黄酮含量的测定方法

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总黄酮含量测定

附录A（标准的附录）总黄酮含量的测定（分光光度比色法）1 试剂所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。

1.1无水乙醇；1.2硝酸铝溶液（100g/L)：称取AL(NO3)3•9H2O 17.6g，加水溶解，定容于100mL容量瓶中，摇匀备用。

1.3 醋酸钾溶液（9.8g/L)：称取KCOOH 9.814g，加水溶解，定容于100mL容量瓶中，摇匀备用。

1.4 芦丁标准溶液：1.4.1芦丁对照品储备液（1.0g/L)：精密称取芦丁标准物质50.000mg，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释定容至50mL。

1.4.2 芦丁对照品工作溶液（0.2g/L)：精密吸取芦丁对照品储备液（1.4.1）10mL,置于50mL容量瓶中，加无水乙醇（1.1）至刻度，摇匀备用。

2 仪器全波长光度计；分析天平（0.000g）；容量瓶等玻璃仪器。

3 分析步骤3.1 标准曲线3.1.1精密吸取芦丁对照品工作液（1.4.2）1mL，2 mL，3mL,4mL，5mL，6mL分别置于50mL容量瓶中。

3.1.2加无水乙醇（1.1）至15mL，然后依次加入硝酸铝溶液（1.2）1.0mL，醋酸钾溶液（1.3）1.0mL，摇匀，加水至刻度，摇匀，静止1hr。

3.1.3 用1cm比色杯于415nm处，以30%乙醇（V/V）溶液为空白，测定吸光度。

3.1.4 以50mL溶液中芦丁质量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标，用线性回归法做标准曲线，（线性范围0.0mg ~1.2mg（以50mL计）。

3.2 空白对照精密吸取待测试样4.0mL，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇14mL,加水稀释至刻度，摇匀。

