微生物学显微镜直接计数法 ppt课件
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微生物大小的测定及显微镜直接计数法
微生物大小和数量的测定一、目的要求1．学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。
2．增强微生物细胞大小的感性认识。
3．了解血球计数板的构造、明确其计数原理。
4．学习并掌握使用血球计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法。
二、基本原理l.显微测微尺显微测微尺可用于测量微生物细胞或孢子的大小，包括镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。
目镜测微尺（图1）是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有等分为50小格和100小格两种。
测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。
由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。
因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。
然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。
镜台测微尺全长1mm，等分为100格，每格0.01mm。
用于校正目镜测微尺每小格的长度.目镜测微尺每格长度（μm）=两重合线间镜台测微尺格数×10两重合线间目镜测微尺格数2.表示方法球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。
如金黄色葡萄球菌直径约为0.8µm，枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3µm。
图1：目镜测微尺和镜台测微尺3．显微直接计数法：将小量待测样品悬浮液置于计菌器上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如酵母、细菌、霉菌孢子等。
菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板或Hawksley计数板。
三种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。
而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。
微生物的纯培养生长曲线及繁殖ppt课件
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一、生长曲线
第二节 细菌的群体生长繁殖
由于采用活菌计数比较麻烦，并要求严格进行操作，否则不易得到
准确的结果，重复性也差，因此在实际工作中多采用分光光度计测
定OD值的方法绘制细菌的生长曲线。
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二、连续培养
第二节 细菌的群体生长繁殖
将微生物置于一定容积的培养基中，经过培养生长，最后一次收获。
缺点：
不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；
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13
一 以数量变化对微生物生长情况进行测定 4、显微镜直接计数法
2）其它方法： 过滤计数：
可以将一定体积的湖水、海水或饮用水等样品通过膜过滤器。然后将 滤膜染色，再在显微镜下计算膜上(或一定面积中)的细菌数；
迅速、代时稳定，所以是研究微生物基本代谢的良好材料。它也常在生产上用作
种子，使微生物发酵的迟缓期缩短，提精高选经编辑济pp效t 益。
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在细菌个体生长里，每个细菌分裂繁殖一代所 需的时间为代时(Generation time);
在群体生长里细菌数量增加一倍所需的时间称 为倍增时间（Doubling time);通常也称为代时， 代时以G表示。
通常用来测定细菌、酵母菌等单细胞微生物的生长情况 或样品中所含微生物个体的数量（细菌、孢子、酵母菌） 1、培养平板计数法
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6
第一节 微生物生长的测定
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7
采用培养平板计数法要求操作熟练， 否则难以得到正确的结果：
样品充分混匀；
每支移液管及涂布棒只能接触一个 稀释度的菌液；
同一稀释度三个以上重复,取平均值；
微生物的选择培养与计数课件-高二生物人教版选择性必修3
分离纯化菌种，获得单菌落
①分离纯化菌种，获得单菌落②用于计数
①都能分离纯化菌种；②都是在固体培养基上进行的。
2023/3/12
操作示范视频：
——间接计数法
1.稀释涂布平板法
（1）原理：
当样品的稀释度足够___时，培养基表面生长的一个____，来源于__________中的一个____；通过计数平板上的____数，就能推测出样品中大约含有多少_____。
Na2HPO4
2.1g
MgSO4·7H2O
0.2g
琼脂
15.0g
蒸馏水
1000ml
②牛肉膏蛋白胨培养基：
作为对照组，来判断选择培养基是否具有选择作用。
③KH2PO4和Na2HPO4的作用是：
提供无机盐； 调节pH。
（3）样品的稀释与涂布平板
（稀释涂布平板法）
注：测细菌时，一般选用104、105、106倍稀释的稀释液进行平板培养 在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，应选择一个比较宽的范围，将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上培养，以保证能从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数。
加入青霉素
不加氮源（以N2为氮源）
不加有机碳源（以CO2为碳源）
将pH调至酸性
思考-讨论
尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素被土壤中某些细菌分解成NH3,再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。
这些细菌之所以能分解尿素，是因为能合成脲酶，来催化尿素分解。
筛选原则：
被石油污染的土壤
冰川冻土层
实验室筛选微生物原理： 人为提供_______________的条件（包括_____、_____和_____等），同时_______________________
①分离纯化菌种，获得单菌落②用于计数
①都能分离纯化菌种；②都是在固体培养基上进行的。
2023/3/12
操作示范视频：
——间接计数法
1.稀释涂布平板法
（1）原理：
当样品的稀释度足够___时，培养基表面生长的一个____，来源于__________中的一个____；通过计数平板上的____数，就能推测出样品中大约含有多少_____。
Na2HPO4
2.1g
MgSO4·7H2O
0.2g
琼脂
15.0g
蒸馏水
1000ml
②牛肉膏蛋白胨培养基：
作为对照组，来判断选择培养基是否具有选择作用。
③KH2PO4和Na2HPO4的作用是：
提供无机盐； 调节pH。
（3）样品的稀释与涂布平板
（稀释涂布平板法）
注：测细菌时，一般选用104、105、106倍稀释的稀释液进行平板培养 在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，应选择一个比较宽的范围，将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上培养，以保证能从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数。
加入青霉素
不加氮源（以N2为氮源）
不加有机碳源（以CO2为碳源）
将pH调至酸性
思考-讨论
尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素被土壤中某些细菌分解成NH3,再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。
这些细菌之所以能分解尿素，是因为能合成脲酶，来催化尿素分解。
筛选原则：
被石油污染的土壤
冰川冻土层
实验室筛选微生物原理： 人为提供_______________的条件（包括_____、_____和_____等），同时_______________________
微生物大小的测定及显微镜直接计数法
微生物学实验报告题目：微生物大小的测定及显微镜直接计数法姓名：学号：年级班级：组别：同组者：时间：【目的要求】1．学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。
2．了解血球计数板的构造、明确其计数原理。
3．学习并掌握使用血球计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法。
【基本原理】l．测微尺的构造：显微镜测微尺是由目镜测微尺和镜台接物测微尺组成目镜测微尺是一块圆形玻璃片，其中有精确的等分刻度，在5mm 刻尺上分50 份。
目镜测微尺每格实际代表的长度随使用接目镜和接物镜的放大倍数而改变，因此在使用前必须用镜台测微尺进行标定。
镜台测微尺为一专用的载玻片，中央有精确等分线将长为1mm 的直线等分成100 个小格，每格长10μm，专用于校正目镜测微尺。
2.球菌用直径表示大小；杆菌用宽和长来表示图一：测微尺的校正3．显微直接计数法：将小量待测样品悬浮液置于计菌器上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如酵母、细菌、霉菌孢子等。
菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板或Hawksley计数板。
三种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。
而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。
中间较宽的平台，被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。
计数区的刻度有两种：一种是计数区（大方格）分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。
计数区由400个小方格组成。
每个大方格边长为1mm，其面积为lmm2，盖上盖玻片后，盖载玻片间的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3。
使用血球计数板计数时，通常测定五个中方格的微生物数量，求其平均值，再乘以25或16，就得到一个大方格的总菌数，然后再换算成1毫升菌液中微生物的数量。
常见微生物数量测定方法比较(共12张PPT)
总结与比较
血细胞计数板和细菌计数板常用于测定单细胞或孢子, 相对比较准确;
膜过滤用于测定细胞浓度很低的样品,平板菌落计数对 多数微生物的测定都适用, 但是相对其他计数法要复杂;
比浊法相对准确,但需要作标准曲线; 对于丝状微生物的数量测定,国际上有明确的标准; 而凯氏定氮法和DNA 含量测定法都是通过对微生物细 胞内含量相对稳定的物质进行定量测定, 再算出细胞的数 量,操作相对复杂.
