HE染色的步骤及方法
HE染色方法与步骤吐血整理
HE染色试剂配置A：0.5~1%的伊红酒精溶液：称取伊红Y0.5~1g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。
以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以95%酒精（即工业酒精，如果不怕浪费，用无水乙醇配制也可）100毫升溶解。
B：苏木素染液配方：(配制3000ml，可按比列减少)苏木精6g无水乙醇100ml硫酸铝钾150g蒸馏水2000ml碘酸钠1.2g冰醋酸120ml甘油900ml配制方法：将苏木素溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸钠。
C：1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。
染色流程(1)二甲苯（Ⅰ）15min(2)二甲苯（Ⅱ）15min（3）二甲苯：无水乙醇=1:12min(4)100%乙醇（Ⅰ）5min(5)100%乙醇（Ⅱ）5min(6)80%乙醇5min(7)蒸馏水5min(8)苏木精液染色5min(9)流水稍洗去苏木精液1-3s(10)1%盐酸乙醇1-3s(11)稍水洗10-30s(12)蒸馏水过洗1-2s(13)0.5%伊红液染色1-3min(14)蒸馏水稍洗1-2s(15)80%乙醇稍洗1-2s(16)95%乙醇（Ⅰ）2-3s(17)95%乙醇（Ⅱ）3-5s(18)无水乙醇5-10min(19)石炭酸二甲苯5-10min(20)二甲苯（Ⅰ）2min(21)二甲苯（Ⅱ）2min(22)二甲苯（Ⅲ）2min(23)中性树胶封固注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步冲水时间需延长至20-30min。
②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。
*冷冻切片HE染色步骤：（1）冰冻切片固定10～30s（2）稍水洗1～2s（3）苏木精液染色（60℃）30～60s（4）流水洗去苏木精液5～10s（5）1%盐酸乙醇1～3s（6）稍水洗1～2s（7）促蓝液返蓝5～10s（8）流水冲洗15～30s（9）0.5%曙红液染色30～60s（10）蒸馏水稍洗1～2s（11）80%乙醇1～2s（12）95%乙醇1～2s（13）无水乙醇1～2s（14）石炭酸二甲苯2～3s（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s（17）中性树胶封固。
H.E染色概念、定义及操作步骤
He染色介绍苏木精—伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。
苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
染色分类易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia ) 。
组织内的蛋白质构成蛋白质的氨基酸的种类很多，它们有不同的等电点。
在普通染色法中，染色液的酸碱度为pH6左右，细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色，这些物质称为嗜碱性。
而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色，这些物质称为嗜酸型。
如果改变染色液的酸碱度，pH值升高时，则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性；pH值降低时，原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。
所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。
去氧核糖核酸（DNA）两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。
苏木精在碱性溶液中称蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。
伊红是细胞浆的良好染料。
由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。
