转染试剂
广东转染试剂类型
广东转染试剂类型
广东转染试剂类型
广东省作为全国经济重心之一，其科技实力在行业内也是一直走在前列。
转染试剂作为生物科研中不可缺少的试剂之一，在广东制造商也
有相当的生产水平和供应能力。
转染试剂，是指将外来的目的基因（DNA、RNA等）引入到靶细胞内，并使其表达的试剂。
其种类繁多，在广东也有着相应的常规类型。
1. 磷脂体基转染试剂
主要由磷脂体和质粒DNA组成，优点是容易制备和操作，适合于大规模生产。
缺点是转染率相对不高，有一定的毒性。
2. 聚乙烯酰胺转染试剂
聚乙烯酰胺（PEI）是一种化学合成剂，使用时与DNA分子组合形成
复合物，可以将DNA有效转染到细胞内。
优点是转染率高且毒性低，目前在广东科研中得到广泛应用。
3. 蛋白质/肽转染试剂
蛋白质/肽转染试剂通常是根据蛋白质或肽与DNA分子的作用机制设计制备的，可以有效地将目的分子转染到靶细胞内。
优点是转染效率高且无毒性，但缺点是价格昂贵。
4. 常规转染剂
常规转染剂是一类较为通用的转染试剂，主要包括羧甲基纤维素钠（CMC-Na）、聚乙烯醇（PVA）、去离子水等，优点是价格低廉且易于操作，但其转染效率较低，通常适用于一些较为简单的试验。
总体来说，转染试剂在广东科研中扮演着不可或缺的角色，其种类繁多，需根据实验需要选择合适的试剂。
在使用转染试剂时，需注意试剂质量和实验条件，以确保实验结果的准确性和科学性。
RNAi-Mate转染试剂操作手册说明书
目录号 C-01
产品说明 RNAi-Mate 转染试剂
规格 0.1mL
价格 ￥160
交货期限 2 个工作日
操作方法
一、体外转染方法 1. 细胞培养
可广泛应用于多种细胞系的DNA和siRNA转染。已成功地应用于多种代表各种来源的细胞类 型,包括 Hela(人宫颈癌细胞), MCF-7(人乳腺癌细胞), Hep3B(人肝细胞癌细胞), COS-7(猴肾细胞), Neuro-2a(鼠神经 母细胞瘤细胞),NIKS(人角质化细胞),C6(鼠神经胶质瘤细胞), DLD-1(人结肠癌细胞), NIH/3T3(鼠胚胎成纤维细 胞), HT-29(人结肠腺癌细胞), A549(人肺癌细胞), CHO-k1(仓鼠卵巢细胞)和293(腺病毒5 DNA转化的人胚胎 肾细胞), SVRbag4细胞。
3. 细胞出现明显死亡
问题 与细胞生存相关的关键基因被关闭
细胞状态欠佳
siRNA/RNAi-Mate(或DNA/RNAiMate) 复合物浓度过高
重新设计实验
建议
使用传代次数较低的细胞;细胞接种后在24小时内达 到70-90%,并在24小时内完成转染
siRNA/RNAi-Mate(或 DNA/RNAi-Mate)浓度过高 时,有时也会产生毒性
4.悬浮细胞转染程序 本程序适用于使用24孔板悬浮细胞的转染。选用生理状态良好的细胞对提高转染效率很重要。 siRNA(DNA)和DNA的用量和两者的比例可在推荐范围内适当调整。 4.1 转染的当天,收集细胞离心,重悬。 4.2 在50μl的DMEM(或Opti-MEM, 或其他无血清培养基)无血清培养基加入20pmol siRNA(或 0.8μg DNA), 柔和混匀。 4.3 混匀RNAi-Mate试剂,用50μl无血清的DMEM或Opti-MEM,或其他无血清培养基)稀释 1μl RNAi-Mate试剂(DNA转染时,则加入2μl RNAi-Mate试剂),轻轻混匀,室温放置5分钟。 4.4 将稀释好的siRNA和RNAi-Mate试剂混合;轻柔混匀,室温放置20分钟,以便形成siRNA/RNAiMate(或DNA/RNAi-Mate)复合物。 4.5 将100μl siRNA/RNAi-Mate(或DNA/RNAi-Mate)复合物加到含有细胞和培养基的培养板的孔 中,来回轻柔摇晃细胞培养板。 4.6 再加入400μL细胞悬浮液(细胞数量决定于细胞类型和转染后分析测试的时间)。 4.7 细胞在37℃温育24h-48h后进行转染后的其它步骤。如果细胞株比较敏感,孵育4-6小时后,除去 复合物,更换培养基。
各种转染试剂的中文转染方法
各种转染试剂的中文转染方法FuGENE6（Roche）转染步骤：转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。
将细胞以1-3×105/2 ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。
将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。
使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。
1. 在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总体积到100 ul。
2. 将3-6 ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。
3. 加入1-2 ug的DNA溶液（0.02－2.0 ug/ul），轻弹管壁混合。
4. 室温孵育20分钟。
5. 将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1 ml不含血清和双抗的营养液洗涤一次，再加入2 ml不含血清和双抗的营养液。