2.活细胞计数法
2.3 霉菌计数法
对于霉菌的计数一般比较困难,由于霉菌生长快, 菌丝叠加导致无法准确计数.国标霉菌计数法的原 理是:将待测菌液进行10 倍梯度系列稀释,利用高 盐察氏培养基(CAO)与待测菌液混匀后倒平板,25 一28℃下培养3d 后开始计数,选择菌落数在10150 之间的平板进行计数,取同稀释度的两个平板 的菌落平均数乘以稀释倍数,即为每g(或 mL)检样 中所含霉菌数。
常见微生物数量测定方法比较
ห้องสมุดไป่ตู้
微生物主要包括原核微生物,真核微生物,病毒等 三大 类,由于多数微生物的个体较小,肉眼无法观察, 对其计数 一般比较困难.在目前的微生物实验教学 中,对微生物计 数的方法主要有三大类:总细胞计数法,活细胞计数法和 微生物生长量测定法.并不是每种方法都是通用的,不同 的微生物种类需要不同的计数方法,目前多用以下8 种方 法进行计数:
1.总细胞计数法
1.3 膜过滤计数法
利用计数板对高浓度的菌液测定比较准确,但当样品中细菌 的数量很低时,如湖水, 海水或饮用水等,用膜过滤计数法更精 确些,可以将一定体积样品溶液加结晶紫染色,再用0.22mm的 聚偏二氟乙烯膜负压过滤,再用无菌水冲洗至无色后,将过滤的 膜进行抽干,将膜放到载玻片上,滴加甘油,盖上盖玻片,即可在 显微镜下计数.一般随机抽取20个视野进行计数,最后算平均数, 计算整个滤膜上的菌的数量,得到原菌液中的微生物数量. 此测 定方法一般只能用于样品中细菌数量很低的。
实验四、环境中微生物的检测PPT课件
谢谢观看
03
实验步骤
样品采集
采集环境中的水样、 土壤样、空气样等， 确保采集的样品具有 代表性。
记录采集时间、地点、 环境条件等信息，以 便后续分析。
使用无菌容器或薄膜 采集样品，避免交叉 污染。
样品处理
将采集的样品进行稀释，使微生物分 散。
对样品进行富集培养，提高微生物的 数量。
对样品进行过滤或离心，使微生物与 杂质分离。
结果应用
环境监测
实验结果可以为环境监测提供依 据，了解环境中微生物的分布和
数量，评估环境质量。
公共卫生
实验结果可以为公共卫生领域提 供参考，了解环境中微生物的种 类和数量，评估其对人类健康的
风险。
科学研究
实验结果可以为科学研究提供数 据支持，深入探究环境中微生物
的生态学和生物学特性。
05
实验总结
实验不足与改进
实验不足
在实验过程中，我发现自己在操作显微镜时还不够熟练，有 时会出现观察不准确的情况。此外，我在实验数据处理方面 也存在一些问题，如数据记录不准确、分析不全面等。
改进方法
为了提高实验的准确性和可靠性，我计划在课后多加练习使 用显微镜，提高自己的操作技能。同时，我也要加强学习数 据处理和分析方面的知识，掌握更多的统计方法和软件应用 技巧。
实验四、环境中微生物的检测ppt 课件
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验总结
01
实验目的
掌握微生物检测的基本原理
01
微生物检测是利用特定的方法和 技术对环境中的微生物进行检测 和计数，以评估环境卫生状况和 潜在的健康风险。
02
基本原理包括微生物培养法、免 疫学方法、分子生物学方法等， 这些方法基于不同原理，能够对 不同类型的微生物进行检测。
实验五微生物细胞大小的测定及显微镜下直接计数
实验五 微生物细胞大小的测定 及显微镜下直接计数
主要实验内容：
一 显微镜下细菌细胞大小的测定 二 血球计数板测定微生物细胞的数量 （显微镜下直接计数）
一 显微镜下细菌细胞大小的测定
1 实验目的 2 实验原理 3 实验材料 4 实验方法步骤 5 实验报告
1 实验目的
学习用镜台测微尺校正目镜测微尺的方法★ 学习并掌握用目镜测微尺测定细菌细胞大小 的方法★★ 巩固显微镜油镜的使用方法
5 实验报告
（1） 目镜测微尺标定结果记录
物镜 低倍镜 油镜 物镜放大倍数 目镜测微尺格数 镜台测微尺格数 目镜测微尺每格 代表长度（um）
100
×
×
0.5um
（2） 在油镜下测量枯草杆菌大小结果记录
菌体 编号 1 2 3 4 5
….
宽 目尺 格数
长
菌体宽 平均值 目尺格 菌体长 平均值 （um） （um） 数
计数方法
在计数时，用含16个中方格的计数板，要按对角线方位 计数左上、左下、右上、下等四个中方格（100个小方格） 所含有的菌数；由此可计算得出每个小方格所含有的菌数 的平均值， 计数室每个小方格容积为： 0.1×10-3÷400＝1／4×106 (ml) 计算公式：
每ml菌液含菌数 = N ×K ×d
菌体大小 （平均值） 宽 ×长（um）
20
二 血球计数板测定微生物细胞的数量
1 实验目的 2 实验原理 3 实验材料 4 实验方法步骤 5 实验报告
1 实验目的
掌握血球计数板测定微生物细胞数量的原理。 学习用血球计数板测定微生物细胞数量的方法。
2 实验原理
利用血球计数板在显微镜下直接计数，是将菌悬液 放入血球计数板与盖玻片之间的计数室中，然后在显微 镜下计数，因为计数室容积一定，所以可根据测定值推 算出菌悬液单位体积所含微生物的总数量。
主要实验内容：
一 显微镜下细菌细胞大小的测定 二 血球计数板测定微生物细胞的数量 （显微镜下直接计数）
一 显微镜下细菌细胞大小的测定
1 实验目的 2 实验原理 3 实验材料 4 实验方法步骤 5 实验报告
1 实验目的
学习用镜台测微尺校正目镜测微尺的方法★ 学习并掌握用目镜测微尺测定细菌细胞大小 的方法★★ 巩固显微镜油镜的使用方法
5 实验报告
（1） 目镜测微尺标定结果记录
物镜 低倍镜 油镜 物镜放大倍数 目镜测微尺格数 镜台测微尺格数 目镜测微尺每格 代表长度（um）
100
×
×
0.5um
（2） 在油镜下测量枯草杆菌大小结果记录
菌体 编号 1 2 3 4 5
….
