大豆脲酶活性的两种不同测定方法的研究
大豆制品脲酶活性测定
（2）仪器与器皿
酸度计（pH计）：具有玻璃电极、 甘汞电极
恒温水浴：须能保持温度30±0.5℃ 试管：20×150mm并配有橡皮塞
（50mL）
（3）试剂
磷酸缓冲液0.05mol/L：称取 3.403gKH2PO4溶于100mL蒸馏水中。 再称取4.355gK2HPO4溶于100mL蒸馏 水中，合并两者并配成1000mL，用 强酸或强碱调节pH=7.0。
此时溶液应具有明亮的琥珀色； （过 段时间溶液会变为深橘红色，
可滴入稀硫酸溶液搅拌之，直至溶 液再次变为琥珀色）
（3）方法：
将一满匙样品放入表面皿中， 摊平，将以调好的尿素-酚红试剂滴 入表面皿中的样品上，直至完全浸 湿，停留5min，观察样品的颜色反 应。
如果红斑面积多于20%，则认为 该样品脲酶活性超标，为不合格产 品。
三、测定原理： 脲酶活性测定实际上是在一定条件
下(pH=7.0，T=30℃)，测定每克试 样、每分钟分解尿素所产生的氨的 量。
脲酶 NH2CONH2→→2NH3↑+CO2
•
四、测定方法： （一）定性法： 1、酚红法 （1）原理：
酚红指示剂在pH 6.4-8.2时由黄变 红，大豆制品中所含的脲酶pH=7.0， T=30℃时可将尿素水解产生氨，释 放的氨可使酚红指示剂变红，根据 变红的时间长短来判断脲酶活性的 大小。
空白试验：不加尿素，其他同上。
品质判定：如果溶液为明显的粉红 色，则认为该大豆制品脲酶活性超 标，为不合格产品。
•0-1min变红，活性非常强（＞ 1.0）；
•1-2min变红，活性大概0.5-1.0； • 2-5min变红，活性大概0.3-0.5。
（4）注意事项： • 1.粉碎样品时，不应产生大量热，
脲酶活性的测定
大豆制品中脲酶活性的测定定性法：酚红法一、原理：酚红指示剂在pH 6.4-8.2时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶在pH=7.0，T=30℃时可将尿素水解产生氨，释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红的时间长短来判断脲酶活性的大小。
二、仪器和试剂：粉碎机：粉碎时不产生强烈发热；分析天平；25ml纳式比色管；恒温水浴锅；0.1%酚红指示剂：0.1g苯酚红溶于100ml 95%乙醇溶液；结晶尿素；三、方法：将试样粉碎，准确称取0.05±0.001g试样于25ml纳式比色管，加入0.2g结晶尿素及5滴酚红指示剂，加入25ml蒸馏水，摇动10s，立即置于30±0.5℃水浴锅中，开始计时，观察溶液颜色变化， 5min 后，取出比色管，摇匀，观察溶液颜色。
空白试验：不加尿素，其他同上。
品质判定：如果溶液为明显的粉红色，则认为该大豆制品脲酶活性超标，为不合格产品。
•0-1min变红，活性非常强（＞1.0）；•1-2min变红，活性大概0.5-1.0；•2-5min变红，活性大概0.3-0.5。
四、注意事项：1.粉碎样品时，不应产生大量热，否则会影响结果判定；2.称量样品时，一定要将样品混合均匀，否则会造成试验误差；3.试样和空白试验同时操作，过程要迅速，防止时间影响。
尿素-酚红法一、原理：酚红指示剂在pH 6.4-8.2时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶可将尿素水解产生氨，释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红样品占所有样品的比例来判断脲酶活性的大小。
二、仪器和试剂：表面皿；0.2N氢氧化钠溶液：称取0.8g氢氧化钠溶于100ml蒸馏水；1.0N硫酸溶液：移取7.0ml浓硫酸溶于500ml蒸馏水；尿素-酚红试剂：用500ml烧杯将0.8g酚红溶于20ml 0.2N氢氧化钠溶液，用蒸馏水稀释至约300ml，加入60g尿素，并溶解之，转移至2L容量瓶，冲洗烧杯数次,加蒸馏水至约1.5L，加入9.4ml 1.0N 硫酸溶液，用蒸馏水定容至2L；此时溶液应具有明亮的琥珀色；（过段时间溶液会变为深橘红色，可滴入稀硫酸溶液搅拌之，直至溶液再次变为琥珀色）三、方法：将一满匙样品放入表面皿中，摊平，将以调好的尿素-酚红试剂滴入表面皿中的样品上，直至完全浸湿，停留5min，观察样品的颜色反应。
脲酶快速检测方法(1)
大豆制品中尿素酶活性的测定方法
方法一尿素酶活性快速测定法——酚红法（粗略法）
1. 原理：尿素酶 +
尿素 氨气（用酚红作指示剂） 2.试剂
（1） 0.1N 氧化钠：称0.4g 氢氧化钠溶于100ml 水中。
（2） 0.1N 硫酸：将1.4ml 浓硫酸溶于l000ml 水中（先加水后加入硫酸） 3.尿素—酚红溶液：
0.14g 酚红溶于35ml 水中+7ml0.1N 氢氧化钠
混合 0.1N 硫酸滴定 琥珀色 21g 尿素溶于300ml 水中
方法：将一匙粉碎过的黄豆粕放入小玻皿中，将已调好的尿素——酚红溶液加入小玻皿中的豆粕上，直至完全锦湿，停留5min ，观察豆粕的红色反应。
稀硫酸0.2N
尿素—酚红试剂：将1.2g 酚红溶解于30ml0.2N 的氢氧化钠中，用蒸馏水将之稀释至约300ml,加入90g 尿素（分析纯）并溶解之，用蒸馏水稀释至2L ，加入14ml1.0N 硫酸或70ml0.2N 的硫酸；用蒸馏水稀释至最后体积3L ；溶液应具有明亮的琥珀色。
（过段时间溶液变为深桔红色，可滴入稀硫酸溶液搅拌之，直至溶液再次成为琥珀色。
方法：将一匙粉碎过的黄豆粕放入小玻皿中，将已调好的尿素——酚红溶液加入小玻皿中的豆粕上，直至完全锦湿，停留5min ，观察豆粕的红色反应。
溶液保质期最好3个月，最好一个月内用完。
大豆制品中尿素酶活性测定方法_1
大豆制品中尿素酶活性测定方法中华人民共和国专业标准蛋白酶活力测定法ZBX66030-87Measurementofproteinaseactivity本方法适用于酿造酱油时在制品菌种、成曲的蛋白酶活力测定。
1福林法试剂及溶液:以下试剂都为分析纯福林试剂(Folin试剂):于2000mL磨口回流装置内,加入钨酸钠(Na2WO4·2H2O)100g,钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)25g,蒸馏水700mL,85%磷酸50mL,浓盐酸100mL,文火回流10h。
