第15章-免疫学检测方法及其原理
免疫学检测技术的原理分析免疫学教材课件
免疫学检测技术在疾病诊断、治疗及药物研发中具有广泛应用。本课件将介 绍其工作原理和应用，以及其优势和限制，以及如何使用本教材。
免疫学检测技术的概述
免疫学检测技术是应用于检测体液和细胞中抗原-抗体反应的技术。它们允许对诊断、预防和治疗疾病的免疫反应进 行研究。
免疫免疫性技术的应用
免疫免疫性技术利用T细胞和B细胞等免疫细胞的高度特异性来检测和研究有关免疫系统的复杂反应。
1
应用
流式细胞术，蛋白质微阵列。
2
蛋白质微阵列
是一种新型的免疫学技术，可快速，同时检测大量蛋白质。通过识别特定的抗体-抗原结合，可以确 定已标记的分子的存在和浓度。
3
流式细胞术
用于确定特定细胞的表面蛋白和内部细胞因子，并可用于诊断疾病。
工作原理
检测抗原或抗体的存在或活性，以确定某种疾病的 存在或发展过程中的免疫反应。
分类
免疫法理方法和免疫免疫性方法，包括酶免疫分析、 放射免疫分析和荧光免疫分析等。
应用
用于检测病毒、细菌、真菌和其他微生物感染，肿 瘤标志物，自身免疫疾病和输血等。
优势和限制
高度灵敏，可靠和快速，但也可能造成假阴性和假 阳性结果。
荧光免疫分析(FLISA)的优势和应用
FLISA是一种荧光标记免疫检测技术，其应用广泛且灵敏 。与ELISA类似，FLISA利用二抗或标记抗体检测抗原或抗体 的存在和浓度。
优势
灵敏和高度特异性；快速且易于自动化，具有高通量。
应用
FLISA用于检测肿瘤标志物、细菌、病毒和各种生物分 子的存在和浓度。
酶免疫分析(ELISAቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ的原理和优势
ELISA是一种常用的免疫学检测技术，其工作原理是通过将抗原-抗体体系与标记酶和底物反应，从而检测 抗原或抗体的存在或浓度。
免疫检测法PPT课件
缺点
01
02
03
04
交叉反应
有时会出现交叉反应，导致假 阳性结果。
抗体依赖
免疫检测法依赖于抗体的质量 和特异性，因此抗体制备的难
度和成本较高。
样品处理要求高
对于某些生物样品，需要进行 复杂的预处理才能进行检测。
检测时间较长
相对于一些快速检测方法，免 疫检测法可能需要更长时间才
能获得结果。
改进方向
分类
根据检测原理和应用领域，免疫 检测法可分为酶联免疫吸附试验 、放射免疫分析、荧光免疫分析 、化学发光免疫分析等。
免疫检测法的应用领域
01
02
03
医学诊断
用于检测人体内的肿瘤标 志物、激素、病毒抗原、 药物残留等，辅助医生进 行疾病诊断和病情监测。
食品安全
用于检测食品中的农药残 留、兽药残留、毒素等有 害物质，保障食品安全。
情监测。
激素水平检测
性激素检测
通过检测性激素水平，有助于评估男性和女性的生殖健康状况，如 睾酮、雌二醇、孕酮等激素的检测。
甲状腺激素检测
甲状腺激素对人体的新陈代谢和生长发育具有重要作用，通过检测 甲状腺激素水平，有助于甲状腺功能亢进和减退的诊断和治疗。
肾上腺激素检测
肾上腺激素与人体应激反应、免疫功能等方面密切相关，通过检测肾 上腺激素水平，有助于相关疾病的诊断和治疗。Fra bibliotek传染病检测
结核病检测
性病检测
通过检测结核病抗体，有助于早期发 现和诊断结核病，为预防和治疗提供 依据。
免疫检测法在性病检测中发挥着重要 作用，如梅毒、淋病、尖锐湿疣等， 通过检测相关抗体和抗原，及时发现 和治疗性病。
肝炎检测
免疫学检测技术基本原理
荧光免疫检测技术(FI)的基本原理
荧光免疫检测技术与FIA类似，但是不需要标记酶和底物，而是直接标记荧光染料，通过检测荧光信号 随时间变化的曲线来判断样品中免疫分子的存在和浓度。
无需酶标记
荧光免疫检测不需要使用 酶标记荧光素酶，避免了 潜在的酶和底物污染。
高通量检测
荧光免疫检测可以在低浓 度下完成快速检测，适用 于高通量和大规模的样品，可以 标记多种不同的免疫分子， 提高检测的多元性和特异 性。
放射免疫检测技术(RIA)的基本原理
放射免疫检测技术利用放射性标记的免疫分子来检测样品中目标免疫分子的存在和浓度。
1
放射性标记
将免疫分子与放射性元素标记如131I、125I等结合。
2
孵育和分离
将标记的免疫分子与待测样品反应孵育，通过分离获得实验的反应产物。
免疫学检测技术基本原理