静止1hr，用ø=0.22μ的过滤膜过滤，滤液作为样品的空白对照。

3.3样品测定3.3.1精密吸取待测样液4.0mL，置于50mL容量瓶中，按3.1.2进行操作。

静止1hr，用ø=0.22μ的过滤膜过滤，滤液作为测定液。

黄酮含量测定

一、黄酮含量的测定方法
1、样品的处理
取材料地上部分洗净，晾晒至表面无水分，置于干燥箱中，80℃下干燥至恒重，磨成粉末，过筛待用。

2、标准曲线的绘制
准确称取芦丁对照品20mg，置于100ml容量瓶中，加体积分数70%乙醇溶解至刻度，摇匀得ml的对照品溶液。

然后，分别吸取0、、、、、、，分别置于7支试管中，加水补齐至，分别加入5%亚硝酸钠，摇匀，放置6min。

再加入10%硝酸铝溶液，摇匀，放置6min。

加入%氢氧化钠溶液4ml，然后分别加水，摇匀，放置15min。

以空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长处测定吸光度。

3、黄酮的提取（微波提取法）
准确称取干燥至横重的野生马齿苋粉末3份，每份1g，分别置于锥形瓶中，喷洒适量蒸馏水润湿，用中高火微波处理90s。

加入一定量体积分数为70%的乙醇溶液，于80℃恒温水浴加热提取，趁热过滤，洗涤残渣，用70%乙醇定容于50ml容量瓶中，摇匀，得黄酮提取液。

4、黄酮含量的计算
吸取分别黄酮提取液1ml，加蒸馏水，摇匀，加入5%亚硝酸钠，摇匀，放置6min。

再加10%硝酸铝溶液，摇匀，放置6min。

加入%氢氧化钠溶液4ml。

加入蒸馏水，摇匀放置15min。

以蒸馏水代替黄酮提取液的空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长出测定吸光度。

带入标准曲线中，计算黄酮含量。

总黄酮含量（mg/g）= c*v/m
式中：c为1ml样品中测得的黄酮含量（mg）；
v为提取液总体积（ml）；
m为叶片干重。

二、矿质元素的测定
每份需。

大豆黄酮检测方法

大豆黄酮含量测定方法【鉴别】1、取本品的细粉适量(约相当于大豆黄酮2mg)。

加无水乙醇2ml，置水中温热；使大豆黄酮溶解，加0.5%三氯化铁试液2~3滴，摇匀，在加0.5%铁氰化钠试液2~3滴，渐显蓝绿色。

2、取含量测定下溶液，照分光光度法（中国药典2000年版第二部附录IV A）测定，供试品溶解液在230~350nm波长范围内的吸收光谱应与对照品溶液一致。

【检查】溶出度取本品，找溶出度测定方法（中国药典2000年版第二部附录X C第一法），以水1000ml为溶剂，转速为每分钟150转，依法操作。

经45分钟时，取出溶液适量滤过，精密量取滤液2ml加水稀释至10 ml，摇匀。

照分光光度法（中国药典2000年版附录IV A）测定，在249nm波长测定吸收度，另取大豆黄酮对照品约12mg，精密称定。

置50ml量瓶中，加无水乙醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，同法测定吸收度，计算出每片的溶出量，限度为标示量的70%应符合规定。

其他应符合片剂项下有关的各项规定（中国药典2000年版第二部附录I A）。

【含量测定】方法一：高效液相1、仪器及试剂仪器：液相色谱仪（附紫外检测器）色谱柱：C18，25cm×3.9mm, 5μm流动相：CH3CN+H2O=65+35(V/V)流速：0.8ml/min检测波长：249nm柱温：35℃进样量：10μL2、样品溶液制备用流动相溶解并稀释样品至0.1mg/ml的溶液。

3、计算采用峰面积归一化法。

方法二：紫外分光光度法：取待测品适量，精密称定（约12.5mg）。

置100ml量瓶中，加无水乙醇80ml 超声处理5分钟后在置60℃水浴中加热5分钟，放冷至室温，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取滤液2ml，置50ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，照分光光度法(中国药典2000年版附录IV A)，在249nm波长处测定吸收度，另精密称取黄豆苷元对照品适量，用无水乙醇溶解并稀释制成每1ml 约含5ug的溶液，同法测定；计算，即得。

总黄酮含量测定方法

总黄酮含量测定方法
总黄酮是一类化合物的总和，常用的测定方法有色谱法、光谱法和比色法等。

1. 色谱法：色谱法是一种常用的分离和测定化合物的方法。

常用的色谱方法包括高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）等。

其中，HPLC是最常用的测定总黄酮含量的方法。

它可以将样品中的黄酮分离开，并通过检测器测量它们的浓度。

2. 光谱法：光谱法是利用物质对光的吸收、发射、散射等特性进行测定的方法。

常用的光谱法包括紫外-可见光谱法（UV-Vis）和荧光光谱法等。

这些方法通过测量样品在特定波长下的吸光度或荧光强度来确定总黄酮含量。

3. 比色法：比色法是通过比较样品与标准溶液的颜色差异来测定样品中的化合物含量的方法。

通常使用染色剂与样品中的黄酮发生反应，形成有色产物，并通过比色仪或分光光度计测量吸光度，进而计算总黄酮的含量。

需要注意的是，不同的测定方法可能对不同类型的总黄酮有不同的适用性和灵敏度。

因此，在选择测定方法时，需要考虑样品的特性和实验室的仪器条件，确保能够准确测定总黄酮的含量。

总黄酮测定含量

1 各批次药材含量测定使用已经确定的总黄酮含量检测方法分别进行5个批次原料含量的测定总黄酮含量测定：分别精密称取药材粗粉0.5g，置100ml锥形瓶中，加70%乙醇50ml，称定重量，超声60分钟，放冷，称定，加入70%乙醇补足减失重量，摇匀，过滤，弃去粗滤液，精密量取续滤液10.0ml上聚酰胺树脂，待充分吸附后，用乙醇进行洗脱，至流出液基本无色，以洗脱液定容至25ml量瓶中，备用。

精密量取供试品溶液5ml，置10ml比色管中，加 5％亚硝酸钠溶液0.4ml，使混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6 分钟，加2mol/L氢氧化钠溶液3ml，再加30%乙醇至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法（《中国药典》2010版一部附录Ⅴ B），在504nm 的波长处测定吸收度。

表1 不同批次药材总黄酮含量测定结果批号含量（%）1 2 3 X±S20140516 0.16350.16480.17010.1661±0.003520140516紫外扫描色谱图2 药材总黄酮转移率研究2.1 单个药材转移率研究2.1.1 单个药材的转移率测定同一批次的各药材，分别按照产品生产工艺提取得单个药材的总黄酮浓缩液样品，进行总黄酮含量检测，与“1”项下同批药材的总黄酮含量相比得出单个药材的转移率（如下式），分别进行5批次药材测定。