取去冷凝器,加入硫酸锂(Li2SO4)50g,蒸馏水50mL,混匀,加入几滴液体溴,再煮沸15min,以驱逐残溴及除去颜色,溶液应呈黄色而非绿色。
若溶液仍有绿色,需要再加几滴溴液,再煮沸除去之。
冷却后,定容至1000mL,用细菌漏斗(No4～5)过滤,置于棕色瓶中保存。
此溶液使用时加2倍蒸馏水稀释。
即成已稀释的福林试剂。
碳酸钠溶液:称取无水碳酸钠(Na2CO3),定容至1000mL。
三氯乙酸(TCA)溶液:称取三氯乙酸(CCL3COOH),定容至1000mL。
磷酸盐缓冲液:称取磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O),定容至1000mL,即成溶液(A液)。
称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O),定容至1000mL,即成溶液(B液)。
取A液28mL和B液72mL,再用蒸馏水稀释1倍,即成的磷酸盐缓冲液。
2%酪蛋白溶液:准确称取干酪素2g,称准至,加入氢氧化钠10mL,在水浴中加热使溶解(必要时用小火加热煮沸),然后用磷酸盐缓冲液定容至100mL即成。
配制后应及时使用或放入冰箱内保存,否则极易繁殖细菌,引起变质。
100μg/mL酪氨酸溶液:精确称取在105℃烘箱中烘至恒重的酪氨酸,逐步加入6mL1N盐酸使溶解,用盐酸定容至100mL,其浓度为1000μg/mL,再吸取此液10mL,以盐酸定容至100mL,即配成100μg/mL的酪氨酸溶液。
不同方法测定大豆脲酶活性的比较研究
不同方法测定大豆脲酶活性的比较研究杨奇慧舒璐钟剑锋摘要：用滴定法和增值法测定大豆粉在85℃和140℃下分别热处理0、45、90、135、180min的脲酶活性，并用0.2%KOH溶解法测定大豆粉在不同热处理下的蛋白质溶解度。
结果表明：在85℃条件下，处理0～180min 大豆粉的脲酶活性和蛋白质溶解度随着时间延长无明显变化；而在140℃条件下，大豆粉的脲酶活性和蛋白质溶解度随着处理时间的延长显著降低。
通过测定结果可见，同一样品用滴定法和增值法测得的脲酶活性在数值上不相等，不能互用，但蛋白质溶解度更能反映大豆粉受热过度的程度。
关键词：大豆粉；脲酶活性；蛋白质溶解度；pH增值法；滴定法众所周知，大豆含有较丰富的蛋白质、脂肪、碳水化合物等，是饲料生产中主要的植物蛋白质源之一，具有较高营养价值。
但是，大豆中含有多种抗营养因子，如蛋白酶抑制因子、植物凝集素、胃肠胀气因子、抗维生素因子、抗原蛋白等，这些抗营养因子阻碍营养物质在动物体内的利用，尤其是胰蛋白酶抑制因子的存在不仅会降低饲料营养成分的消化率和适口性，而且也会影响动物对蛋白质的消化吸收，对动物生长发育也产生不良的影响。
但是，胰蛋白酶抑制因子的测定较困难，而豆粕中脲酶活性与胰蛋白酶抑制因子活性呈正相关，所以通常通过测定脲酶活性来反映蛋白酶抑制因子的活性。
目前，脲酶活性的测定方法有滴定法（国标法）、pH增值法等，目前，对脲酶活性不同测定方法差异性的研究较少，本文拟对两种方法进行研究，以比较不同方法对测定结果的影响，为实际生产和理论研究提供依据和参考。
1 材料和方法1.1 实验材料大豆粉：将生大豆粉碎，过60目标准筛。
在85℃和140℃下分别处理0、45、90、135和180min冷却后装入封口袋保存备用。
1.2 化学试剂本实验所用试剂均为分析纯（AR），实验用水为蒸馏水。
1.3 测定方法1.3.1 pH增值法实验原理：将研细的试样与尿素缓冲液混合，尿素在尿素酶作用下水解产生氨，使溶液pH 值改变，改变的程度与脲酶活性大小相关，因此可以用其与空白溶液的差值表示脲酶活性高低，单位为△pH值。
脲酶活性
随着膨化技术在饲料工业中推广普及，越来越多的饲料生产商在配方中使用膨化大豆粉，与其它蛋白资源一样，大豆的适度熟化非常重要，熟化程度低会含抗胰蛋白酶等营养抑制因子，熟化度过高又会导致氨基酸利用率低。
判断膨化大豆粉是否合格的主要指标是脲酶活性。
脲酶活性是指：在30±5℃和PH值等于7的条件下，每分钟每克膨化大豆分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。
脲酶本身无营养意义，但它与抗胰蛋白酶的含量接近，并且遇热变性失活的程度与抗胰蛋白酶相似，因此，尿酶活性用来作为膨化大豆加热是否合适的间接估测指标。
脲酶活性没有负值，最低为0。
在我国现行的国标推荐值为0.3，在美国一般认为以不超过0.2为宜，并且针对日粮中有尿素的反刍动物而言不得超过0.12，当然对于家禽和猪0.3或稍高都可以接受。
国内很多大企业一般均采用0.2。
实验室定量测定脲酶活性的方法较复杂，有滴定法和pH增值法两种，已有研究表明两者对同一样品测得的数值也不相等。
目前国内绝大部分企业都采用快速而简单的简易判定方法定性地估测脲酶活性，一般来说，主要有如下两种方法。
一.液态法1.原理：大豆制品中的脲酶可使尿素分解成氨，会使酚红指示剂改变颜色。
2.试剂2.1尿素:GB696，分析纯。
2.2酚红指示剂2.2.1称取0.1g酚红，加1.43mL0.1mol/L氢氧化钠溶液，在研钵中研磨以促溶解；2.2.2转移至250mL定量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀备用。
3.操作方法3.1取0.2g粉末样品，置于25mL比色管中。
3.2加0.02g尿素，加酚红指示剂2滴，再加水20mL，充分摇匀15s。
3.3记录粉红色出现时间，并根据时间判断尿酶活性，颜色出现时间应少于15min。
颜色出现时间脲酶活性1min 极强1～5min 强5～15min 稍有15min 无同时作空白对照试验。
样品空白(不加尿素)及试剂空白(不加样品)，只有上述空白正常时，即酚红指示剂不改变颜色，试验结果才是可靠的。
大豆制品脲酶活性测定解读
样品粉碎：至少60%通过400微米 试验筛。 （4）操作步骤 准确称取0.400±0.00lg样品2份， 分别置于2支试管中。一支试管加入 20mL磷酸缓冲液，作为空白试验（A 管），另一支加入20mL尿素缓冲液 （B管）。
盖塞混匀，在30℃恒温水浴中准 确保持30min。在此期间，每隔5min 摇匀一次。取出立即在流水中冷却， 5min内测定溶液pH值。
