生物制药技术复习题71284

名词解释

1、生物技术制药：是指利用生物系统或通过生物反应过程生产药物的技术。

2、生物药物：是指以生物资源为原料或以生物技术为手段开发生产的用作疾病的预防、诊断和治疗的医药品。

2.5、限制酶：及其特性限制性核酸内切酶，是一类专一性很强的核酸内切酶，专一地识别和作用于DNA分子上特定的核苷酸序列，切断DNA双链。

3、连接酶：能将两段DNA拼接起来的酶叫DNA连接酶。这类酶的发现和分离纯化，使两个DNA片段在体外连接形成重组DNA分子成为可能。

4、限制酶星活性：在标准条件下，每种限制酶都有严格的识别序列。在非标准条件下，会导致限制酶识别序列的特异性发生改变，在DNA内产生附加切割，称限制酶的第2活性或星活性。

5、基因载体：在细胞内具有能进行自我复制的独立DNA分子作为外源DNA片段的运载体，简称基因载体，又称分子克隆载体或无性繁殖载体。

6、粘粒：是一种有λ噬菌体粘性末端的杂种质粒，由λDNA的cos区段与质粒DNA重组构建而成。

7、基因文库：将供体生物的DNA用限制酶切成许多片段，在连接酶的作用下分别与克隆载体进行体外重组，这种含有供体生物全部不同基因的重组克隆载体的总体称供体生物的基因文库。

8、cDNA基因文库：以供体生物的总mRNA为模板，在反转录酶作用下合成核苷酸序列互补的DNA（cDNA），将全部cDNA分别与克隆载体进行体外重组，这些含有供体生物全部不同基因的重组克隆载体的总体称供体生物的cDNA基因文库。

9、PCR技术：聚合酶链式反应（Polymerose chain reaction）技术，简称PCR技术，是一种用于在体外扩增位于两段已知序列之间的DNA区段的分子生物学技术。应用该技术可在很短的时间内得到数百万个特异DNA序列的拷贝。

10、转化：将携带目的基因的重组质粒导入受体细胞的过程称为转化。

11、转染：将重组噬菌体DNA直接导入受体细胞的过程称为转染。

12、感染：将重组噬菌体DNA包装到噬菌体头部成为有感染力的噬菌体颗粒，再导入受体细胞的过程。

13、多克隆位点：基因载体上由多种限制酶单一识别序列组成的序列，是插入外源目的基因DNA片段的位点。

14、高丰度mRNA：从某些特定型分化细胞分离的细胞质中，编码某特种蛋白质的目的mRNA占总mRNA的50~90%。称为高丰度mRNA。

15、抗体：指能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。

16、单克隆抗体：采用B淋巴细胞杂交瘤技术，由纯一的单克隆细胞系产生的，针对一个抗原决定簇的，结构和特异性完全相同的高纯度抗体称单克隆抗体。

17、第二抗体：能与抗原和抗体发生免疫反应后形成的复合物进行特异结合的抗体，又称抗抗体。

18、克隆化：分离获得单细胞并将单细胞通过无性繁殖而获得细胞集团的整个过程。这些细胞集团中的每个细胞的生物学特性和功能是完全相同的。

19、细胞分化：生物细胞随功能不同所产生的形态变化称分化。

20、悬浮培养：利用液体培养基培养生物细胞，使细胞悬浮于培养基中生长增殖的过程。

21、贴壁培养：使细胞贴附在某种基质上生长繁殖的培养方法。

22、愈伤组织培养：从植物各种器官的外植体增殖而形成愈伤组织的培养。

23、外植体：指用于植物组织或细胞培养的器官或组织，如根、茎、叶、花、果、胚乳、胚珠、花粉等。

24、继代培养：由最初的外植体上切下的新增殖的组织或细胞，培养一代称为“第一代培养”，连续多代的培养即为“继代培养”。

25、植物生长调节剂：指对植物的生长发育有调节作用的物质，既包括人工合成的，也包括一些天然的化合物以及植物激素。

26、植物激素：仅指植物天然产生的对植物的生长发育有调节作用的物质。

简答题

1、限制酶有哪些特性？

（1）不同限制酶能专一地识别不同的特异核苷酸序列（核苷酸序列不同，序列大小不同）。

（2）各种限制酶的识别序列都具有回文结构。（3）各种限制酶的切割类型是各式各样的，切后形成各种粘性或平整末端。（4）在标准条件下，每种限制酶都有严格的识别序列。在非标准条件下，会导致限制酶识别序列的特异性发生改变，在DNA内产生附加切割，称限制酶的第2活性或星活性。

2、Taq DNA聚合酶的用途？

该酶可用于对DNA进行测序，但主要用于PCR（聚合酶链式反应），对DNA分子的特定序列（目的基因）进行体外扩增。

3、基因载体有哪些特性？

①要有复制子（Replicom）功能，且复制起始区中没有限制酶的酶切位点。

②要含有强启动子，要有能促进外源DNA高水平表达的调控区。

③要有多种限制酶的单一切点，以适用于多种限制酶产生的DNA片段的插入。

④具有两种以上易被检测的选择性遗传标记，作为对重组与非重组转化体的选择标记。

⑤载体DNA的分子量要尽可能小，以利于容纳较长区段的外源DNA片段。

⑥应属于松弛型复制，能在氯霉素存在下扩增其拷贝数。

⑦从安全防治考虑，载体应为非传递性，有较小的宿主范围，不为传递性载体所诱导。

4、如何将天然的原始载体改造成理想的基因载体？

①引入强启动子。②引入选择性标记基因。③切除大部分多余序列段，以提高容纳外源DNA片段的能力。

④引入由多种限制酶单一识别序列组成的多克隆位点。⑤引入多种用途的辅助序列。

5、简述cDNA基因文库构建的基本步骤。

①从供体生物细胞或组织中提取纯化得总RNA。

②从总RNA中分离纯化出总mRNA。

③以总mRNA 为模板反转录合成总cDNA。

④总cDNA分别克隆到载体上—构建DNA重组体。

⑤cDNA文库的鉴定。

⑥含目的基因cDNA重组体的筛选

6、PCR技术的基本程序

①变性：首先使双链DNA在反应液中经热变性（94~95℃）而分开成单链（或使反转录合成的cDNA:RNA杂交链分开成单链）。

②退火：然后降温至40~60℃，在低温下与两个引物进行退火，使引物与单链DNA配对结合。

③延伸：再在中温72℃下利用Taq DNA聚合酶的聚合活性和热稳定性进行聚合（延伸）反应。

7、简述RT-PCR技术合成目的基因的基本步骤。

①从供体生物特定分化型组织或细胞中提取纯化总RNA，其中目的mRNA为高丰度mRNA。

②以Oligo(dT)为引物，以总RNA中的总mRNA为模板，在反转录酶作用下合成互补的总cDNA。

③变性：升温至94~95℃加热5min，使总mRNA ﹕cDNA的杂交链由于热变性而分开成单链。

④退火：降温至40~60℃，加入“上游”寡核苷酸引物和“下游”寡核苷酸引物，进行退火，使引物与单链mRNA 和cDNA结合。

引物应是与目的基因3‵端互补的核苷酸序列