游离氨基酸测定(完整版)
茶叶中游离氨基酸的测定
茶叶中游离氨基酸的测定茶叶是一种传统的饮品，具有多种保健功效。
而茶叶中的游离氨基酸是决定茶叶品质的重要因素之一。
本文将探讨茶叶中游离氨基酸的测定方法及其意义。
一、茶叶中游离氨基酸的意义游离氨基酸是构成蛋白质的基本组成部分，也是人体所需的重要营养物质之一。
在茶叶中，游离氨基酸的含量与茶叶的品质有着密切的关系。
茶叶中游离氨基酸的含量高低直接影响着茶叶的口感和香气，也是评价茶叶质量好坏的重要指标之一。
因此，准确测定茶叶中游离氨基酸的含量对于茶叶品质的评价具有重要意义。
常用的测定茶叶中游离氨基酸含量的方法主要有色谱法、高效液相色谱法和光谱法等。
以下将分别介绍这几种方法的原理和步骤。
1. 色谱法色谱法是一种常用的游离氨基酸测定方法。
其原理是利用色谱柱将茶叶样品中的游离氨基酸分离出来，再通过检测器测定其浓度。
具体步骤如下：（1）样品制备：将茶叶样品粉碎并称取适量，加入适量溶剂提取游离氨基酸。
（2）色谱柱分离：将提取得到的茶叶样品溶液注入色谱柱进行分离，根据游离氨基酸的特性选择合适的色谱柱。
（3）浓度测定：通过色谱柱后，游离氨基酸会进入检测器，根据吸光度或荧光强度等参数测定游离氨基酸的浓度。
2. 高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和测定游离氨基酸的方法。
其原理是利用高效液相色谱仪将茶叶样品中的游离氨基酸分离出来，并通过检测器测定其浓度。
具体步骤如下：（1）样品制备：将茶叶样品粉碎并称取适量，加入适量溶剂提取游离氨基酸。
（2）色谱柱分离：将提取得到的茶叶样品溶液注入高效液相色谱仪进行分离，根据游离氨基酸的特性选择合适的色谱柱。
（3）浓度测定：通过高效液相色谱柱后，游离氨基酸会进入检测器，根据吸光度或荧光强度等参数测定游离氨基酸的浓度。
3. 光谱法光谱法是一种简单快速的游离氨基酸测定方法。
其原理是利用游离氨基酸在特定波长下的吸收特性来测定其浓度。
具体步骤如下：（1）样品制备：将茶叶样品粉碎并称取适量，加入适量溶剂提取游离氨基酸。
游离氨基酸测定（完整版）
总游离氨基酸测定（完整版）实验原理：游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用，产生蓝紫色的化合物二酮茚－二酮茚胺，产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在570nm下测其含量。
因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应，在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉.仪器与用具：100ml容量瓶；漏斗；三角瓶研钵；刻度吸管：0.1ml×1、1ml×2、2ml×2、5ml×1;沸水浴；具塞刻度试管20ml×10;分光光度计.一、试剂1.水合茚三铜：称重结晶的茚三铜0.6g,装入烧杯，加入正丙醇15ml，使其溶解加入正丁醇30 ml、乙二醇60 ml、乙酸-乙酸钠缓冲液（pH=5.4）9 ml,混匀，棕色瓶冰箱保存，10天内有效。
2.乙酸-乙酸钠缓冲液（pH5.4）：称取化学纯乙酸钠54.4g，加入无氨蒸馏水100 ml，电炉加热至沸，使其体积减半，冷却后加冰乙酸30 ml，加蒸馏水定容至100 ml。
3.氨基酸标准溶液：精确称取80℃烘干至恒重的亮氨酸0.0234g溶于10％异丙醇并定容至50ml。
取此液5ml蒸馏水稀释到50ml，即为5μg/ml氨基酸标液。
4.0.1%抗坏血酸：称取0.050g抗坏血酸，溶于50 ml蒸馏水中，即配即用。
5.10％乙酸二、标准曲线制备加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。
以吸光度为纵坐标，氨基氮ug数为横坐标，绘标准曲线三、实验步骤：1.烟末0.5g于研钵中加入5 ml10%乙酸，研磨匀浆后用蒸馏水定容100 ml，用滤纸过滤到三角瓶中备用。
2.1ml滤液加入到20ml 干燥试管中，加1 ml蒸馏水，水合茚三铜3ml, 0.1%抗坏血酸0.1ml, 加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。
茚三酮法测游离氨基酸
一、目的学习茚三酮显色法测定氨基酸含量的方法二、原理茚三酮溶液与氨基酸共热，生成氨。
氨与茚三酮和还原性茚三酮反应，生成紫色化合物。
该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比，可通过测定570nm处的光密度，测定氨基酸的含量。
三、试剂与材料（1）标准氨基酸溶液：配制成0.3mmol/L溶液。
（2）pH5.4，2mol/L醋酸缓冲液：量取86mL2mol/L醋酸钠溶液，加入14mL2mol/L乙酸混合而成。
用pH检查校正。
（3）茚三酮显色液：称取85mg茚三酮和15mg还原茚三酮，用10mL乙二醇甲醚溶解。
茚三酮若变为微红色，则需按下法重结晶：称取5g茚三酮溶于15～25mL热蒸馏水中，加入0.25g活性炭，轻轻搅拌。
加热30min后趁热过滤，滤液放入冰箱过夜。
次日析出黄白色结晶，抽滤，用1mL冷水洗涤结晶，置干燥器干燥后，装入棕色玻璃瓶保存。
还原型茚三酮按下法制备：称取5g茚三酮，用125mL沸蒸馏水溶解，得黄色溶液。
将5g维生素C用250mL温蒸馏水溶解，一边搅拌一边将维生素C溶液滴加到茚三酮溶液中，不断出现沉淀。
滴定后继续搅拌15min，然后在冰箱内冷却到4℃，过滤、沉淀用冷水洗涤3次，置五氧化二磷真空干燥器中干燥保存，备用。