免疫学检测技术是一种检测生物体内免疫分子的方法，应用广泛于临床诊断、 生命科学、农业、环境监测和食品安全等领域。
免疫学检测技术的定义和概述
免疫分子的来源
免疫分子包括抗体、补体和细 胞因子等，都是免疫系统特异 性抗原识别和应对的产物。
检测方法的基本原理
通过与特定抗原或抗体结合来 检测样品中目标免疫分子的存 在和浓度。
免疫学检测技术的应用
广泛应用于疾病诊断、药物开 发、生物学研究和疫苗制备等 领域，成为现代生物技术发展 的重要手段。
免疫学检测技术的常见方法
直接法
直接使用标记的抗体或抗原检测样品中的免 疫分子。
间接法
利用未标记的抗体与样品中的免疫分子结合， 再使用标记的二抗或蛋白A/G结合物检测。
竞争法
利用抗原或抗体与样品中的免疫分子竞争结 合，测定中目标免疫分子的含量。
免疫学检测技术的基本原理及其应用 ppt课件
要
免疫学检测技术主要应用： 对多种免疫性疾病的诊断、疗效评估、 发病机制探讨; 对抗原性物质、免疫细胞、细胞因子、 粘附分子或细胞受体等的定性、定量检测。
PPT课件
1
第一节
抗原或抗体的检测
抗原-抗体反应包括：
沉淀反应、凝集反应、溶解反应、补体 结合反应、中和反应等。
抗原-抗体反应可用已知的特异性抗体检测 未知的抗原；也可用已知的抗原检测未知的 抗体。
将待测血清标本作琼脂将待测血清标本作琼脂凝胶电泳不同分子量凝胶电泳不同分子量蛋白组分开然后与电蛋白组分开然后与电泳方向平行挖一泳方向平行挖一小槽加入加入相应的相应的抗血清抗血清与不同区带的蛋白抗原作不同区带的蛋白抗原作双向免疫扩散在各区双向免疫扩散在各区带相应的位置形成带相应的位置形成沉淀沉淀常用于血清蛋白种类分常用于血清蛋白种类分也称免疫扩散是把单向免疫扩散同电也称免疫扩散是把单向免疫扩散同电泳结合在一起的方法
用荧光素、同位素或酶等示踪物质 标 记抗体（或抗原）进行抗原-抗体反应。 能极大地提高了反应的灵敏度，可以对 微量物质进行定量、定性或定位检测。 三种基本类型：免疫荧光技术、免疫酶 技术和同位素标记技术。
PPT课件
18
免疫荧光显微技术 (Immunofluorescence Technique)
14
免疫电泳 （Immunoelectrophoresis)
将待测血清标本作琼脂 凝胶电泳，不同分子量 蛋白组分开，然后与电 泳方向平行挖一小槽， 加入相应的抗血清，与 不同区带的蛋白抗原作 双向免疫扩散，在各区 带相应的位置形成沉淀 弧。 常用于血清蛋白种类分 析。
PPT课件 15
免疫学检测方法及其原理
原理：利用抗原抗体特异性结合 的原理，通过酶催化底物产生颜 色反应，检测抗原或抗体的存在。
步骤：将抗原或抗体固定在固相 载体上，加入待测样品，再加入 酶标记的抗体或抗原，最后加入
底物，产生颜色反应。
优点：灵敏度高，特异性强，操 作简便，可定量检测。
应用：广泛应用于免疫学检测、 疾病诊断、药物研发等领域。
评估药物的疗效和安全性
03
检测方法：使用免疫细胞进 04
筛选结果：根据检测结果，
行药物筛选，如ELISA、流
选择具有治疗效果的药物进
式细胞术等
行进一步研究
科学研究
01
免疫学检测在科学
研究中的应用
02 免疫学检测在生物
医学研究中的应用
03
免疫学检测在生物
技术研究中的应用
04 免疫学检测在生物
制药研究中的应用
2 免疫学检测原理
抗原抗体特异性结合
抗原：能够引起免疫反应的物质，如病毒、细菌 等
抗体：由B细胞产生的，能够识别并结合抗原的 蛋白质
特异性结合：抗原与抗体之间具有高度特异性， 即一种抗原只能与一种抗体结合
结合原理：抗原与抗体结合后，形成抗原抗体复 合物，从而激活免疫系统，产生免疫反应
信号放大技术
免疫学检测方法及其 原理
演讲人
目录
01. 免疫学检测方法 02. 免疫学检测原理 03. 免疫学检测应用
1 免疫学检测方法
抗原抗体反应
01
抗原：能够引起 免疫反应的物质， 如病毒、细菌等
02
抗体：由免疫系 统产生的，能够 识别和结合抗原 的蛋白质
03
反应原理：抗原 与抗体结合，形 成抗原抗体复合 物，引发免疫反 应
临床免疫学检验 课件 第15章 免疫细胞标志和功能检测技术
PMBC
Ficoll 分离液
(聚蔗糖-泛影葡胺）
２份6%聚蔗糖蒸馏水溶液 １份34%泛影葡胺生理盐水溶液
纯度达 95%
上层：血浆
外周血
Ficoll
白膜层 中层：分离液
底层：红细胞和多核细胞
二 、淋巴细胞分离
?贴壁粘附法 ?吸附柱过滤法 ?Percoll 分离液法