黄芪、桑叶、黄精、山茱萸：分别取黄芪、桑叶、黄精、山茱萸各100g，加水煎煮两次（回流），第一次加水12倍量，煎煮2.0h，过滤；第二次加水10倍量，煎煮1.0h，过滤，合并滤液浓缩至100ml，备用。

黄芪不同浓缩程度的考查：取黄芪100g，加水煎煮两次（回流），第一次加水20倍量，煎煮2.5h，过滤；第二次加水20倍量，煎煮2.0h，过滤，合并滤液，重复试验三次，分别浓缩至50ml、100ml、200ml，备用。

精密量取上述溶液5ml，加乙醇15ml，摇匀，过滤，弃去粗滤液，精密量取续滤液10.0ml上聚酰胺树脂，待充分吸附后，用乙醇进行洗脱，至流出液基本无色，以洗脱液定容至25ml量瓶中，备用。

中药总黄酮的含量测定方法

中药总黄酮的含量测定方法
中药总黄酮的含量测定方法常用的有以下几种：
1. 酸碱比色法：先将中药样品提取，然后加入酸性试剂，使黄酮化合物转化为黄色络合物，再通过比色法测定黄色染色的强度，从而计算出黄酮的含量。

2. 高效液相色谱法（HPLC）：中药样品经过适当溶剂提取后，利用高效液相色谱仪对黄酮进行分离和检测，通过峰面积或峰高与标准品进行比较计算黄酮的含量。

3. 紫外分光光度法：根据黄酮化合物在紫外可见光区域的吸收特性，在一定波长范围内测定样品的吸光度，通过比较吸光度与标准曲线计算黄酮的含量。

4. 荧光法：将黄酮溶液与适当溶剂混合后，在特定波长下激发，并测定荧光强度，通过标准曲线计算黄酮的含量。

以上方法可根据实际研究需求和条件选择适合的方案进行测定。

值得注意的是，不同的中药样品可能有不同的成分和浓度，因此在具体测定过程中需根据样品特点进行方法优化和验证。

山楂黄酮的含量测定方法

山楂黄酮的含量测定方法一、引言山楂黄酮是一种常见的生物活性成分，具有多种药理作用，例如降脂、保护心脏、抗氧化等。

准确测定山楂黄酮的含量对研究其药理作用和开发药物具有重要意义。

本文将介绍几种常用的山楂黄酮含量测定方法，并从中挑选最适合的方法进行深入探讨。

本文按照从简单到复杂的顺序进行讲解，帮助读者更好地理解山楂黄酮的含量测定。

二、常用的测定方法1. 薄层色谱法薄层色谱法是一种简单、快速的分离和测定方法。

其基本原理是将样品溶液均匀涂在薄层色谱板上，放入含有适量溶剂的瓶中，让溶剂沿着色谱板向上移动，通过观察刻线上的斑点来确定山楂黄酮的含量。

这种方法操作简单、成本低廉，但缺点是分离效果较差，测定结果的准确性有限。

2. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种精确测定山楂黄酮含量的常用方法。

基本原理是将样品溶液注射到高效液相色谱仪中，通过不同溶剂的流动和固定相的作用，分离出山楂黄酮与其他成分，最后通过检测器对山楂黄酮进行定量。

这种方法具有分离效果好、准确性高等优点，但需要专用设备和较长的分析时间。

3. 比色法比色法是一种常用的快速测定山楂黄酮含量的方法，该方法通过测量山楂黄酮在特定波长下的吸光度来定量。

具体操作时，将山楂黄酮溶液和试剂混合后，根据试剂与山楂黄酮的反应产生的色素的吸光度变化来确定山楂黄酮的含量。

这种方法操作简便、快速，但需要选取合适的试剂和波长，并且对样品的前处理要求比较高。

三、选择最适合的方法进行探讨根据上述介绍，山楂黄酮的含量测定方法可以选择薄层色谱法、高效液相色谱法和比色法。

考虑到测定过程中的准确性和实用性，我们选择高效液相色谱法进行深入探讨。

高效液相色谱法是目前应用广泛的山楂黄酮含量测定方法之一。

其优势在于分离效果好、准确性高，并且可以同时测定多个成分，适用于复杂样品的分析。

高效液相色谱仪的使用越来越普及，使得该方法更加便捷和可行。

在使用高效液相色谱法测定山楂黄酮含量时，我们需要选择合适的柱和固定相，优化流动相的组成和流速，并确定适当的检测波长。

黄酮含量测定的方法

黄酮含量测定的方法
黄酮是一类天然的植物次生代谢产物，具有多种生物活性，包括抗氧化、抗炎、抗癌等作用。

因此，测定黄酮含量是对植物提取物、草药或食物中黄酮类化合物进行研究和评价的重要手段。

目前常用的黄酮含量测定方法包括色谱法、分光光度法和高效液相色谱法等。