乙二醇甲醚若放置太久，需用下法除去过氧化物：在500mL乙二醇甲醚中加入5g硫酸亚铁，振荡1～2h，过滤除去硫酸亚铁，再经蒸馏，收集沸点为121～125℃的馏分，为无色透明的乙二醇甲醚。
（4）60％乙醇。
（5）样品液：每毫升含0.5～50μg氨基酸。
（6）分光光度计。
（7）水浴锅。
四、操作步骤1．标准曲线的制作分别取0.3mmol/L的标准氨基酸溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL于试管中，用水补足至1mL。
各加入1mLpH5.4，2mol/L醋酸缓冲液；再加入1mL茚三酮显色液，充分混匀后，盖住试管口，在100℃水浴中加热15min，用自来水冷却。
放置5min后，加入3mL60％乙醇稀释，充分摇匀，用分光光度计测定OD570nm。
实验八植物组织中游离氨基酸的分离鉴定
实八:植物组织中游离氨基酸的分离鉴定
左哥
一、实验材料、器材
1、展层溶剂标准氨基酸溶液0.5%羧甲基纤维素钠溶液硅胶G粉0.5%茚三酮丙酮溶液
2、层析缸玻璃板
二、操作步骤
1、马铃薯提取液制备：30g去皮马铃薯，80%乙醇，组织捣碎机，水浴蒸干，残渣加水溶解→
2、制版：1.8g硅胶G，研磨3min，干燥，110C烘箱活化30min→
3、点样：→
4、展层→
5、显色→
6、鉴定。
三、实验结果
四、讨论及分析
由样点颜色和Rf值与标准样点对比可知，2号点为Met，6号点为Pro，7号点为His，
1—6号点，对应氨基酸为酸性或中性氨基酸，而7、8号对应氨基酸为碱性氨基酸。
薄板上样品中5号显色斑点为紫红色，但距离6号点较近，未能完全分离，推断有以下
几点原因：点样时扩散直径过大，导致两斑点扩散区域重叠难以辨认；薄层担体粒度本身的
限制，试验中展层时间不长即达到了预计的溶剂前沿（居上边缘约1cm），即展层速度过快，
原因可能是制板时硅胶G研磨过粗，据范迪姆特方程：H=A+B/U+Cu,其中A、C均与粒度成
正比，即提高填充料的均匀性和减少粒度才能在定长的条件下提高有效搭伴数，增强分离效
果；研磨时用力适当，方法合适，适当增加研磨时间才能是硅胶G颗粒又匀又细，达达到
较好分离效果。
同时，也要注意不可研磨过细，否则易拖尾。
实验植物组织游离氨基酸总量测定柯上网材料
缩合生成Ruhemans紫。
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共热、微酸性
《植物生理生化实验A》
福建农林大学
24％
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《植物生理生化实验A》
仪器设备：
分光光度计； 电子天平； 恒温水浴；100ml容量瓶； 玻璃研钵；移液枪；20ml具塞刻度试管; 普通试管；三角 瓶；玻璃漏斗等。
谢等有一定意义 。
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测定意义：
《植物生理生化实验A》
作作作为为为福营施逆建农养肥境林品的生大学质生理的理指指指标标标 。。。。。。？
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目的要求：
《植物生理生化实验A》
1、了解植物体内氨基酸测定的意义； 2、了解氨基酸测定的方法； 34、、其掌进操握一茚步作三熟要酮练点分试;剂光显福光色建度法农计测林的定大游使学离用氨方基法酸。总量的基本原理及 5、比较不同萌发程度的水稻种子游离氨基酸总量的差异。
2．标准曲线的绘制及样品测定： 取10支20mL刻度试管，按下表进行操作。
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《植物生理生化实验A》
实验步骤：
表1 游离氨基酸标准曲线制作及样品测定
试管
试
编号
剂 (毫升)
样品提取液
标准氨基酸溶液 （5μg/ml）
无氨蒸馏水(ml)
水合茚三酮(ml) 0.1%抗坏血酸(ml)
什么要加入抗坏血酸溶液？
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《植物生理生化实验A》
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游离a-氨基酸含量的测定
• 目的与要求
• 实验的重点和难点
• 仪器和试剂 • 基本操作 • 实验原理 • 实验内容 •数据记录和处理 • 思考题
•注意事项
实验目的与要求
1、了解分光光度法测定游离氨基酸的原理与方法； 2、掌握分光光度计的使用。
重点和难点
分光光度计的使用与标准曲线的制作
仪器和试剂
抗坏血酸（滴）
氨基氮ug/管 吸光度
4
0
4
12.5
4
25.0
4
37.5
4Байду номын сангаас
50.0
4
62.5
摇匀后，将上述6支比色管置于80℃水浴槽加热
15分钟后用冷水冷却，再用缓冲液定容至25mL，摇匀。
3、样品含量的测定
从8号比色管移取1.00mL溶液于9号25mL比色
管，在分别加入3.00mL缓冲溶液、2.00mL茚三酮 溶液和4滴抗坏血酸，摇匀后置于80℃水浴槽加热 15分钟后用冷水冷却，再用缓冲液定容至25mL， 摇匀。以1号比色管溶液为参比液测出样品的吸光
实验内容
1、样品中游离a－氨基酸的提取： 称1.0g剪碎的新鲜蘑菇放入研钵中，加入2mL
蒸馏水，研磨成匀浆，再转入7号25mL比色管，然
后用6mL蒸馏水分三次洗涤研钵，分别转入7号比色 管，再置于80℃水浴槽加热10分钟后用冷水冷却，
再用蒸馏定容至25mL。摇匀后，过滤，将滤液置于
8号比色管以备用。
2、标准曲线制作： 在6支比色管中，按下表顺序与用量加入试剂：
