罗丹明B紫外-可见吸收光谱实验报告手册

实验标准曲线法测定罗丹明B的含量

1．实验目的

（1）了解紫外-可见分光光度计的结构及使用方法。

（2）掌握标准曲线法定量分析的技术，了解紫外可见光谱法进行纯组分定量分析的全过程。

（3）掌握不同浓度的配制和样品含量的计算。

2．实验原理

E1 带和E2 带是苯环上三个双键共轭体系中的π电子向π*反键轨道跃迁的结果，可简单表示为π→π * 。

B带也是苯环上三个双键共轭体系中的π→π * 跃迁和苯环的振动相重叠引起的，但相对来说，该吸收带强度较弱。

以上各吸收带相对的波长位置由大到小的次序为：R、B、K、E2、E1 ，但一般K和E带常合并成一个吸收带。

与可见光吸收光谱一样，在紫外吸收光谱分析中，在选定的波长下，吸光度与物质浓度的关系，也可用光的吸收定律即朗伯—比尔定律来描述：A= lg (Io /I) =ε bc

其中A为溶液吸光度，Io为入射光强度，I为透射光强度，ε为该溶液摩尔吸光系数，b为溶液厚度，c为溶液浓度。

特征峰：

1. 吸收峰的形状及所在位置

——定性、定结构的依据

2. 吸收峰的强度——定量的依据

A = lg(1/T)=κCL

T：透射率

λ：摩尔吸收系数，单位：L·cm⁻¹·mol⁻¹

C：浓度

L：光程长

紫外可见光谱的两个重要特征

波峰：λmax, κ

例：λmaxEt = 279 nm (κ=5012，logk=3.7)

3．仪器与试剂

仪器：紫外分光光度计，移液管，吸耳球，微量注射器。

试剂：罗丹明B溶液。

4．实验内容与步骤

（1）标准曲线的绘制

配制一系列标准浓度的罗丹明B水溶液，用水作空白溶液，测紫外吸收光谱，确定λmax，绘制c-A标准曲线。（罗丹明B原液浓度1.000mM）（2）未知罗丹明B溶液的紫外可见光谱

以水为空白溶液，测未知罗丹明B溶液的的紫外可见吸收光谱。

5．数据处理

（1）制作标准曲线。

（2）根据未知罗丹明B溶液在λmax的A，在标准曲线上查浓度。