产淀粉酶的芽孢杆菌筛选ppt课件
从土壤中筛选产淀粉酶的细菌菌1
从土壤中筛选产淀粉酶的菌株(四川化工职业技术学院食品1131)总述：查资料可知在土壤中从在多种可产淀粉酶的菌种，并且芽孢杆菌是不错的菌种，因此，采集土样，对土壤中的芽孢杆菌进行分离纯化，就可得到理想菌株。
在菌株的初选过程中采用涂布平板法，把配好的培养基灭菌后倒成平板，再把稀释好的土样涂布到平板上，置于适宜的条件下进行培养。
24h后对其进行鉴定，鉴定的方法是在培养好的菌株上滴加淀粉溶液，周围出现透明圈的为产淀粉酶的菌株，并且透明圈与菌落直径的比值越大，说明菌种越纯或菌株的生产性能越高。
然后再进行复选，复选时采用平板划线法或斜面划线法，挑取的菌落为透明圈与菌落直径比值较大的，进行多步筛选就可得到较纯的菌株。
实验流程待测数据：透明圈直径菌落直径摘要：查资料可知枯草芽孢杆菌能产生淀粉酶，因此从四川化工职业技术学院的土壤中筛选产淀粉酶的细菌菌株，利用五点取样采集土样，再用涂布平板法对菌株进行初步培养，在培养出的菌落周围滴淀粉溶液，对周围出现透明圈的菌落在进行平板划线培养，在地如淀粉溶液鉴定，对周围出现透明圈的菌落进行斜面划线培养，就可得到较纯的产淀粉酶的菌株。
引言：芽孢杆菌是人类发现最早的细菌之一。
早在1835年，Ehrenberg所描述的“Vibriosubtilis”即是现在大家熟悉的“枯草芽孢杆菌”，它是由Cohn于1872年正式命名的，现作为芽孢杆菌属(Bacillaceae)的模式菌株[1]。
从生物学特性来讲，枯草芽孢杆菌具有典型的芽孢杆菌特征，其细胞呈直杆状，大小(0.8-1.2)μm×(1.5-4.0)μm，单个，革兰氏染色阳性，着色均匀，可产荚膜，运动(周生鞭毛)；芽孢中生或近中生，小于或等于细胞宽，呈椭圆至圆柱状；菌落粗糙，不透明，扩张，污白色或微带黄色；能液化明胶，胨化牛奶，还原硝酸盐，水解淀粉，为典型好氧菌[2]。
1997年，Kunst F.等人首先完成了枯草芽孢杆菌的完整基因组序列测定，并将结果发表在《Nature》杂志上[3]。
微生物综合实验土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选及其淀粉酶活力的测定
微生物综合实验：土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选及其淀粉酶活力的测定土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选及其淀粉酶活力的测定姓名:李青嵘班级:生工102学号:1014200044同组组员:黄得凤同组组员:张旭霞摘要本实验通过90?水浴20min预处理，杀死无芽孢菌体，再以弱选择性淀粉培养基和稀释涂布平板法对土壤中产淀粉酶芽孢杆菌进行初步筛选，又通过分区划线法对初筛菌株进一步分离纯化，得到两株纯培养的芽孢杆菌。
并通过耐盐试验、明胶试验、糖发酵试验、VP试验、吲哚试验，等多项生理生化实验对筛选出来的菌种进行鉴定，鉴定结果均为蜂房芽孢杆菌。
进一步通过3，5-二硝基水杨酸显色法对菌种的淀粉酶活力进行鉴定，测定结果分别为10.68MMU，12.64MMU。
关键词:淀粉酶，芽孢杆菌，酶活测定1. 前言淀粉酶是催化淀粉水解的一类酶的总称，广泛存在于动物、植物和微生物中。
目前淀粉酶广泛应用多种领域，在发酵工业中淀粉酶可用于淀粉原料的液化及糖化工艺;在食品工业中淀粉酶可用于面包焙烤，使其体积更大，颜色更好，颗粒更柔软;在农业中淀粉酶可作为饲料添加剂，降解饲料中淀粉营养成分以利于动物吸收利用;此外，淀粉酶在医疗卫生、废料处理、纺织印染等领域都有广泛应用。
目前生产应用的淀粉酶主要来源于微生物，并集中在几种细菌和真菌中，尤其以芽孢杆菌所产的淀粉酶较多。
其原因首先芽孢杆菌属(Bacillus)中能产生淀粉酶的菌种较多;其次，芽孢杆菌属产的淀粉酶有较好的应用价值，如凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜热芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌产的淀粉酶具有耐热性;再次，芽孢杆菌应用历史悠久，广泛用于饲料添加剂，其安全性有保证。