1. 色谱法：色谱法常用的分离技术有薄层色谱法（TLC）和气相色谱法（GC）。

其中TLC常用于初步筛选和分离样品中的黄酮类化合物，GC常用于定量分析。

2. 分光光度法：分光光度法是通过黄酮类化合物吸收特定波长处的紫外光来间接测定其含量。

这种方法简单、快速，但对样品的成分和色素的影响较大。

3. 高效液相色谱法（HPLC）：HPLC是目前最常用的分析方法。

通过选择合适的柱型、流动相和检测波长，可以实现对不同黄酮类化合物的分离和定量。

此外，还可以结合质谱（MS）等技术，用于黄酮类化合物的结构鉴定和定量分析。

需要注意的是，不同的黄酮类化合物在不同的测定方法中可能表现出不同的灵敏度和选择性，因此在选择测定方法时需要考虑到样品中的主要成分和相关性质。

同时，还应注意样品的前处理、提取和色谱条件等因素，以获得准确可靠的测定结果。

黄酮含量的测定

A C
增大
二、溶液的吸光定律
透光率（透射比）透光率定义：入射光 I0 透射光 It
It T I0
T 取值为0.0 % ~ 100.0 % 全部吸收全部透射 T = 0.0 % T = 100.0 %
Lambert – Beer Law:
A Kcb
物质的性质
lg T Kcb A
（3）样品测定：
根据样品中总黄酮含量高低，取适宜体积待测
液，按标准曲线制备操作步骤于510nm处进行吸光度
的测定（样液如有沉淀，应过滤后测定）。
4.结果计算
根据标准工作曲线，求出相当于样品吸光度的芦
丁含量。
入射光波长温度
K：吸光系数
吸收定律与吸收光谱的关系
吸光定律 A 吸收光谱 C
A或

A

max C
吸光度的加合性
多组分体系中，如果各组分之间无相互作用，其吸光度具有加合性，即
A
Ai ibci b i ci
i i i
对吸收定律偏离
A
主要原因
非单色光吸光质点的相互作用 C
（2）标准曲线的绘制：准确吸取芦丁标准溶液0、0.50、1.00、2.00、 3.00、⒋00ml（相当于芦丁0、75、150、300、450、 600ug），移入10ml刻度比色管中，加入30％乙醇溶液至5ml，各加5％亚硝酸钠溶液0.3ml，振摇后放置 5min，加入10％硝酸铝溶液0.3ml摇匀后放置 6min，加1.0mol／L氢氧化钠溶液2ml，用30％乙醇定容至刻度。摇匀，放置15min，于510nm波长处测定吸光度，以零管为空白，以芦丁含量（ug）为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，计算相关系数（r）。

黄酮含量测定

一、黄酮含量的测定方法1、样品的处理取材料地上部分洗净，晾晒至表面无水分，置于干燥箱中，80℃下干燥至恒重，磨成粉末，过筛待用。

2、标准曲线的绘制准确称取芦丁对照品20mg，置于100ml容量瓶中，加体积分数70%乙醇溶解至刻度，摇匀得0.2mg/ml的对照品溶液。

然后，分别吸取0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4ml，分别置于7支试管中，加水补齐至2.4ml，分别加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。

再加入10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。

加入4.3%氢氧化钠溶液4ml，然后分别加2.2ml水，摇匀，放置15min。

以空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长处测定吸光度。

3、黄酮的提取（微波提取法）准确称取干燥至横重的野生马齿苋粉末3份，每份1g，分别置于锥形瓶中，喷洒适量蒸馏水润湿，用中高火微波处理90s。

加入一定量体积分数为70%的乙醇溶液，于80℃恒温水浴加热提取1.5h，趁热过滤，洗涤残渣，用70%乙醇定容于50ml容量瓶中，摇匀，得黄酮提取液。

4、黄酮含量的计算吸取分别黄酮提取液1ml，加1.4ml蒸馏水，摇匀，加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。