经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。
再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。
故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。
染色结果细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。
HE染色步骤-使用
HE染色步骤：
事先准备好盖玻片
1.脱蜡：脱蜡二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10min
2.覆水：100%（Ⅰ、Ⅱ）、90%、80%、70%酒精各5min，自来水冲洗5min×3
3.苏木精染色5min（根据染色情况，可以适当增加或减少染色时间），流水冲洗。
4.5%乙酸分化1min，流水冲洗。
（用吸管滴加乙酸，布满玻片上的组织即可，分化后颜色
变浅了一些，成为蓝色）
5.返蓝：返蓝液（实验室没有，也可不用）
6.伊红染色1min（根据染色情况，可以适当增加或减少染色时间），流水冲洗。
7.脱水：70%、80%、90%、100%酒精各10s，二甲苯1min（可以在通风橱自然晾干再封
片，约5min左右）
8.滴上中性树胶，封片。
（用吸管滴上一滴即可，尽量少滴，但压片后要将组织全部覆盖
完，避免中间有气泡）。
HE染色及组化步骤
组织固定及HE染色步骤
1、固定：刚取的新鲜组织块经福尔马林溶液固定48小时（一般固定2天）
2、用镶子取出放到大的蜡盒上，用刀片切成1*0.5厘米的小块，用小白蜡盒包上，放入80%
的乙醇中过夜
3、脱水：第二天早上8点，把蜡盒依次放入95% I的乙醇中（3h）— 95%II的乙醇中（3h）
—100% I的乙醇中（3h）— 100%II的乙醇中（过夜）
4、透明：第二天早8点从100%11的乙醇中取出小蜡盒放到二甲苯1、二甲苯II中各30 分钟
5、浸蜡：放入蜡缸中I、II、IIL中各浸泡30分钟
6、包埋
7、切片
8、烤片
HE染色
二甲苯 I （30min）—二甲苯II （30min）一100% I 的乙醇中（lOmin）一 100%II 的乙醇中（lOmin） 95%的乙醇中（5min）— 90%的乙醇中（5min）— 80%的乙醇中（5min）—自来水缸中浸泡5min —苏木精染核5min —水洗一1%的盐酸酒精分化一水洗一弱氨水返蓝一水洗一镜下观察一伊红染质（15min）—水稍洗一80%的乙醇、95%的乙醇I、95% 的乙醇II中各过一下即可一100% I的乙醇中（5min）— 100%II的乙醇中（lOmin）—二甲苯I （lOmin）一二甲苯II （lOmin）一中性树胶封片
免疫组化步骤
切片常规脱蜡至水洗预处理（热修复或酶消化）阻断3%的H202 PBS洗封闭加一抗（鼠或兔抗人） PBS洗加二抗（生物素标记IgG鼠或兔））PBS洗加三抗（链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶）PBS洗DAB（AEC或BCIP/NBT）显色水洗复染核水洗弱氨水返兰水洗脱水透明封片。
he染色的操作流程原理
he染色的操作流程原理下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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将组织样本迅速放入固定液中，以防止组织自溶和腐败。
HE染色步骤
HE染色法是苏木精（hematoxylin）和伊红（eosin）的首个字母缩写。
苏木精是碱性染料，使细胞核染色质和胞质内的核糖体呈紫蓝色。
伊红是酸性染料，使细胞质和细胞外基质中带较强碱基的蛋白质成份着红色。
常规he染色步骤：(1)二甲苯（Ⅰ）15min(2) 二甲苯（Ⅱ）15 min（3）二甲苯：无水乙醇=1:1 2min(4)100%乙醇（Ⅰ）5min(5)100%乙醇（Ⅱ）5 min(6)80%乙醇5min(7)蒸馏水5 min(8)苏木精液染色5 min(9) 流水稍洗去苏木精液1-3 s(10) 1%盐酸乙醇1-3 s(11) 稍水洗10-30 s(12)蒸馏水过洗1-2 s(13) 0.5%伊红液染色1-3 min(14) 蒸馏水稍洗1-2 s(15) 80%乙醇稍洗1-2 s(16) 95%乙醇（Ⅰ）2-3 s(17) 95%乙醇（Ⅱ）3-5 s(18) 无水乙醇5-10 min(19) 石炭酸二甲苯5-10 min(20) 二甲苯（Ⅰ）2 min(21) 二甲苯（Ⅱ）2 min(22) 二甲苯（Ⅲ）2 min(23) 中性树胶封固注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步冲水时间需延长至20-30min。
