转基因大豆检测手段

转基因大豆检测手段的研究

【摘要】中国很多大豆制品是利用进口转基因大豆进行加工的，产品中一定含有转基因大豆的成分，但是却未被标明，所以亟待对转基因大豆进行检测的手段，本文对转基因大豆的几种检测方法进行了综述。

【关键词】转基因大豆成分 pcr sds-page 基因芯片酶联免疫吸附分析技术

我国为大豆的原产国也是大豆的主产国之一，但是近年来，国外的转基因大豆大量涌入中国，中国国产大豆失去了价格优势，很多企业选择低成本的转基因大豆作为原料。中国是个饮食文化上很依赖大豆的国家，各种大豆制品充斥着我们的餐桌，但是由于转基因大豆可能存在安全性问题，很多消费者选择不食用转基因食品，但是有调查显示我国存在很多大豆制品中是使用转基因大豆制作的，但是都没有进行标示，所以在食品安全监测方面，亟待一种有效的检测产品中是否含有转基因成分的手段。本文列出几种大豆制品的转基因成分的检测方法，并对其优缺点进行了综述。

1 pcr法

1.1 pcr（polymerase chain reaction）

目前，种植最广的是抗草甘膦大豆由美国孟都山公司生产的转基因大豆，转基因大豆的外源基因epsps（5-enolypyruvy lshikimate-3-phosphate synthase，来源于a.tumefaciens菌株cp4），调控元件上游为花椰菜花叶病毒camv35s启动子，下游终止

子为nos，检测时主要针对这三种基因进行检测，而且还包括大豆的内源基因lectin，用于鉴别大豆。利用这四个基因片段的特异性基因序列，利用primer premier5.0设计四对引物，进行扩增，可以初步确定大豆中是否含有转基因成分。有研究结果表明，利用ctab法提取大豆的总dna，对大豆的camv 35s启动子和内源基因lection pcr扩增，扩增片段长度为118bp和195bp，表明了大豆中有转基因成分。另有研究利用gus标记基因和nos终止子的

pbi221质粒作为pcr检测的阳性对照，在转基因大豆中扩增出了阳性结果，并利用southern杂交验证了结果的可靠性。这些研究都证明了利用pcr对转基因大豆进行检测是简便可靠的一种检测手段。

1.2 巢式（nested pcr）和半巢式pcr

在食品检验领域，很多时候我们要面对的是大豆制品，其中的dna被破坏，可供我们利用的有效的模板少，所以利用普通pcr无法检测出是否含有转基因大豆成分。巢式pcr是设计2对引物，其中1对引物在另1对引物扩增产物的片段上，通过2次pcr反应对某个基因进行检测。通常第1次采用能扩增较大片段的引物，经过20～30 次循环扩增后，将第1次扩增的产物作为模板进行第2次扩增。半巢式pcr的原理与巢式pcr基本相同，只是半巢式pcr只有1对半引物，有1个引物被用于2次pcr反应中。这2种方法不但可以减少假阳性的出现，而且可以使检测的下限下降几个数量级。从理论上来说，用巢式和半巢式pcr可以检测到低于10-11g/

μl的dna模板量。

2 基因芯片

基因芯片是采用光导原位合成或显微印刷等方法，将大量dna

探针片段有序地固化于支持物的表面，然后与已标记的生物样品中dna分子杂交，再对杂交信号进行检测分析，就可得出该样品的遗传信息。一次可以检验大量样品，但是造价较高，还有待开发。

3 酶联免疫吸附技术

酶联免疫吸附分析是指：应用一个酶标记的免疫反应物和一个免疫吸附剂的酶免疫分析，通过不同的方法，可用于测定未知样品的浓度。lipp等人在2000年建立测试和验证了基于elisa的抗草甘膦转基因大豆的特异性检测方法，这个方法利用cp4-epsps（5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶）蛋白特异性抗体，初步研究表明，此方法可以检测大豆原料中的转基因成分含量范围在0.3%-5%之间。

4 蛋白质sds-page电泳

研究表明：利用sds-page蛋白电泳，发现转基因大豆中有一条分子量约为45ku的蛋白带的表达量明显比非转基因大豆强，这样可以在蛋白检测中，从表达量的大小来区分转基因大豆与非转基因大豆，但是，这个实验中，由于无法引进转基因大豆对应的原始非转基因大豆品种，只能与中国的大豆进行比对，所以结果仅作参考，但是这为转基因大豆的检测提供了一个新思路。

5 结语

转基因大豆的检测方法多种多种，各有其优点和缺点，在实际的检测工作中，要根据具体情况，选择一种行之有效的方法。

参考文献：

[1]蒋原，祝长青，林宏.利用pcr技术检测转基因大豆 round upready的研究.检验检疫科学，2001，11（4）：11-13，20.

[2]刘光明，李庆阁，王群力等.多重荧光pcr同时检测转基因成分35s和nos方法的建立.厦门大学学报，2002，41（4）：493～496.