再加10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。

加入4.3%氢氧化钠溶液4ml。

加入蒸馏水2.8ml，摇匀放置15min。

以蒸馏水代替黄酮提取液的空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长出测定吸光度。

带入标准曲线中，计算黄酮含量。

总黄酮含量（mg/g）= c*v/m式中：c为1ml样品中测得的黄酮含量（mg）；v为提取液总体积（ml）；m为叶片干重。

二、矿质元素的测定每份需0.2g。

黄酮含量的测定方法

黄酮含量的测定方法黄酮含量的测定方法1、对照法1）①对照品制备：精密称取芦丁对照品20.8mg，置于100ml容量瓶中，加70%乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。

②样品溶液制备精密称取样品0.50g，精密加入70%乙醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，称定重量，用70%乙醇补足减失重量，即得。

③标准曲线的制备精密称取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于25ml比色管中，加70%乙醇10ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加1mol/L 氢氧化钠溶液10ml，加70%乙醇置刻度，摇匀，放置15分钟。

各取10ml 置于50ml容量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度。

在510nm的波长下测定吸光度。

2）①样品溶液的制备：分别精确称取80℃恒温干燥的样品用50%甲醇回流提取，料液比1：15,提取两次，每次30min，将两次提取液合并浓缩至一定体积，用30%甲醇定容至50ml 容量瓶中。

从其中取出12ml溶液放入100ml 容量瓶中，稀释至刻度，再从100ml 容量瓶中取出1.5ml溶液，放至10ml容量瓶中，定容，为待测样品液Ⅰa和Ⅱa。

②最大吸收波长的选择：分别作样品液Ⅰa、Ⅱa及芦丁标准品的吸收曲线，均在350 nm 处有一强吸收，因此选择350 nm为测定波长。

③标准曲线的制定：精密称取芦丁对照品10.3mg，用少量30%乙醇溶解后，转移至50ml容量瓶，用蒸馏水定容至刻度。

分别精密量取2ml、3ml、4ml、5ml、6ml芦丁溶液置于100ml 容量瓶中，于350 nm 波长处测定吸光值，以芦丁空白为参比，以芦丁浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，提示在4.12～12.36mg／103ml浓度之间，吸光度值与浓度呈现良好的线性关系。

④含量测定结果：分别吸取2．2．1中Ⅰa和Ⅱa待测样品液各适量于石英比色池中，按标准芦丁一吸光度测定法，以样液空白参比，于350nm 波长下测定吸光值，计算各提取液中总黄酮含量。

黄酮类含量测定方法

黄酮类含量测定方法
黄酮类是一种常见的植物次生代谢产物，具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。

因此，测定黄酮类的含量对于研究植物的生物活性和药用价值具有重要意义。

以下是测定植物中黄酮类含量的常用方法：
1. 酸水解法
通过酸水解将黄酮骨架中的糖部分裂解，然后用紫外光谱法（UV）或高效液相色谱法（HPLC）等方法测定莽草中黄酮类的总含量。

但是，该方法会破坏一部分黄酮类化合物的结构、消耗大量的试剂和时间。

2. 高效液相色谱法（HPLC）法
由于黄酮类化合物的分子结构复杂，所以HPLC法是测定黄酮类含量的有效方法之一。

通过将样品在特定条件下分离、纯化，利用紫外或荧光探测器分析检测出样品中的黄酮类含量并计算。

该法具有分离效率高、检测灵敏度、可靠度高等优点。

3. 毛细管电泳法（CE）法
毛细管电泳法是利用毛细管对混合物进行分离，将混合物分离为单独的组分的方法，实现其含量分析。

该方法抗干扰性强、检测速度快，适用于对样品含量分析较低且复杂的情况。

综上所述，不同的样品或应用领域需要不同的黄酮类含量测定方法，研究者可以
根据自己的需要选用不同的方法进行研究。

总黄酮含量测定

总黄酮含量测定1 总黄酮含量测定1． 1 紫外可见分光光度法严赞开［1］综述了紫外分光光度法测定植物中黄酮含量的方法．重点介绍了单波长法、差示法、双波长法、三波长法、导数法等紫外分光光度法测定黄酮类化合物含量的原理及分析特性。

