医学微生物学实验：脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定
脓汁和粪便标本中病原菌检测实验报告二
脓汁和粪便标本中病原菌的检测年级专业：14临床输血学号： 3140704004姓名：宁立军组别：第七组合作者：牛恺文黄可秀朱晋辉实验室：第六实验室指导老师：罗军实验的得分：一、实验目的通过革兰氏染色并在油镜下观察细菌形态结构、细菌的生化反应和细菌的血清学反应等手段区别和鉴定脓汁标本中和粪便标本中细菌，检测病原微生物，并进行细菌药物敏感性试验。
二、实验器材1器材接种环接种针打火机马克笔酒精灯电热恒温培养箱物显微镜电炉试管（带棉塞）称量纸药勺牛皮纸橡皮筋尺子锥形瓶高压蒸汽灭菌器镊子玻片吸水纸2 试剂药品普通营养琼脂培养基蒸馏水脓汁标本粪便标本石蜡油生理盐水结晶紫卢戈碘液 95%乙醇稀释复红葡萄糖微量发酵管（2支）乳糖微量发酵管（2支）青霉素抗菌素纸片链霉素抗菌素纸片庆大霉素抗菌素纸片兔血浆福氏志贺菌诊断血清三、方法与步骤1培养基制备称取一定量的肉汤培养基，至于三角烧瓶中，加入适量的蒸馏水，煮沸一次，趁热分装；称取一定量的营养琼脂培养基，至于三角烧瓶中，加入适量的蒸馏水，煮沸三次（煮至刚刚冒泡，立刻置于台面，半分钟后再煮），使完全溶解，趁热分装。
（平板培养基：以无菌操作，倾注平皿10ml，琼脂完全凝固后，平板倒放，4℃冰箱保存备用。
斜面培养基：培养基趁热斜放，培基不超过试管长度的2/3，琼脂凝固以后，4℃冰箱保存备用。
）贴上标签后灭菌使用。
2空气与人体体表细菌学检查根据空气中细菌气溶胶粒子，在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培养基表面，培养以后，计数菌落形成单位（CFU），了解空气的污染情况。
平板盖打开，盖朝下放在平板旁，琼脂平板暴露15分钟即可。
在普通平板上接种手指上的细菌。
第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。
3细菌分离培养接种前，接种环烧灼灭菌。
取标本在平板表面上方密集涂布5～10 mm²。
烧掉接种环上多余的标本。
冷却后，应用分区划线分离法，将脓汁标本接种于营养琼脂平板（2份），粪便标本接种于伊红美蓝平板（2份）。
实验5 金黄色葡萄球菌的检验
实验5 金黄色葡萄球菌的检验1 目的和要求（1）掌握金黄色葡萄球菌的检验方法（2）了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理2 基本原理金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。
此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素，食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。
因此，检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。
绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热的DNA酶。
3 实验材料3.1 检样乳与乳制品（如奶粉、消毒乳）、肉制品、饮料3.2 菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。
3.3 培养基7.5%氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基3.4 试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。
3.5 仪器与其他用具无菌吸管（1mL、5、10）、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、均质器、恒温箱等。
4 检样程序5 操作步骤5.15.1.1样品的处理称取25 g 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min。
若样品为液态，吸取25 mL 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。
5.1.2 增菌和分离培养5.1.2.1 将上述样品匀液于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
金黄色葡萄球菌检验
至少观察6h；
☞凝固为阳性。 ☺用阳性表皮菌做对照试验，观察结果。（不凝固）
兔血浆配制：将小支试剂加入粉剂瓶中，摇匀即可。现配现用。
革兰氏染色步骤：
涂片—— 火焰固
定——结晶紫初染——
水洗—— 碘液媒染——
乙醇脱色—— 水洗——
吸干—— 番红或沙黄复 染—— 水洗—— 干燥— — 镜检
• 涂片：在载玻片中央滴一滴生理盐水，用
无菌操作法挑取菌种于生理盐水中，调匀
并涂成薄膜。注意：生理盐水不宜过多；
涂片必须均匀。
• 火焰固定：载玻片通过火焰1 ~ 2 次固定，