1.贴壁黏附法
PBMC
37℃ 1 hour
? 外周血单个核细胞分离 ? 淋巴细胞的分离 ? T、B细胞和 T细胞亚群的分离
一、外周血单个核细胞分离
?外周血单个核细胞（ peripheral blood mononuclear cells, PBMC）包括淋巴细胞和
单核细胞（monocyte ）。
?分离原理 ：根据比重不同进行分离
血小板
PBMC
多核白细胞
红细胞
? 对分离介质的要求：
– 对细胞无毒； – 基本等渗；
分离介质 是关键
– 与血浆和分离细胞不相溶；
– 有特定的比重。
? 不同动物的PBMC 比重有差异：
– 小鼠：1.085
– 大鼠：1.087
– 人：1.075～1.090
? 常用Ficoll分离液(1.077±0.001)分离人的
1. E花环沉淀法
成熟T细胞具有CD2分子 能结合绵羊红细胞
方法：淋巴细胞 +SRBC 悬液→加入分层液
→T细胞形成 E花环而沉于管底 →悬液
中为B细胞。
缺点：分离效率低，易受多种因素影响
2. 尼龙毛分离法(吸附能力差异)
方法：淋巴细胞→通过聚酰胺纤维管→洗脱下来的是T细胞
3. 亲合板结合分离法—分离亚群
免疫检测技术的基本原理可编辑全文
玻片直接凝集试验
+
试管法半定量试验
1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512
2.间接凝集法
➢ 先将可溶性抗原或抗体吸附在颗粒载体上 (如RBC, 乳胶颗粒)，再与相应抗体或抗 原反应，出现凝集为阳性结果。
抗原吸附 乳胶颗粒
＋
步骤2：加入抗原 吸附的乳胶颗粒混 匀
结果判断：
不凝集为 阳性结果
凝集反应
2.沉淀反应
概念：可溶性抗原与相应抗体结合后出 现沉淀物称沉淀反应。
类型： ★单向免疫扩散 ★双向免疫扩散 ★对流免疫电泳 ★免疫比浊法
单向琼脂扩散试验
双向琼脂扩散试验
对流免疫电泳
免疫比浊法原理
酶及其底物
酶结合物是酶与抗体或抗原, 半抗原 在交联剂作用下联结的产物。是ELISA成败 的关键试剂，它不仅具有抗体抗原特异的 免疫反应，还具有酶促反应，显示出生物 放大作用，但不同的酶选用不同的底物 ， 将得到不同的颜色反应.
酶
底物
辣根过氧化物酶
ห้องสมุดไป่ตู้
邻苯二胺 四甲替联苯胺 氨基水杨酸 邻联苯甲胺 2,2‘-连胺基-2(3-乙基-并噻
植物毒素如罌粟硷、吗啡、藻类毒素
河豚毒素
苯并芘
食源性病原菌检测试剂盒
大肠杆菌检测 沙门氏菌检测 单增李斯特菌 金黄色葡萄球菌
食品其他检测：
转基因成份的检测：如转基因玉米中中的cry9e蛋白 转基因大豆中的CP4 EPSPS蛋白质．
肉制品的掺假检测： 以辣根过氧化物酶标记不同动物肌肉和血清球蛋A
抗血清检查牛肉、马肉、猪肉、羊肉和驼肉检测14种 畜禽熟肉制品，包括牛肉、羊肉、鹿肉和马肉等，在 掺假率为1%时即可检出
免疫学检验的基本原理与方法
免疫学检验的基本原理与方法免疫学检验是一种常见的实验室技术，在医学、生物学等领域具有广泛的应用。
本文将介绍免疫学检验的基本原理和常用的方法，并探讨其在疾病诊断、病毒检测和药物研发中的应用。
一、免疫学检验的基本原理免疫学检验基于机体免疫系统的特性，利用抗原与抗体之间的特异性结合反应来检测和定量分析抗原或抗体的存在。
其基本原理如下：1. 特异性识别：抗体可以识别并结合与之对应的抗原，形成特异性的抗原-抗体复合物。
2. 高度敏感性：免疫学检验可以检测极低浓度的抗原或抗体，提供高度敏感的结果。
3. 双重验证：通过采用一对互补的抗原和抗体，可以用于验证检测结果的准确性。
二、常见的免疫学检验方法在免疫学检验中，常用的方法包括酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫印迹（Western Blotting）、免疫荧光等。
下面将对这些方法进行具体介绍：1. 酶联免疫吸附实验（ELISA）ELISA是一种常见且广泛应用的免疫学检验技术。
它利用酶标记的抗体与待检测样品中的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标记物复合物。
通过添加底物，酶标记物能够催化底物的反应，产生可测量的信号。
ELISA可用于定量或半定量测定目标物的浓度，并可应用于多种领域，如感染性疾病的诊断、蛋白质的定量等。