1． 1． 1 紫外可见分光光度法: 是以分子吸收光谱为基础的紫外－可见分光光度法，利用某些物质的分子在峰带I( 300 ～400 nm) 和峰带Ⅱ( 220 ～ 280 nm) 光谱区的吸光度来进行分析测定的方法。

具有简便、适用性广、准确度、精密度和重现性较好等特点，在总黄酮含量分析中发挥着重要作用。

1． 1． 2 比色法: 是一些药典最常用的总黄酮含量检测方法，它主要以Al( NO3 ) 3 为显色剂，在碱性条件下，利用其与总黄酮形成红色螯合物为特征。

常用于总黄酮类化合物含量测定的金属盐试剂有Al( NO3 ) 3、AlCl3 等。

1． 1． 3 差示分光光度法简称ΔA 法: 使用稍高于样品或稍低于样品的标准作参比，测量样品和参比间的相对吸光度。

而此相对吸光度又与样品和参比间的浓度差成比例关系，借差示工作曲线而求出样品的含量。

1． 1． 4 双波长和导数分光光度法: 用于测定吸收光谱曲线重达的混合物的含量而不须用解联立方程，还可分析高浓度及混浊样品，其灵敏度和准确度比普通分光光度法好。

在选择波长时，原则上除了要干扰物有相等吸光度外，还要求两波长比较接近，被测组分在该两波长处的摩尔吸收系数相差大些，这样方法的灵敏度会更高。

如果将上述双波长分光光度计上两个波长尽可能指近，使只相差1 ～ 2 nm，并且同时进行扫瞄，能得到试样一阶导数吸收光谱-吸光度对波长的变化率曲线，即导数分光光度法。

2 药理作用2． 1 镇痛作用赵铁华等［4］研究结果显示灌胃、腹腔注射、皮下注射适宜剂量的黄芩茎叶总黄酮，对实验动物经化学和热刺激导致的疼痛反应皆有一定的抑制作用，其镇痛作用机制与中枢作用相关。

黄酮含量测定知识讲解

黄酮含量测定一、黄酮含量的测定方法1、样品的处理取材料地上部分洗净，晾晒至表面无水分，置于干燥箱中，80℃下干燥至恒重，磨成粉末，过筛待用。

2、标准曲线的绘制准确称取芦丁对照品20mg，置于100ml容量瓶中，加体积分数70%乙醇溶解至刻度，摇匀得0.2mg/ml的对照品溶液。

然后，分别吸取0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4ml，分别置于7支试管中，加水补齐至2.4ml，分别加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。

再加入10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。

加入4.3%氢氧化钠溶液4ml，然后分别加2.2ml水，摇匀，放置15min。

以空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长处测定吸光度。

3、黄酮的提取（微波提取法）准确称取干燥至横重的野生马齿苋粉末3份，每份1g，分别置于锥形瓶中，喷洒适量蒸馏水润湿，用中高火微波处理90s。

加入一定量体积分数为70%的乙醇溶液，于80℃恒温水浴加热提取1.5h，趁热过滤，洗涤残渣，用70%乙醇定容于50ml容量瓶中，摇匀，得黄酮提取液。

4、黄酮含量的计算吸取分别黄酮提取液1ml，加1.4ml蒸馏水，摇匀，加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。

再加10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。

加入4.3%氢氧化钠溶液4ml。

加入蒸馏水2.8ml，摇匀放置15min。

以蒸馏水代替黄酮提取液的空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长出测定吸光度。

带入标准曲线中，计算黄酮含量。

总黄酮含量（mg/g）= c*v/m式中：c为1ml样品中测得的黄酮含量（mg）；v为提取液总体积（ml）；m为叶片干重。

二、矿质元素的测定每份需0.2g。

黄酮含量的测定方法

黄酮含量的测定方法黄酮是一类天然产物，常见于植物中，具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种生物活性。