不可过热，以载玻片不烫手背为宜。
• 结晶紫初染：涂片置于水平位置。涂片薄
谢 谢
7.5%氯化钠肉汤
分离
从阳性增菌液中用接种环取
1环 BP平板，划线 18~24h或45~48h 1环 血平板，划线 18~24h
36℃±1 ℃
培养
血平板 BP平板
开始处
开始处
平板划线示意图
菌落特征：黑色或灰 色，圆形，光滑凸起， 湿润，周围有一浑浊 带，在其外层有一透 明圈
菌落特征：金黄色， 有时也为白色，大而 凸起，圆形，不透明， 表面光滑、湿润，周 围有透明溶血圈。
从阳性血平板或BP平 板上挑取典型菌落，营 养琼脂斜面划线
于36℃±1℃培养18~24h
从血平板或BP平 板上挑取典型菌落， 加入脑心浸出液 （BHI）肉汤
从血平板或BP平 板上挑取典型菌 落，染色
血浆凝固酶试验
☞用长滴管将新配制的兔血浆移入灭菌小试管中；
☞用吸量管移取0.2~0.3mL脑心浸出液（BHI）肉汤
脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验报告
2016年秋季学期微生物学实验报告1、了解医学微生物学主要的研究方法和手段，掌握基本技能和基本原理。
2、熟悉常见病原性球菌及常见肠道致病菌的检查程序，掌握各检查实验操作。
3、了解脓汁和粪便标本中病原菌的检测的临床应用及临床意义。
4、熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。
5、熟悉抗生素对于不同细菌的作用机理。
6、树立牢固的无菌观念。
二、实验器材：1、培养基：营养琼脂平板、伊红美兰平板、斜面、营养肉汤、半固体琼脂2、标本：脓汁标本、粪便标本、空气细菌培养物、手指皮肤细菌培养物、细菌分离培养物、斜面培养物、营养肉汤培养物、药敏试验培养物3、器材：1）培养基的制备：天平、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、试管、试管架、刻度吸管、洗耳球、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、干粉培养基、酒精灯、火机。
2）细菌的分离培养：碘酒棉球，酒精棉球、眼科镊子、接种环。
3）细菌的纯培养: 接种环。
4）细菌的形态学检查：生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、结晶紫染液、芦戈氏碘液、95%酒精、稀释石炭酸复红、染色架、接种环。
5）细菌的生化试验:糖发酵管、抗菌素（青霉素、链霉素、庆大霉素）纸片、眼科镊子、接种针、接种环、小砂轮、葡萄糖发酵微量管、乳糖发酵微量管、兔血浆、生理盐水、载玻片。
6）结果分析：尺子。
三、方法与步骤1、营养肉汤培养基的制备取1.1g营养肉汤粉末于锥形瓶中，加入50ml蒸馏水，摇晃锥形瓶使其几乎完全溶解。
将锥形瓶置于电陶炉上加热至沸腾，观察固体是否完全溶解，冷却后分装至试管内。
2、细菌的分离培养（平板划线分离法）甲→脓汁标本→营养琼脂平板乙→脓汁标本→营养琼脂平板丙→粪便标本→伊红美蓝平板丁→粪便标本→伊红美蓝平板1）接种环烧灼灭菌，以免污染标本。
2）取标本3～5ul。
3）转动平板，当看到平板表面象镜面有反光的时候，保持这个角度，划线时就能看清划线痕迹，以便控制划线。
4）接种环与平板呈30～40度角，在平板表面上方，以曲线的形式，作大幅度来回连续划线，边划边退，线段要划得长而密集，每区划线不少于30条5）甲、乙烧掉接种环上多余的标本。
〖医学〗脓汁中病原性球菌和粪便中致病性杆菌的鉴定
金
表
黄
皮
色
葡
葡
萄
萄
球
球
菌
菌
观察菌落特点
脓汁标本在血平板上经过24小时的培养，已 经长出菌落，首先观察菌落的特点： • 菌落的形态； • 光滑程度； • 色素的产生情况； • 细菌的溶血情况。
形态学鉴定
革兰染色，观察细菌的染色性状和排列特点。
G-球菌
双球菌 结合临床进行判断
G+菌链状排列或成对排列
新乡医学院 微生物学教研室
凝固酶
❖ 是指能使含有枸橼酸钠或肝素抗凝剂的人或 兔的血浆发生凝固的酶类物质。
❖ 致病性葡萄球菌大多能产生凝固酶 ❖ 凝固酶分为两种：游离凝固酶、结合凝固酶
方法
❖ 试管法
适合于游离凝固 酶的检查
❖ 玻片法
适合于结合凝固 酶的检查
试管法凝固酶试验
原理
协同因子
游离凝固酶 类似凝血酶原物质
操作内容
1 革兰染色： 每台2张玻片，染1张球菌和1张杆菌；
2 血浆凝固酶实验： 每台1张玻片；
3 玻片凝集反应： 每台1张玻片；
4 接种双糖铁培养基： 每台2管双糖铁培养基（穿刺+斜面 ）。
观察内容
1 脓汁标本细菌在血平板上的生长现象； 2 肠杆菌在SS平板上生长的菌落特点； 3 肠杆菌在双糖铁培养基上生长的特点。
如果介于12－20mm之间时应重复试验。
结果判断
菌落特点：形态；色素；溶血； 革兰染色的特点：判断形态，排列和染色； 根据溶血判断链球菌的种类；根据生化反应 区别肺炎双球菌和甲链。
G+菌葡萄串状排列
首先观察菌落特点：色素；溶血情况；
进一步鉴定： 血浆凝固酶实验； 耐热核酸酶实验； 甘露醇的发酵
脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验报告模板一