②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。
冷冻切片HE染色步骤：（1）冰冻切片固定10～30 s（2）稍水洗1～2 s（3）苏木精液染色（60℃）30～60 s（4）流水洗去苏木精液5～10 s （5）1%盐酸乙醇1～3 s （6）稍水洗1～2 s（7）促蓝液返蓝5～10 s （8）流水冲洗15～30 s （9）0.5%曙红液染色30～60 s （10）蒸馏水稍洗1～2 s （11）80%乙醇1～2 s （12）95%乙醇1～2 s （13）无水乙醇1～2 s （14）石炭酸二甲苯2～3 s （15）二甲苯（Ⅰ）2～3 s （16）二甲苯（Ⅱ）2～3 s （17）中性树胶封固。
HE染色步骤
HE染色液的配制：Harris苏木素：甲液苏木素0.9克100%酒精10 ml乙液铵（或钾）明矾20 克蒸馏水200ml然后加入氧化汞0.5克甲液加乙液加热煮沸后离开火焰缓缓加入氧化汞，玻棒搅拌，然后烧杯于冷水速冷，第二天过滤（夜），临用前加几滴醋酸（100ml加入0.25克）对核着色效果更好。
伊红1%：1g溶于10ml蒸馏水，溶解后逐滴加冰醋酸，边滴边搅拌，至糊状时，再加数毫升蒸馏水，继续逐滴加冰醋酸至沉淀不再增加时过滤，滤纸放入温箱（50-60）过夜，烘干物用100 毫升85%酒精溶解。
1.切片：将切片刀磨好，装到机上，将预定使用的刀部位移至蜡块下方，刀的倾斜角为30度，调整切片机厚度为6um，右手摇片扒，左手持一毛笔拖住蜡带，随切片机的转动轻轻把蜡带拉开，用毛笔拖住蜡带，挑断后顺序放在纸上。
（切片时，放入-20度冰箱中冻一下再切，效果比较好）2.摊片：41-42度，将预先切开的蜡片摊于水面上，使蜡片受热自然张开浮在水面上，也可用细针帮助张开皱褶，用经过APES处理过的载玻片伸入水中把蜡片移至玻片上，拨正位置。
注：2%APES前期处理载玻片的方法第一缸：4ml APES + 196 ml丙酮，配成2%的APES液，1.5-2 min第二缸：200ml丙酮（I）2min，震荡第三缸：200ml丙酮（II）2min，震荡第四缸：200ml蒸馏水（I）5min第五缸：200ml蒸馏水（II）5min自然风干，备用3.烘片：8h4.HE染色步骤二甲苯脱蜡(1)(2)5～10min(冬天10～20min)→100％酒精1 min→95％酒精1 min→85％酒精1 min→70％酒精1 min→50％酒精1 min→蒸馏水1–3 min(苏木精时水擦干)→苏木精染色1–2 min→自来水冲洗3–5 min(酚化分化3–5 min)→蒸馏水洗3–10min →70％酒精1–2 min→85％酒精2min→伊红20s→95％酒精→100％酒精(1)(2) 1～2min→二甲苯(1)(2)5～10min→封片。
he染色的操作流程
he染色的操作流程
微染色（Micro-dyeing）是一种新型制革工艺，它以小分子染料的定量
给色的方式为牛副色革料定色。
它具有色彩可控、无需破坏革料正常
结构、染色后无残留环境污染物等优点，是一种理想的染色技术。
微染色的操作流程：
1、进料准备：把要染色的革料放入调色柜，并将染料和溶剂按配方比
例预先放入调色柜。
2、革料配色：调整染料颜色，采用比例法给予染色革料所需色彩，然
后用滤网将染料颗粒过滤掉，准备染色溶液。
3、微染色：把染色溶液灌注到沙包上，在固定的温度、湿度、PH值
及染料浓度下，将革料进行微电解印染，使染料能够附着在革料表面，完成配色。
4、烘干/洗涤：烘干革料，以去除多余的染料，再进行洗涤以固定染色。
5、检查：检查色彩是否符合图片，整体色彩过渡良好，并符合客户要求。
6、包装：完成染色后，就可以进行包装了，将染色后的革料包装起来，以便顺利的运输出去。
HE染色步骤