本文主要从土壤中筛选产淀粉酶的芽孢杆菌，分离纯化，并进行酶活测定，从而获得有经济价值比较高的菌株。
2. 材料与方法2.1. 实验材料2.1.1. 土样的采集从广州大学B-8门前采集土样,g，每天加入2 g淀粉和10 ml水进行培养5天。
实验 土壤中产淀粉酶菌株的筛选ppt课件
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背景知识
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实验1 土壤中产淀粉酶菌株的筛选（1）
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实验目的
掌握菌种分离与筛选的方法 从土壤中筛选出能够合成分泌淀粉酶的微生物
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实验原理
自然界微生物种类繁多，有些微生物能够以淀 粉作为碳源进行生长繁殖，这是因为它们能够 合成分泌淀粉酶。
当能合成淀粉酶的微生物在含有淀粉的固体培 养基中生长时，会将淀粉酶分泌到菌体周围， 使菌落周围的淀粉水解成为小分子量的糊精、 聚糖和单糖。这些水解产物不能与碘作用，从 而在菌体周围形成透明圈。
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分离
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实验步骤
5.各组做好标记，置于30 ℃恒温培养48 h （倒置培养？？）
6. 产淀粉酶菌株的鉴定（下次课）
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6. 产淀粉酶菌株的鉴定
瓶皿上（点植法：用接 种环在固体培养基表面接触几点），同时用签字笔 按对应顺序对各单菌落进行标号。
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实验步骤
1. 筛选培养基的配制（已完成） 可溶性淀粉2 g，NaCl 5 g，牛肉膏5 g，蛋白胨
10 g，琼脂20 g，水1000 mL。
2. 倒平板（每组6个，每个平板10mL左右）
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实验步骤
3. 土样的采集
各实验室分别取三种不同环境的土样并记录当 时取样环境情况（1-2、3-4、5-6每两小组在同 一个地方进行取样），通常取离地面5～15cm 处的土壤。
菌落被挑起而不致破碎 菌落颜色多样，菌落正反面颜色常不一致 带有泥腥味
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产淀粉酶芽孢杆菌的筛选
酶学特性分析
总结词
通过测定产淀粉酶活性、酶学性质等指 标，对产淀粉酶芽孢杆菌进行深入分析 。
VS
详细描述
通过淀粉平板透明圈法等方法测定产淀粉 酶活性，了解其在不同条件下的酶活性能 表现。同时，通过酶学性质分析，了解产 淀粉酶芽孢杆菌所产淀粉酶的酶学性质， 如最适温度、最适pH值、热稳定性等指 标，为后续的应用提供理论依据。
生化特性分析
总结词
通过测定产淀粉酶芽孢杆菌对各类糖类的利用情况、酸碱指示剂的变色反应等指标，进一步鉴定其生 化特性。
详细描述
通过微量生化管实验，测定产淀粉酶芽孢杆菌对葡萄糖、蔗糖、乳糖等糖类的利用情况，观察其在不 同糖培养基上的生长情况。同时，通过酸碱指示剂的变色反应，观察产淀粉酶芽孢杆菌的代谢产物， 进一步鉴定其生化特性。
有机肥料
产淀粉酶芽孢杆菌可以与有机废弃物一起发酵，制成有机肥料，提供植物所需的营养元 素，同时改善土壤结构和肥力。
生物农药
产淀粉酶芽孢杆菌可以产生抗菌、抗病毒物质，抑制病原菌的生长和繁殖，减少植物病 害的发生和传播。
在环境保护中的应用
废水处理
产淀粉酶芽孢杆菌可以用于废水处理，通过 生物降解作用将废水中的有机物转化为无害 物质，降低废水对环境的污染。
菌种资源保护与利
用