在药学和食品工业中，测定黄酮含量的方法非常重要，因为它可以评估原料的质量和产品的纯度。

目前常用的测定方法包括光谱法、色谱法和化学法等。

光谱法是测定黄酮含量最常用的方法之一。

常见的光谱法包括紫外-可见吸收光谱法（UV-Vis）和高效液相色谱-紫外检测器（HPLC-UV）。

紫外-可见吸收光谱法通过测定黄酮在特定波长下的吸光度，从而反应其含量。

这种方法操作简单，快速，但需要参考品的标准曲线进行定量分析。

相比之下，HPLC-UV法需要使用高效液相色谱仪，可以通过分离样品中的黄酮类化合物，再通过紫外检测器进行定量分析。

这种方法准确性高，分离效果好，但需要耗费较多的时间和资源。

除了光谱法，色谱法也是测定黄酮含量的常用方法之一。

目前常用的色谱法包括气相色谱法（GC）和液相色谱法（LC）。

气相色谱法通过将黄酮类化合物转化为易挥发的衍生化合物，再通过气相色谱仪进行分离和定量。

这种方法对于易挥发的黄酮类化合物特别有效，但对于不易挥发的化合物则不适用。

液相色谱法分为高效液相色谱法（HPLC）和超高效液相色谱法（UHPLC），通过使用不同的色谱柱和移动相来实现黄酮类化合物的分离和定量。

这种方法具有分离效果好，灵敏度高，且适用范围广的优点。

化学法是一种相对简单的测定黄酮含量的方法。

常见的化学法包括显色反应法、比色反应法和化学滴定法等。

显色反应法通过将黄酮化合物与特定试剂反应产生有色产物，再通过测定产物的吸光度进行定量分析。

这种方法快速简便，但对于不同的黄酮类化合物，可能需要不同的试剂进行定量。

比色反应法通过与金属离子或有机碱反应，产生有色络合物，从而测定黄酮含量。

相比之下，化学滴定法需要使用标准溶液进行滴定，通过滴定的体积或浓度差计算黄酮含量。

这种方法操作简单，但限制较大，只适用于某些特定化合物的测定。

总结起来，测定黄酮含量的方法有光谱法、色谱法和化学法等。

枸杞色素中黄酮含量测定国标

枸杞色素中黄酮含量测定国标引言枸杞是一种传统的中药材，被广泛用于保健和药物制剂中。

枸杞中含有丰富的黄酮类化合物，具有多种生理活性和保健功能。

因此，准确测定枸杞色素中的黄酮含量对于评价其质量和功效非常重要。

本文将介绍国标对于枸杞色素中黄酮含量测定的要求及相关方法。

国标要求根据国家药典委员会发布的《中华人民共和国药典》（2020年版），对于枸杞色素中黄酮含量的测定有以下要求：1.测定方法：采用高效液相色谱法（HPLC）进行测定。