宽 目尺 格数
长
菌体宽 平均值 目尺格 菌体长 平均值 （um） （um） 数
计数方法
在计数时，用含16个中方格的计数板，要按对角线方位 计数左上、左下、右上、下等四个中方格（100个小方格） 所含有的菌数；由此可计算得出每个小方格所含有的菌数 的平均值， 计数室每个小方格容积为： 0.1×10-3÷400＝1／4×106 (ml) 计算公式：
每ml菌液含菌数 = N ×K ×d
菌体大小 （平均值） 宽 ×长（um）
20
二 血球计数板测定微生物细胞的数量
1 实验目的 2 实验原理 3 实验材料 4 实验方法步骤 5 实验报告
1 实验目的
掌握血球计数板测定微生物细胞数量的原理。 学习用血球计数板测定微生物细胞数量的方法。
2 实验原理
利用血球计数板在显微镜下直接计数，是将菌悬液 放入血球计数板与盖玻片之间的计数室中，然后在显微 镜下计数，因为计数室容积一定，所以可根据测定值推 算出菌悬液单位体积所含微生物的总数量。
《显微镜直接计数法》PPT课件
版权所有 未经作者同意 请勿使用
实验十 显微镜直接计数技术
三、实验材料：
1.实验菌种及培养基：酿酒酵母菌细胞稀释 液； 2. 实验设备及器材：恒温培养箱；恒温干燥 箱；高压蒸汽灭菌锅；显微镜；酒精灯；接 种环；滴瓶；试剂瓶；双层瓶；镊子；载玻 片；φ90mm培养皿；500ml标本缸；15×150 试管；火柴（或打火机）；吸水纸；镜头纸； 棉花；
版权所有 未经作者同意 请勿使用
实验十 显微镜直接计数技术
计数室是一个边长为1mm的正方形，其面积 为1mm2。每个计数室被辅助线划分为25 （中格）×16（小格）个小格，以方便计数。 图10-2为计数室（红色双线围成的即为由25 个中格组成的计数室。）
＋
加样处
＋
图10-1 计数板俯视图
二、基本原理：
显微镜直接计数技术可以对含菌样品所含的 总菌数做出统计，是常用的、较快捷的一种 统计微生物数量的方法和技术。 显微镜直接计数技术使用一特制的、专用的 计数工具——血球计数板进行计数操作。 血球计数板上有四条槽，把计数板分为三个 平台，两侧的平台用于搭放盖玻片，中间的 平台又被分为两个较小的、每个平台上各有 一个计数室的平台。如图10-1
1.将统计、计数结果填入下表：
版权所有 未经作者同意 请勿使用
实验十 显微镜直接计数技术
2.影响显微镜直接计数结果的因素有哪些， 如何避免？ 3. 整理实验设备，清理实验台。
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1、快乐总和宽厚的人相伴，财富总与诚信的人相伴，聪明总与高尚的人相伴，魅力总与幽默的人相伴，健康总与阔达的人相伴。 2、人生就有许多这样的奇迹，看似比登天还难的事，有时轻而易举就可以做到，其中的差别就在于非凡的信念。 3、影响我们人生的绝不仅仅是环境，其实是心态在控制个人的行动和思想。同时，心态也决定了一个人的视野和成就，甚至一生。 4、无论你觉得自己多么了不起，也永远有人比更强;无论你觉得自己多么不幸，永远有人比你更不幸。 5、也许有些路好走是条捷径，也许有些路可以让你风光无限，也许有些路安稳又有后路，可是那些路的主角，都不是我。至少我会觉得，那些路不是自己想要的。 6、在别人肆意说你的时候，问问自己，到底怕不怕，输不输的起。不必害怕，不要后退，不须犹豫，难过的时候就一个人去看看这世界。多问问自己，你是不是已经为了梦想而竭尽全力了? 7、人往往有时候为了争夺名利，有时驱车去争，有时驱马去夺，想方设法，不遗余力。压力挑战，这一切消极的东西都是我进取成功的催化剂。 8、真想干总会有办法，不想干总会有理由;面对困难，智者想尽千方百计，愚者说尽千言万语;老实人不一定可靠，但可靠的必定是老实人;时间，抓起来是黄金，抓不起来是流水。 9、成功的道路上，肯定会有失败;对于失败，我们要正确地看待和对待，不怕失败者，则必成功;怕失败者，则一无是处，会更失败。1、快乐总和宽厚的人相伴，财富总与诚信的人相伴，聪明总与高尚的人相伴，魅力总与幽默的人相伴，健康总与阔达的人相伴。 2、人生就有许多这样的奇迹，看似比登天还难的事，有时轻而易举就可以做到，其中的差别就在于非凡的信念。 3、影响我们人生的绝不仅仅是环境，其实是心态在控制个人的行动和思想。同时，心态也决定了一个人的视野和成就，甚至一生。 4、无论你觉得自己多么了不起，也永远有人比更强;无论你觉得自己多么不幸，永远有人比你更不幸。 5、也许有些路好走是条捷径，也许有些路可以让你风光无限，也许有些路安稳又有后路，可是那些路的主角，都不是我。至少我会觉得，那些路不是自己想要的。 6、在别人肆意说你的时候，问问自己，到底怕不怕，输不输的起。不必害怕，不要后退，不须犹豫，难过的时候就一个人去看看这世界。多问问自己，你是不是已经为了梦想而竭尽全力了? 7、人往往有时候为了争夺名利，有时驱车去争，有时驱马去夺，想方设法，不遗余力。压力挑战，这一切消极的东西都是我进取成功的催化剂。 8、真想干总会有办法，不想干总会有理由;面对困难，智者想尽千方百计，愚者说尽千言万语;老实人不一定可靠，但可靠的必定是老实人;时间，抓起来是黄金，抓不起来是流水。14、成长是一场和自己的比赛，不要担心别人会做得比你好，你只需要每天都做得比前一天好就可以了。 15、最终你相信什么就能成为什么。因为世界上最可怕的二个词，一个叫执着，一个叫认真，认真的人改变自己，执着的人改变命运。只要在路上，就没有到不了的地方。 16、你若坚持，定会发光，时间是所向披靡的武器，它能集腋成裘，也能聚沙成塔，将人生的不可能都变成可能。 17、人生，就要活得漂亮，走得铿锵。自己不奋斗，终归是摆设。无论你是谁，宁可做拼搏的失败者 9、成功的道路上，肯定会有失败;对于失败，我们要正确地看待和对待，不怕失败者，则必成功;怕失败者，则一无是处，会更5、别着急要结果，先问自己够不够格，付出要配得上结果，工夫到位了，结果自然就出来了。 6、你没那么多观众，别那么累。做一个简单的人，踏实而务实。不沉溺幻想，更不庸人自扰。 7、别人对你好，你要争气，图日后有能力有所报答，别人对你不好，你更要争气望有朝一日，能够扬眉吐气。 8、奋斗的路上，时间总是过得很快，目前的困难和麻烦是很多，但是只要不忘初心，脚踏实地一步一步的朝着目标前进，最后的结局交给时间来定夺。 9、运气是努力的附属品。没有经过实力的原始积累，给你运气你也抓不住。上天给予每个人的都一样，但每个人的准备却不一样。不要羡慕那些总能撞大运的人，你必须很努力，才能遇上好运气。 10、你的假装努力，欺骗的只有你自己，永远不要用战术上的勤奋，来掩饰战略上的懒惰。 11、时间只是过客，自己才是主人，人生的路无需苛求，只要你迈步，路就在你的脚下延伸，只要你扬帆，便会有八面来风，启程了，人的生命才真正开始。 12、不管做什么都不要急于回报，因为播种和收获不在同一个季节，中间隔着的一段时间，我们叫它为坚持。失败。11、学会学习的人，是非常幸福的人。——米南德 12、你们要学习思考，然后再来写作。——布瓦罗 13、在寻求真理的长河中，唯有学习，不断地学习，勤奋地学习，有创造性地学习，才能越重山跨峻岭。——华罗庚 14、许多年轻人在学习音乐时学会了爱。