加强产淀粉酶芽孢杆菌菌种资源 的保护和利用，建立菌种库和基 因库，为未来的研究和应用提供 丰富的资源保障。
感谢您的观看
THANKS
对初筛得到的菌株进行发酵条件优化和酶活检测，进一步筛选出具 有更高酶活力的菌株。
分子生物学方法
利用分子生物学方法对筛选出的菌株进行基因序列分析，了解其淀粉 酶基因的类型和结构，为后续的工业化应用提供理论依据。
土壤中产淀粉酶的芽孢杆菌的筛选及淀粉酶活力的测定教案
土壤中产淀粉酶的芽孢杆菌的筛选及淀粉酶活力的测定13级生技426摘要本实验从土壤中分离出能产淀粉酶的芽孢杆菌并对其进行鉴定、保存，实验中涉及菌株的分离纯化、菌株的形态学鉴定和生理生化鉴定，根据伯杰氏细菌学手册鉴定其种属。
实验中通过80℃水浴20min预处理，杀死无芽孢菌体，筛选出芽孢杆菌；再用稀释涂布平板法对芽孢杆菌进行初步筛选；又通过分区划线法对初筛菌株进一步分离纯化；最后用选择性淀粉培养基进行筛选，得到纯培养的产淀粉的芽孢杆菌。
最后并通过耐盐试验、明胶试验、糖发酵试验、VP试验、吲哚试验等多项生理生化实验对筛选出来的菌种进行鉴定。
关键词：淀粉酶芽孢杆菌生化鉴定一、引言芽孢杆菌属(Bacillus)是一类好氧或兼性厌氧，产生抗逆性内生孢子的杆状细菌。
多为腐生菌，主要分布于土壤、动植物体表及水体中。
由于芽孢杆菌属的细菌可以产生多种有用代谢产物，芽孢又是菌体度过不良环境的休眠体。
因此，在工、农业生产上有较高的应用价值。
菌体杆状，直或接近直，0.3 – 2.2X1.2 – 7.0微米。
多数运动，鞭毛典型侧生，形成抗热内生孢子。
在一个孢子囊细胞中，孢子不多于1个。
暴露与空气中时，不妨碍孢子的形成。
革兰氏反应为阳性，仅在生长早期为阳性、阴性。
有机体化能营养，利用多种底物进行严格呼吸代谢，严格发酵代谢或呼吸和发酵二者兼有的代谢。
在呼吸代谢中，最终的电子受体是分子氧，在一些种中可以用硝酸盐代替氧，大多数种产接触酶，严格好养或兼性厌氧。
淀粉酶是一种用途极为广泛的生物催化剂，可应用于面包制造业淀、粉的糖化和液化、纺织品脱浆、造纸、清洁剂工业、化学、临床医学的分析和制药业等。
淀粉酶家族包括α-淀粉酶，β-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶。
二、实验目的1．了解微生物分离纯化的原理及微生物分离纯化常用方法和技术；2．掌握从土壤中筛选产淀粉酶菌株的原理及方法；3．掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力测定的原理及方法；4．培养学生自行设计实验流程、综合分析解决问题及判断实验结果的能力；5．对所学习过的微生物实验方法进行综合技能训练；6．从不同环境土壤样品中筛选出能产淀粉酶的芽孢杆菌，并分析比较各产淀粉酶菌株的产淀粉酶活力及总结各芽孢杆菌在土壤中的分布情况。
淀粉酶的生产精品PPT课件
淀粉是什么？
淀粉是由许多葡萄糖分子以α-1， 4或α-1，6糖苷键连接而成的大分 子物质。淀粉有直链淀粉和支链淀 粉之分。
淀粉酶是什么？
淀粉酶属于水解酶类，是催化淀 粉、糖原、糊精中糖苷水解的一类酶 的统称。
根据水解淀粉的方式不同，主要 的淀粉酶有α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡 萄糖淀粉酶、脱支酶、环糊精葡萄糖 转移酶等。
1.2 α-淀粉酶的水解反应
淀粉在α-淀粉酶的作用下很快 被切割成分子较小的糊精、低聚糖、 麦芽糖、葡萄糖等，引起粘度下降， 对碘呈色反应为篮－紫－红－无色， 又叫液化酶。
水解直链淀粉，首先将淀粉降解为 寡糖、麦芽三糖和麦芽糖，然后将寡 糖、麦芽三糖进一步降解为麦芽糖和 葡萄糖。
水解支链淀粉，由于不能水解α1.6糖苷键，产物除麦芽糖、少量葡 萄糖外，还有带α-1.6键的小分子极 限糊精。
种子瓶培养（三角瓶） 麦麸玉米粉培养基，32-34℃，
70-72h，培养至长出大量菌丝及黄 绿色孢子。
种曲培养（曲盒） 培养基与种子瓶相同，接种量0.5-
1.0％，料层厚1cm，培养3天。
厚层通风培养 麦麸谷壳培养基接种量0.5％，34-
36℃，28h。
产品 培养好的麸曲直接烘干即为工业级
粗酶，水浸醇沉后粉碎加糖可作为助 消化药物。