6. 将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。
7. 3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。
Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）：1. 转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。
细胞铺板在2 ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
2. 对于每孔细胞，使用250 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释4.0 ugDNA，轻轻混匀。
3. 使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用250 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释10 ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。
Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。
NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。
4. 混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。
室温放置20分钟。
5. （optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。
转染试剂的转染过程及特点
转染是将核酸导入真核细胞中的过程。
相关实验方案和技术包括转染试剂（脂质体转染、阳离子聚合物转染等）、以及化学法（DEAE-葡聚糖法、磷酸钙法等）或物理方法（如电穿孔、基因枪粒子轰击法、显微注射等）。
其中，转染试剂已然成为实验室细胞转染主流方法。
转染试剂是新一代的阳离子聚合物基因转染试剂，已被广泛应用于体外细胞转染和动物体内转染、众多原代细胞和转化细胞株转染、瞬时转染和稳定转染、贴壁细胞和悬浮细胞转染等。
具有高效转染、细胞毒性很低，不被血清清除、操作简便易行，高重复性等特点。
特点
● 转染效率高
对原代培养细胞HUV-EC有较高的转染效率，而大多数阳离子脂质体对此细胞的转染效率很低。
● 细胞毒性低
在正确的转染方法及条件下，常用的细胞存活率高于90%。
● 试剂不被血清清除，转染操作简单
新型转染试剂不被血清清除，转染时可直接将转染试剂/DNA复合物直接加到细胞培养基中，无需更换培养基质和清洗细胞，整个操作过程可在半小时内完成。
图1.与传统转染实验程序比较
● 适应于体外细胞转染和动物体内转染、众多原代细胞和转化细胞株转染、瞬时转染和稳定转染、贴壁细胞和悬浮细胞转染等。
●新型转染试剂成功转染的部分细胞株：。
PEI细胞转染液使用方法(标准版)
PEI细胞转染液是一种广泛应用于实验室的转染试剂，用于将外源DNA或RNA 转染到细胞中。
以下为PEI细胞转染液的标准使用方法：一、准备工作1. 细胞：选择合适的细胞类型，如HEK293、CHO等。
确保细胞状态良好，密度适中。
2. 转染试剂：PEI细胞转染液。
3. 外源DNA或RNA：需转染的基因或表达载体。
4. 实验器材：离心机、显微镜、培养皿、移液器等。
二、操作步骤1. 细胞培养：将细胞接种于适当的培养皿中，用含适当抗生素的培养基培养细胞。
将培养皿放入37℃、5% CO₂的培养箱中，进行细胞培养。
2. 转染液制备：根据实验要求，将PEI细胞转染液按照一定比例稀释。
一般情况下，可以使用10倍稀释的PEI细胞转染液。
3. 转染操作：（1）将稀释后的PEI细胞转染液与外源DNA或RNA混合均匀。
（2）用移液器将混合液滴加到细胞培养皿中，注意不要直接将液体倒在细胞上，以免破坏细胞。
（3）将培养皿轻轻摇晃，使转染液与细胞充分接触。
然后将培养皿放入培养箱中，继续培养。
4. 转染后处理：转染后的细胞需要继续培养，观察转染效果。
根据实验要求，可使用荧光显微镜、实时定量PCR等方法检测转染效果。
三、注意事项1. 操作过程中，应确保实验器材干净无菌，避免污染。
2. 转染过程中，应控制转染液的浓度和滴加速度，避免对细胞造成过度刺激。
3. 转染后，注意观察细胞状态，如出现异常情况，应立即处理。
4. 实验过程中，应遵循实验室安全规定，确保人身安全。
以上为PEI细胞转染液的标准使用方法。
实际操作过程中，可能因实验条件、细胞类型等因素而有所调整。
在实际应用中，请根据具体情况进行操作。
lip3000转染说明书
Lip3000转染说明书一、引言本说明书旨在提供关于使用Lip3000进行转染实验的详细步骤和操作注意事项。
Lip3000是一种常用的基因转染试剂，适用于各种细胞类型的转染，无论是质粒DNA转染还是RNA干扰实验。
本转染试剂的使用方法简单且高效，能够快速将外源基因导入到细胞内。
在进行Lip3000转染实验之前，请阅读本说明书并仔细按照步骤进行操作。
二、实验材料•Lip3000转染试剂•承载目标基因的质粒DNA（或RNA）•细胞培养基•细胞培养器具（离心管、无菌培养皿等）•离心机•PCR仪（或其他适用于转染验证的仪器）三、实验步骤1. 细胞预处理在进行转染之前，首先需要对待转染细胞进行预处理。