（4）注意事项： • 1.对于样品较粗、具有大块状的样品， 最好将其稍微粉碎，亦不可太细， 否则不容易观察； • 2.样品一定要铺平，容易观察； • 3.溶液保质期为3个月，最好1个月内 用完； • 4.此方法容易受颗粒度影响。
（二）定量法 1、 pH增值法 （1）原理： 脲酶水解尿素产生氨，使溶液的 pH值升高，通过测定样品溶液的pH 值和空白的pH值之差来计算脲酶的 活性。脲酶活性定义为：在30℃和 pH=7的条件下，每分钟每克大豆制 品分解尿素后所释放的氨态氮的毫 升数。
高温、高湿、高压，粒度小，时间 长脲酶活性低。但是，加工过度， 一些氨基酸会被豆制品质量较差。
三、测定原理： 脲酶活性测定实际上是在一定条件 下(pH=7.0，T=30℃)，测定每克试 样、每分钟分解尿素所产生的氨的 量。
脲酶 NH2CONH2→→2NH3↑+CO2
（5）计算 UA=pH(B管)-pH(A管)
2、滴定法 （1）原理： 将粉碎的大豆制品与中性尿素缓 冲溶液混合，在30℃保持30min后， 尿素酶催化尿素水解产生氨，用过 量的盐酸溶液中和氨，再用氢氧化 钠标准溶液回滴。
（2）脲酶活性定义 在30℃和pH＝7的条件下，每分 钟每克大豆制品分解尿素后，所释 放的氨态氮的毫克数。
（3）方法： 粉碎→称取0.05±0.001g→放入试 管→加入尿素0.2g、指示剂5滴→加 蒸馏水25mL→摇动10s→立即置于 30±0.5℃水浴锅→计时观察溶液变 红时间→5 min后取出试管，摇匀继 续观察
脲酶定性的实验
脲酶定性的实验随着膨化技术在饲料工业中推广普及,越来越多的饲料生产商在配方中使用膨化大豆粉,与其它蛋白资源一样,大豆的适度熟化非常重要,熟化程度低会含抗胰蛋白酶等营养抑制因子,熟化度过高又会导致氨基酸利用率低.判断膨化大豆粉是否合格的主要指标是脲酶活性.脲酶活性是指：在30±5℃和PH值等于7的条件下,每分钟每克膨化大豆分解尿素所释放的氨态氮的毫克数.脲酶本身无营养意义,但它与抗胰蛋白酶的含量接近,并且遇热变性失活的程度与抗胰蛋白酶相似,因此,尿酶活性用来作为膨化大豆加热是否合适的间接估测指标.脲酶活性没有负值,最低为0.在我国现行的国标推荐值为0.3,在美国一般认为以不超过0.2为宜,并且针对日粮中有尿素的反刍动物而言不得超过0.12,当然对于家禽和猪0.3或稍高都可以接受.国内很多大企业一般均采用0.2.实验室定量测定脲酶活性的方法较复杂,有滴定法和pH增值法两种,已有研究表明两者对同一样品测得的数值也不相等.目前国内绝大部分企业都采用快速而简单的简易判定方法定性地估测脲酶活性,一般来说,主要有如下两种方法.一.液态法1.原理：大豆制品中的脲酶可使尿素分解成氨,会使酚红指示剂改变颜色.2.试剂2.1尿素:GB696,分析纯.2.2酚红指示剂2.2.1称取0.1g酚红,加1.43mL0.1mol/L氢氧化钠溶液,在研钵中研磨以促溶解；2.2.2转移至250mL定量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀备用.3.操作方法3.1取0.2g粉末样品,置于25mL比色管中.3.2加0.02g尿素,加酚红指示剂2滴,再加水20mL,充分摇匀15s.3.3记录粉红色出现时间,并根据时间判断尿酶活性,颜色出现时间应少于15min. 颜色出现时间脲酶活性1min 极强1～5min 强5～15min 稍有15min 无同时作空白对照试验.样品空白(不加尿素)及试剂空白(不加样品),只有上述空白正常时,即酚红指示剂不改变颜色,试验结果才是可靠的.一般企业认为7、8分钟变色较为合适.二、半固态法1.原理：大豆制品中的脲酶可使尿素分解成氨,会使酚红指示剂改变颜色.2.试剂2.1稀硫酸（H2SO4）0.2N.2.2尿素一酚红试剂2.2.1将1.2克酚红溶解于30ml0.2N的NaOH中；2.2.2用蒸馏水将之稀释至约300mL；2.2.3加入90g尿素（分析纯）并溶解之；2.2.4用蒸馏水稀释至2L；2.2.5加入14mL 1.0N的H2SO4或70mL o.2N的H2SO4；2.2.6用蒸馏水稀释至最后体积3L；2.2.7溶液应具明亮的琥珀色.3.操作方法3.1在一个150ml的烧杯中倒入少量试剂,注意溶液必须呈明亮的琥珀色.若溶液已转变为深桔红色,滴人稀硫酸溶液并搅拌之,直至溶液再度呈琥珀色.3.2量一匙粉末样品,放置于培养皿中.3.在样品上加入两匙试剂,轻轻搅拌,将样品平铺于培养皿中.若仍有干样品斑点,则再加入试剂,直至将样品浸湿.4.放置5分钟后观察：a. 没有任何红点出现：再任其放置25分钟,若仍无红点出现,说明大豆粉过熟.b. 有少量红点：少量尿素酶活性,可用.c. 样品表面约有25％为红点覆盖：少量尿素酶活性,可用.d. 豆饼表面约有50％为红点覆盖：尿素酶活性较高,不可以使用.e. 豆饼表面的75％－100％为红点覆盖：尿素酶活性很高,样品过生,不能使用. 以上两种简易脲酶活性估测方法在国内各饲料厂被广泛采用,尤其是后者在膨化大豆粉生产的在线检测上很普遍.尽管这两种方法原理一样,但是,因其操作过程差异,所以对膨化大豆粉品质的反映内容也不尽相同.三、液态法和半固态法之比较首先需要说明的是,这两种脲酶活性快速检测方法没有行业约定俗成的名称,笔者接触过的企业均只采用其中的一种方法,对前者可以称之为“试管法”,后者称之为“表面皿法”,根据其实施的过程及样品的状态,笔者将其区分为“液态法”和“半固态法”.从实施方法来看,液态法是过程检测,从开始一直到规定时间段结束,而半固态法属于断点检测,是5分钟后看结果；液态法通过控制各个体合格,总体自然合格,而半固态法要求的是总体符合统计学上的合格,即允许部分个体不合格.简单地说,液态法要求每一个微粒的熟化程度均要满足5分钟以内不变色,如果一个不合格,整个批次为不合格；而半固态法允许部分微粒在5分钟内变色,部分不合格,总体可以是合格的.从这点上来说,液态法对膨化大豆粉的品质要求更高,控制更严格,不仅要求熟化,而且要均匀熟化.举例说明,如果在熟化完全的大豆粉样品中掺入微量（可以是一粒）生大豆粉,液态法会立即变色从而判定为不合格,而半固态法只是增加了一个变色点,总体上仍是合格的.从上可以看出,这两种检测方法对膨化大豆粉品质的反映内容是不一样的.半固态法反映的是产品符合统计学上的合格,而液态法反映的是完全合格.这两种不同检测方法对膨化设备的要求也是有差别的,液态法要求设备能均匀熟化,而半固态法允许产品出现部分不合格,只要总体上符合就可以,对膨化设备的要求自然要低. 