实验三 酵母菌大小和数量测定

六、思考题
1、使用显微测微尺为什么要进行校正？ 2、为何用血球计数板可测得总菌值？
七、注意事项

1、取样时先要摇匀菌液，加样时技术室不 可有气泡产生。
2、活细胞是透明的，因此在进行显微计数 观察时适当减低视野亮度，以增大反差。 3、校正目镜测微尺时，光线不易过强，否 则难以找到镜台测微尺的刻度。
1.
2. 3. 4.
室之后将其转入视野中心，再换高倍镜找 中格，并观察和计数。
取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。 取酵母菌稀释液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴， 使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。 静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央 计数室。 在高倍镜下计数：随机计数五个中格的菌数，然后求得 每个中格的平均值。乘上16(或25)就得出一大格中的 总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。
两重合线间目镜测微尺格数
用同样的方法可对高倍镜和油镜进行校正
2、显微直接计数法 （血球计数板）
血球计数板的构造
0.1毫米
a.平面图(中间平台分为两半，各刻有一个方格网)
b.侧面图(中间平台与盖玻片之间有高度为0.1毫米的间隙)
1mm/20格
A.25中格*16 小格计数板
1/400mm2
个 数 小 室 格 ，每 。，每个 体个方 积大格 为格网 边个 长大 格 B.16中格*25 小格计数板 ， 计中 数间 室大 共高格 为 血球计数板计数网的分区和分格 计
实验三 酵母菌大小和数量的测定
某些酵母菌的形态
面包酵母
出芽生殖中的啤酒酵母
实验内容
实验目的 实验原理 实验材料 实验方法和步骤 实验结果记录 思考题

一、实验目的：
1.学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测 定微生物大小的方法； 2.学习使用血球记数板测定微生物数量的方 法


四、实验方法与步骤：
（一）细胞大小测定 1、对目镜测微尺的校正
镜台测微尺有刻度的一面朝上，置显微镜载物台上 （目镜测微尺已在镜筒中），在高倍镜下进行目镜测微 尺校正。 2、细胞大小的测量
酵母菌悬液滴在载玻片上，盖上盖玻片，置显微镜 载物台上。调节显微镜光圈，用目镜测微尺测量细胞直 径。
关键：先低倍镜下找大格位置，找到计数 （二）细胞数量测定
目镜测微尺的校正： 在低倍镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜 测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，寻找两条完全 重合的刻度线，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和小方 格的格数。因为镜台测微尺的刻度每格长10µ m，所以由下列公 式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。
两重合线间镜台测微尺格数×10 目镜测微尺每格长度（μm）=
二、实验原理：
1、测微尺的构造及测定原理：
目镜测微尺是一块具有刻度的圆形玻片。镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻 片，一般将lmm等分为100格，每格长l0μm（即0.0lmm），是专门用来校正目镜测微尺的。 不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样， 因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一 定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。
9 1mm 0.1mm3 (10-4 ml), 400
0.1mm
小格
中格
如菌体位于中格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左 线不数右线，以减少误差。可拍照后从图片上计数。
三 、实验材料
1、菌种： 啤酒酵母菌 2、器材： 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球 计数板、盖玻片、无菌滴管、吸水纸、擦 镜纸
吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。
5. 计数完毕ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸
五、实验结果记录
（一）微生物细胞大小测定 1、目镜测微尺校正：因为镜台测微尺1小格＝10 μm，故 目镜测微尺1小格＝ μm 2、酵母菌大小测定：
菌体 目尺格数 实际直径(μm)
（二）细胞数量测定 总菌数的测定(利用公式计算)。T表示五个中方格中的总菌数； D表示菌液稀释倍数。