2. 免疫印迹（Western Blotting）免疫印迹是一种常用于检测特定蛋白质的免疫学技术。
该方法通过将复杂的蛋白质混合物经SDS-PAGE电泳分离后，将之转移到固体载体上。
然后，用特异性抗体与目标蛋白质结合，并通过酶标记的二抗与一抗结合，产生可见的信号。
免疫印迹可用于诊断疾病、检测蛋白质相对分子质量和检测表达水平等。
3. 免疫荧光免疫荧光是一种利用抗体对荧光染料标记的抗原进行特异性识别的免疫学技术。
该技术通过与荧光探针结合并激发荧光信号，来检测细胞或组织中特定抗原的定位和表达。
免疫荧光广泛应用于免疫组织化学、细胞信号转导、病毒感染等领域，可用于研究细胞和组织的结构、功能以及疾病的发生机制。
免疫学检测技术的基本原理及其应用
免疫学检测技术的基本原理及其应用免疫学检测技术是一种通过测定机体中的抗体或抗原来进行诊断、监测或研究的检测方法。
其基本原理是利用人体免疫系统的特性，通过抗原与抗体的特异性结合来检测和定量分析抗原或抗体的存在与水平。
下面将详细介绍免疫学检测技术的基本原理及其主要应用。
一、免疫学检测技术的基本原理1.直接免疫检测方法：直接免疫检测方法是通过将待检测样品与已知特异性抗体标记物直接反应，利用标记物发出的信号来检测目标物质。
常用的标记物有放射性同位素、荧光物质、酶和金等。
2.间接免疫检测方法：间接免疫检测方法是通过将待检测样品与已知特异性抗体反应后，再经过第二抗体与标记物结合的方式来检测目标物质。
这种方法主要应用于寻找含有多重抗原决定簇的抗原。
二、免疫学检测技术的主要应用1.临床应用：免疫学检测技术在临床上应用广泛，例如用于检测病毒、细菌、寄生虫等病原体的感染，常见的如乙肝、艾滋病、流感等病毒的检测。
此外，免疫学检测技术还可用于检测肿瘤标志物、自身免疫性疾病、免疫功能检测等。
2.生物制药与生物工程：免疫学检测技术在生物制药与生物工程中有着重要应用。
例如，通过免疫学检测技术来检测和定量分析生物制药产品中的杂质和残留物，确保产品质量和安全性。
另外，免疫学检测技术还可用于基因工程草甘膦抗性作物的筛选和鉴定。
3.食品安全监测：免疫学检测技术在食品安全监测中起到重要作用。
通过免疫学检测技术可以检测食品中的有害物质或者过敏原，如重金属、农药、酒精、过敏原等，确保食品的质量和安全。
4.动物疫病监测：免疫学检测技术在兽医领域有着广泛应用。
例如，可以通过免疫学检测技术来检测动物体内的病原体感染，如猪瘟、狂犬病、禽流感等，及时采取措施进行防治。
5.环境监测：免疫学检测技术还可用于环境污染物的监测。
例如，通过检测水体、大气中的有害物质，判断环境中的污染程度和对人体的危害。
总结起来，免疫学检测技术基于抗原与抗体的特异性结合反应，可以应用于临床诊断、药物开发、食品安全监测、动物疫病监测和环境监测等多个领域。
免疫学检测技术的基本原理及其应用PPT
免疫反应链
了解单克隆和多克 隆抗体在免疫反应 中的作用。
信号放大
揭示检测技术如何 利用信号放大机制 来增强检测敏感性。
检测方法
介绍常见的免疫学 检测方法，如 ELISA、免疫印迹 和流式细胞术。
免疫学检测技术的主要应用领域
探索免疫学检测技术在医学领域中的主要应用领域，包括诊断疾病、疫苗开发和药物监测。
1 定义
免疫学检测技术是一组用于检测和测量免疫反应的实验细胞生物学的深入研究。
免疫学检测技术的基本原理
深入了解免疫学检测技术的基本原理和机制，包括抗原-抗体相互作用、免疫反应链、信号放大和检测 方法。
抗原-抗体相 互作用
抗原与特定抗体之 间的相互作用是这 些技术的基础。
诊断疾病
了解免疫学检测技术在早期疾病诊断和监测中的重要作用。
疫苗开发
探索免疫学检测技术在疫苗研发和效力评估中的应用。
药物监测
了解如何利用这些技术来监测药物治疗的有效性和副作用。
免疫学检测技术的具体方法和步骤
深入了解免疫学检测技术的具体方法和步骤，包括样本收集、试剂准备、标记和检测分析。
1
样本收集
收集样本是免疫学检测的第一步，通常涉及血液、尿液或组织样本。
免疫学检测技术在医学领域的应用案例
探索免疫学检测技术在医学领域中的实际应用案例，包括癌症诊断、自身免疫疾病和传染病。
癌症诊断
了解如何利用免疫学检测技术 来识别和分类不同类型的癌症 细胞。
自身免疫疾病
探索免疫学检测在自身免疫疾 病诊断和治疗中的关键作用。
传染病
了解免疫学检测技术在传染病 预防、控制和治疗中的应用。
免疫学检测技术的基本原 理及其应用