可能会有人疑问,膨化大豆粉出来的不都应该是均匀一致的吗?其实不然,物料在膨化机内受到湿、热、机械剪切的共同作用从而熟化,机械剪切对膨化大豆粉所起的作用大约能占三成多,如果结构设计上缺陷或部件磨损,就会导致熟化不均匀.目前湿法膨化大豆粉的出料温度大都在135度左右（对家禽和猪要求可能低点）,六年前,笔者曾遇到过膨化大豆粉出料温度在170度,用液态法检测仍不合格,出来的料有熟的,有褐变的,还有少许夹生的,如果用半固态法检测,估计就合格了.次年,一膨化厂使用某企业膨化机生产膨化大豆粉,因不熟被退货六十吨,根据大部分企业采用半固态法检测的情况,将其以一定比例掺入熟化料中,最终符合统计学上的合格.上述事件,大概就是这两种不同测定方法的实践意义吧.脲酶urease（水解酶）：脲酶试验原理：存在于大多数细菌、真菌和高等植物里.它是一种酰胺酶、能酶促有机物质分子中酶键的水解.脲酶的作用是极为专性的,它仅能水解尿素,水解的最终产物是氨和碳酸.土壤脲酶活性,与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关.根际土壤脲酶活性较高,中性土壤脲酶活性大于碱性土壤.人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况.土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量,也可以通过测定未水解的尿素量来求得.本方法是测定生成的氨量.试剂：1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素,用水溶至100ml.3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184克柠檬酸和147.5克氢氧化钾溶于蒸馏水.将两溶液合并,用1mol/LNaOH将PH调至6.7,用水稀释至1000毫升.4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5克苯酚溶于少量乙醇,加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮,用乙醇稀释至100毫升（A）,存于冰箱中；27克NaOH溶于100毫升水（B）.将AB溶液保存在冰箱中.使用前将2溶液各20毫升混合,用蒸馏水稀释至100毫升.5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂,至活性氯的浓度为0.9%,溶液稳定.6）氮的标准溶液：a 精确称取0.4717克硫酸铵溶于水并稀释至1000ml,得到1ml 含有0.1mg氮的标准液标准曲线绘制：吸取配置好的氮溶液10ml,定容至100ml,即稀释了10倍,吸取1,3,5,7,9,11,13ml移至50ml容量瓶,加水至20ml,再加入4ml苯酚钠,仔细混合,加入3ml次氯酸钠,充分摇荡,放置20分钟,用水稀释至刻度.将着色液在紫外分光光度计上于578nm处进行比色测定,以标准溶液浓度为横坐标,以光密度值为纵坐标绘制曲线图.取新鲜土壤7份,每份30g,装于棕色广口瓶中,先将1,3－二氯丙烯溶于丙酮（定量）,6份分别加入不同浓度均为1.5ml的1,3－二氯丙烯,使之在土壤中的浓度分别为1、10、50、100、200、500µg/g,另1份相应加入1.5ml的丙酮作为对照,然后调节土壤的含水量至最大田间持水量的60%（记录此时重量,以便补充水分）.放置于25℃恒温培养箱,培养后第0d、1d,5d,10d（前10d密封,后来测定的敞口）、20d,30d,40d,50d分别取土样检测脲酶的活性.取样前,反复旋转广口瓶,混匀土样,一个处理随机取3个重复.1) 称取5g过1mm筛的风干土样于100ml容量瓶中.2) 向容量瓶中加入1ml甲苯（以能全部使土样湿润为度）并放置15分钟3) 之后加入10ml 10％尿素溶液和20ml柠檬酸缓冲液（PH6.7）,并仔细混合4) 将容量瓶放入37摄氏度恒温箱中,培养24h5) 培养结束后,用热至38摄氏度水稀释至刻度,仔细摇荡,并将悬液用致密滤纸过滤于三角瓶中.6) 显色：吸取3ml滤液于50ml容量瓶中,加入10ml蒸馏水,充分震荡,然后加入4ml苯酚钠,仔细混合,再加入3ml次氯酸钠,充分摇荡,放置20分钟,用水稀释至刻度,溶液呈现（青定）酚的蓝色.7) 1h内在（（青定）酚的蓝色在1h内保持稳定）在分光光度计上用1cm液槽,于578nm处将显色液进行比色测定.8) 无土对照：不加土样,其他操作与样品实验相同.以检验试剂纯度,整个实验设置一个对照9)无基质对照：以等体积的水代替基质,其他操作与样品实验相同.每个土样都设此对照.结果计算：土壤脲酶活性以24小时后100g土壤中NH3－N的毫克数表示.M＝（X样品－X无土－X无基质）*100*10式中：M－土壤脲酶活性值X样品――样品实验的光密度值在标准曲线上对应的NH3－N毫克数X无土――无土对照实验中的光密度值在标准曲线上对应的NH3－N毫克数X无基质――无基质对照实验中的光密度值在标准曲线上对应的NH3－N毫克数100 ――样品定容的体积与测定时吸取量的比值10 ――酶活性单位的土重与样品土重之比值注意事项：当脲酶活性为3-80微克NH3-N时,本法能获得可靠结果.当脲酶活性小于3微克NH3-N,培养时间需增至24小时（已经24h了）（计算时应考虑这一点）计算：脲酶活性以24h后1g土壤中NH3-N的mg数表示.NH3-N（mg）＝a*2A：从标准曲线查得NH3-N毫克数2 ：换算成1k土的系数.。
大豆脲酶活性的两种不同测定方法的研究
烈摇 动， 于（０ ０５ ）ｃ 置 ３ ± ． ｃ恒温水 浴中 ， ０ 每隔 ５ｍ ｎ振摇 ｉ
王忠艳 ， 单位及 通讯地址 同第一作者。
收稿 日期 ：０ ７ ２ ｌ ２ ｏ 一ｌ 一 ０
因子 等 ． 且 当 抗 营 养 因子 的 含 量 超 过 动 物 的 耐 受 范 并 围时 还 会 影 响 到 动 物 的 健 康 和 生 产 性 能 。 为 此 ． 国 我
１ 大 豆 粉 样 品 ． １将 普通 市售生 大豆粉 碎 （ 非强 热 ） ４ 过 ０目标 准分 析 筛 。在 １０ｃ 分 别 处 理 ０ ３ ６ ９ １ 、５ １ 、 １ ４ｃ下 、 、 、 、２ １ 、８ ２ 、