比色管号 V标/mL V缓/mL V茚/mL 1 0 3.00 2.00 2 0.50 2.50 2.00 3 0.10 2.00 2.00 4 1.50 2.00 2.00 5 2.00 2.00 2.00 6 2.50 2.00 2.00
蘑菇中游离氨基酸含量的测定实验报告
蘑菇中游离氨基酸含量的测定实验报告一、引言在食品营养学中，游离氨基酸是评价食品蛋白质质量的重要指标之一。
游离氨基酸的含量可以反映食品的蛋白质水平，也可以为食品品质的评价提供依据。
蘑菇是一种常见的食材，其营养价值较高，其中游离氨基酸含量的测定对于评价蘑菇的蛋白质质量非常重要。
本实验旨在通过对蘑菇中游离氨基酸的测定，探究蘑菇的蛋白质质量，并为进一步研究蘑菇的营养价值提供参考。
二、实验方法1. 实验材料准备•蘑菇样品：取新鲜的蘑菇作为实验样品。
•无水无氧乙酸：用于提取蘑菇中的游离氨基酸。
•pH 2.2缓冲液：用于调节提取液的酸碱度。
2. 实验步骤1.将蘑菇样品洗净并切碎成小块。
2.取20克蘑菇样品加入100 mL pH 2.2缓冲液中。
3.加入适量的无水无氧乙酸，使pH值控制在2.2左右。
4.进行超声波提取，提取时间为30分钟。
5.将提取液离心，收集上清液。
6.将上清液过滤，得到待测样品。
3. 游离氨基酸含量测定1.取1 mL 待测样品加入氨基酸分析仪样品瓶中。
2.将样品瓶放入氨基酸分析仪，按照仪器操作说明进行测定。
3.记录并计算游离氨基酸的含量。
三、实验结果根据实验测定，蘑菇中游离氨基酸含量为：•脯氨酸：5.2 mg/g•缬氨酸：3.8 mg/g•苏氨酸：2.5 mg/g•赖氨酸：1.9 mg/g•…四、实验讨论根据实验结果可以看出，蘑菇中游离氨基酸的含量较高，表明蘑菇具有较高的蛋白质质量。
其中以脯氨酸和缬氨酸的含量最高，说明蘑菇富含这两种氨基酸。
与其他食材相比，蘑菇中游离氨基酸的含量可能有所差异。
这可能是由于蘑菇的生长环境、品种等因素所致。
进一步的研究可以探究不同蘑菇品种中游离氨基酸含量的差异。
游离氨基酸的含量对于食物的品质和营养价值具有重要的影响。
蘑菇作为一种营养价值较高的食材，其富含的游离氨基酸有助于提供人体所需的必需氨基酸，并具有重要的保健作用。
五、结论通过本实验的测定，我们得出了蘑菇中游离氨基酸的含量，并得出以下结论：1.蘑菇中富含游离氨基酸，特别是脯氨酸和缬氨酸。
饲料中游离氨基酸的检测方法
饲料中游离氨基酸的检测方法
一、样品制备
1.采集样品：选择有代表性的饲料样品，用干净、干燥的容器采集，避免污染和变质。
2.粉碎样品：将采集的样品进行粉碎，使氨基酸分布更均匀。
3.称取样品：按照实验室规范，精确称取一定量的样品用于后续实验。
二、衍生化处理
1.确定衍生化试剂：根据待测氨基酸的化学性质和仪器检测需求，选择合适的衍生化试剂。
2.衍生化反应条件：确定衍生化反应的温度、时间、pH值等条件，确保反应完全、稳定。
3.衍生化产物纯化：对衍生化产物进行纯化，去除杂质，提高检测的准确性。
三、分离纯化
1.选择色谱柱：根据氨基酸的性质和分离要求，选择合适的色谱柱。
2.确定色谱条件：调整流动相的组成、pH值、流速等条件，达到最佳的分离效果。
3.检测器选择：根据需要选择合适的检测器，如紫外检测器、荧光检测器等。
4.分离纯化过程：将样品溶液进行分离纯化，得到纯化的氨基酸
溶液。
四、检测分析
1.仪器准备：根据选择的检测器类型，准备好相应的仪器设备。
2.进样分析：将纯化的氨基酸溶液进行进样分析，记录色谱图和峰信息。
3.数据处理：对色谱数据进行处理，计算各氨基酸的含量和相关参数。
4.结果分析：根据计算结果，对饲料中游离氨基酸的含量和分布进行分析。
以上是饲料中游离氨基酸的检测方法，包括样品制备、衍生化处理、分离纯化和检测分析等方面。
根据实际需求和实验室条件，可以选择合适的实验方法和仪器设备进行检测和分析。
实验20植物组织中游离氨基酸总量的测定
实验20植物组织中游离氨基酸总量的测定第一篇：实验20植物组织中游离氨基酸总量的测定实验20植物组织中游离氨基酸总量的测定茚三酮显色法氨基酸是组成蛋白质的基本单位也是蛋白质的分解产物。
植物根系吸收、同化的氮素主要以氨基酸和酰胺的形式进行运输。
所以测定植物组织中不同时期、不同部位游离氨基酸的含量对于研究根系生理、氮素代谢有一定意义。
一、原理氨基酸与茚三酮共热时能定量地生成二酮茚胺。
该产物显示蓝紫色称为 Ruhemans 紫。
其吸收峰在 570 nm 而且在一定范围内吸光度与氨基酸浓度成正比。
氨基酸与茚三酮的反应分两步进行第一步氨基酸被氧化形成 CO 2、NH 3 和醛茚三酮被还原成还原型茚三酮第二步所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和一分子氨脱水缩合生成二酮茚–二酮茚胺 Ruhemans 紫反应式如下在一定范围内反应体系颜色的深浅与游离氨基的含量成正比因此可用分光光度法测定其含量。
二、实验材料、试剂与仪器设备一实验材料各种植物组织。
二试剂 1.水合茚三酮试剂称取 0.6 g 再结晶的茚三酮置烧杯中加入 15 mL 正丙醇搅拌使其溶解。
再加入 30 mL 正丁醇及 60 mL 乙二醇最后加入9 mL pH5.4 的乙酸–乙酸钠缓冲液混匀贮于棕色瓶置4 ℃下保存备用10 d 内有效。
2.乙酸–乙酸钠缓冲液 pH 5.4 称取乙酸钠 54.4 g 加入100 mL 无氨蒸馏水在电炉上加热至沸使体积蒸发至 60 mL 左右。
冷却后转入100 mL 容量瓶中加30 mL 冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至100 mL。
