：主要用于弧菌增菌，35-37℃培养5-8h后，传代到TCBS平板上培养。
四、培养物鉴定1、志贺氏菌的鉴定志贺氏菌属包括4个种即痢疾志贺氏菌（S.dysenteriae）、福氏志贺氏菌（S.flexneri）、鲍氏志贺氏菌（S.boydii）、宋内氏志贺氏菌（S.sonnei）。
志贺氏菌血清学分群分为A、B、C、D四群。
目前，A群含有15个血清型，B群含有8个血清型（前5个血清型又进一步分为11个亚型），C群含有19个血清型，D群只含有1个血清型。
对于肠道培养基上可疑为志贺氏菌的菌落，首选鉴定试验：赖氨酸脱羧酶试验、动力试验、葡萄糖产气试验、粘液酸盐试验、克氏柠檬酸盐试验、乙酸盐实验。
志贺氏菌上述这7个试验均为阴性。
志贺氏菌还必须进行血清学鉴定，可使用玻片凝集方法。
但对于生化试验符合志贺氏菌而血清凝集试验弱阳性或不凝集时，应制备生理盐水菌悬液，100℃水溶15~30min，冷却后观察自凝现象，如果自凝试验阴性，再进一步使用抗血清做凝集试验。
2、沙门氏菌的鉴定沙门氏菌种及其亚种鉴定沙门氏菌属在含有乳糖的鉴别培养基经36℃培养18-24h后，其菌落一般为无色透明或半透明，中等大或叫较小，边缘整齐、光滑，稍呈隆起。
多数沙门氏菌因产生硫化氢，在SS、HE培养基上可形成中心带黑色或墨绿色的菌落。
生化反应鉴定为沙门氏菌或志贺氏菌的菌株还要进行血清学鉴定确定菌体抗原（O抗原）。
沙门氏菌和志贺氏菌都应进一步进行血清学和全面生化鉴定。
3、弯曲杆菌的鉴定培养24-48h后检查弯曲杆菌的特征性菌落：有扁平的、能扩散的、可以弥漫整个平板表面的菌落；有很小的、凸起的、半透明的菌落。
颜色可为灰色、黄色或粉红色。
氧化酶试验阳性。
取可疑形态菌落进行革兰氏染色。
由于常规革兰氏染色时弯曲杆菌不易着色，可用蕃红或石炭酸复红染液染片3min。
最适于弯曲杆菌的染色方法是用0.1% 的碱性复红染液染片3min。
显微镜下观察弯曲杆菌是小的、轻度弯曲的G—杆菌，呈“S”型或海鸥型。
动力试验：弯曲杆菌悬于肉汤培养液如营养肉汤或Mueller-Hinton(M-H)肉汤中，用相差显微镜或光学显微镜观察动力，盐水和蒸馏水可能抑制其动力。
血清学试验：用玻片乳胶凝集试验商品试剂盒能鉴定到属的水平即空肠弯曲杆菌、海鸥弯曲杆菌和大肠弯曲杆菌。
此试验是检测以上3种细菌的细胞壁抗原。
当抗原与用弯曲杆菌抗体包被的乳胶颗粒悬液发生反应时即产生凝集现象。
DNA探针：DNA探针商品试剂盒能鉴定出空肠弯曲杆菌、大肠弯曲杆菌和海鸥弯曲杆菌，但不能进行种间鉴别。
该试剂盒利用非放射性检测系统4h内即获得快速检测结果。
快速马尿酸盐水解试验：马尿酸盐试验阳性鉴定为空肠弯曲杆菌，马尿酸盐试验阴性需进一步鉴定。
萘丁酸和头孢噻吩敏感试验：制备2-3mlBHI或Mueller-Hinton(M-H)肉汤微菌悬液。
将菌悬液均匀涂布于血平板使菌落融合生长。
再将30ug萘丁酸和30ug头孢噻吩纸片贴在平板上。
在弯曲杆菌的微需氧环境下培养24h，如纸片周围出现抑菌环为敏感。
4、弧菌的鉴定观察培养后的TCBS平板，挑选符合弧菌菌落颜色和生长特征的菌落进行鉴定，生化筛选结果阳性的菌落应进行全面生化鉴定。
TCBS 平板上培养48h后方能报告阴性结果。