测定 ， 可及 时修 订配合 饲料生 产过程 中对大 豆及其 制
品 的正 确 加工 及使 用方 法 ． 经济 、 有效 地 消 除抗 营养
因 子 的 抗 营养 作 用 。
１ 材 料 与 方 法
同时 ， 大豆 中也含有 影响 动物对饲 料 中营养物 质的消 化、 吸收和利 用 的抗 营养 因子 ， 如脲 酶 、 蛋 白酶 抑制 胰
（ Ｂ１３ ４ ８ ） 定 ： 饲 料 用 大 豆 需 加 热 后 使 用 ， ６ 、２ ７ 、８ ８ 、４ ８ ｉ ， Ｇ ０ ８－ ９ 规 “ 脲 ９ ７ 、５ ７ 、 １８ 、７ｍ ｎ 冷却 后装入封 口袋备用 。
１２ 化 学 试 剂 ．
大豆 饼 》 准 （Ｂ ０ ７ － ８ ） 《 料用 大豆 粕 》 准 标 Ｇ １ ３９ ９和 饲 标 ｆ Ｂ ０ ８ － ８） Ｇ １３ ０ ：９规定 ：大 豆饼 和大 豆粕 的脲 酶活 性都 － － “
２ ２ ３ ３ ３ ３ ４２、 ５、 ８、 ４、 ７、 ０、 ３、 ６、 ９、 ４ ４ ５１、４ 、 ７、 ０、 ３、 ６、 ５ ５ ６ ６ ６
大豆中脲酶活性的测定
c.试剂：尿素 磷酸氢二钠 磷酸二氢钾 尿素缓冲液（PH6.9至7.0） 4.45克磷酸 氢二钠和3.40克的磷酸二氢钾溶于水并稀 释至1000ml，再将30克尿素溶于此缓冲 液中。 盐酸 氢氧化钠 0.1mol/L标准溶液
操作方法
称取0.2克已粉碎的样品，转入试管中， 加入10ml的尿素缓冲液，立即盖好试管并剧烈 振动，马上置于30℃的恒温水浴中，准确计时 保持30分钟。然后加入10ml0.1mol/L盐酸溶液， 迅速冷却到20℃，将试管内容物全部转入烧杯， 用5ml水冲洗试管2－3次，立即用标准氢氧化 钾标准液滴定至PH=4.70。 另取试管作为空白管，加入10ml的尿素缓 冲液，然后加入10ml0.1mol/L盐酸溶液。称取 与上述试样量相当的试样，迅速加入此试管中， 立即盖好试管并剧烈振动，马上置于30℃的恒 温水浴中，准确计时保持30分钟，冷却到20℃， 将试管内容物全部转入烧杯，用5ml水冲洗试 管2－3次，立即用标准氢氧化钾标准液滴定至 PH=4.70。
快速测定方法2
在培养皿上放入少量的豆饼粕，在样品上 滴入少量指示剂并搅拌，将其平铺于培养皿中， 放置5min后观察结果。 无任何红点出现，再放置25min仍然无红点出 现，说明豆粕过熟； 有少量红点出现，说明脲酶活性较低，豆粕可 用； 样品表面有25％被红点覆盖，豆粕可用； 样品表面有50％被红点覆盖，应慎用； 样品表面有75％－100％被红点覆盖，脲酶活 性过高，豆粕过生，不可用；
4.操作步骤
准确称取0.4克样品2份，分别置于2支试
管中。一支试管加（A管），另一支加入20ml尿素缓冲
液（B管）。盖塞混匀，在30℃恒温水浴中准
确保持30min。在此期间，每隔5min摇匀一次。
取出立即在流水中冷却，5min内测定溶液的
两种脲酶活性定性测定方法及比较
两种脲酶活性定性测定方法及比较随着膨化技术在饲料工业中推广普及，越来越多的饲料生产商在配方中使用膨化大豆粉，与其它蛋白资源一样，大豆的适度熟化非常重要，熟化程度低会含抗胰蛋白酶等营养抑制因子，熟化度过高又会导致氨基酸利用率低。
判断膨化大豆粉是否合格的主要指标是脲酶活性。
脲酶活性是指：在30±5℃和PH值等于7的条件下，每分钟每克膨化大豆分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。
脲酶本身无营养意义，但它与抗胰蛋白酶的含量接近，并且遇热变性失活的程度与抗胰蛋白酶相似，因此，尿酶活性用来作为膨化大豆加热是否合适的间接估测指标。
脲酶活性没有负值，最低为0。
在我国现行的国标推荐值为0.3，在美国一般认为以不超过0.2为宜，并且针对日粮中有尿素的反刍动物而言不得超过0.12，当然对于家禽和猪0.3或稍高都可以接受。
国内很多大企业一般均采用0.2。
实验室定量测定脲酶活性的方法较复杂，有滴定法和pH增值法两种，已有研究表明两者对同一样品测得的数值也不相等。
目前国内绝大部分企业都采用快速而简单的简易判定方法定性地估测脲酶活性，一般来说，主要有如下两种方法。
一.液态法1.原理：大豆制品中的脲酶可使尿素分解成氨，会使酚红指示剂改变颜色。
2.试剂2.1尿素:GB696，分析纯。
2.2酚红指示剂2.2.1称取0.1g酚红，加1.43mL0.1mol/L氢氧化钠溶液，在研钵中研磨以促溶解；2.2.2转移至250mL定量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀备用。
3.操作方法3.1取0.2g粉末样品，置于25mL比色管中。
3.2加0.02g尿素，加酚红指示剂2滴，再加水20mL，充分摇匀15s。
3.3记录粉红色出现时间，并根据时间判断尿酶活性，颜色出现时间应少于15min。
颜色出现时间脲酶活性1min 极强1～5min 强5～15min 稍有15min 无同时作空白对照试验。
样品空白(不加尿素)及试剂空白(不加样品)，只有上述空白正常时，即酚红指示剂不改变颜色，试验结果才是可靠的。
脲酶活性的测定
3、样品试验与空白试验的制备应相 隔5分钟，并且每隔5分钟搅拌内 容物一次。
4、30分钟后，相隔5分钟将样品与空 白试验的称量瓶从水浴中取出，将 上层液体移入5ml烧杯中，在从水 浴中取出刚达5分钟时，分别测定 此种上层液体的PH值。
六、结果的计算
1、计算公式：
样品试验的PH值与空白试验的PH值 两者之间的差异，则为脲酶活性的指数， 即：
脲酶活性 = 试样的PH测定值-空白的PH测定值
2、重复性：
每个样品应取两个平行样测定， 以其算术平均值为结果。
七、注意事项
1、关于酸度计的使用
2、称量瓶应塞紧 3、关于固定质量称量法 4、通常： 0.02<△PH≤0.3 加工适度 △PH<0.02 加工过度 △PH>0.3 加工不够 BACK
1、样品试验： 准确称取0.200±0.001g样品 于称量瓶中，加入10ml尿素缓冲 溶液，加塞混合，然后置于30℃ 水浴中，在混合操作时称量瓶切 勿倒置。
2、空白试验： 准确称取0.200±0.001g样品于 称量瓶中，加入10ml0.05mol/L磷 酸盐缓冲溶液，加塞混合，置于 30℃水浴中。
三、仪器及试剂
1、仪器