2.检测波长：选择适当的检测波长进行分析。

3.校正曲线：建立合适的校正曲线，并确定分析所需样品体积。

4.样品处理：对样品进行适当处理，如提取、过滤等。

5.仪器条件：设置合适的仪器条件，如流速、柱温等。

6.数据处理：采用适当的数据处理方法，如峰面积法、外标法等。

7.质量控制：采用质量控制样品进行测定，并计算相对标准偏差。

测定方法根据国标要求，我们可以采用以下步骤来测定枸杞色素中黄酮含量：1.准备样品：选择符合要求的枸杞样品，并将其研磨成细粉。

2.提取样品：将细粉加入适量的溶剂中，如甲醇或乙腈，并在适当的条件下进行提取，如超声波提取或加热提取。

3.过滤样品：将提取得到的液体通过滤纸或微孔过滤器进行过滤，以去除杂质。

4.准备标准溶液：根据国标要求，选择适当浓度的黄酮标准物质，并按照一定比例稀释成不同浓度的标准溶液。

5.建立校正曲线：使用HPLC仪器，在适当条件下对不同浓度的标准溶液进行分析，并记录峰面积和浓度之间的关系。

根据这些数据建立校正曲线。

6.样品测定：将经过处理的样品注入HPLC仪器进行分析，记录峰面积。

7.计算含量：使用校正曲线，将样品的峰面积与标准溶液的浓度进行对应，并计算出样品中黄酮的含量。

8.质量控制：使用质量控制样品进行测定，计算相对标准偏差并确保测定结果的准确性和可靠性。

结论通过采用HPLC法测定枸杞色素中黄酮含量，我们可以得到准确且可靠的结果。

根据国标要求，我们需要建立合适的校正曲线，并在适当条件下对样品进行处理和分析。

黄酮含量的测定

黄酮含量的测定黄酮含量的测定1.提取（以麦苗粉为例）根据仿⽣学原理，⼈体胃、⼩肠、⼤肠的体液酸度最佳pH分别为2.0,7.5,8.3。

称取1g麦苗粉末，选⽤⼄醇-⽔作为浸取剂，模拟胃肠道的pH，分别调pH值2.0,7.5,8.3,在60℃下超声50min，合并3次提取剂，，定容。

⼯艺流程：1g麦苗粉末→⼀次提取（加⼊10ml70﹪的⼄醇，⼄醇pH2.0）→抽滤→留渣继续⼆次提取，滤液保存→⼆次提取（加10ml70﹪的⼄醇，提取剂pH7.5）→抽滤→留渣继续三次提取，滤液保存→三次提取（加⼊10ml70﹪的⼄醇，⼄醇pH8.3）→合并三次滤液→定容⾄30mL→黄酮类化合物含量的测定分光光度法测吸光值。

麦苗汁的提取直接从榨汁后定容⾄100ml的麦苗汁中取36.5ml，加⼊85.2ml⽆⽔⼄醇，60℃超声提取150min。

2.试剂配置芦丁标准液：准确称取芦丁标准品7.5mg，⽤50%⼄醇溶解并定容⾄25mL，得到浓度为300mg/mL的芦丁标准溶液。

10% Al(NO3)3溶液：称取5g Al(NO3)3，⽤蒸馏⽔溶解并定容⾄50mL。

5% NaOH 溶液：称取2.5g NaOH，⽤蒸馏⽔溶解并定容⾄50mL。

5% NaNO2 溶液：称取2.5g NaNO2，⽤蒸馏⽔溶解并定容⾄50mL。

0.05mol/L Tris-HCl缓冲液(pH=8.2)：0.1mol/L Tris 50mL，加⼊0.1mol/L HCl 22.9mL，混匀，稀释定容⾄100mL。

3 mmol/L 邻苯三酚-HCl溶液：准确称取0.0189g邻苯三酚，⽤10 mmol/L HCl溶解并定容⾄100mL。

9mmol/L⽔杨酸-⼄醇：准确称取1.2430g⽔杨酸，⽤95%⼄醇溶解并定容到1000mL 容量瓶中。

9mmol/L FeSO4：准确称取1.3680g FeSO4，定容到1000mL容量瓶中。

10mmol/L HCl：准确量取83.3mL分析纯HCl，定容到100mL容量瓶中。

黄酮含量测定

荞麦黄酮含量测定
准备：把样品用无菌水洗干净，在室温下晾干后，放入烘箱中105℃杀青，杀青后样品放到60℃恒温干燥箱至恒重。

将处理好的样品研磨成粉末，放入干燥器中保存备用。

黄酮的测定参考(刘娜，2006)紫外分光光度法。

1.标准曲线的绘制
①芦丁标准品56㎎于50ml容量瓶中；
②用70%甲醇溶液溶解，并定容至刻度线（标准溶液）；
③用移液枪分别吸取芦丁标准溶液0.5ml、1ml、1.5ml、2ml、2.5ml、3ml置于25ml容量瓶中；
④加入三氯化铝2ml，乙酸甲溶液3ml，用70%的甲醇溶液定容至刻度，摇匀，得到芦丁对照品浓度梯度溶液；
⑤静置30min后用试剂空白作背景；
⑥分别对上述芦丁对照品浓度梯度进行测定，用吸光度(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线。

2.样品的测定
①准确称取研磨后的样品粉末1g，加入30ml75%的甲醇，置于60℃恒温水浴锅中水浴4h；
②趁热过滤于50ml的容量瓶中，用75%的甲醇溶液清洗滤纸和残渣，合并滤液，冷却至室温，加甲醇溶液定容至刻度，摇匀，为待测液。

③准确吸取1.0ml待测液置于25ml容量瓶中，分别后加入三氯化铝2ml，乙酸甲3ml，用75%的甲醇定容至刻度，摇匀，室温下放置30min，于波长420nm处测定吸光值。

黄酮含量测定

植物黄酮含量测定
对照品溶液的制备
精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀。

精密量取20ml，置50ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（每1ml中含无水芦丁0.2mg）。

标准曲线的制备
精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照紫外-可见分光光度法（通则0401），在500mn 的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定方法
取植物干燥细粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇继续提取至无色（约4小时），提取液蒸干，残渣加稀乙醇溶解，转移至50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为供试品贮备液。

取供试品贮备液，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，即得。