一、 取材 组织块的大小一般为 0.5x0.5x0.2 厘米，或者 1x1x3 厘米，1.5x1.5.0.5 厘米，最厚不 超过 0.5 厘米。 二、 固定 一般固定 12-24 小时，小块组织 4-16 小时即可。 （如：小鼠卵巢用多聚甲醛固定 12 小时即可） 固定剂（多聚甲醛）用量：固定组织时，固定剂一般为组织体积的 10-15 倍，容器勿 太小。且固定剂应避免阳光。 三、 脱水 70%酒精 1 小时 ↓ 85%酒精 1 小时 ↓ 95%酒精 1 小时 ↓ 100%酒精（1） 30 分钟 ↓ 100%酒精（2） 1 小时 ↓ 100%酒精（3） 30 分钟 同浓度酒精应该准备两份以备脱水不完全 1 脱水在有盖子的瓶内进行 2 组织在更换高一级酒精时，可先用吸水纸吸干以免带入水分 3 纯酒精有水分可加入无水硫酸铜去除水分 四、 透明 1/2 纯酒精+1/2 二甲苯混合液 ↓ 二甲苯 ↓ 二甲苯 五、 透蜡 使用石蜡熔点为 70℃，温箱温度调到 64℃ 1/2 二甲苯+1/2 石蜡混合液 30 分钟 ↓ 纯蜡 1 小时 ↓ 纯蜡 1 小时 六、 包埋 用 L 型金属框包埋。 30 分钟 30 分钟 分钟 二甲苯 7 分钟 100%酒精 1 分钟 100%酒精 1 分钟 95%酒精 2 分钟 85%酒精 2 分钟 70%酒精 2 分钟 50%酒精 2 分钟 蒸馏水 2 分钟 苏木精 20 秒 自来水冲洗 4 分钟 蒸馏水 6 分钟 50%酒精 2 分钟 70%酒精 7 分钟 85%酒精 2 分钟 伊红染色 20 秒 95%酒精 2 分钟 100%酒精 2 分钟 二甲苯 4 分钟 二甲苯 4 分钟 中性树脂封片
Harris 苏木素： 甲液 苏木素 0.9 克 100﹪酒精 10ml 乙液 铵（或钾）明矾 20 克 蒸馏水 200ml 然后加入氧化汞 0.5 克 甲液加乙液加热煮沸后离开火焰缓缓加入氧化汞。玻棒搅拌，然后烧杯于冷 水速冷，第二天过滤，临用前加几滴醋酸（100ml 加入 0.25 克）对核着色效果更 好。 伊红： 1g 溶于 10ml 蒸馏水，溶解后逐滴加冰醋酸，边滴边搅拌，至糊状时，再加 数毫升蒸馏水， 继续逐滴加冰醋酸至沉淀不再增加时过滤， 滤纸放入温箱 （50-60） 过夜，烘干物用 100 毫升 85﹪酒精溶解。
HE染色法
苏木素 1克
碘酸钠 0.2克
钾明矾 50克
水合氯醛 50克
蒸馏水 1000ml
柠檬酸 1克
将苏木素及碘酸钠用蒸馏水加温溶解,呈樱 桃红色,再加入钾矾, 使溶液变为兰紫色,煮沸5min后,再加入水合氯醛搅拌,此时液体变为红紫色,溶解完后加入柠檬酸,取下冷却,滤过后即可使用。此液能长久保存。
(三)Harris氏苏木素液:
苏木素 0.9克 铵明矾(或钾)20克
甲液 无水酒精 10ml 乙液 蒸馏水 200ml
一氧化汞 0.5～1克
甲、乙两液分别溶解,然后两液混合,加热熬沸,再加入一氧化汞, 以玻棒搅至溶液呈深紫色,置于凉水中急速冷却,静置一夜后,滤过密封保存。用前若加入少许5%冰醋酸,则染色效果更好。此液经2～3个月后,着色力减退,故宜少配。
(3)入苏木素染液,1%盐酸分化,水洗 兰化;
(4)入0.5～1%酸性复红液5～30min,水洗 至红色不退;
(5)蒸馏水洗30秒钟以上,入买洛里氏染色液20min,流水冲洗2～5min;
Devil入95%酒精分化,入无水酒精脱水,二甲苯透明,封固。
结果:胶元纤维, 网状纤维呈深红色、粘液、淀粉样物呈淡兰色,纤维素、 肌纤维、胶质纤维酸性颗粒呈红色.红细胞、髓鞘呈红色,细胞核呈兰色。
3.移入90%酒精中(二瓶),约2min。
4.移入80%酒精中(二瓶),约2min。
5.移入70%酒精中,约2min。
6.移入水中,洗去酒精,约2～3min。
7.移入蒸馏水中,约2min。
(二)染色:
1.移入苏木素中,浸染8～15min,一般以稍深染为宜。
2.移入水中,洗去苏木素和浮色,约1～2min。
HE染色方法与步骤吐血整理
HE染色方法与步骤吐血整理HE染色试剂配置A：0.5~1%的伊红酒精溶液：称取伊红Y0.5~1g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。
以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以95%酒精（即工业酒精，如果不怕浪费，用无水乙醇配制也可）100毫升溶解。
B：苏木素染液配方：(配制3000ml，可按比列减少)苏木精6g无水乙醇100ml硫酸铝钾150g蒸馏水2000ml碘酸钠1.2g冰醋酸120ml甘油900ml配制方法：将苏木素溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸钠。
C：1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。