3.标准氨基酸称取80 ℃下烘干的亮氨酸 46.8 mg 溶于少量10 异丙醇中用 10 异丙醇定容至 100 mL。
取该溶液 5 mL 用蒸馏水稀释至 50 mL 即为含氨基氮5 μ g/mL 的标准氨基酸溶液。
4.0.1 抗坏血酸称取 50 mg 抗坏血酸溶于 50 mL 无氨蒸馏水中随配随用。
茶叶中游离氨基酸总量的测定实验报告
茶叶中游离氨基酸总量的测定实验报告一、实验目的测定茶叶中游离氨基酸总量，了解茶叶的品质和营养价值，为茶叶的生产、加工和质量控制提供科学依据。
二、实验原理茶叶中的游离氨基酸在一定的条件下与茚三酮反应，生成紫红色的络合物。
该络合物在 570nm 波长处有最大吸收峰，其吸光度与游离氨基酸的含量成正比。
通过测定吸光度，并与标准曲线比较，可以计算出茶叶中游离氨基酸的总量。
三、实验材料与仪器1、实验材料茶叶样品：选取不同种类、不同产地的茶叶。
茚三酮试剂：称取茚三酮 05g，溶于 100mL 乙醇中，摇匀，冷藏备用。
磷酸盐缓冲液（pH 80）：称取磷酸二氢钾 05g，磷酸氢二钠 23g，加水溶解并定容至 1000mL。
标准氨基酸溶液：准确称取一定量的谷氨酸，用蒸馏水溶解并定容，配制成浓度为200μg/mL 的标准溶液。
2、实验仪器分光光度计分析天平容量瓶（100mL、50mL、25mL）移液管（1mL、2mL、5mL）具塞刻度试管（25mL）恒温水浴锅离心机四、实验步骤1、标准曲线的绘制分别吸取 00mL、05mL、10mL、15mL、20mL、25mL 标准氨基酸溶液于 25mL 具塞刻度试管中，各加入 10mL 磷酸盐缓冲液（pH 80）和 10mL 茚三酮试剂，摇匀，在沸水浴中加热 15min，取出后迅速冷却至室温，用蒸馏水定容至 25mL，摇匀。
以空白溶液（00mL 标准氨基酸溶液）为参比，在 570nm 波长处测定各溶液的吸光度。
以游离氨基酸的浓度（μg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品处理称取茶叶样品 20g 于研钵中，加入 80%乙醇 50mL，研磨成匀浆，转移至离心管中，在 4000r/min 下离心 10min，取上清液。
将上清液用 80%乙醇定容至 100mL，摇匀。
3、样品测定吸取 10mL 样品溶液于 25mL 具塞刻度试管中，按照标准曲线绘制的步骤进行操作，测定吸光度。
血清中游离氨基酸的测定
血清中游离氨基酸的测定血清中游离氨基酸的测定是一种重要的生化分析方法，可以用来评估人体的营养状况、肝脏功能以及某些代谢疾病的诊断和监测。
本文将介绍游离氨基酸测定的原理、方法和一些相关应用。
一、原理在正常生理状态下，游离氨基酸主要由肠道摄入的蛋白质分解产生，也可由肝脏合成。
血清中游离氨基酸的浓度与体内摄入和代谢的平衡相关。
游离氨基酸的测定常采用高效液相色谱（HPLC）或气相色谱（GC）方法。
HPLC法：该方法利用高效液相色谱技术，将游离氨基酸样品进行分离和定量。
通过样品的前处理、有机溶剂的洗脱和柱温的控制，可以有效地分离血清中的游离氨基酸。
GC法：该方法利用气相色谱技术，将游离氨基酸样品中的氨基酸成分进行分离。
通过取样、衍生化、柱温控制和检测器的选择，可以得到准确的游离氨基酸浓度。
二、方法1. 样品准备首先，需要收集被测者的血清样品。
采集血清样品时应注意避免任何污染，以确保测定的准确性。
2. 样品处理将收集到的血清样品离心，得到澄清液。
然后，使用合适的方法进行样品的前处理，例如蛋白质沉淀、酸水解或衍生化。
3. 色谱条件设置对于HPLC法，需要准备一个合适的色谱柱和流动相。
流动相的pH值和组成应根据实验需要进行优化。
对于GC法，需要选择合适的柱和检测器，同时设置适当的柱温和气体流速。
4. 校准曲线绘制制备一系列已知浓度的游离氨基酸标准溶液，将其进行色谱分析，并记录各峰的相对峰面积。
5. 样品分析将经过前处理的血清样品注入色谱仪中，进行色谱分析。
记录各氨基酸的峰面积，并利用已知浓度标准曲线进行定量计算。
三、应用1. 营养评估游离氨基酸的测定可用于评估人体的蛋白质营养状况。
蛋白质供应不足或消化吸收障碍会导致血清游离氨基酸浓度下降，从而反映出人体的蛋白质代谢情况。
2. 代谢疾病监测某些代谢疾病，如肝功能异常、糖尿病和肾功能损害，会对游离氨基酸的代谢产生影响。
通过监测血清中游离氨基酸的浓度变化，可以帮助医生进行疾病的诊断和监测。
gbt8314-87茶游离氨基酸总量测定-中华人民共和国国家标准茶游离
中华人民共和国国家标准茶游离氨基酸总量测定 GB/T 8314—87 Tea-Determination of free amino acids content━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━本标准适用于茶叶中游离氨基酸总量的测定。
茶叶水浸出物中具有α-氨基的有机酸且呈游离状态存在者,均称茶叶游离氨基酸。
1 原理氨基酸在pH8.0的条件下与茚三酮共热,形成紫色络合物,用分光光度法在特定的波长下测定其含量。
2 仪器和用具实验室常规仪器及下列各项:2.1 分析天平: 感量0.0001g。
2.2 分光光度仪。
3 试剂和溶液3.1 pH8.0磷酸盐缓冲液:按GB 8313—87《茶茶多酚测定》中3.2的规定,配制1/15M磷酸氢二钠(3.2.1)和1/15M磷酸二氢钾(3.2.2)溶液。
然后取1/15M的磷酸氢二钠溶液95mL和1/15M磷酸二氢钾溶液5mL,混匀。
3.2 2％茚三酮溶液: 称取水合茚三酮(纯度不低于99％)2g,加50mL水和80mg氯化亚锡(GB638—78,分析纯),搅拌均匀。
分次加少量水溶解,放在暗处,静置一昼夜,过滤后加水定容至100mL。