——莱杰 15、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基 16、我们一定要给自己提出这样的任务：第一，学习，第二是学习，第三还是学习。——列宁 17、学习的敌人是自己的满足，要认真学习一点东西，必须从不自满开始。对自己，“学而不厌”，对人家，“诲人不倦”，我们应取这种态度。——毛泽东 18、只要愿意学习，就一定能够学会。——列宁 19、如果学生在学校里学习的结果是使自己什么也不会创造，那他的一生永远是模仿和抄袭。——列夫· 托尔斯泰 20、对所学知识内容的兴趣可能成为学习动机。——赞科夫 21、游手好闲地学习，并不比学习游手好闲好。——约翰· 贝勒斯 22、读史使人明智，读诗使人灵秀，数学使人周密，自然哲学使人精邃，伦理学使人庄重，逻辑学使人善辩。——培根 23、我们在我们的劳动过程中学习思考，劳动的结果，我们认识了世界的奥妙，于是我们就真正来改变生活了。——高尔基 24、我们要振作精神，下苦功学习。下苦功，三个字，一个叫下，一个叫苦，一个叫功，一定要振作精神，下苦功。——毛泽东 25、我学习了一生，现在我还在学习，而将来，只要我还有精力，我还要学习下去。——别林斯基、学习外语并不难，学习外语就像交朋友一样，朋友是越交越熟的，天天见面，朋友之间就亲密无间了。——高士其 2、对世界上的一切学问与知识的掌握也并非难事，只要持之以恒地学习，努力掌握规律，达到熟悉的境地，就能融会贯通，运用自如了。——高士其 3、学和行本来是有联系着的，学了必须要想，想通了就要行，要在行的当中才能看出自己是否真正学到了手。否则读书虽多，只是成为一座死书库。——谢觉哉、你的假装努力，欺骗的只有你自己，永远不要用战术上的勤奋，来掩饰战略上的懒惰。 11、时间只是过客，自己才是主人，人生的路无需苛求，只要你迈步，路就在你的脚下延伸，只要你扬帆，便会有八面来风，启程了，人的生命才真正开始。 12、不管做什么都不要急于回报，因为播种和收获不在同一个季节，中间隔着的一段时间，我们叫它为坚持。 13、你想过普通的生活，就会遇到普通的挫折。你想过最好的生活，就一定会遇上最强的伤害。这个世界很公平，想要最好，就一定会给你最，取平均值； 6.计算样品所含总菌数：根据统计、计数结 果，计算样品所含的总菌数； 7.清洗处理计数板：实验完成后，及时按 规定清洁处理技术板。 本实验所用计数板，可用清水清洁处理后， 吸干水分，妥善保存。
实验十 显微镜直接计数技术
三、实验材料：
1.实验菌种及培养基：酿酒酵母菌细胞稀释 液； 2. 实验设备及器材：恒温培养箱；恒温干燥 箱；高压蒸汽灭菌锅；显微镜；酒精灯；接 种环；滴瓶；试剂瓶；双层瓶；镊子；载玻 片；φ90mm培养皿；500ml标本缸；15×150 试管；火柴（或打火机）；吸水纸；镜头纸； 棉花；
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实验十 显微镜直接计数技术
计数室是一个边长为1mm的正方形，其面积 为1mm2。每个计数室被辅助线划分为25 （中格）×16（小格）个小格，以方便计数。 图10-2为计数室（红色双线围成的即为由25 个中格组成的计数室。）
＋
加样处
＋
图10-1 计数板俯视图
二、基本原理：
显微镜直接计数技术可以对含菌样品所含的 总菌数做出统计，是常用的、较快捷的一种 统计微生物数量的方法和技术。 显微镜直接计数技术使用一特制的、专用的 计数工具——血球计数板进行计数操作。 血球计数板上有四条槽，把计数板分为三个 平台，两侧的平台用于搭放盖玻片，中间的 平台又被分为两个较小的、每个平台上各有 一个计数室的平台。如图10-1
1.将统计、计数结果填入下表：
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实验十 显微镜直接计数技术
2.影响显微镜直接计数结果的因素有哪些， 如何避免？ 3. 整理实验设备，清理实验台。
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1、快乐总和宽厚的人相伴，财富总与诚信的人相伴，聪明总与高尚的人相伴，魅力总与幽默的人相伴，健康总与阔达的人相伴。 2、人生就有许多这样的奇迹，看似比登天还难的事，有时轻而易举就可以做到，其中的差别就在于非凡的信念。 3、影响我们人生的绝不仅仅是环境，其实是心态在控制个人的行动和思想。同时，心态也决定了一个人的视野和成就，甚至一生。 4、无论你觉得自己多么了不起，也永远有人比更强;无论你觉得自己多么不幸，永远有人比你更不幸。 5、也许有些路好走是条捷径，也许有些路可以让你风光无限，也许有些路安稳又有后路，可是那些路的主角，都不是我。至少我会觉得，那些路不是自己想要的。 6、在别人肆意说你的时候，问问自己，到底怕不怕，输不输的起。不必害怕，不要后退，不须犹豫，难过的时候就一个人去看看这世界。多问问自己，你是不是已经为了梦想而竭尽全力了? 7、人往往有时候为了争夺名利，有时驱车去争，有时驱马去夺，想方设法，不遗余力。压力挑战，这一切消极的东西都是我进取成功的催化剂。 8、真想干总会有办法，不想干总会有理由;面对困难，智者想尽千方百计，愚者说尽千言万语;老实人不一定可靠，但可靠的必定是老实人;时间，抓起来是黄金，抓不起来是流水。 9、成功的道路上，肯定会有失败;对于失败，我们要正确地看待和对待，不怕失败者，则必成功;怕失败者，则一无是处，会更失败。1、快乐总和宽厚的人相伴，财富总与诚信的人相伴，聪明总与高尚的人相伴，魅力总与幽默的人相伴，健康总与阔达的人相伴。 2、人生就有许多这样的奇迹，看似比登天还难的事，有时轻而易举就可以做到，其中的差别就在于非凡的信念。 3、影响我们人生的绝不仅仅是环境，其实是心态在控制个人的行动和思想。同时，心态也决定了一个人的视野和成就，甚至一生。 4、无论你觉得自己多么了不起，也永远有人比更强;无论你觉得自己多么不幸，永远有人比你更不幸。 5、也许有些路好走是条捷径，也许有些路可以让你风光无限，也许有些路安稳又有后路，可是那些路的主角，都不是我。至少我会觉得，那些路不是自己想要的。 6、在别人肆意说你的时候，问问自己，到底怕不怕，输不输的起。不必害怕，不要后退，不须犹豫，难过的时候就一个人去看看这世界。多问问自己，你是不是已经为了梦想而竭尽全力了? 7、人往往有时候为了争夺名利，有时驱车去争，有时驱马去夺，想方设法，不遗余力。压力挑战，这一切消极的东西都是我进取成功的催化剂。 8、真想干总会有办法，不想干总会有理由;面对困难，智者想尽千方百计，愚者说尽千言万语;老实人不一定可靠，但可靠的必定是老实人;时间，抓起来是黄金，抓不起来是流水。14、成长是一场和自己的比赛，不要担心别人会做得比你好，你只需要每天都做得比前一天好就可以了。 15、最终你相信什么就能成为什么。因为世界上最可怕的二个词，一个叫执着，一个叫认真，认真的人改变自己，执着的人改变命运。只要在路上，就没有到不了的地方。 16、你若坚持，定会发光，时间是所向披靡的武器，它能集腋成裘，也能聚沙成塔，将人生的不可能都变成可能。 