以下是一般的细胞预处理步骤：1.将细胞培养在含有适宜培养基的培养皿中，以确保细胞处于最佳状态。
2.细胞密度应达到80%~90%的收缩。
注意不要使细胞超过90%的收缩，否则会影响转染效率。
3.在转染前，将培养皿中的培养基抽去，并用预暖的PBS洗涤细胞，以确保细胞表面不含有培养基或其他干扰物。
2. 转染操作请按照以下步骤进行转染操作：1.将Lip3000转染试剂放在室温下静置10分钟，使其回到室温并充分混匀。
2.在一个无菌离心管中，将转染试剂按照以下比例混合：–将500μl Opti-MEM培养基加入离心管中；–加入2.5μl Lip3000试剂，轻轻混匀；–静置20分钟，使转染试剂和培养基充分结合。
3.将预处理后的细胞培养皿中的PBS抽去，加入稀释后的Lip3000转染试剂。
注意：转染试剂的添加量需根据细胞的情况进行优化，典型的转染试剂与细胞的最佳比例为2:1。
4.搅拌培养皿或转动培养皿，使转染试剂均匀分布在培养皿上的细胞中。
5.保持培养皿平放，在37°C的细胞培养箱中孵育转染混合液4至6小时。
细菌转染时间的长短根据细胞的特性和转染效果进行调整。
3. 转染验证与后续处理待转染时间到达后，即可以进行转染效果的验证。
各种转染试剂中文说明
FuGENE6（Roche）转染步骤:转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。
将细胞以1-3×105/2ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。
将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。
使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。
1.在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总体积到100ul。
2.将3-6ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。
3.加入1-2ug的DNA溶液（0.02－2.0ug/ul），轻弹管壁混合。
4.室温孵育20分钟。
5.将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1ml不含血清和双抗的营养液洗涤一次，再加入2ml不含血清和双抗的营养液。
6.将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。
7.3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。
Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）：1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。
细胞铺板在2ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
2.对于每孔细胞，使用250ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释4.0ugDNA，轻轻混匀。
3.使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用250ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释10ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。
Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。
NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。
4.混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。
室温放置20分钟。
5.（optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。
加入2ml无血清配养基。
转染试剂的作用原理
转染试剂的作用原理一、转染试剂的基本概念转染试剂是一种用于将外源基因或其他生物分子转移到目标细胞中的化学物质。
转染试剂可以通过物理或化学方法改变细胞的通透性，使外源物质能够进入细胞内，并达到转染的目的。
转染试剂在基因治疗、基因表达研究和细胞工程等领域广泛应用。
二、转染试剂的分类转染试剂按照机理和性质的不同可分为多种类型，常见的转染试剂包括：1.脂质体（Liposome）：脂质体是由磷脂双分子层构成的微小囊泡，可与细胞膜融合，将目标物质转移到细胞中。
2.内源蛋白介导的转染：通过利用特定的蛋白质，如病毒衣壳蛋白或细胞内运输蛋白，将目标物质转移到目标细胞中。
3.阳离子聚合物：阳离子聚合物具有正电荷，能够与负电荷的DNA或RNA结合形成复合物，进而转染入细胞。
4.高分子基质：高分子材料如凝胶、纤维或微球等可用于载体，将目标物质与细胞接触，实现转染。