3.3 茶氨酸或谷氨酸标准液: 称取100mg茶氨酸或谷氨酸(纯度不低于99％)溶于100mL水中,作为母液。
准确吸取5mL母液,加水定容至50mL作为工作液(1mL含茶氨酸或谷氨酸0.1 mg)。
4 操作方法4.1 取样按GB 8302—87《茶取样》规定取样。
4.2 试样的制备按GB 8303—87《茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定》的规定,制备试样。
4.3 测定步骤4.3.1 试液的制备按GB 8305—87《茶水浸出物测定》中3.4.1的规定,制备试液。
4.3.2 测定准确吸取试液(4.3.1)1mL,注入25mL容量瓶中,加0.5mLpH8.0缓冲液(3.1)和0.5mL 2％茚三酮溶液(3.2),在沸水浴中加热15min。
MM_FS_CNG_0263 茶、游离氨基酸总量测定
茶、游离氨基酸总量测定.适用范围本适用于茶叶中游离氨基酸总量地测定..定义茶叶水浸出物中具有α氨基地有机酸且呈游离状态存在者，均称茶叶游离氨基酸..原理概要氨基酸在地条件下与茚三酮共热，形成紫色络合物，用分光光度法在特定地波长下测定其含量..主要试剂和仪器.试剂磷酸盐缓冲液：磷酸氢二钠（）：称取磷酸氢二钠，加水溶解后定容至.磷酸二氢钾（）：称取磷酸二氢钾，加水溶解后定容至.取地磷酸氢二钠溶液和磷酸二氢钾溶液，混匀.三酮溶液（％）：称取水合茚三酮(纯度不低于％)，加水和氯化亚锡，搅拌均匀.分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至.茶氨酸或谷氨酸标准液：称取茶氨酸或谷氨酸(纯度不低于％)溶于水中，作为母液.准确吸取母液，加水定容至作为工作液(含茶氨酸或谷氨酸)..仪器分析天平：感量.分光光度仪..取样.大包装茶取样.取样件数.取样件数按下列规定：～件，取样一件；～件，取样两件；件以上，每增加件(不足件者按件计)增取一件；件以上，每增加件(不足件者按件计)增取一件；件以上，每增加件(不足件者按件计)增取一件..在取样时如发现茶叶品质、包装或堆存情况等有异常情况时，可酌情增加或扩大取样数量，以保证样品地代表性，必要时应停止取样..取样步骤.包装前取样即在产品包装过程中取样.在茶叶定量装件时，每装若干件(如每批件以上，则每装件；件以下，则每装约件)后，用取样铲取出样品约.所取地原始样品盛于有盖地专用茶箱中，然后混匀，用分样器或四分法逐步缩分至～，作为平均样品，分装于～个茶样筒中，供检验用..包装后取样即在产品成件、打包、刷唛后取样.在整批茶叶包装完成后地堆垛中，从不同堆放位置，随机抽取规定地件数.逐件开启后，分别将茶叶全部倒在塑料布上.用取样铲各取出有代表性地样品约，置于有盖地专用茶箱中，混匀.用分样器或四分法逐步缩分至～，作为平均样品，分装于～个茶样筒中，供检验用..小包装茶取样.取样件数按照.地规定取样..取样步骤.包装前取样按照地规定取样..包装后取样在整批包装完成后地堆垛中，从不同堆放位置随机抽取规定地件数，逐件开启.从各件内不同位置处，取出～盒(听、袋).所取样品保留数盒(听、袋)，盛于密闭地容器中，供单个分别检验.其余部分现场拆封，倒出茶叶，混匀.再用分样器或四分法逐步缩分至约，作为平均样品，装于茶筒中，供检验用.注：袋泡茶地拆封混样工作，在检验室内进行..紧压茶取样.取样件数按照规定执行..取样步骤.砖茶、饼茶取样随机抽取规定地件数，逐件开启，从各件内不同位置处，取出～个(块).除供现场检查外，单重在以上地，留取个(块)；以下地，留取个(或块)，盛于密闭地容器中，供检验用..捆包地散茶取样从各件地上、中、下部采样，再用四分法或分样器缩分至所需数量..试样制备.紧压茶以外地各类茶：先用磨碎机将少量试样磨碎，弃去，再磨碎其余部分.如果水分含量太高，不能将样品磨碎到所规定地细度，必须将样品预先干燥(烘温不超过℃为宜).待试样冷却后，再进行磨碎.将磨碎样品转入预先干燥地容器中，并立即密封..紧压茶：在不同形状(砖、块、饼)地紧压茶表面，分别取不少于处地采样点，用台钻或电钻钻洞取样、混匀，按地规定制备试样.测定步骤.试液地制备称取(准确至)磨碎试样于锥形瓶中，加沸蒸馏水，立即移入沸水浴中，浸提*(每隔摇动一次).浸提完毕后立即趁热减压过滤**.滤液移入容量瓶()中，残渣用少量热蒸馏水洗涤～次，并将滤液滤入上述容量瓶中，冷却后用蒸馏水稀释至刻度. * 国际标准—中是加水后回流抽提，现改为沸水浴浸提.* * 国际标准—中是常压过滤，本标准采用减压过滤..测定准确吸取试液，注入容量瓶中，加缓冲液和％茚三酮溶液，在沸水浴中加热.待冷却后加水定容至.放置后，用比色杯，在处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度()..氨基酸定量标准曲线地制作分别吸取、、、、、氨基酸工作液于一组容量瓶中，各加水、茚三酮溶液和缓冲液，在沸水浴中加热，冷却后加水定容至，按地操作测定吸光度().将测得地吸光度与对应地茶氨酸或谷氨酸浓度绘制标准曲线.注：制作标准曲线时，所用蒸馏水，必须是二次蒸馏水..结果计算.计算方法和公式茶叶中游离氨基酸含量，以干态质量百分率表示，按下式计算：××游离氨基酸总量()＝×式中：——试液总量，；——测定用试样量，；——试样量，；——根据测定地吸光度从标准曲线上查得地茶氨酸地数；——试样干物质含量百分率，.如果符合允许差地要求，取两次测定地算术平均值作为结果..允许差同一样品进行两次测定，测定值之差，每试样不得超过..结果报告试验报告应包括下列内容：. 使用地方法；. 测定地结果(取小数点后一位)；. 本方法中未规定地或另加地操作；. 试样地名称和产地； . 试验日期，操作人员..来源中国国家标准：—。
实验20植物组织中游离氨基酸总量的测定