分析天平、样品粉碎机、样品分析 筛、恒温水浴、酸度计、称量瓶、 移液管、角匙等
2、试剂
0.05mol/L磷酸盐缓冲液、尿素缓 冲溶液等
四、试样的选取和制备
选取具有代表性的试样，粉碎至40 目，用“四分法”缩减至200～300g， 密闭保存，以防试样组分变化或变质。
五、测定步骤
实验三 大豆制品中脲酶活性的测定20来自0.10.30一、实验目的
1、掌握大豆制品中脲酶活性的测 定原理 2、熟悉掌握用PH增值法测定大豆 制品中脲酶活性
脲酶活性测定方法pH增值法、盐酸中和法
MM_FS_CNJ_0315出口大豆饼粕脲酶活性 pH增值法盐酸中和法MM_FS_CNJ_0315出口大豆饼粕脲酶活性测定方法pH增值法、盐酸中和法1.适用范围本方法适用于大豆饼粕类脲酶活性的测定。
2.方法一2.1.术语脲酶活性：在规定的操作条件下，使试样中的脲酶分解尿素释放出氨基氮，以溶液pH值的变量表示。
2.2.原理概要将研细的试样与缓冲尿素溶液混合，在30℃作用30min后，测定溶液的pH值。
2.3.主要试剂和仪器2.3.1.主要试剂磷酸缓冲溶液：将3.403g KH2PO4和4.355g K2HPO4溶解并稀释至1000mL。
临用前，以强酸或强碱调节其pH至7.0，其使用期限不超过90d；缓冲的尿素溶液：溶15g尿素（NH2CONH2）于500mL磷酸缓冲溶液中。
加入5mL甲苯，用于防腐和防止霉菌生长。
按上法调节其pH至7.0。
2.3.2.仪器分析天平：感量0.1mg；研磨器：易于清理，研磨过程中不发热，并能达到要求的磨粉细度；恒温水浴：能控制于30±0.5℃；pH计：备有玻璃电极和甘汞电极，灵敏度不低于±0.02pH单位，同时附有温度补偿；试管：直径22mm，长150mm，具橡胶塞；烧杯：容量10mL；单刻度移液管：10mL；精密计时器；标准筛。
2.4.试样的制备用研磨器将约10g的样品，在不升高温度的条件下尽可能研细，使其通过60目标准筛的量不少于60％。
收集全部磨碎物于广口瓶中，小心混合并立即进行分析。
2.5.过程简述准确称取试样0.200g，放入试管内，加10mL缓冲的尿素溶液，塞好橡胶塞，混匀。
置于30±0.5℃水浴中，记下时间。
隔5min放入第二个与此相同的试管作重复试验。
另称试样0.200g，放另一试管内，加10mL磷酸缓冲溶液，塞好橡胶塞，混匀，作为空白试验。
与上管间隔5min置于同一水浴中。
在消化过程中，每隔5min将试管内容物都摇匀一次。
大豆制品脲酶活性测定 PPT
（4）注意事项： • 1.粉碎样品时，不应产生大量热，
否则会影响结果判定； • 2.称量样品时，一定要将样品混合
均匀，否则会造成试验误差； • 3.试样和空白试验同时操作，过程
要迅速，防止时间影响。
2、尿素酚红法 （1）原理：酚红指示剂在pH 6.4-8.2
时由黄变红，大豆制品中所含的尿 素酶可将尿素水解产生氨，释放的 氨可使酚红指示剂变红，根据变红 样品占所有样品的比例来判断脲酶 活性的大小。
（2）仪器和试剂： • 粉碎机：粉碎时不产生强烈发热 • 分析天平：感量0.01g • 25ml纳式比色管 • 恒温水浴锅 • 0.1%酚红指示剂：0.1g苯酚红溶于
100ml 95%乙醇溶液 • 结晶尿素：分析纯
（3）方法：
粉碎→称取0.05±0.001g→放入试 管→加入尿素0.2g、指示剂5滴→加 蒸馏水25mL→摇动10s→立即置于 30±0.5℃水浴锅→计时观察溶液变 红时间→5 min后取出试管，摇匀继 续观察
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
空白试验：不加尿素，其他同上。
品质判定：如果溶液为明显的粉红 色，则认为该大豆制品脲酶活性超 标，为不合格产品。
•0-1min变红，活性非常强（＞ 1.0）；
•1-2min变红，活性大概0.5-1.0； • 2-5min变红，活性大概0.3-0.5。
（4）注意事项： • 1.对于样品较粗、具有大块状的样品，
最好将其稍微粉碎，亦不可太细， 否则不容易观察； • 2.样品一定要铺平，容易观察； • 3.溶液保质期为3个月，最好1个月内 用完； • 4.此方法容易受颗粒度影响。
脲酶活性的测定
Department of Animal science
动物营养与饲料学
脲酶测定
4、30分钟后，相隔5分钟将样品与空 白试验的称量瓶从水浴中取出，将 上层液体移入5ml烧杯中，在从水 浴中取出刚达5分钟时，分别测定 此种上层液体的PH值。
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Department of Animal scien握大豆制品中脲酶活性的测 定原理 2、熟悉掌握用PH增值法测定大豆 制品中脲酶活性
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动物营养与饲料学
脲酶测定
二、 测定原理
将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶 液混合，在30℃保持30分钟，尿素酶催化 尿素水解产生氨，由于尿素水解释放的氨 是碱性的，可使溶液PH值升高，试样溶液 与空白溶液的PH值之差，即可间接表示出 氨量的多少。 NH2CONH2+ 尿素酶 2NH3 ↑ + CO2
BACK
动物营养与饲料学
脲酶测定
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七、注意事项
1、关于酸度计的使用
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动物营养与饲料学
脲酶测定
2、称量瓶应塞紧 3、关于固定质量称量法 4、通常： 0.02<△PH≤0.3 加工适度 △PH<0.02 加工过度 △PH>0.3 加工不够
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动物营养与饲料学
脲酶测定
六、结果的计算
1、计算公式：
样品试验的PH值与空白试验的PH值 两者之间的差异，则为脲酶活性的指数， 即：
脲酶活性 = 试样的PH测定值-空白的PH测定值
大豆脲酶实验报告
一、实验目的1. 了解大豆脲酶的提取方法和纯化过程；2. 探究大豆脲酶的活性变化；3. 分析大豆脲酶在不同条件下的稳定性。
