总结-各种实验方法的作用

2.聚合酶链式反应（PCR）

标签：聚合酶链式反应PCR

PCR技术可用于：（1）检验感染性疾病是否处于隐性或亚临床状态；（2）有效检测癌基因的突变，准确检测癌基因的表达量；（3）临床应用于检测地中海贫血的基因突变。

3.逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）

标签：逆转录RT-PCR 聚合酶链反应

逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，

RT-PCR）可以：(1）分析基因的转录产物；（2）获取目的基因；（3）合成cDNA 探针；（4）构建RNA高效转录系统。

4.免疫组化

标签：免疫免疫组化

免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色

剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。根据标记物的不同分为：免疫酶法、免疫荧光法、亲和组织化学法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。其中前三种最常用。

标签：细胞细胞凋亡检测

细胞凋亡检测可以：（1）用于肿瘤细胞和组织在内的不同种类病理标本研究；（2）应用于临床诊疗，新药研制、生物制品开发、肿瘤放化疗、以及从促凋亡角度探索肿瘤的基因治疗；（3）对相关疾病的早期发现、放化疗的疗效评价具有举足轻重的地位。

碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI 匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。

标签：细胞冻存复苏

细胞冻存和复苏可以：（1）用于生物学保种；（2）用于医学上干细胞研究；（3）用于传代培养。

标签：蛋白质表达分离纯化

蛋白质表达、分离、纯化可以：（1）探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理；（2）供作结构与功能的研究；（3）作为催化剂、营养剂等。

标签：质粒DNA 提取

质粒DNA提取可以：（1）快速纯化质粒；（2）用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。

标签：大肠杆菌转化

大肠杆菌转化可以：（1）将重组DNA分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达，以获得目的基因；（2）验证大肠杆菌感受态细胞效果；（3）用于分子生物学其他研究。

标签：大肠杆菌感受态细胞制备

细胞经过一些特殊方法（电击法、CaCl2法）等处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的细胞，即感受态细胞（Compenent cells）。

标签：凝胶迁移EMSA

凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）可以：（1）研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用；（2）可用于DNA定性和定量分析；（3）用于研究RNA 结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

实验方法原理凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA-electrophoretic mobility shift assay）是一种研究DNA结合蛋白和相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DN 或RNA片段和寡核苷酸片段（特异），和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

标签：酶联免疫吸附ELISA

酶联免疫吸附（ELISA）可以：（1）免疫酶染色各种细胞内成份的定位。（2）研

究抗酶抗体的合成。（3）显现微量的免疫沉淀反应。（4）定量检测体液中抗原或

抗体成份。

实

验

方

法

原

理

图1. 双抗体夹心法测抗原示意图

双抗体夹心法（测抗原）：本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。

这种方法欲测的抗原必须有两个可以与抗体结合的部位，因为其一端要包被于固相载体上的抗体作用，另一端则要与酶标记特异性抗体作用。因此，不能用于分子量小于5000的半抗原之类的抗原测定。我用在霍乱肠毒素的测定。HbSAg及HbS的测定。

实

验

方

法

原

理

图1：间接法测抗体示意图

间接法（测抗体）：间接法首先用抗原包被于固相载体，这些包被的抗原必须是可溶性的，或者至少是微小的颗粒，经洗涤，加入含有被测抗体之标本，再经孵育洗涤后，加入酶标记抗抗体，(对人的标本说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM)，再经孵育洗涤后，加底物显色，底物降解的量，即为欲测抗体的量其结果可用目测或用分光光度计定量测定，本法用同种抗原包被固相载体后，只要用一种酶标记抗人球白，即可作多种人的传染病、寄生虫病以及其他疾病的血清学诊断。如用酶标记抗人IgM，则可用于早

诊断。