（三）β-淀粉酶为外切酶 （四）作用淀粉时还原性增加，但粘度不易下降，糊
化缓慢 （五）β-淀粉酶较α-淀粉酶分子量大 （六）水解作用：
1、直链淀粉：可以完全水解成麦芽糖 2、Leabharlann 链淀粉：麦芽糖和大分子β-极限糊精
2.3 植物β-淀粉酶的提取
（一）麦麸提取 β-淀粉酶
（二）从甘薯淀 粉废液中提取 β-淀粉酶
产淀粉酶芽孢杆菌的分离和鉴定
孢杆 菌 ， 枯 草 芽孢 杆 菌 的产 淀粉 酶 能 力优 于蜡 样 芽孢杆 菌 。 关键词 ： 芽孢 杆 菌 ； 淀粉酶 ； 分 离； 鉴 定
Ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ａｍ ｙ ｌ ａ ｓ ｅ －Ｐｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｉ ｎｇ Ｂａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ Ｗ ＡＮＧ Ｌｅ ｉ ．ＣＨＥＮ Ｙｕ － ｆ ｅ ｉ ．ＹＡＮＧ Ｌ ｉ ｕ
产淀粉酶芽孢杆菌的分离和鉴定
王磊 ， 陈字飞 ， 杨柳
（ 吉林 工商学 院 食 品工程学院 ， 吉林 长春 １ ３ ０ ５ ０ ７ ）
摘
一
要： 从土壤 中分 离筛选出产淀粉 酶的茵株 ， 经淀粉培养基初 筛后 ， 采用Ｄ Ｎ Ｓ法对发酵提取的粗酶液进行 总酶活和
淀粉酶活力的测定， 通过 形态观察和 生理生化反 应对筛出的菌株进行鉴定。 结果表 明： 分 离到 ４株产淀粉酶 芽孢杆
实验八土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选及淀粉酶活力的测定
本项目是在2006年已通过专家组论证的综合性 实验项目“土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的分离纯化、 初步鉴定及菌种保藏”的基础上再增添了“对所 分离到的各菌株进行摇瓶发酵检测其淀粉酶活力、 并结合生态环境对各菌株的淀粉酶活力进行比较
分析”等内容。
二、涉及的内容或知识点
①土样的无菌采集及土样的生态环境调查；②培养基的制备 及灭菌；③无菌操作、接种及微生物的培养技术；④采集的 各环境土壤样品中产淀粉酶芽孢杆菌的的分离（采用稀释倒 平板法结合选择培养基分离技术等多种方法分离微生物）； ⑤微生物的纯化技术（采用平板划线技术纯化菌株）；⑥微 生物的形态学检查（包括对已纯化的各菌株进行革兰氏染色 及形态观察、芽孢染色、菌落特征观察）；⑦通过多项生化 试验对分离到的各菌株进行初步鉴定（主要包括耐盐试验、 淀粉水解试验、V.P试验、吲哚试验 、糖发酵试验、柠檬酸 盐试验及明胶液化试验等）；⑧菌株的摇瓶培养技术；⑨发 酵液淀粉酶活力的测定；并结合生态环境对各菌株的淀粉酶 活力进行比较分析；通过数据统计分析不同环境土样的产淀 粉酶芽孢杆菌的分布情况 ⑩ 菌种的保藏
出研究中的不足、改进的地方及尚待进一步解决的问题、自己
的收获和体会等。
四、实验的基本框架
调查研究及查阅充分的文献资料 环境 采集不同环境土壤的土样 各环境的土壤样品悬液制备 的分离培养 ）及淀粉水解试验 验以初步鉴定该菌株 确定采集样品的生态 土壤的保存运送 土壤悬液的热处理 对分离到的单菌
采用稀释法并结合选择培养基分离法进行产淀粉酶芽孢杆菌 菌株的进一步纯化
2、实验方案要求
写出实验的目的要求、实验原理、材料与方法（包括所需药
品和仪器设备、具体的实验步骤、实验数据的处理方法等）、 注意事项及可能存在的问题、减少这些问题出现的措施和办 法、预期结果及参考文献。
产淀粉酶菌株的分离和筛选
产淀粉酶菌株的分离及筛选摘要：【实验目的】1学习从土壤等环境中分离微生物的技术。
2了解产淀粉酶菌株的分离方法。
3观察产淀粉酶菌的形态特点，并分析不同条件下酶的特性。
【实验原理】淀粉酶广泛在于动植物和微生物中，是最早用于工业生产并且迄今仍是用途最广、产量最大的酶制剂.。
【实验目的】1学习从土壤等环境中分离微生物的技术。
2了解产淀粉酶菌株的分离方法。
3观察产淀粉酶菌的形态特点，并分析不同条件下酶的特性。
【实验原理】淀粉酶广泛在于动植物和微生物中，是最早用于工业生产并且迄今仍是用途最广、产量最大的酶制剂产品之一。