医学微生物学实验报告姓名___ __________学号___ ________年级___ ____组别__ ______实验名称脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验者合作者日期指导老师一、实验目的1、掌握培养基的制备的原则和一般方法2、掌握细菌的分离培养方法3、掌握油镜的正确使用，细菌标本图片的制备4、掌握细菌的形革兰氏染色法以及形态学检查方法5、熟悉细菌的生化试验方法（糖发酵试验、抗菌素敏感性试验、血浆凝固酶实验、动力学实验）的原理及方法6、掌握玻片凝集试验的原理及方法二、实验器材1、5ml试管15支、托盘天平、锥形瓶、营养肉汤干粉培养基、量筒、使馆狂、酒精灯、洗耳球、刻度吸管2、脓汁标本1支，粪便标本1支、伊红美兰平板2个，营养琼脂平板2个、接种环、酒精灯3、斜面4支、细菌分离培养物（上次实验平板）4、斜面培养物4支，营养肉汤4支，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1本，载玻片4张5、斜面培养物4支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支，营养琼脂平板4个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，眼科镊子2把。
6、半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。
三、方法与步骤流程图：营养琼脂培养基的制备细菌的分离培养细菌的纯培养细菌形态学检查液体培养基接种细菌的生化实验1、营养肉汤培养基的制备①称取1.1g营养肉汤干粉培养基于锥形瓶中，加入50ml蒸馏水溶解②加热煮沸1次，加热时需要摇动③分装于15支小试管中，每支3ml④集中放在试管筐中，罩上硫酸纸和牛皮纸，用橡皮筋包扎好⑤灭菌2、细菌的分离培养平板画线法：小组分工：甲→脓汁标本→营养琼脂平板丙→粪便标本→伊红美蓝平板乙→脓汁标本→营养琼脂平板丁→粪便标本→伊红美蓝平板步骤：①点燃酒精灯，把接种环在酒精灯上烧灼灭菌，金属杆快速通过火焰2～3次，以杀灭表面微生物。
②取出标本，在火焰旁边，左手斜持标本管下端，右手小指夹住试管棉塞上端，缓慢拔出棉塞并夹持之，管口迅速通过火焰3次③将冷却的接种环沾取标本1环，管口迅速通过火焰灭菌后塞上棉塞放回。
葡萄球菌的鉴定
血浆凝 固酶
甘露醇 发酵
金葡
表葡
腐生
（4）新生霉素敏感试验
血平板 菌悬液涂布 5ug/L新生霉素纸片 35℃孵育16~18h S:抑菌圈直径>16mm，R:≤16mm
结果 ATCC25923 表葡 S R
腐生
阳性结果 （S）
实验七 葡萄球菌鉴定
检验系微生物教研室
（一）葡萄球菌检验程序
脓液、咽拭子、穿刺液 尿液、痰液脑脊液血液粪便、呕吐 物
直接涂片染色
初报
分离培养 （血平板）
分离培养
增菌培养 （高盐甘露醇 平板）
涂片染色 触媒 血浆凝固酶 甘露醇发酵 耐热核酸酶 其他鉴定试验
取可疑菌落
鉴定试验
药敏试验
报告
（二）目的要求
培养基：血琼脂平板，MH琼脂，甘露醇发酵管 试剂：生理盐水，3%H2O2,EDTA抗凝兔血浆，革兰染液，
新生霉素纸片、头孢西丁、红霉素、克林霉素纸片 其他：酒精灯，接种环，接种针，玻片，显微镜，孵箱等
（四）步骤方法
1.细菌菌落特征观察：
大小 形态 光泽 表面 边缘 透明度 颜色 溶血 金葡 表葡 腐生
玻片法
【操作】取兔血浆和生理盐水各1滴分别滴于载玻 片上，用接种环挑取细菌，混合后观察。
【操作】
试管法
（3）甘露醇发酵试验：
【原理】致病性葡萄球菌多含有分解甘露醇的酶类， 能发酵甘露醇产酸，培养基由紫色变为黄色。
【操作】细菌分别接种甘露醇单糖发酵管，经35℃ 孵育18-24h观察结果。
【结果】金葡为阳性，表皮、腐生为阴性
H2O2
H2O + O2
化脓性球菌的分离鉴定
A群链球菌的防治原则
A群链球菌
主要通过飞沫传播，应对病人和带菌者及时治疗，以减少传染源。另 外，还应对空气、器械和敷料等消毒。对急性咽喉炎和扁桃体的病人， 尤其是儿童，须彻底治疗。以防止急性肾小球炎、风湿热和亚急性细菌 性心内膜炎的发生。首选药物为青霉素G。
葡萄球菌的鉴定
2.生化反应检测
2.1 血浆凝固酶试验
原理：金葡菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中可溶性的纤维 蛋白原变为不溶性的纤维蛋白，结合型血浆凝固酶附着于细菌 表面，在玻片上形成凝块；游离型的血浆凝固酶则可使试管中 的血浆发生凝固；
方法步骤（玻片法）：在在玻片两端各滴生理盐水1d，取肉 汤培养菌液与生理盐水混匀，在其中一端的菌液中滴加兔血浆 1d混匀，观察结果。因致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可 凝固兔血浆，故如血浆中明显小凝块出现，而生理盐水中无此 现象者为阳性，若血浆中无凝块时为阴性。
A群链球菌的鉴定
3.2 吡咯烷酮试验（PYR）检验方法