17、人生，就要活得漂亮，走得铿锵。自己不奋斗，终归是摆设。无论你是谁，宁可做拼搏的失败者 9、成功的道路上，肯定会有失败;对于失败，我们要正确地看待和对待，不怕失败者，则必成功;怕失败者，则一无是处，会更5、别着急要结果，先问自己够不够格，付出要配得上结果，工夫到位了，结果自然就出来了。 6、你没那么多观众，别那么累。做一个简单的人，踏实而务实。不沉溺幻想，更不庸人自扰。 7、别人对你好，你要争气，图日后有能力有所报答，别人对你不好，你更要争气望有朝一日，能够扬眉吐气。 8、奋斗的路上，时间总是过得很快，目前的困难和麻烦是很多，但是只要不忘初心，脚踏实地一步一步的朝着目标前进，最后的结局交给时间来定夺。 9、运气是努力的附属品。没有经过实力的原始积累，给你运气你也抓不住。上天给予每个人的都一样，但每个人的准备却不一样。不要羡慕那些总能撞大运的人，你必须很努力，才能遇上好运气。 10、你的假装努力，欺骗的只有你自己，永远不要用战术上的勤奋，来掩饰战略上的懒惰。 11、时间只是过客，自己才是主人，人生的路无需苛求，只要你迈步，路就在你的脚下延伸，只要你扬帆，便会有八面来风，启程了，人的生命才真正开始。 12、不管做什么都不要急于回报，因为播种和收获不在同一个季节，中间隔着的一段时间，我们叫它为坚持。失败。11、学会学习的人，是非常幸福的人。——米南德 12、你们要学习思考，然后再来写作。——布瓦罗 13、在寻求真理的长河中，唯有学习，不断地学习，勤奋地学习，有创造性地学习，才能越重山跨峻岭。——华罗庚 14、许多年轻人在学习音乐时学会了爱。——莱杰 15、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基 16、我们一定要给自己提出这样的任务：第一，学习，第二是学习，第三还是学习。——列宁 17、学习的敌人是自己的满足，要认真学习一点东西，必须从不自满开始。对自己，“学而不厌”，对人家，“诲人不倦”，我们应取这种态度。——毛泽东 18、只要愿意学习，就一定能够学会。——列宁 19、如果学生在学校里学习的结果是使自己什么也不会创造，那他的一生永远是模仿和抄袭。——列夫· 托尔斯泰 20、对所学知识内容的兴趣可能成为学习动机。——赞科夫 21、游手好闲地学习，并不比学习游手好闲好。——约翰· 贝勒斯 22、读史使人明智，读诗使人灵秀，数学使人周密，自然哲学使人精邃，伦理学使人庄重，逻辑学使人善辩。——培根 23、我们在我们的劳动过程中学习思考，劳动的结果，我们认识了世界的奥妙，于是我们就真正来改变生活了。——高尔基 24、我们要振作精神，下苦功学习。下苦功，三个字，一个叫下，一个叫苦，一个叫功，一定要振作精神，下苦功。——毛泽东 25、我学习了一生，现在我还在学习，而将来，只要我还有精力，我还要学习下去。——别林斯基、学习外语并不难，学习外语就像交朋友一样，朋友是越交越熟的，天天见面，朋友之间就亲密无间了。——高士其 2、对世界上的一切学问与知识的掌握也并非难事，只要持之以恒地学习，努力掌握规律，达到熟悉的境地，就能融会贯通，运用自如了。——高士其 3、学和行本来是有联系着的，学了必须要想，想通了就要行，要在行的当中才能看出自己是否真正学到了手。否则读书虽多，只是成为一座死书库。——谢觉哉、你的假装努力，欺骗的只有你自己，永远不要用战术上的勤奋，来掩饰战略上的懒惰。 11、时间只是过客，自己才是主人，人生的路无需苛求，只要你迈步，路就在你的脚下延伸，只要你扬帆，便会有八面来风，启程了，人的生命才真正开始。 12、不管做什么都不要急于回报，因为播种和收获不在同一个季节，中间隔着的一段时间，我们叫它为坚持。 13、你想过普通的生活，就会遇到普通的挫折。你想过最好的生活，就一定会遇上最强的伤害。这个世界很公平，想要最好，就一定会给你最，取平均值； 6.计算样品所含总菌数：根据统计、计数结 果，计算样品所含的总菌数； 7.清洗处理计数板：实验完成后，及时按 规定清洁处理技术板。 本实验所用计数板，可用清水清洁处理后， 吸干水分，妥善保存。
04微生物细胞大小的测定和显微镜直接计数
实验四微生物细胞大小的测定和显微镜直接计数一、实验目的1.学习接目测微计的校正方法，了解血球计数板的构造和计数原理2. 学习使用显微镜测微尺测定微生物细胞大小，掌握用血球计数板测定微生物细胞总数的方法。
二、实验原理微生物细胞的大小是微生物分类鉴定的重要依据之一。
微生物个体微小，必须借助于显微镜才能观察，要测量微生物细胞大小，也必须借助于特殊的测微计在显微镜下进行测量。
显微测微计由镜台测微计和目镜测微计两部分组成。
后者可直接用于测量细胞大小。
它是一块圆形玻片，其中央有精确等分到度，测量时将其放在接目镜中的隔板上。
由于目镜测微计所测量的是微生物细胞经过显微镜放大之后所成像的大小，刻度实际代表的长度随使用的目镜和物镜放大倍数及镜筒的长度而改变，所以，使用前须先用镜台测微计进行标定，求出某一放大率下，目镜测微计每一小格所代表的长度，然后用目镜测微计直接测被测对象的大小。
镜台测微计是一块中央有精确刻玻片，刻度的总长为lmm，等分为100小格，每小格长10um，专用于对目镜测微计进行标定的。
三、材料3.1 器械：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺，载玻片、盖玻片、血球计算板、擦镜纸、吸水纸、玻片架、肾形盘、洗瓶、接种环、酒精灯、火柴、滴管。
3.2 菌种：培养48h的啤酒酵母斜面菌体和菌悬液。
3.3 革兰氏染液四、实验步骤（一）微生物菌体大小的测定1.目镜测微尺的校正（1）更换目镜镜头：更换目镜测微尺镜头（标记为PF）；或者取下目镜上部或下部的透镜，在光圈的位置上安上目镜测微尺，刻度朝下，再装上透镜，制成一个目镜测微尺的镜头。
（2）某一倍率下标定目镜刻度：将镜台测微尺置于载物台上，使刻度面朝上，先用低倍镜对准焦距、看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器使两尺重叠，并使二尺的左边的某一刻度相重合，向右寻找另外二尺相重合的刻度。
记录两重叠刻度间的目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。
酵母菌数量的测定—显微镜直接计数法
14
五、数据处理
各中格中的菌数（个）
二室 平均
菌数
A
B
值 （个/
1
2
3
4
5
（个 mL）
） 第一
室 第二
室
15
六、思考题 能否利用显微镜直接计数的方法测定
酵⺟菌菌液中的死细菌与活细菌？如果可 以，如何进行？如果不可以，请说明原 因。
16
式1：总菌数（个/mL）=A/5×16×10000×B 式2：总菌数（个/mL）=A/5×25×10000×B
三、实验器材 血球计数板、显微镜、盖玻片、滴管、 酿酒酵⺟菌液
8
四、实验步骤
1、加样品
•取净洁干燥的血球计数板盖上盖玻片。 •将菌悬液适当稀释（稀释1倍），摇匀。
•用滴管吸取菌悬液，加1～2滴于盖玻片边 缘，让菌液靠毛细渗透作用进入计数室。 •放置5 min左右让计数室充满菌液。
• 如遇酵⺟出芽，芽体大小达到⺟细胞一般时，即作 为两个菌体计算。