本演示文稿将介绍免疫学检测技术的基本原理及其在医学领域中的应用。了 解这些关键概念和案例将有助于您更好地理解和应用免疫学检测技术。
免疫学检测技术的基本原理PPT课件
2.沉淀反应－单向免疫扩散，双向免疫扩散，
免疫电泳，免疫比浊
3.补体参与的反应－补体结合试验，溶血空斑试
验
4.用标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应
用标记抗体或抗原进行的 抗原抗体反应
免疫荧光技术(immunofluorescence) 酶免疫测定(enzyme immunoassay,EIA) 放射免疫测定(radioimmunoassay,RIA) 化学发光免疫分析(chemiluminescence
ELISA 双抗体夹心法
淋巴细胞的分离与类型鉴定
免疫荧光法 磁珠分离法 流式细胞术(FlΒιβλιοθήκη w cytometry)/荧光激活
的 细胞分选器(Fluorescence activated cell sorter,FACS)
淋巴细胞功能测定
T细胞功能测定
T细胞增殖试验 细胞毒试验 细胞因子检测 皮肤试验
immunoassay,CLIA)
免疫印迹法(immunoblotting)
酶联免疫吸附试验(enzyme-linked
immunosorbent assay,ELISA)
双抗体夹心法 间接法 BAS—ELISA 酶联斑点试验（enzyme-linked immunospot
assay,ELISPOT)
免疫学检测技术的基本原理
掌握 检测抗原或抗体常用的方法、原 理及其应用、T 细胞功能测定的方法
熟悉 免疫印迹法、免疫PCR的原理、吞 噬细胞功能的测定方法
了解 免疫学检测方法的评估与选择
第一节 抗原或抗体的检测
抗原抗体反应的原理—特异性，可见性
抗原或抗体的检测方法
1.凝集反应－直接凝集，间接凝集
B细胞功能测定
【高质量】免疫学检测技术的基本原理PPT文档
如类风湿因子的测定等。
呈色反应 抗原抗体比例对反应现象的影响 缺点--非特异性荧光增加。 * 双抗体夹心法：用于检测抗原。 如类风湿因子的测定等。 可溶性抗原（血清蛋白、组织浸液等）与 用荧光素、同位素或酶等示踪物质 标记抗体 其检测的敏感度可达pg-ng/ml水平。 如肥达氏反应。 藻红蛋白（PE），显红色。 C 酶联免疫斑点试验（ELISPOT） B 免疫组化技术—检测组织中或细胞表面的抗原。 5．免疫印迹法（Western blotting） 1．免疫荧光技术(Immunofluorescence Technique) 对抗原进行定性、定量、定位检测。 用于定量测抗原。 其方法是先电泳、后扩散。 颗粒性抗原（RBC、细菌等）与相应抗体
1．免疫荧光技术(Immunofluorescence Technique)
用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待测标本的抗 原反应，，置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发出 荧光，借此对标本中的抗原作鉴定和定位。 （1）常用荧光素 异硫氰酸荧光素（FITC）， 显黄绿色。 免疫酶技术
主要用于定性检测抗原或抗体，抗原组成及两 种抗原相关性分析。
藻红蛋白（PE），显红色。 在一定量的抗体中分别加入递增量的抗原，经一定时间后形成免疫复合物。
免疫标记技术主要有三种基本类型： C 酶联免疫斑点试验（ELISPOT）
（2）方法 如ABO血型鉴定，细菌的鉴定、分型等。
（2）试管凝集试验：用于定量测抗体
*直接荧光法： 免疫学检测技术的基本原理
标记物质与抗体（或抗原）的化学连接未改变 可溶性抗原（血清蛋白、组织浸液等）与
用酶标记的抗体进行的抗原抗体反应。EIA 将抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性 相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。
免疫学检测技术的基本原理-精品医学课件
2．间接凝集反应
概念：将可溶性抗原/抗体先结合于一种
与免疫无关的颗粒状载体表面，成为致敏颗 粒，再与相应抗体/抗原结合，出现的凝集现 象。
载体颗粒：红细胞、乳胶颗粒、活性炭 颗粒等。
正向间接凝集反应如：类风湿因子的检测