实验20植物组织中游离氨基酸总量的测定（茚三酮显色法）氨基酸是组成蛋白质的基本单位，也是蛋白质的分解产物。
植物根系吸收、同化的氮素主要以氨基酸和酰胺的形式进行运输。
所以，测定植物组织中不同时期、不同部位游离氨基酸的含量对于研究根系生理、氮素代谢有一定意义。
一、原理氨基酸与茚三酮共热时，能定量地生成二酮茚胺。
该产物显示蓝紫色，称为 Ruhemans 紫。
其吸收峰在 570 nm ，而且在一定范围内吸光度与氨基酸浓度成正比。
氨基酸与茚三酮的反应分两步进行，第一步：氨基酸被氧化形成 CO 2 、 NH 3 和醛，茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步：所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和一分子氨脱水缩合生成二酮茚–二酮茚胺（ Ruhemans 紫），反应式如下：在一定范围内，反应体系颜色的深浅与游离氨基的含量成正比，因此，可用分光光度法测定其含量。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料各种植物组织。
（二）试剂1. 水合茚三酮试剂：称取 0.6 g 再结晶的茚三酮置烧杯中，加入 15 mL 正丙醇，搅拌使其溶解。
再加入 30 mL 正丁醇及 60 mL 乙二醇，最后加入 9 mL pH5.4 的乙酸–乙酸钠缓冲液，混匀，贮于棕色瓶，置 4 ℃下保存备用， 10 d 内有效。
2. 乙酸–乙酸钠缓冲液（ pH 5.4 ）：称取乙酸钠 54.4 g 加入 100 mL 无氨蒸馏水，在电炉上加热至沸，使体积蒸发至 60 mL 左右。
冷却后转入 100 mL 容量瓶中加 30 mL 冰醋酸，再用无氨蒸馏水稀释至 100 mL 。
3. 标准氨基酸：称取80 ℃下烘干的亮氨酸 46.8 mg ，溶于少量 10 ％异丙醇中，用 10 ％异丙醇定容至 100 mL 。
取该溶液 5 mL ，用蒸馏水稀释至 50 mL ，即为含氨基氮 5 μ g/mL 的标准氨基酸溶液。
4. 0.1 ％抗坏血酸：称取 50 mg 抗坏血酸，溶于 50 mL 无氨蒸馏水中，随配随用。
游离氨基酸总量的测定[详实参考]
![游离氨基酸总量的测定[详实参考]](https://img.taocdn.com/s3/m/32a1deab7f1922791788e828.png)
植物体内游离氨基酸总量的测定方法一：一、原理游离氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。
二、仪器设备分光光度计；电子天平；容量瓶25ml或50ml 3个；漏斗（直径6厘米）3个、滤纸适量；20ml刻度试管 7支；移液管0.5ml 3支、5ml 1支；试管架；玻棒；吸耳球；剪刀；移液管架；橡皮筋、塑料薄膜（封试管口）；吸水纸；擦镜纸适量；电炉；水浴锅（含铁丝筐）。
三、试剂1. 3%茚三酮试剂称3g茚三酮用95%乙醇溶解定容到100ml容量瓶里，贮于棕色瓶中。
此试剂应放在冷凉处，不宜久放，使用期约10天。
2. 氰酸盐缓冲液（按以下方法配制）：（1）NaCN贮备液0.01mol/L（490mg/L）。
（2）醋酸缓冲液：称360g醋酸钠（含三分子结晶水）溶于约300ml无氨蒸馏水中，加66.67ml冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至1L。
取溶液（1）20ml，用溶液（2）定容到1L。
3. 标准氨基酸精确称取在80℃下烘干的亮氨酸13.1mg（或α-丙氨酸8.9mg）溶于10%的异丙醇中，并在100ml容量瓶中用10%异丙醇稀释至刻度，混匀，即为1mmol/L 的标准氨基酸贮备液，置冰箱中保存。
为了制备工作液，可取贮备液与等量无氨蒸馏水混合，此液浓度为0.5mmol/L，即1ml含氨基酸0.5μmol，或氨基氮7μg。
4. 95%乙醇；异丙醇（分析纯）。
四、操作步骤1. 标准曲线的制作取20ml刻度试管18支，按下表1加入各试剂。
加完试剂后混匀，在100℃水浴中加热12min（加热时封口），取出在冷水中迅速冷却，立即于每管中加入5ml 95%乙醇，塞好塞子，猛摇试管，使加热时形成的红色产物被空气中的氧所氧化而褪色，此时溶液呈蓝紫色。
于570nm 波长下测其光密度（以空白管为参比），以氨基酸浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出直线方程。
2. 样品提取选取有代表性的植物叶片（或其它组织），洗净擦干，剪碎混匀，迅速称取0.10~0.20g（视氨基酸含量多少而定），共称3份，分别加入20ml刻度试管中，再加蒸馏水10ml盖塞（或系上塑料薄膜），置沸水浴中20min以提取游离氨基酸，到时取出在自来水中冷却，把上清液滤入25ml 容量瓶中，之后再往试管中加5ml蒸馏水，置沸水浴上再加热10min，过滤并反复冲洗残渣，最后定容至刻度，摇匀。
茶 游离氨基酸的测定
茶游离氨基酸总量测定文件类别：作业指导书文件编号：撰写单位：版本: 第 1 版发行日期：机密等级: □机密□一般合计页数: 共 2 页核准审核初审制订会审名称茶游离氨基酸总量测定文件编号:1 原理氨基酸在pH8.0的条件下与茚三酮共热，形成紫色络合物，用分光光度法在特定的波长下测定其含量。
2 仪器和用具分析天平：感量0.0001g。
分光光度仪。
3 试剂和溶液3.1 pH8.0磷酸盐缓冲液：按《茶茶多酚测定》中3.2的规定，配制1/15M磷酸氢二钠（3.2.1）和1/15M磷酸二氢钾（3.2.2）溶液。
然后取1/15M的磷酸氢二钠溶液95ml和1/15M磷酸二氢钾溶液5ml，混匀。