淀粉酶种类繁多，特点各异，可应用于造纸、印染、酿造、果汁和食品加工、医药、洗涤剂、工业副产品及废料的处理、青贮饲料及微生态制剂等多种领域。
在酿造发酵工业如酒精生产、啤酒制造、发酵原料液化及糖化工艺过程均有重要价值，如添加高温淀粉酶可提高啤酒质量，中温蒸煮条件下添加适当耐高温a-淀粉酶可提高糖化率及酒精出酒率，降低甲醇含量，提高酒精质量，同时可提高设备利用率等。
淀粉酶在面包焙烤过程中分解淀粉产生的可溶性糖被酵母转化成酒精和CO2气体，不仅能增加面包体积，同时还有改善面包表皮色泽、提高面包软度、延长保质期的作用，对面包冷却和冷冻也有重要作用。
由于微生物数量多，繁殖快，工业生产主要采用向生物发酵法大量生产该制剂。
本实验从土壤中分离的淀粉酶产生菌从温度、pH值两方面探讨其产酶的最适条件。
通过平板培养法，从样品中初步分离出淀粉产生菌株，再通过单菌落培养从而获得比较纯的菌种。
然后对其进行二级扩大培养，最终测定液体培养基菌液中被酶分解得到的葡萄糖含量来讨论菌株的最适条件（温度、pH值等），为工业街道淀粉酶及饲料添加剂提供候选菌株。
【仪器、材料和试剂】（一）仪器1、恒温培养箱2、高压蒸气灭菌锅3、摇床4、恒温水浴锅5、生物显微镜6、电子天平（二）材料样品一：存放过久发霉的麦芽和周围粉尘样品二：米饭生产线附近草坪上的土壤（三）试剂与器材1、锥形瓶（50ml、100ml、500ml等）2、培养皿（25个左右）3、大小试管（30个左右）4、移液枪（1000μl、100μl）及大小枪头若干5、酒精灯、接种针等6、牛肉膏或酵母膏7、蛋白胨8、NaCl9、可溶性淀粉10、琼脂11、卢戈氏碘液11、草酸铵结晶紫12、碘液13、95%酒精14、蕃红染色液15、蒽胴试剂（现配）16、葡萄糖标准液(0.1 g/L)实验环节1 产淀粉酶菌株的初筛【实验步骤】1、称取一个样品5g，倒入盛有45mL无菌水带塞的三角锥形瓶中，摇床振荡30min制成样品悬液记为10-1土壤稀释液；2、用无菌移液管吸取10-1的土壤悬液0.5mL，放入4.5mL无菌水中吹吸数次混匀即为10-2稀释液，照此方法分别制成10-2~10-9稀释液；3、分别取10-5、10-6、10-7、10-8、10-9土壤稀释液各0.5mL，涂布于平板培养基表面，一个稀释度涂布接种2块平板，37℃下恒温培养16h ；4、待长出菌落后滴加卢戈氏碘液，挑取有明显淀粉水解圈的单菌落，作为初筛菌株。
高产淀粉酶菌株的分离鉴定及酶学性质研究PPT课件
06
结论
研究成果总结
确定了该菌株的最佳生长条件，包括温度、pH 和培养基成分。
通过基因工程技术对菌株进行改造，提高了淀粉酶的 产量和性能。
成功分离出高产淀粉酶的菌株，经过鉴定为革 兰氏阳性菌。
酶学性质研究表明，该菌株产生的淀粉酶具有较 高的活性和稳定性，适用于多种淀粉类物质的降 解。
对实际生产的指导意义
针对市场需求，研究开发具有 更高活性和稳定性的淀粉酶突 变体，提高产品的竞争力。
谢谢观看
菌株分离方法
采用适当的培养基和培养条件， 通过划线分离、涂布分离、稀释 分离等方法，将菌株从样本中分 离出来。
分离得到的菌株鉴定
形态学鉴定
观察菌落的形状、大小、颜色、 质地等特征，以及菌体细胞的形 态、染色反应等，初步确定菌株 的分类地位。
生化鉴定
通过测定菌株对碳源、氮源、维 生素等物质的利用以及产生的代 谢产物，进一步确定菌株的分类 学特征。
高产淀粉酶菌株的分离鉴定及酶学 性质研究ppt课件
目录
• 引言 • 高产淀粉酶菌株的分离 • 酶学性质研究 • 菌株遗传特性研究 • 实验结果与讨论 • 结论
01
引言
研究背景与意义
淀粉酶在食品、造纸、纺织等工业领 域具有广泛应用，因此高产淀粉酶菌 株的分离鉴定及酶学性质研究具有重 要的实际意义。
酶活力的测定
在确定的发酵条件下，测定菌株产淀粉酶的 活力，为后续的酶学性质研究提供依据。
03
酶学性质研究
酶活力的测定
酶活力定义
酶活力是指酶催化特定化学反应的能 力，通常以单位时间内底物消耗或产 物生成的量来表示。
酶活力测定方法
通过在一定条件下，测定酶促反应的 初速度来计算酶活力，常用的方法有 紫外可见吸收法、荧光法、电化学法 等。
α-淀粉酶的生产工艺-PPT课件