一些大肠杆菌、弯曲杆菌和肠球菌也可以在TCBS培养基中生长，但通常情况下其菌落小且为半透明。
变形杆菌发酵蔗糖产生的黄色菌落一定要仔细与弧菌的黄色菌落相区别。
邻单胞菌和气单胞菌都可以在TCBS平板上生长，它们通常形成蓝色菌落。
选血平板上非假单胞菌落进行氧化酶试验，氧化酶阳性可能为弧菌或气单胞菌。
常规肠道培养基上生长的弧菌不发酵乳糖。
与腹泻性疾病相关的弧菌要鉴定到“种”的水平。
嗜水气单胞菌易被错误鉴定为河弧菌。
河弧菌可通过以下1个或2个试验鉴别：O/129敏感试验（备0.5 McFarland标准菌悬液，涂布M-H琼脂平板，贴上50ugO/129的纸片，35-37℃培养24h，观察抑菌环，河弧菌Ｏ/129敏感，气单胞菌Ｏ/129耐药）；NaCl刺激生长试验（分别接种不含NaCl和含1% NaCl的营养肉汤，35-37℃培养18-24h，观察生长状况。
气单胞菌在不含NaCl和含1%NaCl的营养肉汤中均不生长，河弧菌是一种嗜盐弧菌，没有NaCl不生长，在含1%的NaCL营养肉汤中生长。
血清学鉴定霍乱弧菌：用霍乱弧菌O1抗血清鉴定霍乱弧菌。
O1群霍乱弧菌和非O1群霍乱弧菌都能引起霍乱样疫病，但O1群菌株最易引起流行。
将可疑菌落尽早用非选择性培养基进行密集划线传代，35-37℃培养5-8h后制成奶样菌悬液，在玻片上将1滴此菌悬液与1滴抗血清混合，晃动玻片1min，观察是否凝集，凝集反应阳性提示为霍乱弧菌O1群，然后再通过生化反应验证血清学鉴定。
实验室如果无O1群抗血清储备，一定要将霍乱弧菌分离物送至当地卫生防疫机构实验室。
5、致病性大肠埃希氏菌的鉴定目前尚无稳定特异的生化试验能鉴别粪便标本中致病性大肠埃希氏菌和非致病性大肠埃希氏菌。
EPEC、ETEC、EIEC和STEC 的血清型只作为鉴定致病性大肠埃希氏菌的一个方面。
确证大肠埃希氏菌致病性的方法有：细胞毒素测定、侵袭试验、DNA探针检测致病基因、组织培养测定细胞毒素等。
（1）STEC（以前称EHEC）:发病5天内留取粪便标本，大肠埃希氏菌O157：H7是最常见的能引起出血性结肠炎的血清型，但EPEC O26：H11和O111也能产生细胞毒素而引起此综合征。
在山梨醇麦康凯培养基上为无色菌落。
鉴定：选择5-10个乳糖阳性菌落接种于山梨醇麦康凯平板培养基上进行山梨醇发酵试验，选择5-10个山梨醇发酵试验阴性菌落进行O157抗血清和H抗血清试验，用O157抗血清凝集阳性的菌落进行生化鉴定。
赫氏埃希氏菌（E.hermannii）也能凝集O157抗血清。
致病性研究：检测粪便中的细胞毒素和分离物产生细胞毒素的能力。
大肠埃希氏菌O157及其它STEC可以在粪便标本中产生细胞毒素。
将经过鉴定的大肠埃希氏菌O157：H7提交有关实验室进行细胞毒素检测。
注意：不是所有的O157：H7血清型都可产生细胞毒素。
（2）ETEC ：在初次分离培养基上ETEC不能与其它非致病性大肠埃希氏菌相区别。
从初次分离平板上取10个菌落分别进行埃希氏菌纯化培养、鉴定为大肠埃希氏菌。
对可疑菌株进行毒素研究，将上述10个菌落的分离物进行热稳定或热不稳定肠毒素试验，方法有ELISA法、胶乳凝集试验或DNA探针技术。
如高度可疑应将分离物和粪便标本送到有关实验室检测。