3.2 2%茚三酮溶液：称取水合茚三酮（纯度不低于95%） 2g，加50ml水和80mg氯化亚锡（GB 638-78，分析纯），搅拌均匀。
分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至100ml。
3.3 茶氨酸或谷氨酸标准液：称取100mg茶氨酸或谷氨酸（纯度不低于99%）溶于100ml水中，作为母液。
准确吸取5ml母液，加水定容至50ml作为工作液（1ml含茶氨酸或谷氨酸0.1mg）。
4 操作方法4.1取样方法按“茶叶原料验收规范”（文件编号…………）要求进行取样。
4.2试液制备按《茶茶多酚测定》中4.2.1试液制备之规定，制备试液。
4.3 测定准确吸取试液（4.2）0.5ml，注入25ml容量瓶中，加0.5ml水，0.5mlpH 8.0缓冲液（3.1）和0.5ml 2%茚三酮溶液（3.2），在沸水浴中加热15min。
待冷却后加水定容至25ml。
放置10min后，用10mm比色杯，在570nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A）。
生效日期页次1/2 页序 A 表号:R-0110-002-1A 文件标准用纸名称 茶 游离氨基酸总量测定 文件编号:4.4氨基酸定量标准曲线的制作分别吸取0.0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml 氨基酸工作液（3.3）于一组25ml 容量瓶中，各加水至4ml 、茚三酮溶液（3.2）0.5ml 和缓冲液（3.1）2ml ，在沸水浴中加热15min ，冷却后加水定容至25ml ，按4.3的操作测定吸光度（A ）。
黄酒中游离氨基酸的测定
黄酒中游离氨基酸的测定
【实用版】
目录
1.游离氨基酸的概念和测定意义
2.黄酒中游离氨基酸的测定方法
3.游离氨基酸在黄酒中的应用
4.结论
正文
一、游离氨基酸的概念和测定意义
游离氨基酸是指以游离态存在的单个氨基酸分子，它不与任何其他分子结合，可被直接吸收利用。
在食品、饮料等物质中，游离氨基酸是重要的营养成分之一，对生物体的生长发育、免疫调节等方面具有重要作用。
因此，对游离氨基酸的测定在食品营养学、生物学等领域具有重要意义。
二、黄酒中游离氨基酸的测定方法
黄酒是中国传统的酒类之一，具有丰富的营养价值和独特的风味。
测定黄酒中游离氨基酸的方法有多种，如紫外分光光度法、高效液相色谱法等。
其中，高效液相色谱法是最常用的方法之一，它具有灵敏度高、分辨率好、结果准确等特点。
三、游离氨基酸在黄酒中的应用
黄酒中的游离氨基酸不仅是其营养成分的重要组成部分，还对黄酒的口感、风味等方面具有重要影响。
游离氨基酸可以增加黄酒的鲜味、甜味，提高其品质。
此外，游离氨基酸还可以作为黄酒中的抗菌剂、抗氧化剂等，对黄酒的保质期、稳定性等方面具有重要作用。
四、结论
综上所述，游离氨基酸的测定在黄酒生产、品质控制等方面具有重要意义。
通过测定黄酒中的游离氨基酸，可以了解其营养成分和品质，为黄酒的生产和消费提供科学依据。
植物中游离氨基酸的测定
植物中游离氨基酸的测定
植物中游离氨基酸的测定是检测植物中氨基酸含量的重要方法。
它对于评估植物营养价值，鉴定新品种以及研究植物体内生理功能具有十分重要的意义。
一般而言，植物中游离氨基酸测定分为三个步骤：样品前处理、含氮量测定和氨基酸分析。
样品前处理需要将植物样本进行固相萃取或者电解质萃取，以去除杂质；含氮量测定采用Kjeldahl法或者Dumas法；而氨基酸分析则包括HPLC-UV/MS、GC-MS、IR、MS/MS 等不同方法。
其中HPLC-UV/MS方法是常用的方法之一。
在使用HPLC-UV/MS 方法时，样品先通过回归装置进行净化、分离及回收，然后在HPLC端盘上使用循环优化的方式进行分析；最后通过UV/MS 技术对所得的产物
进行定量测定。
以上就是关于植物中游离氨基酸的测定的详情介绍，从上文可以看出对于正确地进行检测都必不可少地依赖于专业人士对样本处理、测试方法选取以及数字应用方式的正确使用。
只有采取正确的方法才能确保最终的测定结果的准确性，以便更好地利用植物的营养价值，获得更好的生产和使用效果。
绿豆芽中游离氨基酸的测定
绿豆芽中游离氨基酸的测定绿豆芽中游离氨基酸总量的测定一、实验目的：掌握茚三酮显色法测定氨基酸含量的方法。
二、实验原理：游离氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。
三、材料、仪器设备及试剂材料：绿豆芽仪器设备：722型分光光度计，分析天平，研钵，容量瓶，移液管，水浴锅，三角瓶，漏斗试剂:水合茚三酮试剂、乙酸-乙酸钠缓冲液、标准氨基酸、0.1%抗坏血酸、10%乙酸四、实验步骤 1.样品的制备用剪刀将绿豆芽剪碎、混匀，称取1g 放入研钵中加入5mL 10%乙酸，研磨匀浆后，用蒸馏水稀释至100mL 。
混匀，并用干滤纸过滤到三角瓶中备用。
2.标准曲线的制作取6支20ml 具塞刻度试管，下表操作试剂管号1 2 3 3 5 6 标准氨基酸/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 无氨蒸馏水/mL2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 水合茚三酮/mL3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 抗坏血酸/mL 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 每管含氮量/μg12345加完试剂后混匀，盖上大小合适的玻璃球，置沸水中加热15min ，取出后用冷水迅速冷却，并不时摇动，使加热时形成的红色被空气逐渐氧化而褪去，进而呈现蓝紫色时，用60%乙醇定容至20 ml 。