可溶性 载体 抗原
抗体
间接凝集
反向间接凝集反应：若将抗体结 合于载体微球上检测抗原。
淋巴细胞转化试验 （形态计数法）
• 原理：人T细胞表面有PHA或ConA受体，T细 胞在体外受PHA或ConA的刺激后能转化为体 积较大、代谢旺盛、且能进行分裂的淋巴细胞， 以此测定T细胞的功能。
PHA刺激
48~72小时
mitogens small T lymphocyte
lymphoblast
免
疫 测
( Ag*-Ab)+ (Ag-Ab) 抗原抗体复合物
定
法
分离Ag*-Ab 和游离Ag*
(RIA)
示
测定Ag*-Ab和/或游离Ag*放射性
意
图
从标准曲线上读知含量
第二节 免疫细胞功能的测定
免疫细胞的分离与鉴定 免疫细胞功能测定
一、淋巴细胞的分离与鉴定
• 根据细胞的密度、粘附性能、表面标志 等，采用不同方法分离外周血单个核细 胞、淋巴细胞及不同亚群。
免疫荧光显微技术
间 接 免 疫 荧 光 法 示 意 图
抗核抗体(FITC-IgG）)
(2)酶免疫测定法（EIA):
常用酶：HRP、ALP • ELISA：双抗夹心法、间接法、竞争法等。
基本步骤
底物
显色
二抗 一抗
不同Ag
to detect Ab to detect Ag
免疫学检测法
免疫学检测法疗效评它们可用于有关免疫疾病的诊断、免疫学检测技术的用途非常广泛，价及发病机制的研究。
如对传染病、免疫增殖性疾病、免疫缺损病、超敏反应、自身免疫病、移植排斥反应肿瘤的免疫学检测，对诊断、治疗均有很大帮助。
此定量检查不仅推动了对各种外在医学生物学研究中对抗原性物质或细胞的定性、本章仅介绍常而且扩大免疫学与医学生物许多领域的联系。
免疫学现象的研究，用免疫学检测方法的原理，简要过程和实用意义。
抗原或抗体的检测第一节一、检测的原理对样品中的抗原或抗体借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象，进行定性、定量、定位的检测。
抗原抗体的结合就像酶与底物的结合，激．抗原与抗体的亲和力(affinity)1抗原决定素与其受体的结合一样不是化学的反应，而是非共价键的可逆的结合。
空间构型互补程簇和抗体分子可变区互补构型，造成两分子间有较强的亲和力。
度不同，抗原和抗体分子之间结合力强弱也不同。
互补程度高，则亲和力强。
此酸碱度和离子浓度对抗原和抗体分子上各基因的解离性和电荷特外，反应温度、高抗体与抗原决定簇之间的结合力大小可用亲合力来表示。
性也有重要的影响，即使抗原浓度很低时也有较多的抗体结合抗原亲合力的抗体与抗原的结合力强，形成免疫复合物。
．抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性2定性和定位检测比定位或定量的检测。
特点，对标本中的抗原或抗体进行定性、若有免疫复合物形成即用已知的抗体和待检样品混合，较简单，经过一段时间，则说就说明待检样品中有相应的抗原存在。
若无预期的现象发生，的现象发生，明样品中无相应的抗原存在。
同理也可用已知的抗原检测样品中是否有相应抗体。
以反应中加入抗原和抗体的浓度与形成免疫对抗原或抗体进行定量检测时，复物的浓度呈函数关系。
）根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原（或抗体）的含量：在（1一定的反应条件下，加入的已知抗体（或抗原）的浓度一定，反应产生的免疫复也就是抗体浓度一定量成正比。
第15章 免疫细胞标志与功能检测技术总结
细胞内大分子物质 的合成增加 T细胞形态变化
齐齐哈尔医学院免疫
同位素法 形态法
（1）形态学检查法
+
刺激物：常用PHA
PHA 无PHA
标本：外周血单个核细胞
37℃
72h
取培养细胞涂片染色镜检 观察细胞形态学改变
齐齐哈尔医学院免疫
未转化和转化淋巴细胞的形态特征
转化的淋巴细胞 未转化的淋巴细胞 淋巴母细胞 细胞大小(直径μm) 核大小、染色质 12-20 增大、疏松 过渡型 12-16 增大、疏松 6-8 不增大、密集
第三节 抗原提呈细胞的表面标志
抗原提呈类细胞表面标志
齐齐哈尔医学院免疫
CD1a,CD11c,CD83
一、单核-吞噬细胞系统
组织部位 骨髓 骨髓和血液 各种组织 （巨噬细胞）
熟悉
细胞名称 干细胞—单核母细胞—前单核细胞 单核细胞 组织细胞（结缔组织）,枯否细胞（肝） 破骨细胞（骨）、小胶质细胞（神经 组织）、