• 计算一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来 计算样品的含菌量。
• 菌体在血球计数板处于不同空间，要在不同焦距下 才能看全，所以，观察时必须不断调节细螺用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷； •镜检观察是否清洗干净； •洗后干燥（晾干、吹干，或乙醇、丙酮等有 机溶剂脱水干燥）。
4
5
血球计数板规格
计数室高度：0.1mm 大方格边⻓：1mm。 每个大方格分成400个小方格。
规格一：每个大方格分成16个中方格，每个中方格又分 成25个小方格。 规格二：每个大方格分成25个中方格，每个中方格又分 成16个小方格。
设五个中方格的总菌数为A，菌液的稀释倍 数为B，规格一、规格二计数板，分别采用式 1、式2计算。
五、数据处理
各中格中的菌数（个）
二室 平均
菌数
A
B
值 （个/
1
2
3
4
5
（个 mL）
） 第一
室 第二
室
15
六、思考题 能否利用显微镜直接计数的方法测定
酵⺟菌菌液中的死细菌与活细菌？如果可 以，如何进行？如果不可以，请说明原 因。
16
式1：总菌数（个/mL）=A/5×16×10000×B 式2：总菌数（个/mL）=A/5×25×10000×B
三、实验器材 血球计数板、显微镜、盖玻片、滴管、 酿酒酵⺟菌液
8
四、实验步骤
1、加样品
•取净洁干燥的血球计数板盖上盖玻片。 •将菌悬液适当稀释（稀释1倍），摇匀。
•用滴管吸取菌悬液，加1～2滴于盖玻片边 缘，让菌液靠毛细渗透作用进入计数室。 •放置5 min左右让计数室充满菌液。
• 如遇酵⺟出芽，芽体大小达到⺟细胞一般时，即作 为两个菌体计算。
• 计算一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来 计算样品的含菌量。
• 菌体在血球计数板处于不同空间，要在不同焦距下 才能看全，所以，观察时必须不断调节细螺用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷； •镜检观察是否清洗干净； •洗后干燥（晾干、吹干，或乙醇、丙酮等有 机溶剂脱水干燥）。
4
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血球计数板规格
计数室高度：0.1mm 大方格边⻓：1mm。 每个大方格分成400个小方格。
规格一：每个大方格分成16个中方格，每个中方格又分 成25个小方格。 规格二：每个大方格分成25个中方格，每个中方格又分 成16个小方格。
设五个中方格的总菌数为A，菌液的稀释倍 数为B，规格一、规格二计数板，分别采用式 1、式2计算。
微生物的生长及其控制(共98张PPT)
就总体而言，微生物生长的温度范围较广， 已知的微生物在-10～95℃范围内生长。 而对某一具体微生物而言，只能在一定的 温度范围内生长，且此温度范围有宽、有 窄。
生长温度三基点：任何微生物的生长温度 总有最低生长温度、最适生长温度、最高 生长温度。
温度
最适生长温度：
即某微生物分裂代 时最短或生长速率最高 时的培养温度。不同微 生物的最适生长温度是 不一样的。 应该着重 指出：最适生长温度不 一定是一切代谢活动的 最适温度。
膜洗脱（常用）等。
诱导法
诱导因子：不影响微生物生长，可特异性抑制细胞分裂， 消除该抑制后，细胞同时出现分裂。
此法会扰乱细胞的正常代谢
举例： 1、温度调整法； 2、营养条件调整法；
3、抑制DNA合成法（代谢抑制剂：）
（抑制DNA合成法是利用代谢抑制剂阻碍DNA合成相当一
段时间，然后解除其抑制，可达到同步目的。常用的代
（一）微生物细胞数目的测定
－－适用于单细胞微生物或丝状微生物的孢子
直接计数法－－总菌计数 1、计数板计数法（常用）
2、比例计数法
间接计数法－－活菌计数
1、平板菌落计数法
2、液体稀释法
3、厌氧菌菌落计数
其他计数法
1、比浊法
2、膜过滤法
血球计数板
各 种 型 号 的 全 自 动 血 球 计 数 仪
活菌计数的一般步骤
二、单细胞微生物的典型生长曲线
三、微生物的连续培养
四、微生物的高密度培养
一、微生物的个体生长和同步生长
微生物在适宜的环境条件下，不断地吸收 营养物质，并按照自己的代谢方式进行代 谢活动，如果同化作用大于异化作用，则 细胞质的量不断增加，体积得以加大，于 是表现为生长。简单地说，生长就是有机 体的细胞组分与结构在量方面的增加。
生长温度三基点：任何微生物的生长温度 总有最低生长温度、最适生长温度、最高 生长温度。
温度
最适生长温度：
即某微生物分裂代 时最短或生长速率最高 时的培养温度。不同微 生物的最适生长温度是 不一样的。 应该着重 指出：最适生长温度不 一定是一切代谢活动的 最适温度。
膜洗脱（常用）等。
诱导法
诱导因子：不影响微生物生长，可特异性抑制细胞分裂， 消除该抑制后，细胞同时出现分裂。
此法会扰乱细胞的正常代谢
举例： 1、温度调整法； 2、营养条件调整法；
3、抑制DNA合成法（代谢抑制剂：）
（抑制DNA合成法是利用代谢抑制剂阻碍DNA合成相当一
段时间，然后解除其抑制，可达到同步目的。常用的代
（一）微生物细胞数目的测定
－－适用于单细胞微生物或丝状微生物的孢子
直接计数法－－总菌计数 1、计数板计数法（常用）
2、比例计数法
间接计数法－－活菌计数
1、平板菌落计数法
2、液体稀释法
3、厌氧菌菌落计数
其他计数法
1、比浊法
2、膜过滤法
血球计数板
各 种 型 号 的 全 自 动 血 球 计 数 仪
活菌计数的一般步骤
二、单细胞微生物的典型生长曲线
三、微生物的连续培养
四、微生物的高密度培养
一、微生物的个体生长和同步生长
微生物在适宜的环境条件下，不断地吸收 营养物质，并按照自己的代谢方式进行代 谢活动，如果同化作用大于异化作用，则 细胞质的量不断增加，体积得以加大，于 是表现为生长。简单地说，生长就是有机 体的细胞组分与结构在量方面的增加。
高三生物一轮复习课件第37讲微生物的培养技术及应用
②在火焰旁冷却接 种环，拔出酵母菌 培养液试管的棉塞
③试管口通过火焰
④在火焰附近用接 种环蘸取一环菌液
⑦灼烧接种环，待其冷却后， 从第一次划线的末端开始作第 二次划线。重复以上操作，作 第三、四、五次划线。
⑥将皿盖打开一条缝隙， 将沾有菌种的接种环迅速 伸入平板内，划3-5条平 行线，盖上皿盖。
⑤试管口通过火 焰，并塞上棉塞
什么目的？
无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适 的方法。 (1)培养细菌用的培养基与培养皿 (2)玻棒、试管、烧瓶和吸管 (3)实验操作者的双手
(1)、(2)需要灭菌；(3)需要消毒。 培养基用高压蒸汽灭菌， 培养皿、玻璃棒、试管、烧瓶、吸管可以采用干热灭菌法， 实验操作者的双手可以用酒精擦拭。
◆微生物的共同特点：个体微小、结构简单
微生物结构简单、形体微小，眼睛看不到，若想得到纯净的微生物， 就必须对其进行培养和分离。