原理：特异检验A群链球菌氨基肽酶 方法步骤： • 用PYR缓冲液A液浸润PYR测试条末端滤纸； • 用接种环从适合的琼脂培养基上挑取可疑待测菌落，在末端滤纸上
涂抹开或直接蘸取菌落； • 放置于密闭容器；35℃±2℃，孵育5min~10min； • 滴加一滴PYR缓冲液B液至末端涂抹细菌处，观察是否有红色产生。
化脓性炎症是临床上常见病。但是除了 病原性球菌外，其他微生物也可以引起化脓 性感染。
常见的标本有脓汁、咽拭子、痰液、血 液、脑脊液等。
本次实验以脓汁标本进行病原性球菌的 分离鉴定。
脓汁中病原球菌的查程序
涂片： 革兰氏染色
血琼脂平板 （分离培养）
病原实验报告
病原物的分离培养和纯化病原物的分离和纯化摘要：本实验主要通过用对辣椒炭疽病或柑橘炭疽病病菌的分离和在pda培养基中对炭疽病菌消毒后做无菌培养然后转移到斜面培养的实验过程观察炭疽病菌的生长情况，了解分离与纯化病原物的基本原理与方法，掌握实验室常用的消毒灭菌方法，并掌握培养基的制作和无菌操作技术。
关键词：分离培养、炭疽病、pda培养基、灭菌前言柯赫氏法则(koch’s rule)又称柯赫氏假设(kochs postulates)或柯赫氏证病律，是确定侵染性病害病原物的操作程序。
如发现一种不熟悉的或新的病害时，就应按柯赫氏法则的四个步骤来完成诊断与鉴定。
诊断是从症状等表型特征来判断其病因，确定病害种类。
鉴定则是将病原物的种类和病害种类同已知种类比较异同，确定其科学名称或分类上的地位。
有些病害特征明显，可直接诊断或鉴定，如霜霉病或秆锈病。
但在许多场合难以鉴定病原物的属、种。
如花叶症状易于识别，要判断由何种病原物引起，就必须经详细鉴定比较后才能确定。
柯赫氏法则表述为：“(1)在病植物上常伴随有一种病原微生物存在；(2)该微生物可在离体的或人工培养基上分离纯化而得到纯培养；(3)将纯培养接种到相同品种的健株上，出现症状相同的病害；(4)从接种发病的植物上再分离到其纯培养，性【1】状与接种物相同”。
如果进行了上述四步鉴定工作得到确实的证据，就可以确认该微生物即为其病原物。
但有些专性寄生物如病毒、菌原体、霜霉菌、白粉菌和一些锈菌等，目前还不能在人工培养基上培养，可以采用其他实验方法来加以证明。
侵染性病害的诊断与病原物的鉴定都必须按照柯赫法则来验证，每个医学家和植物病理学家都应能熟练地运用。
柯赫氏法则同样也适用来对非侵染性病害的诊断，只是以某种怀疑因子来代替病原物的作用，例如当判断是否缺乏某种元素而引起病害时，可以补施某种元素来缓解或消除其症状，即可确认是某元素的作用。
1. 材料、仪器与用具1.1实验材料柑橘炭疽病或辣椒炭疽病病害部位、pda培养基（自制）1.2仪器用具超净工作台、培养箱、培养皿、试管、接种铲、接种针、70%酒精、0.1升汞、电炉等 2. 内容与方法2.1培养基的配制“培养基按成分及对成分了解程度分为天然培养基、半组合培养基、组合培养基三类，从物理性分为固体培养基、液体培养基两种，培养基不同，配制方法【2】不同。
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌是一种常见的细菌，它是引起人体多种感染的病原菌之一。
金黄色葡萄球菌检验技术是通过分离、培养和鉴定来检测和确定金黄色葡萄球菌的存在与类型。
以下是金黄色葡萄球菌检验技术的介绍及分析。
金黄色葡萄球菌的分离是检验的第一步。
样品通常是从患者的伤口、分泌物或体液中获取的，也可以从环境中收集。
分离可以通过将样品涂抹到适当的察尔染色的琼脂平板上，然后进行培养和鉴定来完成。
金黄色葡萄球菌会在琼脂平板上形成金黄色的菌落。
培养是金黄色葡萄球菌检验的关键步骤。
常用的培养基包括牛肉蛋白胨琼脂、亚洲互联网的Tag：脑心制剂琼脂、亚洲互联网的Tag：镜光菌属琼脂等。
金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性球菌，它可以在各种营养富集培养基中生长，但最好使用富含血液、蛋白质和碳水化合物的培养基。
培养的时间通常为24小时，金黄色葡萄球菌菌落会呈现金黄色且凸起。
鉴定是确认金黄色葡萄球菌的类型的步骤。
鉴定方法包括形态学观察、生化试验和分子生物学方法。
形态学观察是通过显微镜观察菌落和细胞形态来判断。
金黄色葡萄球菌是圆形或椭圆形的，常呈簇状分布。
生化试验可以通过检测金黄色葡萄球菌对特定底物的代谢能力来进行鉴定。
一些常用的测试包括氧化酶试验、半乳糖发酵试验等。
分子生物学方法可以通过检测特定基因或DNA序列来鉴定金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌检验技术的分析主要集中在以下几个方面。
金黄色葡萄球菌的检验可以帮助医生确定感染的病原菌，从而指导合理的治疗方案。
金黄色葡萄球菌是耐药菌中的重要成员，对多种抗生素具有耐药性，因此及早检测和鉴定金黄色葡萄球菌可以避免无效的药物治疗。
金黄色葡萄球菌还可以引起食物中毒和医院相关感染等，检验技术的应用可以有助于减少相关疾病的发生。
金黄色葡萄球菌的检验