五、其他免疫细胞功能检测技术
六、免疫细胞表面标志和功能检测的临床 应用
齐齐哈尔医学院免疫
齐齐哈尔医学院免疫
掌握
第一节
免疫细胞的分离
一、外周血单个核细胞分离
二、淋巴细胞的分离
三、T、B细胞和T细胞亚群的分离 四、不同分离方法的评价
齐齐哈尔医学院免疫
一、外周血单个核细胞分离
掌握
外周血单个核细胞(perpheral blood mononuclear cells, PBMC)：包括淋巴 细胞和单核细胞。
对分离介质的要求
熟悉
1.对细胞无毒 2.基本等渗 3.不溶于血浆等分离物质 4.有要求的比重 2份6%聚蔗糖蒸馏水溶液+1份34% 泛影葡胺比重为1.077±0.002
免疫学检测原理
免疫学检测原理
免疫学检测是一种常用的生物学分析方法，用于检测体内的抗体或抗原。
其原理基于免疫反应，即抗原与抗体之间的特异性相互作用。
免疫学检测通常分为直接和间接检测两种方法。
直接检测中，样品中的抗原与标记有特定抗体的探针结合，形成抗原-抗体
复合物。
这种复合物可以通过各种方法来检测，例如流式细胞仪、免疫组化等。
间接检测中，样品中的抗原与特定抗体结合后，再与标记有第二抗体的探针结合。
这种方法通常用于检测抗体。
在免疫学检测中，探针的选择很关键。
探针可以是放射性同位素、酶、荧光剂或荧光素等，这些标记物能够产生可检测的信号。
通过测量标记物的信号强度，可以确定样品中的目标抗原或抗体的存在和数量。
免疫学检测方法的选择取决于具体的实验要求以及所需要检测的抗体或抗原类型。
常见的免疫学检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、西方印迹（Western blotting）和免疫组化等。
总的来说，免疫学检测是一种快速、敏感且特异的方法，被广泛应用于临床诊断、生物医学研究和药物开发等领域。
通过免疫学检测，可以获得关于免疫系统功能和疾病状态的重要信息，有助于了解疾病的发展机制和制定相应的治疗策略。
第15章-免疫学检测方法及其原理
第2节 免疫细胞及其功能的检测
一、免疫细胞数量的检测
流式细胞术
二、免疫细胞功能的检测
1．T细胞功能的检测 （1）淋巴细胞转化试验 （2）细胞毒试验 2．B细胞功能检测 B细胞增殖试验 抗体形成细胞测定
3．检测细胞免疫功能的皮肤试验 正常机体对特定抗原产生细胞免疫应答后，再用相同抗原 做皮肤试验，即出现以局部红肿为特征的迟发性超敏反应， 细胞免疫正常者呈阳性反应，而细胞免疫低下者则呈阴性 反应。
检测
未知 抗原 抗体
检测
二、特点
1．特异性 是抗原抗体检测的基本原理
2．可逆性 3．可见性
是抗原抗体亲和度大小的体现 是形成可见复合物的关键
三、常见的抗原抗体反应种类
1．凝集反应（agglutination）
颗粒性抗原（细菌或细胞）与相应抗体结合后，在 一定条件下，出现肉眼可见的凝集物，称凝集反应 ①玻片法 直接凝集反应 ②试管法 间接凝集反应 半定量试验，如肥达反应 将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关 的颗粒状载体表面，成为致敏颗粒 （免疫微球），再与相应抗体结合出 现凝集现象称为间接凝集反应。 定性试验，如血型鉴定
2．沉淀反应（precipitation） 可溶性抗原（血清蛋白、外毒素、组织浸出液、细菌 滤液等）与相应抗体结合，在一定条件下，形成肉眼可见的 沉淀物，称沉淀反应。
（1）单向琼脂扩散试验
（2）双向琼脂扩散试验 （3）对流免疫电泳 3．补体参与的反应（complement mediated reactions）
第15章 免疫学检测方法及其原理
学习目标
1．解释血清学反应的概念和特点 2．叙述抗原抗体检测方法及用途 3．简述免疫标记技术的原理和方法 4．简述T细胞功能检测的方法
免疫学检测技术的基本原理演示文稿
微粒与生物素、亲和素、酶
相结合，最后酶作用于荧光
b）
底物发光，通过检测荧光强
度判断未知抗原的含量。
现在是17页\一共有43页\编辑于星期六
e) 免疫组化技术
定位、定性、定量检测
现在是18页\一共有43页\编辑于星期六
②免疫荧光技术
现在是19页\一共有43页\编辑于星期六
③放射免疫测定
用放射性核素标记抗原或抗体进行的免疫测定。将同 位素的敏感性与抗原抗体结合的特异性结合起来，具有重 复性好、准确性高等优点，广泛应用于激素、药物等微量 物质的检测。常用的有131I、125I。