6、煮沸1min
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7、实验现象
12
3
二、PH对酶活性的影响 ：取三支洁净试管编上号分别按下表中序 号1至7的要求操作。 有砖红色沉淀 无砖红色沉淀 无砖红色沉淀
The end 谢谢 本次课程到此结束
谢谢
实验器材
• 1.菌种：枯草芽孢杆菌JD-32生产法 • 2.仪器：培养皿、试管、发酵罐、灭
菌锅、振荡培养箱、高速冷冻离心机
工艺流程
保藏菌种 斜面活化 摇瓶种子 厚层通风
培养
发酵
种子罐扩 大培养
沉淀
粗制品
烘干
收集滤液
过滤 抽提
麸曲
离心 洗涤沉淀
风干
粉碎
精制品
实验步骤
1.培养基 的制备 与灭菌
发酵培养基：蛋白胨5g，酵母膏2.5g，葡萄糖0.5g,可溶性淀粉2 . 5g，KH2PO4 1g，MgSO4.7H2O 0.25g，CaCl2.2H2O 0.1g， H2O 500mL，pH7.0。分装于100mL锥形瓶中，每瓶50mL， 121℃灭菌20min。
2.接种与 产酶培
养
3.提取
将菌种接种于培养基斜面，35℃培养三天，然后转接到摇瓶种子培养基 ，摇瓶培养一定时间，当菌体进入对数生长期时，以0. 5%接种量接入固体培 养基（麸皮、米糠、豆饼粉、火碱、水；ph=7左右，常压汽蒸一小时，冷却到 38～40℃）在厚层通风制曲箱内，通风保持37～42℃，培养48小时出曲风干 。
6. 固体发酵的培养时间较长，其产量及产能常低 于液体发酵。
7. 萃取的产物常因黏度高不易大量浓缩。 而对于 发酵罐深层培养具有生产周期短、产量高、效益 大等优点故选用层发酵法生产α-淀粉酶。
探究影响淀粉酶活性条件
产淀粉酶的芽孢杆菌的分离和筛选(1)
从土壤中分离和筛选产淀粉酶活性的芽孢杆菌及部分鉴定试验一、实验目的1、通过本实验的学习，学习掌握从环境中分离产淀粉酶菌株以及菌株初步鉴定的方法；2、巩固微生物分离纯化、细菌生理生化鉴定,对所学习过的微生物学实验方法进行综合技能训练；3、培养综合利用微生物学、生物化学等相关知识，自行设计、实施并判断实验结果的能力。
4、根据所学知识自主设计实验方案，在实验方案通过审核后组织实施，最终要求获得产淀粉酶的菌株。
二、实验原理1、土壤中含有各种微生物，其中产淀粉酶的芽孢杆菌含量在不同土壤中含量也不同，因此实验前进行预埋工作，能使土壤中产淀粉酶的细菌含量增加。
待实验前取样即可。
2、在只用淀粉充当碳源的选择培养基中，只有能产生淀粉酶利用淀粉的菌体能成为优势菌种。
在淀粉选择培养基中，产淀粉酶的菌种可以得到富集及分离。
3、芽孢是菌体生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，芽孢最主要的特点就是抗性强，对高温、紫外线、干燥、电离辐射和很多有毒的化学物质都有很强的抗性。
它帮助菌体度过不良环境，在适宜的条件下可以重新转变成为营养态细胞。
细菌富集一段时间后，生长环境不利，会产生芽孢，再在80-90℃温度下杀死菌体，可使芽孢得到富集。
4、芽孢杆菌属的共同特征是：革兰氏阳性；接触酶阳性；水解淀粉；VP试验阳性；不产生吲哚；苯甲氨酸不脱氨；分解酪素；不分解酪氨酸；不产生二羟丙酮；营养体的最高生长温度大约从25℃到75℃以上；最低生长温度大约5℃到45℃；生长最低pH值，从—8到2左右；耐盐范围从低于2%的NaCl到25%NaCl；营养明胶（22℃）7天内液化1厘米或1厘米以上。
枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌在糖发酵试验用阿拉伯糖，木糖和甘露糖代替葡萄糖可产酸；作为营养生长的最低限培养基是无维生素的，但含有葡萄糖、柠檬酸盐和一个氨态盐作为唯一的碳源和氮源。
5、在含有淀粉的鉴别培养基的平板上，具有产淀粉酶能力的芽孢杆菌，水解淀粉生成小分子糊精和葡萄糖，在淀粉平板上菌落周围出现水解圈，但肉眼不易分辨，滴加碘液，未水解的淀粉呈蓝色，水解圈无色。
a-淀粉酶产菌株筛选实验
a-淀粉酶高产菌株的分离鉴定及固定化枯草芽孢杆菌是革兰氏阳性细菌，是a-淀粉酶高产菌株之一，其菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。