金黄色葡萄球菌的检验(定性检测)一．金黄色葡萄球菌的生物学特性金黄色葡萄球菌革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检时呈单个、成对、四联或不规则的簇群；无芽孢，无鞭毛、无荚膜、不运动；兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好；大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄色葡萄球菌，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。
普通平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
主要存在于主要为淀粉类(如剩饭、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及鱼、肉、蛋类等。
二、培养基7.5%的氯化钠（三角瓶135mL）；BP平板培养基；血平板培养基；BHI肉浸液肉汤培养基（试管5个）。
三、金黄色葡萄球菌的定性检测主要包含四个步骤：样品处理；增殖培养；平板分离培养；鉴定（染色镜检和血浆凝固酶实验）。
1.样品的处理和增殖培养：样品为冷冻鱼丸，每组称量15g，放于研钵中，用研磨棒捣碎，放于135mL 7.5%的氯化钠肉汤中进行增菌培养，36℃±1℃培养18h～24h后，可观察到金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长。
2.血平板划线培养：将样品增菌培养物，用接种环取一环划线接种于血平板上，36℃±1℃培养18h～24h。
（每组2个血平板接种增殖样品，1个平板划线接种金黄色葡萄球菌，每组共3个血平板）。
金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落特征：菌落较大，圆形，光滑突起，湿润，金黄色（有时为白色），菌落周围为完全透明溶血圈。
3.BP平板划线培养：将样品增菌培养物，用接种环取一环划线接种于BP平板上，36℃±1℃培养18h～24h。
（每组2个BP平板接种增殖样品，1个平板划线接种金黄色葡萄球菌，每组共3个BP平板）。
金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落特征：菌落直径2-3mm，颜色从灰色到黑色，边缘为淡色，周围有一浑浊带，其外层有一透明圈，用接种针触碰有奶油树脂的硬度。
实验金黄色葡萄球菌的检验
实验5 金黄色葡萄球菌的检验1 目的和要求（1）掌握金黄色葡萄球菌的检验方法（2）了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理2 基本原理金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。
此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素，食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。
因此，检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。
绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热的DNA酶。
3 实验材料3.1 检样乳与乳制品（如奶粉、消毒乳）、肉制品、饮料3.2 菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。
3.3 培养基 7.5%氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基3.4 试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。
3.5 仪器与其他用具无菌吸管（1mL、5、10）、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、均质器、恒温箱等。
4 检样程序5 操作步骤5.15.1.1样品的处理称取 25 g 样品至盛有 225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有 225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min。
若样品为液态，吸取 25 mL 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。
5.1.2 增菌和分离培养5.1.2.1 将上述样品匀液于 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。
鉴别葡萄球菌属和化脓性链球菌属的鉴别流程
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微生物--金黄色葡萄球菌的分离及鉴定
成为致病菌，称这类细菌为机会性致病菌 也称条件致病菌。