5.电穿孔：利用电场或离子流导致细胞膜破裂，使目标物质通过细胞膜进入细胞质。
三、脂质体转染试剂的作用原理脂质体是一种常用的转染试剂，其作用原理主要包括以下几个步骤：1.与DNA结合：脂质体通过与目标DNA相互作用，形成脂质体-DNA复合物。
脂质体由于其亲油性能与DNA中的疏水部分相互作用，同时脂质体表面带有正电荷，可以与DNA的负电荷相吸引。
2.细胞摄取：脂质体-DNA复合物与细胞膜结合后，脂质体会在细胞膜上形成微囊泡。
随后，微囊泡与细胞膜融合，释放出脂质体-DNA复合物进入细胞质。
3.脱脂质体：脂质体在细胞质中逐渐失去其亲油性，释放出DNA。
由于脂质体-DNA复合物在细胞膜上的微囊泡中形成的电位差，使得DNA被吸引到细胞核附近。
4.核入：DNA由细胞质进入细胞核，最终与染色体结合或进入细胞核内的胞浆，实现转基因。
四、脂质体转染试剂的优缺点脂质体转染试剂具有一些优点和缺点，需要根据实际应用情况选择使用：优点：1.安全性：脂质体转染试剂大多采用合成非病毒载体，通常比病毒载体更安全，不会引起病毒感染及遗传毒性。
高效真核转染试剂
高效真核转染试剂( VigoFect )产品说明：本试剂采用一类阳离子非脂性物质为主的配方，可以与DNA形成稳定的复合物，透过细胞膜进入细胞内，并保护DNA免受核酸酶的降解。
该试剂对细胞毒性很小，可在含血清与抗生素的完全培养液中充分发挥作用。
对多数培养细胞种类都有较高的转染效率（不同种类细胞的转染效率可有明显差异）。
此类试剂是目前非病毒介导方法中效率最高的转染试剂。
产品内容与储存方法：名称数量保存条件mlVigoFect 0.44℃可进行200次转染（6孔板或35 mm平皿）。
常温运输，4℃保存。
有效期6个月。
所需其它试剂：使用者需准备150 mM NaCl （超纯水配制，高压或过滤灭菌）或注射用生理盐水作为VigoFect及DNA的稀释液，和要转染的DNA溶液（高纯度，浓度0.1~2 μg/μl）。
操作方法：准备培养细胞：1)转染前24小时，接种适量细胞（接种数量可参考附表）。
至转染时细胞密度以40~60%为宜（80~90%亦可）。
2)转染前1小时，更换新鲜的完全培养液（体积可参考附表），置37℃，5% CO2 培养。
配制转染工作液：（6孔板或35 mm平皿，2 ml培养液）3)取5~8 μg DNA（起始用量5 μg），加入稀释液中至总体积为100 μl，轻轻混匀，室温放置。
4)取VigoFect 1~4μl（起始用量2 μl），加入稀释液中至总体积为100 μl，轻轻混匀，室温放置5分钟。
5)将稀释的VigoFect逐滴加入稀释的DNA溶液中，轻轻混匀，所得的转染工作液在室温放置15分钟。
6)将转染工作液轻轻混匀，逐滴加入2 ml培养液中，轻轻混匀培养液，置37℃，5% CO2培养。
细胞后续处理：7)24~48小时后，观察或收取细胞。
8)稳定转染时，于转染后24~48小时消化细胞分至3~5个培养皿中，加适当浓度的相应抗生素（如G418）筛选。
注意事项：1) 少量使用Vigofect 时，可取精确量的VigoFect 用无菌超纯水稀释一定倍数，以便精确取样量。
lipo293转染试剂说明书
Lipo293转染试剂是一种高效的转染试剂，特别适用于贴壁生长的HEK293、HEK293T、HEK293A、293FT等293系列细胞的转染。
以下是Lipo293转染试剂的使用说明书：适用范围：Lipo293转染试剂适用于贴壁生长的HEK293、HEK293T、HEK293A、293FT等293系列细胞的转染。
转染步骤：（1）准备转染试剂和DNA：按照推荐的DNA用量，将DNA溶解在无菌水中，然后与Lipo293转染试剂按照1:1的比例混合。
（2）细胞处理：将细胞按照推荐的培养条件在细胞培养箱中培养至适宜的密度。
（3）转染：将DNA-Lipo293复合物与细胞混合，并轻轻摇晃，使复合物均匀分布。
（4）培养：将转染后的细胞继续培养，期间注意观察细胞的生长状态。
注意事项：（1）使用高质量的DNA：为了获得最佳的转染效果，建议使用高质量的DNA。
（2）细胞密度和状态：转染前，细胞需要处于良好的生长状态，密度适宜。
（3）保存条件：Lipo293转染试剂应保存在4℃或-20℃的条件下，避免反复冻融。
（4）过敏反应：对于过敏体质的用户，建议在使用前进行皮肤过敏试验。
聚焦转染：8大品牌转染试剂强中强[选购宝典]
![聚焦转染：8大品牌转染试剂强中强[选购宝典]](https://img.taocdn.com/s3/m/66b7e9b6960590c69ec376a0.png)
聚焦转染：8大品牌转染试剂强中强[选购宝典]生物通技术专评：数百万年来原核生物如大肠杆菌就经常相互分享它们的遗传物质的——受到自然的启发，出现了将DNA导入哺乳动物培养细胞的技术——这是分子生物学的又一个重要的里程碑。
也多谢这种技术的不断进步，我们终于可以在各种哺乳动物细胞中进行各种克隆化基因的表达，从而达到不同的目的－－比如，生产制备大量经过真核特有的翻译后加工的活性蛋白；研究表达蛋白的结构和生化特性；研究基因表达的调控机理；甚至调控基因的表达等等。
可以说在哺乳动物细胞中表达外源基因的2个关键：一个是选择构建合适的表达载体和表达细胞株，另一个就是选择合适的方法将克隆的基因导入培养细胞中进行表达。
转染技术的广泛使用促进了人们对外源基因在哺乳动物细胞中的表达等方面的认识，并在方法学上促进了该领域及相关领域的发展。