染色流程(1)二甲苯（Ⅰ）15min(2)二甲苯（Ⅱ）15min（3）二甲苯：无水乙醇=1:12min(4)100%乙醇（Ⅰ）5min(5)100%乙醇（Ⅱ）5min(6)80%乙醇5min(7)蒸馏水5min(8)苏木精液染色5min(9)流水稍洗去苏木精液1-3s(10)1%盐酸乙醇1-3s(11)稍水洗10-30s(12)蒸馏水过洗1-2s(13)0.5%伊红液染色1-3min(14)蒸馏水稍洗1-2s(15)80%乙醇稍洗1-2s(16)95%乙醇（Ⅰ）2-3s(17)95%乙醇（Ⅱ）3-5s(18)无水乙醇5-10min(19)石炭酸二甲苯5-10min(20)二甲苯（Ⅰ）2min(21)二甲苯（Ⅱ）2min(22)二甲苯（Ⅲ）2min(23)中性树胶封固注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步冲水时间需延长至20-30min。
②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。
*冷冻切片HE染色步骤：（1）冰冻切片固定10～30s（2）稍水洗1～2s（3）苏木精液染色（60℃）30～60s（4）流水洗去苏木精液5～10s（5）1%盐酸乙醇1～3s（6）稍水洗1～2s（7）促蓝液返蓝5～10s（8）流水冲洗15～30s（9）0.5%曙红液染色30～60s（10）蒸馏水稍洗1～2s（11）80%乙醇1～2s（12）95%乙醇1～2s（13）无水乙醇1～2s（14）石炭酸二甲苯2～3s（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s（17）中性树胶封固。
HE染色 方法步骤
“HE 染色过程”
试验前准备: 4%多聚甲醛固定，石蜡包埋切片
试剂名称:无水乙醇,氨水,冰乙酸,盐酸,二甲苯,中性树胶，HE 染液
配制试剂:
1%盐酸乙醇分化液配制：
36%—38%盐酸：1ml
75%乙醇：99ml
1、0.2%氨水配制:
25%—28%氨水：0.2ml
自来水：100ml
pH 值在7.5—8之间
试验过程：记录试验的具体步骤，
1，烤片：2小时，温度60℃（目的：使组织切片与载玻片贴合的更加紧密）
2.切片脱蜡至水：
①二甲苯Ⅰ：10min
②二甲苯Ⅱ：10min
③无水乙醇Ⅰ：5min
④无水乙醇Ⅱ：5min
⑤95%乙醇：2min
⑥90%乙醇：2min
⑦80%乙醇：2min
⑧70%乙醇：2min
⑨自来水洗：2min
3.染色：
①苏木精染色：10min
②自来水洗：1min
③1%盐酸乙醇分化：数秒
④自来水洗：1min
⑤0.2%氨水返蓝：30s±
⑥自来水洗：1min
⑦伊红染色：5min
⑧自来水洗：速洗
4. 37℃烘干0.5h以上，中性树胶封固。
he染色流程
he染色流程HE染色是一种常用的生物化学实验技术，用于检测样本中的蛋白质是否存在或定性分析蛋白质的相对含量。
下面是HE染色的基本流程：样品制备：首先，需要准备待检测的蛋白质样品。
通常情况下，蛋白质样品需要先进行预处理，如去除杂质、分离纯化、浓缩等。
样品制备的目的是确保待检测的蛋白质样品质量可靠、浓度准确。
染色液配制：HE染色需要使用特殊的染色液，其中包含了对蛋白质有特异性反应的化学试剂，如考马斯亮蓝、甲醇、乙醇等。
根据具体的实验需求，需要选择适当的染色液和染色条件。
蛋白与染色液反应：将准备好的蛋白质样品与染色液混合，在适当的条件下反应，通常是室温或微温，使蛋白质与染色液发生特异性反应。
这个过程需要注意控制反应时间，通常在30分钟到1小时之内。
样品清洗：反应完成后，需要将染色的样品进行清洗，以去除未反应的物质和干扰因素。
这个过程通常需要使用缓冲液或生理盐水，以确保清洗的效果。
观察和结果分析：清洗后的样品需要进行观察和结果分析。
通常情况下，观察可以通过肉眼观察或使用生物显微镜进行，同时可以结合扫描或摄影进行数据记录。
结果分析需要根据具体的实验需求和检测的蛋白质种类进行判断，如通过光密度扫描或荧光分析等。
在HE染色的流程中，需要注意以下几点：样品制备过程中需要注意蛋白质的质量和浓度，以确保检测结果的可靠性。
在选择染色液时需要根据实验需求和蛋白质的特点进行选择，以避免干扰因素。
在反应过程中需要注意控制反应时间、温度和pH值等条件，以确保反应效果。
在样品清洗过程中需要注意选择适当的清洗液和清洗时间，以去除未反应的物质和干扰因素。