• 致病条件 1.异位寄生：定居部位改变某些细菌离开正常 寄居部位，进入其他部位，脱离原来的制约 因素而生长繁殖，进而感染致病。 2.机体免疫功能低下正常菌群进入组织或血液 扩散。 3.菌群失调。 菌群失调症
补充：什么是MH培养基？
• Mueller-Hinton水解酪蛋白（MH）肉汤， pH7.2~7.4。需氧菌及兼性厌氧菌在此培养 基中生长良好。
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1.如何判断一个人是否为金黄 色葡萄球菌的带菌者
2.非致病菌如何致病
--黄 6300610403
案例
分离及鉴定
MH培养基
鉴定结果
诊间、正常菌群之间，通过营养竞争，代 谢产物的相互制约等因素，维持着良好的生存平衡。在一定条 件下这种平衡关系被打破，原来不致病的正常菌群中的细菌可
脓汁和粪便标本中病原菌的检测
脓汁和粪便标本中病原菌的检测病原菌是引起多种疾病的微生物，包括细菌、病毒、真菌和寄生虫等。
当人体感染病原菌时，常会产生脓汁和粪便等病理样本。
对病原菌进行检测可以帮助医生诊断疾病和进行治疗。
脓汁是由细胞、细菌、炎性介质和液体组成的炎症渗出物。
脓汁样本的检测可以帮助医生确定炎症发生的部位和病原菌种类，对于引起严重感染的病原菌，如金黄色葡萄球菌和链球菌等，及时检测非常重要。
脓汁样本的采集可以通过穿刺或切开取材。
采集样本前需要进行局部消毒，避免产生假阳性结果。
采集后需要将样本送到合格的实验室进行细菌培养和鉴定。
细菌培养是目前脓汁样本中病原菌检测的主要方法。
样本在培养基上进行检测，通过观察培养基的变化和菌落的形态、颜色等特征，可以初步判断病原菌种类。
此外，还可通过病原菌的生化试验和抗生素敏感试验等来进一步鉴定。
粪便样本中的病原菌检测是临床常用的方法之一。
胃肠道感染、痢疾等疾病常表现为腹泻、呕吐、腹痛等症状，这些症状通常伴随着粪便的改变。
检测粪便样本中的病原菌可以帮助医生确定疾病的病因，进而制定合理的治疗方案。
采集粪便样本需要注意消毒和避免受到多余杂质的干扰。
采集的样本应放入干燥、无菌的容器中，并在24小时内送到实验室进行检测。
粪便样本中的病原菌检测方法分为培养法和分子生物学方法两种。
培养法是常用的方法，具有价格低、操作简单、可检测多种病原菌等优点。
具体操作过程包括将样本放入培养基中，根据菌落形态、色素、大小等特征进行初步鉴定，进一步确定病原菌种类，最后进行抗生素敏感性试验。
分子生物学方法则通过检测病原菌的DNA或RNA序列进行鉴定，具有快速、灵敏、特异性高等优点。
目前已有多种分子生物学方法被应用于粪便样本中病原菌检测，如PCR、LAMP等。
综上所述，脓汁和粪便样本中病原菌的检测有助于医生确定疾病的病因，对于治疗方案的制定具有重要的指导意义。
在样本采集和实验室检测中需要严格遵守操作规程，以确保结果准确可靠。
金黄葡萄球菌鉴定步骤
金黄葡萄球菌鉴定步骤金黄葡萄球菌鉴定步骤导语：金黄葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的致病菌，对人类健康造成威胁。
了解金黄葡萄球菌的鉴定步骤对于预防和控制感染具有重要意义。
本文将从简单到深入，介绍金黄葡萄球菌鉴定的全过程。
一、目的金黄葡萄球菌鉴定的目的是确认样本中是否存在金黄葡萄球菌，并进一步了解其特点和性质，以便进行预防和治疗。
二、前期准备1. 确保实验室安全：佩戴实验室必备的防护用品，如手套、口罩和实验室服。
2. 培养基准备：准备适用于金黄葡萄球菌生长的培养基，如牛肉膏蔗糖培养基（Baird Parker Agar）或含有亚硒酸钠的万氏精液胆盐柳糖培养基（Mannitol Salt Agar）。
3. 无菌操作：使用无菌技术，以避免外来细菌的污染。
三、鉴定步骤1. 样本处理：将待检样本在无菌条件下接种于培养基上，可以是涂布法、点状法或环法。
a. 涂布法：将待检样本取适量涂布在培养基表面。
b. 点状法：用匀浆针将待检样本点状刺入培养基内。
c. 环法：用无菌棉签从待检样本中取样后沿培养基表面画环。
2. 培养条件：将培养基培养于37℃恒温培养箱中，培养时间一般为24小时。
3. 金黄葡萄球菌特征：a. 形态特征：金黄葡萄球菌在培养基上生长为黄色或类似葡萄球菌的菌落，呈珠状集聚。
b. 生理特性：金黄葡萄球菌产生酶溶血性作用，可溶解红细胞，形成溶血环。
c. 生化特性：金黄葡萄球菌可产生凝固酶，将凝血蛋白溶解成凝胶。
4. 疑似金黄葡萄球菌鉴定：a. 形态观察：观察菌落形态，如颜色、形状和大小等。
b. 酶溶血性试验：将待检菌落在凝集红细胞上涂布，观察是否形成溶血环。
溶血环直径大于3毫米时，判定为金黄葡萄球菌的溶血作用阳性。
c. 产凝固酶试验：将待检菌悬液与凝血蛋白混合，观察是否形成凝胶。
若凝胶形成，即判定为金黄葡萄球菌的凝固酶阳性。
5. 进一步确认：a. 分子鉴定：可采用PCR等分子生物学方法，通过特定基因的检测来确认金黄葡萄球菌。
医学微生物学实验：脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定
医学微生物教研室
2011年6月
精品课件
实验八
脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定
精品课件
实验内容
脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定
精品课件
目的
熟悉临床标本中常见化脓性细菌的分离鉴定程 序；掌握细菌分离培养的基本技术。
精品课件
实验器材
标本：脓拭子、感染分泌物或模拟脓汁标本 菌种：金黄色葡萄球菌培养物、表皮葡萄球菌 培养基：血琼脂平板、甘露醇发酵管 其他：血浆、生理盐水、革兰染液、玻片、滴管
血平板培养结果观察
─────────────
菌落特点 溶血性 菌落颜色 金黄色 葡萄球菌
注：第2天观察记录结果；如培养48~72h后仍然无菌生长， 则报告“无细菌生长”。
精品课件
检查方法和结果报告
血浆凝固酶试验（玻片法）：
用灭菌接种环取标本和白葡菌（阴性对照）培养物少许， 分别与玻片左右二侧的生理盐水制成均匀菌悬
于玻片玻片左右二侧菌悬液中各加血浆一滴并轻轻摇匀
1~3分钟内观察结果，出现颗粒状凝集为血浆凝固酶试验 阳性，否则为阴性
结果报告：
标本+血浆 白葡菌+血浆
阳性（+）/阴性（─）
精品课件
检查方法和结果报告
甘露醇发酵试验：无菌操作取标本和白葡菌（阴性对 照）培养物分别接种于甘露醇发酵管，其上覆盖无菌 液体石蜡油，37℃培养18~24小时，观察结果。金 葡菌发酵甘露醇产酸，使培养基变混充，颜色由紫色 变黄色，是为甘露醇发酵试验阳性，而白葡菌相反。
标本+甘露醇
阳性（+）/阴性（─）
注：第2天观察记录结果
精品课件
白葡菌+甘露醇
实验报告
金黄色葡萄球菌实验报告doc
金黄色葡萄球菌实验报告篇一：微生物实验报告细菌微生物实验报告题目年级专业实验者学号小组成员指导老师一、实验目的脓汁和粪便标本中病原菌的检测 XX 级临床医学八年制1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的类型，学习并掌握培养基的原则与方法。
2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法。
3.了解并比较细菌在固体、半固体和液体培养基的生长特征。
4.学习并掌握空气及人体细菌检测学方法。
5.掌握细菌涂片标本的制备以及革兰染色法，熟悉不同类型细菌的基本形态。
6.掌握糖发酵实验、抗菌素敏感性实验和血浆凝固酶实验的原理与方法。
7.从脓汁和粪便标本中分离培养和检测出病原体。
二、实验器材1.培养基的制备：干粉培养基、天平、蒸馏水、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、试管筐、移液管、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、手套、石棉网2.空气与人体体表细菌学检查：琼脂培养基、酒精、碘酒3.细菌的分离培养：脓汁标本、粪便标本、伊红美蓝平板、营养琼脂平板、接种环、酒精灯、打火机4.细菌的纯培养：接种环、酒精灯、打火机、中性笔、斜面培养基5.细菌的形态学检测：斜面培养物、营养肉汤、生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、显微镜、接种环、酒精灯、打火机、中性笔、革兰染色试剂、液体培养基6.细菌的生化试验：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、接种针、酒精灯、打火机、中性笔、菌液、营养琼脂平板、接种环、药物纸片（青霉素、庆大霉素、头孢曲松）、玻片、兔血浆、生理盐水7.细菌的血清学试验：玻片、福氏志贺菌诊断血清、生理盐水、接种环、酒精灯三、实验方法与步骤1.培养基的制备称量琼脂粉→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌2.空气与人体体表细菌学检查2.1空气的细菌学检查每组1个营养琼脂平板，选择实验楼女厕所→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15分钟→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24小时→观察结果。
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌(一)形态与染色革兰阳性球菌，成单或双或短链或不规则排列。
（二）培养特性血平板上呈典型菌落为金黄色，周围有明显的透明溶血环（ß），部分菌落也可呈灰白色或柠檬色;在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。
（三）生化反应触酶试验阳性，分解葡萄糖，麦芽糖，蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，液化明胶，血浆凝固酶和DNA酶试验阳性。
（四）鉴别要点在血琼脂平板上菌落呈金黄色或白色，革兰阳性球菌，DNA酶和血浆凝固酶阳性，发酵甘露醇。
链球菌属鉴定(一)形态与染色革兰阳性球菌，固体培养基呈上成单或双排列，较少呈链状排例；肉汤中呈长链状；（二）培养特性血平板上是较小，圆形，突起的ß溶血环。