从磷酸钙到脂质体，到多胺，可用于转染的细胞种类已越来越多，转染试剂也不断更新换代，而转染也不再仅限于将DNA转入细胞中了，RNA，siRNA，蛋白质等等生物大分子也进入了转染的行列。
在纷纭的产品中，你会选择哪种转染试剂？生物通这个转染试剂专辑希望为大家介绍市面上主流的转染试剂和各自的个性特点和适用范围－－可以说，针对不同的细胞株，不同的转染实验目的，还有不同的转染要求，很难找到一种能满足所有的要求，十全十美的产品。
你需要一一尝试和优化条件——但是了解市面上各种产品的特点与长短，无论是对于转染新手，或者是“老革命遇到新问题”，都是有益的。
在生物通这个转染试剂专辑系列我们将分别介绍国外几个经典好用的王牌产品，以及国内物美价廉的后起之秀，以及总结一些使用心得和注意事项。
如果你有自己的心得并愿意和大家分享，欢迎投稿生物通哦:)一、打开转染之门：基本概念作为篇首还是要把老调调再弹弹。
请原谅我有点“唐僧”的回顾几种经典转染方法。
DEAE-葡聚糖（Diethylaminoethyl (DEAE)-dextran）：这个早在1965年出现的转染方法差不多是最古董级的方法之一了，直到现在竟然还有少数人坚持采用。
qBac-III Bacmid转染试剂说明书
Bacmid qBac-III 简要手册V1.4.32021.05本产品包含qBac-III（Bacmid DNA，每次转染使用40ng [5µL]，浓度8ng/µL）Control plasmid*（阳性对照转移载体质粒DNA，每次转染使用300ng [3µL]，浓度100ng/µL）使用者需要准备1.转染试剂2.昆虫细胞培养基（加100UI/ml 氨苄青霉素和100UI/ml 链霉素）3.六孔板或35mm 细胞培养皿，每孔（皿）铺1x106个Sf9细胞（2mL）4.带有目的基因片段的转移载体质粒**（每次转染需要300ng）程序***（以Promega FuGENE HD Transfection Reagent 转染试剂为例，其他转染试剂请参照具体使用说明）A)准备转染DNA 混合物1.向无菌的1.5mL 离心管中加入95µL ddH 2O（或无血清培养基），再向离心管中加入5µL Promega FuGENE HD Transfection Reagent 转染试剂，充分混匀。
2.向无菌的1.5mL 离心管中加入92µL ddH 2O（或无血清培养基），再向离心管中加入5µL Bacmid DNA，再向离心管中加入3µL 转移载体质粒DNA，充分混匀。
3.将（1）中溶液加入（2）中，充分混匀，室温静置20-30min。
B)将DNA 混合物加到细胞中1.将DNA 混合物逐滴均匀加入细胞培养皿中。
2.放置28℃培养箱中静置培养4-6天。
C)收获P0代病毒1.收集培养皿中的培养基（上清），4℃避光保存。
此即为P0代病毒。
D)表达蛋白1.用20-200µL P0代病毒加到铺好细胞的六孔板的一个孔中，28℃静置培养4天，收集培养皿中的培养基（上清），300X g 离心5min 移除细胞碎片，获得P1代病毒，测定滴度（方法自选）。
PEI转染试剂的Protocol
24孔板
1.90.8Fra bibliotek5012孔板
3.5
1.6
100
6孔板
9.6
4
250
6cm平板
21.5
8
500
10cm平板
56.7
16
1000
15cm平板
147
32
2000
4.将B液缓慢加到A液中并混匀，最好使用旋涡振荡器边加边震荡。然后室温放置20min。
5.将DNA-PEI混合液缓慢加入到细胞培养基中，轻轻混匀。
6.转染4h后更换为完全培养基。
培养皿面积(cm2)
转染DNA量（ug）
稀释DNA/PEI的培养基体积（ul）
96孔板
0.32
0.2
25
48孔板
1.1
0.5
PEI转染Protocol
1.转染前一天（24h左右）胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染时汇合度为70~90%。
2.转染前1h，将细胞培养基更换为Opti-MEM或者DMEM基础培养基（若使用Opti-MEM，PEI转染效果更佳）。
3.用一定体积的Opti-MEM稀释质粒，小心混匀，记为A液；用相等体积的Opti-MEM稀释PEI，小心混匀，记为B液（质粒：PEI=1：2，W/W)，室温静止5min。
转染试剂的中文详解
各种转染试剂的中文转染方法2014-05-06丁香园FuGENE6（Roche）转染步骤：转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。
将细胞以1-3×105/2 ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。
将FuGENE6 Reagent在室温静置10-15分钟以平衡到室温。
使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。
1.在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总体积到100 ul。
2.将3-6 ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。
3.加入1-2 ug的DNA溶液（0.02－2.0 ug/ul），轻弹管壁混合。
4.室温孵育20分钟。