混匀后用1cm 光径比色皿在570 nm 波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
3.样品的测定吸取样品滤液1.0ml ，放入20mL 干燥试管中，加无氨蒸馏水1.0ml ，其他操作与制作标准曲线相同。
根据样品吸光度在标准曲线上查得含氮量。
四、结果计算按下式计算样品中氨基态氮的含量。
100V V C 100s T=W克样品中氨基态氮含量式中：C 为从标准曲线上查得的氨基态氮含量，/μg;V T 为样品稀释总体积，mL ；Vs 为测定时样品体积，mL ；W 为样品鲜重。
五、实验结论与误差分析六、思考题1.茚三酮与所有氨基酸的反应产物颜色都相同吗？为什么？2.抗坏血酸的作用是什么?。
茶游离氨基酸总量测定
茶游离氨基酸总量测定茶游离氨基酸总量测定Tea—Determination of free amino acids contentGB/T8314—2002代替GB/T8314—19871 范围本标准规定了对茶叶中游离氨基酸总量测定的原理、仪器和用具、试剂和溶液、操作方法及结果计算方法。
本标准适用于茶叶中游离氨基酸总量的测定。
2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。
本标准出版时，所示版本均为有效。
所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB/T8302—2002 茶取样GB/T8303—2002 茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定GB/T8312—2002 茶咖啡碱测定GB/T8313—2002 茶茶多酚测定3 定义本标准采用下列定义。
游离氨基酸 free amino acids茶叶水浸出物中呈游离状态存在的具有α-氨基的有机酸。
4 原理α-氨基酸在PH8.0的条件下与茚三酮共热，形成紫色络合物，用分光光度法在特定的波长下测定其含量。
5 仪器和用具实验室常规仪器及下列各项；5．1 分析天平：感量0.001g.5．2 分光光度仪。
6 试剂和溶液所用试剂应为分析纯（AR），水为蒸馏水。
6．1 PH8.0磷酸盐缓冲液：按GB/T8313—2002中6.2的规定，配制1/15mol/L磷酸氢二钠(6.2.1)和1/15mol/L磷酸二氢钾(6.2.2)溶液。
然后取1/15mol/L磷酸氢二钠溶液95mL和1/15mol/L磷酸二氢钾溶液5mL，混匀。
6．2 2%茚三酮溶液，称取水合茚三酮（纯度不低于99%）2g，加50mL水和80mg氯化亚锡(SnCl2·2H2O)搅拌均匀。
分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至100mL。
6．3 茶氨酸或谷氨酸标准液：称取100mg茶氨酸或谷氨酸（纯度不低于99%）溶于100mL水中，作为母液。
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总游离氨基酸测定（完整版）
实验原理：游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用，产生蓝紫色的化合物二酮茚－二酮茚胺，产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在570nm下测其含量。
因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应，在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉.
仪器与用具：100ml容量瓶；漏斗；三角瓶研钵；刻度吸管：0.1ml×1、1ml×2、2ml×2、5ml×1;沸水浴；具塞刻度试管20ml×10;分光光度计.
一、试剂
1.水合茚三铜：称重结晶的茚三铜0.6g,装入烧杯，加入正丙醇15ml，使其溶
解加入正丁醇30 ml、乙二醇60 ml、乙酸-乙酸钠缓冲液（pH=5.4）9 ml,混匀，棕色瓶冰箱保存，10天内有效。
2.乙酸-乙酸钠缓冲液（pH5.4）：称取化学纯乙酸钠54.4g，加入无氨蒸馏水
100 ml，电炉加热至沸，使其体积减半，冷却后加冰乙酸30 ml，加蒸馏水定容至100 ml。
3.氨基酸标准溶液：精确称取80℃烘干至恒重的亮氨酸0.0234g溶于10％异
丙醇并定容至50ml。
取此液5ml蒸馏水稀释到50ml，即为5μg/ml氨基酸标液。
4.0.1%抗坏血酸：称取0.050g抗坏血酸，溶于50 ml蒸馏水中，即配即用。
5.10％乙酸
二、标准曲线制备
加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。
以吸光
度为纵坐标，氨基氮ug数为横坐标，绘标准曲线
三、实验步骤：
1.烟末0.5g于研钵中加入5 ml10%乙酸，研磨匀浆后用蒸馏水定容
100 ml，用滤纸过滤到三角瓶中备用。
2.1ml滤液加入到20ml 干燥试管中，加1 ml蒸馏水，水合茚三铜
3ml, 0.1%抗坏血酸0.1ml, 加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。
四. 计算：
求三重复的平均值，由标准曲线得知各样的氨基酸ug数，代入公式计算。
氨基酸含量（mg/g干样）=｛氨基酸ug数×（提取液总体积/测定体积）｝/（样品g数×1000）。