（三）生化反应触酶阴性，不分解胆汁溶解。
（四）鉴别要点A群链球菌：ß溶血环,杆菌肽敏感B群链球菌：ß溶血环，CAMP实验阳性D群链球菌：:ß溶血环，胆汁七叶苷实验阳性，65﹪氯化钠耐盐实验阳性。
肠球菌属鉴定(一)形态与染色革兰阳性球菌，固体培养基呈上成单或双排列。
（二）培养特性血平板上是较小、灰白色、圆形、湿润、突起的αβ溶血环。
（三）生化反应触酶阴性，高盐生长，胆汁七叶苷实验阳性。
（四）鉴别要点革兰阳性，触酶阴性，胆汁七叶苷实验阳性，65﹪氯化钠耐盐实验阳性，45度生长。
肺炎球菌属鉴定(一)形态与染色革兰阳性，呈矛头状，成双或链状排列。
（二）培养特性琼脂平板上是较小、圆形、中央呈脐窝状的草绿色溶血环的灰色菌落。
（三）生化反应触酶阴性，Optochin敏感，胆汁溶菌实验阳性。
（四）鉴别要点革兰阳性，呈矛头状，菌落细小，中央凹陷，周围有草绿色Optochin敏感溶血环，胆汁溶菌实验阳性，Optochin敏感。
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2011年6月
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脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定
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实验内容
脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定
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目的
熟悉临床标本中常见化脓性细菌的分离鉴定程 序；掌握细菌分离培养的基本技术。
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实验器材
标本：脓拭子、感染分泌物或模拟脓汁标本 菌种：金黄色葡萄球菌培养物、表皮葡萄球菌 培养基：血琼脂平板、甘露醇发酵管 其他：血浆、生理盐水、革兰染液、玻片、滴管
于玻片玻片左右二侧菌悬液中各加血浆一滴并轻轻摇匀
1~3分钟内观察结果，出现颗粒状凝集为血浆凝固酶试验 阳性，否则为阴性
结果报告：
标本+Leabharlann 浆 白葡菌+血浆阳性（+）/阴性（─）
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检查方法和结果报告
甘露醇发酵试验：无菌操作取标本和白葡菌（阴性对 照）培养物分别接种于甘露醇发酵管，其上覆盖无菌 液体石蜡油，37℃培养18~24小时，观察结果。金 葡菌发酵甘露醇产酸，使培养基变混充，颜色由紫色 变黄色，是为甘露醇发酵试验阳性，而白葡菌相反。
直接显微镜检查：取标本直接涂片，均匀涂成菌 膜，自然干燥，固定后革兰染色，油镜观察。
金黄色 葡萄球菌
革兰染色镜检
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形态
排列 染色性
注：若染色后未发现细菌，可报告“直接镜检未发现细菌”
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检查方法和结果报告
细菌分离培养：取脓液或创伤分泌物接种于血琼脂平板上 （接种后4℃保存），划线分离，37℃培养18~24h后，观 察菌落特征，取单个菌落进行革兰染色镜检。
标本+甘露醇
阳性（+）/阴性（─）
注：第2天观察记录结果
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白葡菌+甘露醇
实验报告
本次实验的目的要求、器材、检查原则、标本检 测程序 （简要）、结果报告和结论
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培养箱、 酒精灯、接种环等
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检查原则
在脓汁标本中，以化脓性球菌最为常见，本实 验主要检测金黄色葡萄球菌
用药前采集标本 无菌操作
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标本检测程序
脓汁、脓性分泌物（未知菌液/固体培养物）
直接
涂片 革兰染色 镜检
接种 血琼脂平板
菌落观察
血浆凝固酶试验
甘露醇发酵
精诊品课断件报告
检查方法和结果报告
血平板培养结果观察
─────────────
菌落特点 溶血性 菌落颜色 金黄色 葡萄球菌
注：第2天观察记录结果；如培养48~72h后仍然无菌生长， 则报告“无细菌生长”。
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检查方法和结果报告
血浆凝固酶试验（玻片法）：
用灭菌接种环取标本和白葡菌（阴性对照）培养物少许， 分别与玻片左右二侧的生理盐水制成均匀菌悬