在结果分析过程中需要结合具体的实验需求和检测的蛋白质种类进行判断，以得出准确的结论。
总之，HE染色的流程包括样品制备、染色液配制、蛋白与染色液反应、样品清洗和观察和结果分析等多个步骤。
在实验过程中需要注意细节和条件控制，以确保检测结果的可靠性。
HE染色方法与步骤吐血整理
HE染色试剂配置A：0.5~1%的伊红酒精溶液：称取伊红Y0.5~1g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。
以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以95%酒精（即工业酒精，如果不怕浪费，用无水乙醇配制也可）100毫升溶解。
B：苏木素染液配方：(配制3000ml，可按比列减少)苏木精6g无水乙醇100ml硫酸铝钾150g蒸馏水2000ml碘酸钠1.2g冰醋酸120ml甘油900ml配制方法：将苏木素溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸钠。
C：1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。
染色流程(1)二甲苯（Ⅰ）15min(2)二甲苯（Ⅱ）15min（3）二甲苯：无水乙醇=1:12min(4)100%乙醇（Ⅰ）5min(5)100%乙醇（Ⅱ）5min(6)80%乙醇5min(7)蒸馏水5min(8)苏木精液染色5min(9)流水稍洗去苏木精液1-3s(10)1%盐酸乙醇1-3s(11)稍水洗10-30s(12)蒸馏水过洗1-2s(13)0.5%伊红液染色1-3min(14)蒸馏水稍洗1-2s(15)80%乙醇稍洗1-2s(16)95%乙醇（Ⅰ）2-3s(17)95%乙醇（Ⅱ）3-5s(18)无水乙醇5-10min(19)石炭酸二甲苯5-10min(20)二甲苯（Ⅰ）2min(21)二甲苯（Ⅱ）2min(22)二甲苯（Ⅲ）2min(23)中性树胶封固注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步冲水时间需延长至20-30min。
②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。
*冷冻切片HE染色步骤：（1）冰冻切片固定10～30s（2）稍水洗1～2s（3）苏木精液染色（60℃）30～60s（4）流水洗去苏木精液5～10s（5）1%盐酸乙醇1～3s（6）稍水洗1～2s（7）促蓝液返蓝5～10s（8）流水冲洗15～30s（9）0.5%曙红液染色30～60s（10）蒸馏水稍洗1～2s（11）80%乙醇1～2s（12）95%乙醇1～2s（13）无水乙醇1～2s（14）石炭酸二甲苯2～3s（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s（17）中性树胶封固。
HE染色步骤
常规HE染色步骤（1）二甲苯（Ⅰ） 5-10 min(2) 二甲苯（Ⅱ） 5-10 min(3) 95%乙醇（Ⅰ） 1-3 min （4）95%乙醇（Ⅱ） 1-3 min （5）80%乙醇 1 min （6）蒸馏水 1 min （7）苏木精液染色 5-15 min(8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s(9) 1%盐酸乙醇 1-3 s(10) 稍水洗 10-30 s(11)促蓝液返蓝 10-30 s(12) 流水冲洗 10-15 min （13）蒸馏水过洗 1-2 s(14) 0.5%曙红液染色 1-3 min(15) 蒸馏水稍洗 1-2 s(16) 80%乙醇稍洗 1-2 s(17) 95%乙醇（Ⅰ） 3-5min(18) 95%乙醇（Ⅱ） 3-5 min(19) 无水乙醇 5-10 min(20) 无水乙醇 5-10 min(21) 二甲苯（Ⅰ） 3-5 min(22) 二甲苯（Ⅱ） 2-5 min(23) 二甲苯（Ⅲ） 3-5 min(24) 中性树胶封固结果：细胞浆红色，细胞核蓝紫色。