二、实验方法1. 实验材料：大豆、蒸馏水、NaCl、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、pH缓冲液、脲、考马斯亮蓝G-250、酶活性测定试剂盒等。
2. 实验步骤：（1）大豆脲酶的提取：称取一定量的大豆，用蒸馏水浸泡过夜，研磨成匀浆，加入适量的磷酸氢二钠和磷酸二氢钠溶液，调节pH至7.0，离心取上清液，即为大豆脲酶粗提液。
（2）大豆脲酶的纯化：取大豆脲酶粗提液，依次用不同浓度的NaCl溶液进行盐析，收集沉淀，复溶于磷酸缓冲液，重复上述操作，直至达到所需纯度。
（3）大豆脲酶的活性测定：采用酶活性测定试剂盒，测定大豆脲酶在不同浓度脲溶液中的活性，以脲的消耗量作为酶活性的指标。
（4）大豆脲酶在不同条件下的稳定性研究：将纯化后的大豆脲酶置于不同pH、温度、离子强度条件下，观察酶活性的变化。
三、实验结果1. 大豆脲酶的提取与纯化：经过提取和纯化，得到纯度较高的大豆脲酶。
2. 大豆脲酶的活性变化：在脲浓度为0.1-1.0 mmol/L时，大豆脲酶活性随脲浓度增加而增强，当脲浓度超过1.0 mmol/L时，酶活性逐渐降低。
3. 大豆脲酶在不同条件下的稳定性：（1）pH稳定性：在pH 6.0-8.0范围内，大豆脲酶活性较高，当pH低于5.0或高于9.0时，酶活性显著降低。
（2）温度稳定性：在37℃时，大豆脲酶活性最高，随着温度升高，酶活性逐渐降低，当温度超过60℃时，酶活性基本消失。
（3）离子强度稳定性：在离子强度为0.1-1.0 mol/L范围内，大豆脲酶活性较高，当离子强度超过1.0 mol/L时，酶活性显著降低。
四、讨论1. 大豆脲酶提取与纯化过程中，采用盐析法可以有效去除杂质，提高酶的纯度。
2. 大豆脲酶活性受脲浓度、pH、温度和离子强度等因素的影响，本研究结果表明，大豆脲酶在适宜的条件下具有较高的活性。
大豆中尿酶活性的测定原理
大豆中尿酶活性的测定原理
大豆中尿酶活性的测定原理基于尿酶催化尿素分解产生氨和二氧化碳的反应。
其测定步骤如下：
1.取适量大豆样品，加入磷酸盐缓冲液中，使其均匀混合。
2.分别加入尿素和尿酰酸，使其与大豆中的尿酶反应。
3.等待一定时间后，加入酚和氯化铁，使其产生褐色化合物，然后用紫外光谱仪测量其吸光度。
4.根据标准曲线计算大豆中尿酶的活性。
其中，尿酸的浓度会随着尿酶的活性增加而降低，而产生的氨和二氧化碳则随同反应中的尿酶一同释放出来。
通过相应的化学反应，可以将其转化为吸光度可测量的化合物，最终得到尿酶的活性值。
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万方数据
１．３．２滴定法（国标：标准编号Ｇ１３ｆＩ＇１３５６７８７—１９９７）嗍 ①实验原理：将粉碎的大豆样品与中性尿素缓
冲液混合，在（３０±０．５）ｏＣ下保持３０ ｒａｉｎ，样品中的脲 酶催化尿素分解产生氨，用过量的盐酸中和吸收氨。 再用氢氧化钠标准溶液回滴到溶液ｐＨ值为４．７０。
摘 要 将大豆粉在１４０℃温度下热处理不同时间，用滴定法和ｐＨ增值法测定了其中脲酶活 性。结果表明，同一样品用滴定法和ｐＨ增值法测得的脲酶活性在数值上不相等，不能直接互用，但在 一定条件下可以进行数值的相互代换。
关键词大豆；脲酶活性；滴定法；ｐＨ增值法 中图分类号￥８１６．４２
大豆是优质的植物性蛋白质饲料．它含有３５％。 ４０％的蛋白质、１５％。２０％的脂肪和２０％。３０％的碳 水化合物，并含有丰富的矿物质与维生素，因此素有 “植物肉”、“绿色的牛乳”之美誉，是目前世界范围内 动物饲料原料中最常用的植物性蛋白质类饲料【ｌ】。但 同时．大豆中也含有影响动物对饲料中营养物质的消 化、吸收和利用的抗营养因子，如脲酶、胰蛋白酶抑制 因子等。并且当抗营养因子的含量超过动物的耐受范 围时还会影响到动物的健康和生产性能。为此，我国 制定了专门的国家标准，如我国《饲料用大豆》标准 （ＧＢｌ０３８４—８９）规定：“饲料用大豆需加热后使用，脲 酶活性不得超过０．４ ＮＨ３ｍｇ／（ｇ·ｍｉｎ）”；我国《饲料用 大豆饼》标准（ＧＢｌ０３７９－－８９）和《饲料用大豆粕》标准 （ＧＢｌ０３８０－－８９）规定：“大豆饼和大豆粕的脲酶活性都 不得超过０．４ ＮＨｃｎｇ／（ｇ·ｍｉｎ）”。目前，在我国较广泛 使用的脲酶活性的测定方法主要有滴定法和ｐＨ增 值法，其中，滴定法是国家标准方法（标准编号ＧＢ／Ｔ １３５６７８７－－１９９７），具有仲裁性。但是由于滴定法要求 精度高，所用试剂品种较多，且配制复杂，测定过程中 操作时间较长，操作步骤较严格，给检测人员的批次 测定带来不便，难以迅速地指导生产。所以在实际生 产中，一般多用ｐＨ增值法测定脲酶活性。ｐＨ增值法 由于测定结果的准确度和精确度都不高，因此，不具 有仲裁性。为了更好的了解两种方法的利与弊．本文
虽然用滴定法和ｐＨ增值法测得的大豆中脲酶活 性的数据有较大差别，不能直接通用，但是可以根据 它们之间的联系，建立一定条件．找到一种简便易行 的方法进行数值间的相互代换．从而实现实验过程的 以简代繁，以达到迅速、高效地指导实际生产的目的。
我国是个饲料资源比较缺乏的国家．应当重视有 关抗营养因子的研究，这应当是今后动物营养及饲料 学研究发展的一个主要方向。
滴定法和ｐＨ增值法虽然存在很多差别，但也存 在一定联系。在Ｅｘｃｅｌ中用ＣＯＲＲＥＬ函数计算图ｌ中 的两组测定结果数据，相关度达到０．９９６。同样由图１ 可知。这两种方法的测定结果的变化规律基本相同， 可以通过计算对两者进行数值上的代换。以达到用简 易的检测方法进行测定。就可推知用较复杂检测方法 测定出的较精确的测定结果的目的。 ４结论
卢晓凌，东北林业大学野生动物资源学院，１５００４０，黑龙 江省哈尔滨市东北林业大学７０２信箱。
王忠艳，单位及通讯地址同第一作者。 收稿日期：２００７—１２—１０
拟对两种方法进行比较研究．以明确两种方法测定结 果区别与联系。同时也希望通过对大豆中脲酶快速的 测定，可及时修订配合饲料生产过程中对大豆及其制 品的正确加工及使用方法，经济、有效地消除抗营养 因子的抗营养作用。 １材料与方法 １．１大豆粉样品
将普通市售生大豆粉碎（非强热）过４０目标准分 析筛。在１４００Ｃ下分别处理０、３、６，９、１２、１５、１８、２１、
