2021药学考研配套生物化学考研真题与解析

2021药学考研配套生物化学考研真题与解析

一、大题问答题解析

1．假定某蛋白相对分子质量为180KDa，其一级结构可能是直线式的也可能是闭环式的。请分析是否有可能的简单的合理方法加以鉴别？[中山大学2009研] 答：可以用Sanger反应或Edman反应对蛋白质的N末端氨基酸进行测定。

Sanger反应中，FDNB可以与肽链N末端氨基酸的α-氨基反应生成黄色的

DNP-氨基酸。经Sanger反应若该蛋白的一级结构是直链式的，则可产生黄色的反应；若该蛋白是闭环式的，由于N末端没有α-氨基，则不能出现黄色的反应。而Edman反应中，肽链N末端氨基酸的α-氨基可与苯异硫氰酸酯反应生

成PTH-氨基酸，用三氟乙酸处理释放出PTH-氨基酸，再用有机溶剂萃取出来，通过色谱分析可以鉴定出PTH-氨基酸。经Edman反应后，若能测出N末端氨基酸，则该蛋白为直链式；若测不出，则该蛋白为闭环式。

另外，理论上讲，如果知道序列，可以找一种合适的蛋白酶切断某一位点，再进行电泳，若该蛋白是闭环式，则电泳结果只产生一条带，且大小不变；若是直链式，则会产生两条带，分子量加起来正好180KDa。

缩写中文名称缩写应用

HPLC 高效液相层折氨基酸、多肽和蛋白质等的分离纯化FPLC 快速蛋白质液相层析蛋白质、多肽及多核苷酸的分离纯化SDS-PAGE SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量ELISA 酶联免疫吸附测定测定抗原或抗体

RT-PCR 逆转录-聚合酶链反应扩增cDNA

2．试写出下列生化名词缩写的中文名称以及它们在生物化学中的应用。

（1）HPLC （2）FPLC （3）SDS-PAGE （4）ELISA （5）RT-PCR （6）HIC （7）IEF 。[南京大学2008 研]

答：如表1-1所示：

表1-1

3．某一蛋白纯化后，凝胶过滤层析显示其分子量为300000。若在6mol/L 盐酸胍存在条件下对该蛋白进行凝胶过滤层析，只获得一分子量为50000的蛋白峰。当6mol/L 盐酸胍和10mmol/L β-巯基乙醇同时存在时，凝胶过滤层析结果显示分子量为17000和33000的两个蛋白峰。请分析该蛋白的结构。[南开大学2008研]

答：该蛋白是由6个单体组成的多聚体，每个单体又由两个亚基靠二硫键连接起来。

4．有一个五肽，加酸水解得Leu 、Ala 、Tyr 利Lys ；用羧肽酶水解得酪氨酸；用胰蛋白酶水解得三组分：（1）Lys 、Tyr ；（2）Tyr ；（3）Lys 、Leu 、Ala ；用丹磺酰氯处理，再用酸水解得赖氨酸的荧光衍生物。试说明此肽的氨基酸序列。

[北京师范大学2005研]

答：（1）加酸水解得Leu 、Tyr 、Lys 、Ala ，说明此五肽由Leu 、Tyr 、Lys 、Ala 组成。

（2）用羧肽酶水解得Tyr ，说明C 端残基为Tyr 。

HIC 疏水层析 利用蛋白质表面的非极性基团和介质上的

非极性基团间的疏水作用来分离纯化蛋白质

IEF 等电聚焦

测定蛋白质的等电点

（3）用胰蛋白酶水解得三组分Lys、Tyr；Tyr；Lys、Leu、Ala。因为胰蛋白酶

专一水解Lys和Arg羧酸形成的肽键，水解得三组分，说明此五肽中含有两个

Lys残基，则其可能的序列为Leu-Ala-Lys-Lys-Tyr和Ala-Leu-Lys-Lys-Tyr。（4）丹磺酰氯可用于测定肽链的氨基末端，它能专一地与链N-端α-氨基反应

生成丹磺酰-肽，丹磺酰-肽水解生成的丹磺酰-氨基酸具有很强的荧光，用丹磺

酰氯处理，再用酸水解得赖氨酸的荧光衍生物，说明肽链N端为Leu。因此，

此肽的氨基酸序列Leu-Ala-Lys-Lys-Tyr。

5．在一个筛选程序中探测到一个迁移率异常的Hb。胰蛋白酶消化后的指纹分

析显示在β链内发生了一个氨基酸的取代：正常的氨基端（胰蛋白酶酶切产物，

其氨基端第一残基是Val）八肽（Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Glu-Lys）不见了，

代之以一个新的六肽。问（1）哪些氨基酸取代符合上述观察到的现象？（2）

给出部分密码表如表1-2所示，编码上述正常（β链氨基端）八肽的DNA序列

为GTGCACCTGACTCCTGAGGAGAAG，此序列中哪些单碱基突变可造成这样

的氨基酸取代？（3）这个（突变的）Hb与HbA和HbS比较（pH8），（如

朝负极泳动）三者的电泳迁移率有什么区别？[上海交通大学2006研]

表1-2

U C A C

G Val Ala Glu Gly

G Val Ala Glu Gly

A Ile Thr Lys Arg

A Ile Thr Lys Arg

答：（1）主要有以下氨基酸取代：Glu6变为Arg，Lys；His2变为Arg，Lys，因胰蛋白酶切割羰基端为Arg或Lys的肽链。

（2）可造成这样氨基酸取代的单碱基突变是G16变为A，使Glu变为Lys。因为其他单碱基突变不会导致氨基酸的改变而发生取代。

（3）这个（突变的）Hb与HbA和HbS的电泳迁移率：HbX＞HbS＞HbA，根据肽链带电情况。HbA是正常成人血红蛋白，HbS是镰刀形红细胞贫血患者的异常血红蛋白，其β链节6位谷氨酸为缬氨酸取代。HbX中Glu6变为Arg，Lys；His2变为Arg，Lys，带负电的氨基酸变为带正电荷的氨基酸，而HbS中Glu变为Val，带负电的氨基酸变为不带电荷的氨基酸。由于电泳朝负极泳动，所以电泳迁移率：HbX＞HbS＞HbA。

6．今有以下四种蛋白质的混合物：①分子量50,000，pI＝10；②分子量72,000，pI＝3.5；③分子量31,000，pI＝7；④分子量12,000，pI＝5，用中性盐梯度洗脱时，若不考虑其他因素：（1）它们流过DEAE-纤维素阴离子交换柱；（2）流经Sephadex G-100凝胶过滤柱时，这些蛋白质的洗脱顺序如何？[四川大学2006研]

答：（1）用DEAE-纤维素阴离子交换柱分离蛋白质，在一定的pH条件下，等电点pI＞pH的蛋白质带正电，不能与阴离子交换剂结合；等电点pI＜pH的蛋白质带负电，能与阴离子交换剂结合，一般pI越大的蛋白质与阴离子交换剂结合力越弱，首先被洗脱下来。比较4种蛋白质的等电点pI：①＞③＞④＞②。所以，当它们流过DEAE-纤维素阴离子交换柱，洗脱顺序为①→③→④→②。（2）凝胶过滤是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。小分子物质能进入其内部，流下时路程较长，而大分子