转：常规HE染色步骤（1）二甲苯（Ⅰ）5-10 min(2) 二甲苯（Ⅱ）5-10 min(3) 95%乙醇（Ⅰ）1-3 min （4）95%乙醇（Ⅱ）1-3 min （5）80%乙醇 1 min（6）蒸馏水 1 min（7）苏木精液染色 5-15 min(8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s(9) 1%盐酸乙醇 1-3 s(12) 流水冲洗20-30min （13）蒸馏水过洗 1-2 s(14) 0.5%曙红液染色 1-3 min(15) 蒸馏水稍洗1-2 s(16) 80%乙醇稍洗1-2 s(17) 95%乙醇（Ⅰ） 2-3 s(18) 95%乙醇（Ⅱ）3-5 s(19) 无水乙醇5-10 min (20) 石炭酸二甲苯无水乙醇5-10 min(21) 二甲苯（Ⅰ） 2 min(22) 二甲苯（Ⅱ） 2 min(23) 二甲苯（Ⅲ） 2 min(24) 中性树胶封固注：①第（10）、（11）步可省去，（12）步冲水时间需延长至20-30min。
细胞he染色的操作流程
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he染色步骤HE实验步骤
he染色步骤 HE实验步骤动物病理切片小结[样本处理]动物麻醉后，开胸，暴露心脏，头皮针插入左心室尖，打开37?生理盐水输液装置，从右心耳下沿剪开右心房，灌洗至流出的生理盐水无血(20min)，换4%多聚甲醛固定液灌注(约5min)[固定]4%多聚甲醛固定。
[石蜡切片]取样从固定中取出待切组织，用手术刀切成2mm厚度的小样，装入脱水小盒中，铅笔标号纸条同放入小盒后流水洗30min，蒸馏水浸洗处理Mice:脱水50%乙醇 2-3h170%乙醇 1-2h80%乙醇 1h95%乙醇 2h(1h+1h)100%乙醇 2h(1h+1h)透明二甲苯 35min+35min浸蜡 1h+1h+1h (62?蜡)[HE染色]脱蜡二甲苯? 15min二甲苯? 15min二甲苯:无水乙醇(1:1) 2min无水乙醇? 2min无水乙醇? 2min95%乙醇 2min85%乙醇 2min70%乙醇 2min50%乙醇 2min蒸馏水 5min(如果是DAB染色要抗原修复)HE染色苏木素 6-8min (时间可以延长，现在10-30min)冲洗 1min(反向将载玻片反向冲洗，注意不要脱片)2含1%盐酸的乙醇进行分色(用75%乙醇配)2-3s动作要快氨水反蓝 >10min伊红 10s冲洗固定脱水95%乙醇 2min100%乙醇? 2min100%乙醇? 2min二甲苯? 2min二甲苯? 2min 树胶封片组织浸蜡-常规石蜡切片制作组织经过透明剂的完全透明后，被移放于65?左右熔化的石蜡中，于65?的电热恒温箱中浸渍的过程称为浸蜡。
组织在脱水时，组织中的脂类和类脂等物质在脱水剂的作用下被溶解掉，留下了许多腔隙，许多管腔组织和血管，也有许多腔隙，这些都严重地影响了切片。
组织浸蜡时，由于诱导剂(二甲苯)的作用，石蜡进入到组织的各个角落，并在各个角落中保存下来。
当石蜡包埋后冷却时，这浸入到里3面的石蜡便可起到支撑的作用，而且使组织不致于变形，塌陷等现象，使切片能完整的切出，便于镜下观察。
HE染色及组化步骤
组织固定及HE染色步骤
1、固定：刚取的新鲜组织块经福尔马林溶液固定48小时（一般固定2天）
2、用镊子取出放到大的蜡盒上，用刀片切成1*0.5厘米的小块，用小白蜡盒包上，放入80%的乙醇中过夜
3、脱水：第二天早上8点，把蜡盒依次放入95%Ⅰ的乙醇中（3h）—95%Ⅱ的乙醇中（3h）—100%Ⅰ的乙醇中（3h）—100%Ⅱ的乙醇中（过夜）
4、透明：第二天早8点从100%Ⅱ的乙醇中取出小蜡盒放到二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各30分钟
5、浸蜡：放入蜡缸中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、中各浸泡30分钟
6、包埋
7、切片
8、烤片
HE染色
二甲苯Ⅰ（30min）—二甲苯Ⅱ（30min）—100%Ⅰ的乙醇中（10min）—100%Ⅱ的乙醇中（10min）95%的乙醇中（5min）—90%的乙醇中（5min）—80%的乙醇中（5min）—自来水缸中浸泡5min —苏木精染核5min —水洗— 1%的盐酸酒精分化—水洗—弱氨水返蓝—水洗—镜下观察—伊红染质（15min）—水稍洗—80%的乙醇、95%的乙醇Ⅰ、95%的乙醇Ⅱ中各过一下即可—100%Ⅰ的乙醇中（5min）—100%Ⅱ的乙醇中（10min）—二甲苯Ⅰ（10min）—二甲苯Ⅱ（10min）—中性树胶封片
免疫组化步骤
切片常规脱蜡至水洗→预处理（热修复或酶消化）→阻断3%的H2O2→PBS洗→封闭→加一抗（鼠或兔抗人）→PBS洗→加二抗(生物素标记IgG鼠或兔））→PBS洗→加三抗（链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶）→PBS洗→DAB（AEC或BCIP/NBT）显色→水洗→复染核→水洗→弱氨水返兰→水洗→脱水→透明→封片。