２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５ｌ、５４、５７、６０、６３、６６、
６９、７２、７５、７８、８１、８４、８７ ｍｉｎ，冷却后装入封口袋备用。 １．２化学试剂
本实验所用试剂均为分析纯（ＡＲ），水为蒸馏水。 １．３脲酶活性测定方法 １．３．１ ｐＨ增值法（ＡｐＨ值法）ｆ２．．．９１
３６５珈．０１７ ０．００７ １７４ＸＪ＋３．１４２ ６７９；ｐＨ增值法ｙ２－－０．０００ ０１０Ｘ于一
０．００１
８３５Ｘ２＋２．３７９ ４９８。根据此方程，通
过在Ｅｘｃｅｌ中用Ｅｘｃｅｌ ＶＢＡ语言进行程序编辑与计
算，可建立一种方便直观的对话窗口（如图２），通过此 窗口即可方便直观地进行这两种测定方法间的数据
3.石彦国 大豆制品工艺学 2005 4.中国标准出版社第一编辑室 中国农业标准汇编一饲料卷 2002 5.王成春;萧雅云 实战Excel 2002VBA程序设计实务 2003
本文读者也读过(6条) 1. 杨奇慧.舒璐.钟剑锋.Yang Qihui.Shu Lu.Zhong Jianfeng 不同方法测定大豆脲酶活性的比较研究[期刊论文]饲料广角2008(21) 2. 张祥.程秀花.赵国琦.王丽.马亮.吴千茂.刘雄伟 挤压膨化工艺对大豆脲酶活性的影响[期刊论文]-粮食与饲料 工业2005(9) 3. 余云雷.齐德生.张妮娅 大豆脲酶活性测定方法比较研究[期刊论文]-养殖与饲料2005(6) 4. 周坚成.Zhou Jiancheng 豆粕脲酶活性的快速测定及其对肉用仔鸡生长的影响[期刊论文]-饲料工业2000,21(5) 5. 周兵.李树文.张宏玲.简丽.程宗佳 不同膨化温度下膨化大豆中脲酶活性和蛋白质溶解度变化趋势浅析[期刊论 文]-饲料广角2006(6) 6. 张祥.程秀花.赵国琦 不同挤压条件对大豆中脲酶活性的影响[期刊论文]-江西饲料2005(1)
图ｌ
热处理时Ｊ司（ｍｉｎ） １４０℃下大豆粉不同处理时间的脲酶活性
由图１可以看出．１４０℃加热条件下．０～８７ ｍｉｎ内
大豆粉脲酶活性随加热时间延长而降低，并呈规律性 变化。而且滴定法的测定值大于ｐＨ增值法的测定值。
由图１可知，用ｐＨ增值法和滴定法两种方法，测定同 一种大豆粉中脲酶活性随加热时间延长而降低这种
参考文献
【１】陈秋东，项雷文，郑建兵．大豆中抗营养因子——致甲状腺肿素、 凝血素、胰蛋白酶抑制荆祛除方法初探阴．食品研究与开发， ２００２，２３（３）：３５—３６．
【２】余云雷，齐德生，张妮娅．大豆脲酶活性测定方法比较研究田．养 殖与饲料．２００５（６）：１９—２１．
【３】石彦国．大豆制品工艺学【Ｍ】．北京：中国轻工业出版社，２００５．８１— ８７．
图２数据处理界面
图３数据记录界面
达到测定方法简便易行．可快速指导生产的目的。对 大豆及其副产品中脲酶活性的测定却普遍采用ｐＨ增 值法。如上文所述，这两种方法在测定过程中实验原 理、实验步骤、结果数值、数值单位等方面都不相同。 其中。虽然两者的测定结果在数值上比较接近，但仍 有一定差异，滴定法的测定结果数值较大。因而，在生 产实际中．两种测定方法的测定结果不能直接相互替 代使用，在对大豆脲酶活性进行表述或提出具体限量 要求时，应明确使用何种测定方法。 ３．２两种脲酶酶活性测定方法的联系
【４】 中国标准出版社第一编辑室．中１１１农业标准汇编一饲料卷【＾Ｉ】．北 京：中国标准出版社，２００２：１２６—１２８．
ｆ５】王成春，萧雅云．实战Ｅｘｃｅｌ ２００２ＶＢＡ程序设计实务ｆ坶北京：中 国铁道出版社。２００３：２３—７５．
３讨论 ３．１两种脲酶活性测定方法的差别
在我国，国家标准规定大豆及大豆饼、粕中脲酶
ｏ 活性的测定方法为滴定法。但在实际生产中，人们为
（编辑：洗桂宇，ｇｕｉｙｕｓｈ＠１２６．ｃｏｒｎ）
万方数据
大豆脲酶活性的两种不同测定方法的研究
作者： 作者单位： 刊名：
英文刊名： 年，卷(期)： 被引用次数：
卢晓凌， Wang Zhongyan， Lu Xiaoling， Wang Zhongyan 东北林业大学野生动物资源学院,150040,黑龙江省哈尔滨市东北林业大学702信箱
在“试样序号”和“ｐＨ增值法测定值（ｐＨ）”标签所对应 的文本框中用键盘输入相应的实验所得的测定结果
万方数据
数据，然后单击“数据转换”按钮。在对话窗口中即可 算出“滴定法估算值［ＮＨ３ｒｎｇ／（ｇ·ｍｉｎ）］”标签所对应的 值，并显示在相应的文本框中，再单击“将数据导人工 作表”按钮，即可把“试样序号”、“ｐＨ增值法测定值 （ｐＨ）”和“滴定法估算值ＩＮＨ３ｍｇ／（ｇ·ＩＩｌｉｎ）１，’标签所对应 的值导人到丁作表ｓｈｅｅｔｌ（如图３）中。如果需对工作 表进行中数据清理，可点击窗体中“清除工作表中数 据”按钮，即可将工作表中数据依行进行删除。
规律性变化时，测定出的变化规律基本相同。这表明
两种方法测得的脲酶活性大小在数值上虽然有所不
同。但数据问存在一定的关系。可通过一定的方法进 行两者间的数据代换。 ２．２实验数据处理
在Ｅｘｃｅｌ程序中对图１中的数据点添加其变化
趋势线，并运用程序拟合趋势线方程，可以得到图中２条
曲线的方程式：滴定法ｙ，＝０．０００ ＯＩＯＸ／３－－０．００１ ３１１ＸＪ２＋
③实验方法：准确称取０．４００ ｇ样品２份，分别 置于２支２５ ｍｌ比色管中，其中１支加入２０ ｍＪ磷酸 盐缓冲液。作为空白试验管，另１支加入２０ ｍｌ尿素 磷酸盐缓冲液。作为试验管，立即盖好比色管塞并剧 烈摇动，置于（３０±０．５０）ｏＣ恒温水浴中，每隔５ ｍｉｎ振摇 １次，准确计时，保持３０ ｍｉｎ。立即分别测定其ｐＨ值。
代换，即用简单常用的ｐＨ增值法的测定结果可以估 算出国标滴定法的测定结果［５１。
该对话窗口的使用方法为：首先打开Ｅｘｃｅｌ软
件，选择“文件”菜单中的“打开”选项，从显示出的对
话框中选择将要打开的文件。单击，即可打开相应的 工作表。然后点击如图３的Ｅｘｃｅｌ工作表ｓｈｅｅｔｌ中的
“数据处理”按钮，进入Ｅｘｃｅｌ对话窗口界面（如图２）。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
理时间的大豆粉试样（共３０个）的脲酶活性，其中每种 方法对每个样品均进行２次平行测定，分别将平行测 定得到的数据求平均值．最后得到实验结果数据６０ 个，依据上述两种不同测定方法可将数据分为两组， 并用Ｅｘｃｅｌ程序进行数据分析和处理．见图１。