需氧菌。
可利用蛋白质、多种糖及淀粉，在遗传学研究中应用广泛。
其芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。
广泛生长在中性的的含淀粉多的环境中，如富含淀粉的面粉厂、土壤等。
淀粉酶是一种用途极为广泛的生物催化剂，可应用于面包制作业、淀粉的糖化和液化、纺织品脱浆、造纸、清洁剂工业、化学、临床医学的分析和制药业等。
淀粉酶家族包括α- 淀粉酶、β- 淀粉酶和葡萄糖淀粉酶。
α-淀粉酶为内切酶，以无规则的方式切开淀粉分子内部的α- 1，4 糖苷键，而使淀粉生成糊精和低聚糖，是一种钙离子依赖性酶。
β- 淀粉酶从非还原性末端顺次切下麦芽糖，为外切酶。
葡萄糖淀粉酶是一种作用于α- 1，4 糖苷键的外切酶，从非还原糖末端切下葡萄糖分子。
a-淀粉酶是一种胞外酶，由于酶纯化等操作往往导致酶活性和稳定性都受影响，而利用细胞固定化可以很好的解决这一问题，其中α -淀粉酶的固定化交联法是目前比较理想的方法。
另可尝试探索用一定浓度的凝胶包埋枯草芽孢菌或用吸附法、交联法将枯草芽孢杆菌固定化，使菌体不能流动而酶可以存在反应液里。
凝胶柱底部可选用一定大小的半透膜使酶和淀粉不能流出反应凝胶柱，而产物可以流出。
【实验一】一、a-淀粉酶生产菌种的分离与培养、筛选二、【实验原理】大多数枯草芽孢杆菌好氧，最适生长温度为32℃,PH为7.2，转速为140r/min，接种量为9％，芽孢率生长最适温度36℃，最适PH为7.2，最适转速120r/min。
在以淀粉为碳源的固体培养基上用划线法分离纯化出产a-淀粉酶的菌株，根据是否可产生透明圈来筛选。
透明圈越大，产酶能力越强。
三、【实验仪器和材料】1、试剂：0.1%吕氏(Loeffier)美蓝染液配制方法：A 液：美蓝(methylene blue, 又名甲烯蓝)0.3 g, 95%乙醇30 ml；B 液：0.0l% KOH l00ml。
实验 土壤中产淀粉酶菌株的筛选ppt课件
在原培养皿表面喷洒稀碘液，记录有水解圈的单菌 落，与此对应找出合成淀粉酶的菌株1-2株。
注意：未分离得到菌落的小组可与其他组合作，挑 取其他组鉴定得到的菌落进行后续实验（实验报告 中注明使用哪一组的菌落）。
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7. 产淀粉酶菌株的增殖培养
液体培养基分装：10ml/瓶，每个菌株对应1瓶（ 每组1-2瓶，参考鉴定结果）
液体培养基接种：用接种环从固体培养基表面上 沾取少许菌苔，将接种环在液体培养基内振摇几 次即可。
做好标记，放入摇床中振荡培养24h。
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8. 产淀粉酶菌株的纯化——平板划线法
灼烧接种环，冷却后用接种环挑取少量菌苔
左手持平皿，将皿盖打开一条缝隙，右手将接种 环伸入皿中，划3-4条平行线
灼烧接种环，60°旋转平皿，划线（注意：后一 区要求与前一区首尾相连，但不得与其他区域搭 在一起）
实验结束后请各组同学务必与实验老师处签到后方 可离开，否则记为缺勤
最后一组同学使用完超净台后，需将台内废液、使 用过的枪头等清理干净，移液枪调回最大量程，并 用酒精棉球将台面擦拭干净后，打开紫外灯照射。
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实验报告：实验目的、实验原理、实验步骤 （注意事项）、实验结果、思考题
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系列实验内容
实验1 土壤中产淀粉酶菌株的筛选 （1、2） 实验2 产淀粉酶菌株的诱变剂量选择 实验3 紫外诱变剂突变菌株的初筛 实验4 紫外诱变剂突变菌株的复筛 实验5 高产淀粉酶生产菌株的稳定性及淀粉酶
活力测定
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实验步骤
1. 筛选培养基的配制（已完成） 可溶性淀粉2 g，NaCl 5 g，牛肉膏5 g，蛋白胨
10 g，琼脂20 g，水1000 mL。