HE染色的步骤及方法
HE染色的步骤及方法HE染色（hematoxylin and eosin staining）是一种广泛应用于组织学研究与临床病理学中的常规染色方法，用于显示组织和细胞的形态结构、特征和组织的组织学构造。
HE染色的主要步骤包括固定、脱水、透明、浸染、洗涤、脱色、洗涤、著色、酸洗、洗涤和封片等。
下面将详细介绍每个步骤的具体方法。
1.固定：将待染的组织标本放入含有4%至10%的缓冲醛（如10%的中性缓冲醛）中固定。
固定的时间一般为24至48小时，具体时间根据组织的大小和种类而定。
2.脱水：在固定后，将组织标本转移到带有不同浓度的乙醇溶液中进行脱水。
脱水的目的是逐渐将水分从组织中溶解掉，以便更好地进行后续处理。
常用的乙醇浓度为70%、80%、95%、绝对乙醇和绝对乙醇。
3.透明：将脱水的组织标本转移到透明剂中，如苯酚、甘油等。
透明的目的是去除残留的乙醇，并将标本与石蜡相容，以便进行后续处理。
4.浸染：将透明的组织标本转移到硬化的石蜡中，通过加热使其温度达到融点，使组织与石蜡充分浸透。
通常情况下，标本需要浸染多次以确保充分浸透。
5.洗涤：将浸染好的组织放入清洁的容器中，用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除未浸透的石蜡。
6. 脱色：将洗净的组织标本放入xylene或但醇溶液中进行脱色，以去除标本中的石蜡。
脱色时间视标本的大小和种类而定，通常为30分钟至1小时。
7.再洗：将脱色的组织标本用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除残留的脱色剂。
8. 著色：将洗净的组织标本置于染色剂中进行著色。
HE染色中，常用的染色剂为血红和嗜酸性染料安伊汀（Eosin）。
组织标本一般需在血红染色剂中浸泡2至5分钟，然后脱水，再在安伊汀染色剂中浸泡2至5分钟。
也可根据需要调整具体的染色时间。
9.酸洗：将著色好的组织标本用弱酸性缓冲液进行酸洗，以去除过量的染色剂。
酸洗时间一般为几秒钟至几分钟。
10.再次洗涤：将经酸洗的组织标本用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除残留的酸洗液。
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HE染色的步骤及方法
一、技术简介
苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosin staining)，简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。
苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性和嗜酸性；而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性。
细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色，这些物质称为嗜碱性。
而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色，这些物质称为嗜酸型。
脱氧核糖核酸（DNA）两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。
苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
伊红是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。
二、实验流程
1. 将脱蜡至水的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。
2. 酸水及氨水中分色，各数秒钟。
3. 流水冲洗1 h后入蒸馏水片刻。
4. 70%和90%酒精中脱水各10 min。
5. 酒精伊红染色液染色2-3 min。
6. 染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明。
7. 将已透明的切片滴上加拿大树胶，盖上盖玻片封固。