颗粒上的类风湿因子检测。
凝集反应常用于溶血性疾病的诊断：
+
病人的RBC 体内anti-Rh
+
由于抗体多属于IgG，分子量较小，抗 体与红细胞间的结合力不能克服细胞 间的排斥力，不出现凝集
体外加入抗 人IgG
出现凝集现象，叫直接库 姆试验
+
正常人O型血的 Rh+的RBC
患者血清内的游 离anti-Rh
T细胞受到特异性抗原或有丝分裂原刺激后发生增殖，可通过以下三种方法检测：
1. 形态计数法：活化细胞体积增大、形态不规则、胞质增多、细胞核松散及出现较多核仁 ；
2. 3H-TdR或125I-UdR掺入法：3H-TdR能掺入到合成的DNA中，用液体闪烁仪检测
样品的放射活性，特点是灵敏可靠，但须特殊仪器，易有放射性污染。
+
体外加入抗
人IgG
现在是13页\一共有43页\编辑于星期六
出现凝集现象，叫 间接库姆试验
2.沉淀反应
毒素、组织浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原与相应抗体反应后，出现肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应。沉淀 反应可在液体中进行，也可在半固体琼脂凝胶中进行。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
未知 抗原 抗体
检测
二、特点
1．特异性 是抗原抗体检测的基本原理
2．可逆性 3．可见性
是抗原抗体亲和度大小的体现 是形成可见复合物的关键
三、常见的抗原抗体反应种类
1．凝集反应（agglutination）
颗粒性抗原（细菌或细胞）与相应抗体结合后，在 一定条件下，出现肉眼可见的凝集物，称凝集反应 ①玻片法 直接凝集反应 ②试管法 间接凝集反应 半定量试验，如肥达反应 将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关 的颗粒状载体表面，成为致敏颗粒 （免疫微球），再与相应抗体结合出 现凝集现象称为间接凝集反应。 定性试验，如血型鉴定
三、分子生物学分型技术
1．聚合酶链反应与SSP分型法 2．PCR-SSO分型法 3．SBT分型法
第15章 免疫ห้องสมุดไป่ตู้检测方法及其原理
学习目标
1．解释血清学反应的概念和特点 2．叙述抗原抗体检测方法及用途 3．简述免疫标记技术的原理和方法 4．简述T细胞功能检测的方法
第1节 抗原和抗体的检测
一、原理
利用抗原抗体在体外特异性结合后出现的各种现象，可 对样品中的抗原或抗体进行定性、定位和定量的检测 已知 抗体 抗原
第2节 免疫细胞及其功能的检测
一、免疫细胞数量的检测
流式细胞术
二、免疫细胞功能的检测
1．T细胞功能的检测 （1）淋巴细胞转化试验 （2）细胞毒试验 2．B细胞功能检测 B细胞增殖试验 抗体形成细胞测定
3．检测细胞免疫功能的皮肤试验 正常机体对特定抗原产生细胞免疫应答后，再用相同抗原 做皮肤试验，即出现以局部红肿为特征的迟发性超敏反应， 细胞免疫正常者呈阳性反应，而细胞免疫低下者则呈阴性 反应。
2．沉淀反应（precipitation） 可溶性抗原（血清蛋白、外毒素、组织浸出液、细菌 滤液等）与相应抗体结合，在一定条件下，形成肉眼可见的 沉淀物，称沉淀反应。
（1）单向琼脂扩散试验
（2）双向琼脂扩散试验 （3）对流免疫电泳 3．补体参与的反应（complement mediated reactions）
第3节 细胞因子的检测
1．生物活性检测 2．免疫学检测法 3．生物学检测
第4节 HLA分型技术
一、血清学分型技术
1．HLA-Ⅰ类抗原的检测 HLA-A、B、C抗原型别鉴定常规使用微量补体依赖 淋巴细胞毒试验（CDC试验）。 2．HLA-DR、DQ抗原检测
二、细胞学分型技术
LA-Dw和HLA-DP抗原的特异性可用混合淋巴细胞反 应（MLR）检测。
4．免疫标记技术（immunolabelling technique） （1）免疫荧光法（immunofluorescence technique）
（2）免疫酶技术（immunoenzymatic techinques， EIA）
图15-5 ELASA操作原理示意图
（3）放射免疫测定法（radioimmunoassay，RIA）