5.将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1 ml不含血清和双抗的营养液洗涤一次，再加入2 ml不含血清和双抗的营养液。
6.将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。
7.3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。
Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）：1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。
细胞铺板在2 ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
2.对于每孔细胞，使用250 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释4.0 ugDNA，轻轻混匀。
3.使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用250 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释10 ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。
Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。
NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。
4.混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。
室温放置20分钟。
5.（optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。
DNA转染试剂-Entranster
Entranster TM-H4000（用于DNA的细胞转染）使用手册本品推荐用于常规细胞的转染。
一重要提示1.本品在转染过程中可以添加抗生素，抗生素的添加与否不影响转染效率和毒性。
2.如转染后需要用Trizol提取RNA，建议转染后6小时换液。
二实验过程（以24孔板为例）1.提前一天细胞铺板提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞密度在60％左右为宜。
2.转染过程⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成DNA稀释液。
注意：无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。
⑵将2μl的Entranster TM-H4000用25μl无血清稀释液体稀释，充分混匀，制成Entranster TM-H4000稀释液。
室温静置5分钟。
⑶将Entranster TM-H4000稀释液分别加入到DNA稀释液中，充分混匀（可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上），室温静置15分钟。
转染复合物制备完成。
⑷将转染复合物加入到含细胞和完全培养基的培养容器上，轻柔混匀。
注意：①对本试剂，采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。
②完全培养基可加抗生素。
⑸培养4-6小时后更换培养基，继续培养24-48小时。
注意：①如细胞没有毒性等不良情况，转染后4-6小时可不必更换培养基。
注意：如用于同时共转染多种质粒，DNA的用量指每种质粒用量的总和，这时如需得到较高转染效率，建议将DNA的用量和转染试剂的用量同步提高1.5-2倍。
三优化由于DNA和转染试剂的用量比值是决定转染效率的重要因素，同时由于各实验室质粒的定量误差，质粒纯化程度不同以及细胞状态不同，造成不同细胞和实验室的最优实验条件的差异，为取得最高的转染效率，初次应用时，建议先进行优化。
最优条件确定后，实验的结果将非常稳定。
下表列出了在6-well的优化方案，供参考。
根据预实验的最优化条件，按培养器皿表面积比例应用到其他培养容器。
四常见问题与解决方案。
上海常用转染试剂配方
上海常用转染试剂配方
转染试剂是在细胞培养研究中必不可少的试剂。
它将核酸或蛋白质带入目标细胞中，以达到研究目的。
本文将介绍上海常用的几种转染试剂配方。
1. Lipofectamine 2000转染试剂
Lipofectamine 2000是一种常用的脂质体转染试剂，其用途广泛且转染效率高。
其配方如下：
无血清培养基：500μL
要转染的DNA：2μg（根据实验需要调整）
将Lipofectamine 2000试剂与无血清培养基混合，放置5分钟，再加入要转染的DNA 液体，混合后放置15分钟，滴加在细胞上。
2. PEI转染试剂
聚乙烯亚胺（PEI）是一种阳离子高分子，由于其能够形成与DNA负电荷的缔合物，使其成为一种有效的转染试剂。
PEI转染试剂可用于转染细胞以获得较高的转染效率。
其配方如下：
PEI试剂：4μg/μL，将其与等体积的无血清培养基混合。
3. PolyJet转染试剂
