γ干扰素基因多态性与弥漫性毒性甲状腺肿易感性的关系

γ干扰素基因多态性与弥漫性毒性甲状腺肿易感性的关系

发表时间：2014-08-20T09:09:16.983Z 来源：《医药前沿》2014年第19期供稿作者：龚莹1 梁军1(通讯作者) 刘学奎3 王玉2 司[导读] IFN－γ基因+874位点单核苷酸多态性可能是GD的易感因素。

龚莹1 梁军1(通讯作者) 刘学奎3 王玉2 司冬芹3 杜振玲3 ( 1徐州市中心医院内分泌科/徐州市医学科学研究所 221009) (2徐州医学院徐州临床学院 221009) (3徐州市中心医院内分泌科 221009) 【摘要】目的：探讨γ干扰素(IFN－γ)基因多态性与弥漫性毒性甲状腺肿(Graves disease，GD)发病易感性的关系。方法：选择汉族GD患者和正常人各100例，采用序列特异性引物聚合酶链反应检测等位基因和基因型。结果：GD组IFN－γ基因+874 位点A等位基因的频率明显高于正常对照组(83.5%对70.5%，P<0.05)；GD组IFN－γ+874 AA基因型频率显著高于对照组(72%对51%，P<0.05)。结论：在中国汉族人群中，GD患者和正常人之间存在IFN－γ基因+874位点A等位基因分布的差异。IFN－γ基因+874位点单核苷酸多态性可能是GD的

易感因素。

【关键词】弥漫性毒性甲状腺肿 γ干扰素多态现象基因【中图分类号】R322.5+1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）19-0036-02 Association of Interferon-gamma gene polymorphisms with Graves 【Abstract】 Objective To explore the relationship between the single nucleotide polymorphism of interferon gamma gene +874 site and Graves disease(GD) Methods One hundred Chinese patients with GD and one hundred racially matched healthy controls were studied. Alleles and ge

types were determined by polymerase chain reaction and sequence specific primers. Results: The frequency of the variant A in the interferon gamma gene +874 site in GD group was significantly higher than that in control group(72% vs 51%;p<0.05). Conclusion: In Chinese population , there were differences between GD patients and controls for frequencies of A allele in interferon gamma gene +874 site, interferon gamma gene +874 site single nucleotide polymorphism may contribute to increasing the susceptibility to GD.

【Key Words】 Graves disease Polymorphism Interferon gamma Gene 弥漫性毒性甲状腺肿(Graves disease，GD)是一种器官特异性自身免疫疾病。虽然其发生机制目前尚不完全明确，但其发病与遗传易感基因和环境因素之间的相互作用有一定的关系。细胞因子是一类由免疫细胞产生的一组能够调节细胞功能的高度活性、具有多功能的免疫介质。已经有研究表明有多种细胞因子，如干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子、白细胞介素通过改变免疫活性细胞以及甲状腺滤泡上皮细胞的一些功能状态，然后直接或间接进一步参与GD的发生和发展[1-3]。细胞因子的表达是受基因调控的，位于基因表达调控区的单核苷酸基因多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)影响基因的表达，在疾病的个体差异方面有显著意义。IFN－γ基因与GD的相关性如何，目前国内尚无报道，我们采用序列特异性引物聚合酶链反应(polymerase chain reaction and sequence specific primers，PCR–SSP)技术对IFN－γ基因+874位点的SNP进行了分析，以了解其与GD易感性的关系。

一对象和方法

1.对象：(1)病例组：选取我院门诊及住院无血缘关系的苏北地区汉族GD患者100例(女80例，男20例)，15～75岁(37.64±1

2.83)岁。GD诊断标准：存在甲亢症状，体检甲状腺弥漫性肿大，甲状腺功能检查血清游离三碘甲状腺原氨基酸、甲状腺素升高、促甲状腺激素水平降低。 (2)对照组：100名正常人，女性79例，男性21例，年龄(38.0±12.7)岁，都没有甲状腺疾病史及家族史，同时也无没有其他自身免疫性疾病史。

2.(1)试剂 DNA快速提取试剂盒、dNTP和TaqDNA聚合酶,DNA分子量标记物购自大连宝生物公司；(2)引物设计与合成根据IFN-γ序列(NC-000012),采用primer5.0设计引物。由上海生工公司合成。为证明扩增成功，所有的反应混合体系均包括内参照引物。IFN－γ基因+874位点特异正向引物1：5’-cgcgcaacacaaaatcaaatca-3’，正向引物2：5’-cgcgcaacacaaaatcaaatct-3’，通用反向引物5’-gctacatctgaatgacctgcc-3’扩增片段大小527bp。人GAPDH内参照正向引物：5’-tattgggcgcctggtcacca-3’，反向引物: 5’-ccaccttcttgatgtcatca-3’，扩增片段大小746bp。(3)DNA提取取外周血300μl(ACD防凝)用DNA快速提取试剂盒,参照说明书的方法提取外周血白细胞DNA。

(4)PCR-SSP扩增目的基因片段 PCR反应体系50μl的反应体系中各成份分别为：10×buffer:5μl；25mmol/L MgCl2：5μl；dNTP：1μl；25μmol/L 4条正、反向引物各1μl；Taq酶1.5U；模板3μl(约200ng)；加双蒸水至50μl体积；PCR扩增步骤：94℃预变性2min进入循环；94℃变性50s;56℃退火50s；72℃延伸1min；共30个循环，最后72℃延伸8min使反应完全。(5)PCR反应产物鉴定及分析取PCR反应产物10μl及DNA分子量标记物于1%琼脂糖凝胶，加EB染色，电泳约30min，然后在紫外线透射的自动成像分析仪上进行成像，记录结果。

3.统计学处理：采用SPSS统计软件进行数据整理和分析，进行个体样本的等位基因以及基因型分析，计算各组的等位基因和基因型频率，计数资料的组间比较使用χ2检验，检验水平α=0.05。

二结果

1、Hardy-Weinberg平衡：为了确保资料的可靠性，对等位基因频率进行了Hardy-Weinberg平衡定律检验，结果表明了观测值与预期值之间的差异无统计学意义。

2、GD组与正常对照组之间等位基因和基因型频率德分布见表1。GD组IFN－γ+874A等位基因的频率明显高于于正常对照组(p <0.05)；GD组IFN－γ+874AA基因型频率显著高于对照组(P<0.05)。

3、进一步的分层分析表明，IFN－γ+874等位基因和基因型频率在不同性别、有无甲亢性眼病及是否有家族史亚组中无显著性差异(p>0.05)。

三讨论

IFN－γ是主要由T细胞和NK细胞产生的一种二聚体糖蛋白，具有较强的免疫调节作用。自身免疫性甲状腺疾病的发生常常伴随细胞因子参与的炎症反应，其中干扰素也参与了该疾病的免疫病理过程[4]。细胞因子的表达是受基因调控的,位于基因表达调控区的SNP影响基因的表达，在疾病的个体差异方面有显著意义。