1. 防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物 是研究和应用微生物的 前提，也是发酵工程的重要基础。
2.实验室培养微生物的条件：
①为微生物提供合适的 营养和环境 条件；
培养基
②要确保 其他微生物无法混入
划分标准 培养基种类
特点
用途
液体培养基
不加凝固剂
工业生产
半固体培养基 注：琼脂仅作为凝固剂不为微生物
物理性质
生长提供能量和碳源
固体培养基
加凝固剂，如琼脂
观察微生物的运动、 分类鉴定
微生物分离、鉴定、 活菌计数、保藏菌种
天然培养基 化学成分 合成培养基
含化学成分不明确的天然物质 培养基成分明确
显微镜的直接计数和细菌大小测定
将结果记录于下表中，A表示五个中方格中的总 菌数；B表示菌液稀释倍数。
各中格中菌数
A
12345 第一室
第二室
B 二室平 菌数/ml 均值
16小格 × 25大格计数室
25小格 × 16大格计数室
计数室的两种刻度形式
(6) 当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计 数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只 计数下方和左方线上的酵母细胞)。 (7) 对每个样品计数三次，取其平均值，按下 列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。
3.计算公式
(1)16格×25格的血球计数板计算公式： 酵母细胞数／ml=100小格内酵母细胞个数／
(3) 将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室 上加盖专用的厚玻片。 (4) 将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于 盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸 水纸吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计 数室内。 (5) 计数时，如果使用16格×25格规格的计数室， 要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中 格（即100个小格）的酵母菌数。如果规格为25格 ×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需 再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。
范围/μm
计(3)数先室酵用通低母常倍有菌镜两观种察规，格对。准焦距，待看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜测微尺的刻度相平行，并使两尺
的左边第一条线相重合，再向右寻找两尺的另外一条重合线。
(3) 将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的厚玻片。
2、显微镜直接计数结果
若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。
目接镜目测 镜微微的尺放生每大物格倍代数表__目的__长_镜_度__测/μm微尺每
各中格中菌数
A
12345 第一室
第二室
B 二室平 菌数/ml 均值
16小格 × 25大格计数室
25小格 × 16大格计数室
计数室的两种刻度形式
(6) 当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计 数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只 计数下方和左方线上的酵母细胞)。 (7) 对每个样品计数三次，取其平均值，按下 列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。
3.计算公式
(1)16格×25格的血球计数板计算公式： 酵母细胞数／ml=100小格内酵母细胞个数／
(3) 将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室 上加盖专用的厚玻片。 (4) 将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于 盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸 水纸吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计 数室内。 (5) 计数时，如果使用16格×25格规格的计数室， 要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中 格（即100个小格）的酵母菌数。如果规格为25格 ×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需 再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。
范围/μm
计(3)数先室酵用通低母常倍有菌镜两观种察规，格对。准焦距，待看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜测微尺的刻度相平行，并使两尺
的左边第一条线相重合，再向右寻找两尺的另外一条重合线。
(3) 将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的厚玻片。
2、显微镜直接计数结果
若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。
目接镜目测 镜微微的尺放生每大物格倍代数表__目的__长_镜_度__测/μm微尺每
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- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
注：该法适合菌浓度较高的样品。
微生物学显微镜直接计数法
在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度 成正比，即与吸光值成正比，菌数越多，吸光值 越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下 测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。 该法适合测定大量的细胞。
显微镜直接计数法
利用血球计数板在显微镜下计数是常用的一 种微生物计数法
4.显微镜计数
静置几分钟，将计数板放在显微镜下， 先用低倍镜找到计数室，再换成高倍镜进 行计数
5.清洗血球计数板