PolyJet是一种高效、无毒、具有低细胞损伤的DNA转染试剂。
其配方如下：
4. FuGENE HD转染试剂
细胞的转染操作应该注意以下几点：
1. 转染时间应该控制在半小时至1小时内，过长或过短都会对转染效率造成影响。
2. 转染的DNA浓度应该适当，过高的DNA浓度会对细胞产生毒性。
3. 转染试剂与DNA的混合比例也应该适当，过多或过少都会导致转染效率降低。
总之，合理选择转染试剂和配方，并严格按照操作步骤进行转染可以提高实验的可靠性和成功率。
转染试剂行业类别
转染试剂行业类别
转染试剂行业属于生物医药行业的一个细分领域，主要提供用于基因转染的试剂产品和服务。
这些试剂用于将外源基因导入到真核细胞中，以研究基因功能、表达蛋白质或进行基因治疗等。
根据产品类型，转染试剂可以进一步细分为脂质体试剂和非脂质体试剂。
脂质体试剂是一种基于脂质体技术的转染试剂，具有高效、低毒、易用等优点，广泛应用于细胞实验和基因治疗等领域。
非脂质体试剂则包括多种其他类型的转染试剂，如聚合物、多肽等。
此外，根据应用领域，转染试剂还可以分为科研用试剂和临床用试剂。
科研用试剂主要用于基础研究和应用研究，如基因功能研究、药物筛选等；而临床用试剂则用于疾病的诊断和治疗，如基因治疗、细胞治疗等。
总的来说，转染试剂行业是一个不断发展的行业，随着生物医药行业的快速发展和技术的不断进步，转染试剂行业也将迎来更广阔的发展前景。
汉恒生物-LipoFiter 3转染试剂中文说明书
LipoFiter TM 3.0 转染试剂操作说明保存条件：4℃保存，一年有效（避免反复冻融）。
LipoFiter 3.0 简介LipoFiter 3.0脂质体转染试剂( LipoFiter TM3.0 Liposomal Transfection Reagent )是一种适合于把质粒或其它形式的核酸,以及核酸蛋白复合物转染到培养的真核细胞中的高效阳离子脂质体转染试剂。
LipoFiter 3.0 优点1、转染效率高，重复性好，操作简单。
2、无明显细胞毒性，用 LipoFiter 3.0 转染细胞后，对于大多数细胞 72 小时内不更换培养液无明显细胞毒性。
3、LipoFiter 3.0 对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用，并且可以用于稳定表达细胞株的筛选。
LipoFiter 3.0 使用说明1、细胞培养：以 293T 细胞为例，转染前一天(20-24 小时) ~0.4×106细胞(具体的细胞数量据细胞大小和细胞生长速度而定)铺到六孔板内，使第二天细胞汇合度（confluent）能达到约70%~80%。
注：其它培养板或培养皿参考六孔板进行操作，其他培养介质如培养板，培养皿的详细细胞接种数目请按照比例自行换算。
12、在进行下述转染步骤前，把六孔板每孔内换成新鲜细胞培养液。
培养液的体积约为 2 ml。
注：其他培养介质培养液体积参见《各种培养介质下 LipoFiter 3.0 转染 DNA 详表》，抗生素、Glutamine 等对LipoFiter 3.0 转染并无影响。
如果 LipoFiter 3.0 对目的细胞毒性较大，建议去除转染体系内的抗生素。
3、把 LipoFiter 3.0 脂质体转染试剂轻轻混匀。
4、对于待转染的六孔板中一个孔的细胞，取一只洁净无菌离心管，加入 4μg 质粒DNA（其他培养介质 DNA 用量参见附表）到 250 μl DMEM 溶液，用枪轻轻吹打混匀。
注：其他培养介质培养液体积参见《各种培养介质下LipoFiter 3.0转染 DNA 详表》，如后续实验需要，可将 DMEM 用其他如 1640、MEM、F12 等培养基代替，对 LipoFiter 3.0转染效率及操作并无影响。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
自1978年William Linton 先生在美国威斯康辛州麦迪逊市（就是《廊桥遗梦》那里哦）创立Promega以来，今年已经是第26个年头了，也是Promega进驻中国的20周年――这个几乎可以说是国内生物技术最早的启蒙者之一的品牌非常了解国内科研经费来之不易，在进口品牌中以价格算可亲而广受欢迎。
Promega的转染试剂产品由于市场定位较准确，获得的业内评价不错，尤其是在其价格经济实惠前提下，产品质量并没有因此打折扣（就是性价比高咯）。
1. siRNA转染试剂
CodeBreaker™ siRNA转染试剂是Promega的专利配方产品，专门为有效转染siRNA而优化设计。
这一试剂能有效促进siRNA转染哺乳动物细胞，促进基因沉默，而且毒性小，细胞死亡率低，比如转染CHO与HeLa细胞，使用CodeBreaker基因沉默率达到80%或更多，比起同类产品毒性小50%以上。
这一产品操作简便，买来后即可使用，不用溶解。
将CodeBreaker转染试剂与合适的siRNA二聚物混合后孵育几分钟，然后加到培养细胞即可。
而且转染可在完全生长培养基中进行，不需要更换培养基或再加血清，简化了操纵步骤（见下）。
CodeBreaker试剂适用的细胞有HeLa、HEK293、293T、CHO 和 3T3细胞等。
价格1800/0.4ml，以24孔板为例，按照推荐剂量可以可以做200次，6孔板大约可用40次左右。
Day One：细胞铺板 (in complete growth medium).