活性芽孢杆菌的分离鉴定ppt课件
实验材料与仪器 4
1、实验材料：河北大学生科楼院前土壤
2、仪器设备：高压蒸汽灭菌锅、培养皿、培养基分装器、PH试 纸、移液管、吸耳球、玻璃棒、量筒、三角刮、试管、试管架、 酒精灯、电子天平、显微镜、三角烧瓶、洗瓶、接种针、接种环 、双层瓶、擦镜纸、德汉氏小管、直尺、记号笔等。
诱变箱：微波炉（E30E-3）
测定淀粉酶的活性可以把待测菌株种在淀粉培养基表面，经培养后测定 透明圈与菌落直径的比值（H/C值）大小来衡量淀粉酶活力高低。
初筛是指从大量的菌落中随机挑取进行摇瓶试验并通过检测得到一些较 优菌株；复筛是指将初筛得到的较优菌株再进行多次摇瓶实验验证其效 价和传代稳定性，并从中得到一两个或少数几个最优的菌株。
强的菌株。稀释菌液并涂布到淀粉培养基平板上，37℃下过夜 培养，分别测水解圈的d0 /d1值，将正突变的菌种接种到种子
培养基瓶中35℃培养12h。然后以5%的接种量接种于发酵培养 基上，37℃，160r/min培养48h。发酵后24h补加碳酸钙。离
心(4000r/min,20min),收集上清液即为待测粗酶液。
四活性菌株的鉴定将菌接种至蛋白胨水培养基中37下在培养液中加入乙醚12ml静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面此时沿管壁缓慢加入510滴吲哚试剂加入吲哚试剂后切勿摇动试管以防破坏乙醚层影响结果观察如有吲哚存在乙醚层呈现玫瑰红色此为吲哚试验阳性反应否则为阴性反应阳性用阴性用表示
活性芽孢杆菌的分离、 鉴定与1 育种
引言 2
芽孢杆菌能产生多种消化酶，帮助动物对营养物质的消化吸收。芽孢 杆菌具有较强的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，同时还具有降解饲料 中复杂碳水化合物的酶，如果胶酶、葡聚糖酶、纤维素酶等
而淀粉酶是最早用于工业生产并且迄今仍是用途最广、产量最大的酶 制剂产品之一。淀粉酶种类繁多,特点各异,在造纸、印染、酿造、果汁 和食品加工、医药、洗涤剂、工业副产品及废料的处理、青贮饲料及 微生态制剂等多种领域具有广阔的用途。现在淀粉酶主要来源于植物 和微生物并通过发酵完成生产，因此筛选出高产、稳定的淀粉酶产生 菌是淀粉酶生产的头等大事。
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实验目的
学习掌握从环境中分离产淀粉酶菌株以及 菌株初步鉴定的方法
目的
获得产淀粉酶的菌株并对其进行初步的鉴 定
培养综合利用微生物学、生物化学等相关 知识，自行设计、实施并判断实验结果的 能力
巩固微生物分离纯化、细菌保藏等技能， 对所学习过的微生物学实验方法进行综合 技能训练
初筛
在单菌落处滴加碘液，挑取有透明圈 的单菌落划线分离，在37的培养箱中 培养2天。
鉴定
1、将单菌落点种落接到淀粉平板上纯培养，在37摄氏 度培养2天。
2、在培养后的平板上滴加碘液，用直尺测量透明圈 的大小。
实验材料 玻璃器 皿`
烧杯（500ml） 锥形瓶（250ml）
培养皿 涂布棒 移液枪
试管
其他设备及仪 器`
超净 工作台、生化培养箱、高压蒸 汽灭菌锅、水浴锅、培养接种器具，
等
实验原理
一
二
三
产淀粉酶的芽 孢杆菌含量在 不同土壤中含 量也不同，实 验前进行预埋 工作，能使土 壤中产淀粉酶 的细菌含量增 加。待实验前 取样即可
在只用淀粉 充当碳源的 选择培养基 中，只有能 产生淀粉酶 利用淀粉的 菌体能成为 优势菌种， 从而得到富 集
细菌富集一 段时间后， 生长环境不 利，会产生 芽孢，再在 80-90 温度 下杀死菌体 ，可使芽孢 得到富集
五
在已确定的芽 孢杆菌情况下 ，在菌落处滴 加碘夜来观察 透明圈情况。
配无菌水，并将其分装 到7个试管中,每只9ml 。（7个管）
实验材料
试验样 品处` 理
实验前选取淀粉密集的地方（面粉厂附近）取样品土壤， 用塑料袋将样品保存好，留做实验之用。
培养` 基
1、富集培养基： 10g的可溶性淀粉，蛋白胨10g， 酵母膏 3g/L、Nacl 2g、
蒸馏水1000ml (2倍浓缩100ml/500ml锥形瓶)
25g/L NaCl5g/L PH7.2—7.4