计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干 净后自行晾干，摇匀菌液，计数室中不可有气泡产生；
2、菌液浓度以每小格有5-10个菌体为宜。
3、计数时，格线上的菌体只数上方和右边线上的；
稀释100倍)
2.器具
显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。
四 实验方法
1.检查计数板
检查计数板是否有破损。
2.镜检计数室
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。 若有污物，则需清洗后才能进行计数。
3．加样品
将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细 口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘点 一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗 透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满 菌液。注意不可有气泡产生。
➢优点：直观、快速 ➢缺点：误差较大，不适合细菌计数（太小）
其原理与计数板的构造有关
➢每块计数板上有两个计数室 （正方形），盖上 盖玻片后容积是一定的（0.1mm3），深为 0.1mm，边长为1mm，其上面有精确的刻度。
计数室
其刻度一般有两种规格
16个中方格，每个中方格分25个小格 16×25 25个中方格，每个中方格分16个小格 25×16
4、如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时， 作为两个菌体计算；
5、清洗计数板时切勿用手或硬物刷洗。在水龙头 上用水柱清洗，直到洗净为止。
6、一个样品要从两个计数室中计得的平均值来计 算。
微生物学显微镜直接计数法
一、实验目的：
➢ 掌握使用血球计数板进行微生物显微镜直接计 数的方法
➢ 了解微生物数量测量的几种方法、原理及其应 用
微生物学显微镜直接计数法
➢常用的微生物细胞数目的检测法 血球计数板法 平板菌落计数法 干重法 比浊法等
干重法
➢ 将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出 来，然后烘干至恒重(干燥温度可采用105℃、 100℃或80℃)、称重。一般干重为湿重的 10%—20%。
微生物学显微镜直接计数法
➢ 我们采用的是25×16的，计数时查5个中方格的总菌数 。如图：
5个方格的总菌数
➢ 计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B
稀释倍数
➢ 1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B
=50,000A×B个
微生物学显微镜直接计数法
1.菌种
酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌悬液(已
微生物学显微镜直接计数法
在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度 成正比，即与吸光值成正比，菌数越多，吸光值 越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下 测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。 该法适合测定大量的细胞。
显微镜直接计数法
利用血球计数板在显微镜下计数是常用的一 种微生物计数法
4.显微镜计数
静置几分钟，将计数板放在显微镜下， 先用低倍镜找到计数室，再换成高倍镜进 行计数
5.清洗血球计数板
计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干 净后自行晾干，摇匀菌液，计数室中不可有气泡产生；
2、菌液浓度以每小格有5-10个菌体为宜。
3、计数时，格线上的菌体只数上方和右边线上的；
稀释100倍)
2.器具
显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。
四 实验方法
1.检查计数板
检查计数板是否有破损。
2.镜检计数室
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。 若有污物，则需清洗后才能进行计数。
3．加样品
将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细 口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘点 一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗 透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满 菌液。注意不可有气泡产生。
➢优点：直观、快速 ➢缺点：误差较大，不适合细菌计数（太小）
其原理与计数板的构造有关
➢每块计数板上有两个计数室 （正方形），盖上 盖玻片后容积是一定的（0.1mm3），深为 0.1mm，边长为1mm，其上面有精确的刻度。
计数室
其刻度一般有两种规格
16个中方格，每个中方格分25个小格 16×25 25个中方格，每个中方格分16个小格 25×16
4、如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时， 作为两个菌体计算；
5、清洗计数板时切勿用手或硬物刷洗。在水龙头 上用水柱清洗，直到洗净为止。
6、一个样品要从两个计数室中计得的平均值来计 算。
微生物学显微镜直接计数法
一、实验目的：
➢ 掌握使用血球计数板进行微生物显微镜直接计 数的方法
➢ 了解微生物数量测量的几种方法、原理及其应 用
微生物学显微镜直接计数法
➢常用的微生物细胞数目的检测法 血球计数板法 平板菌落计数法 干重法 比浊法等
干重法
➢ 将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出 来，然后烘干至恒重(干燥温度可采用105℃、 100℃或80℃)、称重。一般干重为湿重的 10%—20%。
微生物学显微镜直接计数法
➢ 我们采用的是25×16的，计数时查5个中方格的总菌数 。如图：
5个方格的总菌数
➢ 计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B
稀释倍数
➢ 1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B
=50,000A×B个
微生物学显微镜直接计数法
1.菌种
酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌悬液(已