Day Two
1. 将CodeBreaker™ Reagent加到无血清培养基中，混合均匀，室温孵育15—20分钟。
2. 制成复合物：加入siRNA到第二步中，轻微混合。
室温孵育15—20分钟。
3. 然后与细胞混合，37°C培育24—72小时，OK，检测吧。
2. DNA转染试剂
Transfast™ 是一种特殊的脂质体转染试剂，由阳离子脂类（+）
-N,N[bis(2-hydroxyethyl)]-N-methyl-N-[2,3-di(tetradecanoyloxy)propyl]和中性脂类DOPE（用于加强转染能力）组成。
TransFast试剂是干脂膜，一旦水化后就形成多层脂质体，因此也就具有更多优势，尤其表现在可以传递多种生物大分子－－小的从寡聚核苷酸，到质
粒DNA或者RNA，大到酵母人工染色体，都可用TransFast转染试剂传递进细胞（包括原代细胞），而且脂质体可以用于体外转染的同时还可以用于体内转染。
迄今为止，已经证明TransFast™ 转染试剂在转染NIH3T3，CHO，293，K562，PC12，Jurkat 和昆虫Sf9时特别好。
Transfast一个包装是1.2mg（0.4mgx3）1800左右，每个管是干脂膜，用前一天要先用无核酸酶污染的水溶解后在负20度冻存过夜（可以反复冻融10次而不影响转染效率）；用的时候是要用无血清培养基稀释DNA，加适量融化混匀的转染试剂，去掉培养皿中的培养基后加入转染试剂－DNA复合物，温育1小时后补加完全培养基。
如果对无血清非常敏感的细胞可能就不适合。
Tfx是与TransFast结构类似的脂质体转染试剂，不同处也是Tfx最大的特点就是所有的Tfx 试剂含有相同浓度的阳离子脂成分，但其中融合脂类的DOPE的摩尔比例不同，故Tfx 可分为Tfx-10、Tfx-20和Tfx-50三种。
这样实验人员就可以根据自己的需要选择适用的试剂。
Tfx可在血清存在下转染细胞，这有利于转染原代细胞，因为原代细胞在没有血清存在时可能会失去活性。
因此使用Tfx转染细胞需要的时间少，大多细胞系只需1个小时。
Tfx 可转染的细胞较多。
一个包装的Tfx包含有Tfx-10、Tfx-20和Tfx-50，可以配合不同的细胞使用，价格大约1600左右。
Transfectam是一种用于转染真核细胞的阳离子脂质体，这种脂质体由dioctadecylamidoglycyl spermine（DOGS）复合而成脂多胺结构。
其中的精胺基团（spermine）通过一个肽键共价结合于脂质部分，这样spermine头部的强正电荷使整个结构高度亲和于带负电的DNA分子，而脂质结构则包裹住整个分子，使之便于定位在细胞膜上。
Transfectam 试剂可以有效转染广泛的真核细胞。
目前已经用于进行了稳定和瞬时的转染，这些转染既包括已建立的细胞系，也包括原代细胞。
除了用于DNA转染，Transfectam也可用于RNA转染和体内应用。
0.5mg转染试剂才1400左右，需要用200ul100％乙醇溶解。
使用还是挺方便的，可以在有血清的环境中转染。
用量也很节约。