自来水水质的微生物学检测实验设计

自来水水质的细菌学检查

一、文献综述

1.（1）水质细菌学检验的意义

生活自来水及其水源水等水体受到生活污水、工农业废水或人和动物粪便的污染后,水中的细菌数可大量增加,其中病原菌也随之增加引发传染危害人类健康因而水中细菌总数和大肠菌数量可反映水体受微生物污染的程度水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。故水的细菌学检验对了解水体受污染程度在流行病学和提供水质标准中有重要意义和价值它是评价水质污染程度的重要指标之一。

（2）总大肠菌群的检测意义

大肠菌群系：指一群在37°C、24小时能发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

测定的意义：大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除--般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在(如沙门氏菌、志贺氏菌等)，因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。它反映了水源是否被粪便污染，同时间接地指出水源是否有肠道致病菌污染的可能性。大肠菌群数系以每1g (或mL)检样内大肠菌群近似可能数MPN (the most probable number-简称MPN)表示

（3）耐热大肠菌群的检测意义

作为一种卫生指标菌，耐热大肠菌群中很可能含有粪源微生物，因此耐热大肠菌群的存在表明可能受到了粪便污染，可能存在大肠杆菌。但是，耐热大肠菌群的存在并不代表对人有什么直接的危害。作为粪便污染指标菌，耐热大肠菌群与大肠菌群、大肠杆菌相似，主要以其检出情况来判断食品是否受到了粪便污染。粪便是肠道排泄物，有健康者，也有肠道病患者或带菌者粪便，所以粪便中既有正常肠道菌，也可能有肠道致病菌(如沙门氏菌、志贺式菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌等)和食物中毒者。因此，食品既然受到粪便污染就有可能对食用者造成潜在的危害。通常情况下，耐热大肠菌与大肠菌群相比，在人和动物粪便中所占的比例较大，而且由于在自然界容易死亡等原因，耐热大肠菌群的存在可认为食品直接或间接的受到了比较近期的粪便污染。因而，耐热大肠菌群在食品中的检出，与大肠菌群相比，说明食品受到了更为不清洁的加工，肠道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。

耐热大肠菌群比大肠菌群能更贴切地反应食品受人和动物粪便污染的程度，且检测方法比大肠杆菌简单地多，而受到重视。

2.(1)细菌总数测定的原理与方法

原理：水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。由于重金属及其他有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用，因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污染。细菌总数主要作为判定被检水样污染程度的标志在水质卫生学检验中，细菌菌落总数(CFU)是

指lmL水样在营养琼脂培养基(LB培养基)中，于37C培养24h后所生长的腐生性细菌菌落总

数。它是有机物污染程度的指标，也是卫生指标。

方法：本实验采用标准平皿法对水样中细菌做计数,这是一种测定水中好氧的和兼性厌氧的异养细菌密度。由此法所得的菌落数实际上要低于水样中实际活菌的数目。一般规定，1ml 饮用水中总菌数不得超过100个。

(2)大肠菌群数测定的原理与方法

原理：大肠菌群系指-群能发酵乳糖，产酸产气,氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽抱杆菌。它反映了食品是否被粪便染，同时间接地指出食品是否有肠道致病菌污染的可能性。即中大肠菌群数系每100g (或m)检样大肠菌群最近似数(the most probable number简称MPN)示。方法：采用多管发酵法，以最近似数的方法来记载。此一数字是根据概率公式来计算,有大于实际数字的倾向,在增加每种稀释度的试管重复数后，可减小偏差。

二、实验采用标准

随着经济的发展，人口的增加，不少地区水源短缺，有的城市饮用水水源污染严重，居民生活饮用水安全受到威胁。1985年发布的《生活饮用水卫生标准》（GB5749－85）已不能满足保障人民群众健康的需要。为此，卫生部和国家标准化管理委员会对原有标准进行了修订，联合发布新的强制性国家《生活饮用水卫生标准》（GB5750－2006）（下称“新标准”）。GB5750--2006

（详见质量控制标准与检验方法标准）

质量控制标准与检验方法标准

（略，详见质量控制标准与检验方法标准.PDF）

生活饮用水卫生国标(GB5750- 2006)规定总大肠菌群(MPN/ 100ml或CFU/ 100mL)不得检出。细菌总数的定义及国标限值细菌总数是指1升水样在营养琼脂培养基中,于培养基24小时培养后,所生长的细菌菌落的总数。国标中规定1升水中细菌总数不得超过100个

采样方法

自来水:从学校各生活区（天健区楼栋）取样。先将自来水龙头用火焰灭菌，再开放水龙头使水流1-2分钟后，用无菌空瓶接取水样。

三、主要仪器设备

培养基及器皿、牛肉膏蛋白胨培养基、乳糖蛋白胨发酵管(内倒置小管)、10ml吸管一支、100ml量筒一支、2瓶50ml三倍乳糖蛋白胨培养液(内倒置小管)、10支5ml三倍乳糖蛋白胨培养液(内倒置小管)、伊红美蓝琼脂培养基、无菌空瓶、EMB，革兰染液。

培养基:营养琼脂培养基

四、实验技术路线

初发酵——平板分离——复发酵证实实验

初步发酵试验:三倍浓缩乳糖蛋白胨液体培养基，接种水样总量为300ml ( 100ml 2份，10ml10 份，12支发酵管)。37C培养24h ~ 48h。

平板分离: 将产酸产气及只产酸不产气(发酵乳糖)管接种EMB, 37C培养24h,取典型菌落作革兰氏染色镜检。

复发酵试验:革兰氏染色镜检为革兰阴性无芽胞杆菌，取该菌接种于普通浓度乳糖蛋白胨(每管接1~3个菌落), 37C培养24h,有产酸产气者即证明有大肠杆菌的存在。

实验流程图如下