苏木精苏木素染色液溶液配制方法
病理制片技术——常用试剂及染液的配制
病理制片技术——常用试剂及染液的配制一、Harris氏苏木精染色液的配制1．试剂准备：苏木精10 g，硫酸铝钾80 g，无水乙醇200 ml，蒸馏水2000 rnl，氧化汞3 g，冰乙酸40ml。
2．配制步骤(1)将2000 ml蒸馏水注入一只3000 的大号三角烧瓶内，加入80 g硫酸铝钾后置电炉或电磁炉上加热硫酸铝钾完全溶解。
(2)将200 ml无水乙醇注入一只300 ml的三角烧瓶内，加入10 g苏木精摇动使之完全溶解。
(3)将已完全溶解于无水乙醇的苏木色精液体缓缓注入已完全溶解的2000 ml硫酸铝钾液体中，继续加热至液体沸腾关闭电源。
此时液体应呈透明的玫瑰红色。
(4)将3 g氧化汞溶于20ml蒸馏水中搅匀后缓缓(一定要缓慢)方入未被氧化的苏木精液体中，边加氧化汞边搅拌。
此时苏木精被氧化，液体的颜色会迅速地变成深蓝紫色。
(5)氧化汞加完后用玻棒充分的搅拌液体并继续加热至液体再度沸腾关闭电源。
(6)用湿毛巾保护，将装有停止沸腾的热苏木精的三角烧瓶转移至冷水中迅速降温至室温。
(7)密封瓶口室温避光直射储存备用，临用前每100 ml苏木精液加入2～3 ml冰乙酸混匀。
二、伊红染色液的配制l. 试剂准备；伊红Y 20 g，蒸馏水1500 ml，95％乙醇500 ml，冰乙酸lml。
2．配制步骤(1)先将20 g伊红Y溶于500 m1蒸馏水中，用玻棒搅拌至其完全溶解后再加入1000 ml 蒸馏水并搅匀，液体呈深红色。
(2)加入500 ml 95％乙醇并搅匀，此时液体由深红色转变为荧光绿色。
(3)加入lml冰乙酸并搅匀，密封瓶口室温储存备用。
三、HE染色分化液的配制0.5％盐酸乙醇液：蒸馏水300 ml与95％乙醇700 ml混合后加入浓盐酸5 ml混匀。
四、HE染色返蓝液的配制0.5％氢氧化氨液：在1000毫拜蒸馏水中溶入5毫升浓氢氧化氨混匀。
常用染色液和试剂的配制
一、埃利希(EhrIiCh)氏苏木精染液先将苏木精2g溶于IOOm1乙醇中，再加冰醋酸IOm1,混合后加蒸储水IOOm1和IOOm1甘油，然后加硫酸铝钾(约Iog)至饱和，搅拌均匀，倒入瓶中。
将瓶口用1层纱布包着小块棉花塞上，放在暗处通风的地方，并经常摇动促进“成熟”，直到液体颜色变为深红色为止。
成熟时间约2-4周。
若加0.4g碘酸钠可加快成熟。
二、吉姆萨(GiemSa)氏母液将吉姆萨粉末Ig先溶于少量甘油，在研钵内研磨30min以上，至看不见颗粒为止，再将全部(66m1)剩余甘油倒入，于56℃温箱内保温2h。
然后再加入甲醇(66m1),搅匀后保存于棕色瓶中。
母液配制后放入冰箱可长期保存，一般刚配制的母液染色效果欠佳，保存时间越长越好。
临用时用PH6.8的磷酸盐缓冲液稀释10倍。
三、瑞(Wright)氏染液称取瑞氏染料粉末OJg于研钵内研细后，加入少量甲醇再反复研磨，最后将全部甲醇(总共60m1)加入研匀，染料全部溶解后，将染液保存于棕色瓶内备用。
四、醋酸洋红染液将洋红粉末Ig倒入IOOm145%醋酸溶液中，边煮边搅拌，煮沸(沸腾时间不超过30s),冷却后过滤，即可使用。
也可再加入1%~2%铁明矶水溶液5-10滴，至此液变为暗红色而不发生沉淀为止。
如制作永久标本染色时，可加入饱和氢氧化铁或醋酸铁(媒染剂)溶液数滴，至染色液呈浅蓝色为止。
五、硫堇染液(工作液)①干液(硫堇)：硫堇Ig或2g溶于Ioom150%乙醇中，溶解后过滤备用；②醋酸钠缓冲液：醋酸钠∙3H2O9.7g,巴比妥钠14.7g,溶于50Om1蒸储水中；③0.1mo1/1盐酸；按①：②：③=40：28：32比例配成混合液，调pH5.7±0.2,即得硫堇工作液。
六、0.02%盾纳斯绿B(JanusGreenB)用0.9%生理盐水溶液配制。
七、甲基绿一派洛宁染液(Unna试剂)派洛宁0.25g,甲基绿0.15g,95%乙醇20m1,甘油20m1。
苏木素改良配方
苏木素改良配方
苏木素1．5克，硫酸铝钾20克，碘酸钠．2克，无水乙醇5毫升，甘油100毫升，蒸馏水400毫升。
制配方法：用5毫升无水乙醇溶解苏木素，蒸馏水溶解钾明矾(加温至90度，勿煮沸)，离火后，将溶解的苏木素和碘酸钠同时加入钾明矾水溶液内，流水冷却至室温，再加甘油，震荡1小时后即可使用。
染液在六个月内染色效果最好。
我给你的只有苏木素
苏木素传统配方
苏木精 1.0g
乙醇50ml
醋酸5ml
甘油50ml
硫酸铝钾5g
蒸馏水50ml
将苏木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并搅拌，以加速其溶
解。
当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器，同时加入其余的乙醇；硫酸铝钾需研磨并加热，然后溶解于蒸馏水中，将其一滴滴地加入上边的溶液，并不断摇动，此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经常摇动以加速其成熟，成熟约需4周左右，成熟的染液为深红色。
3种苏木素染液的染色效果比较
3种苏木素染液的染色效果比较在HE染色中，细胞核的着色情况直接影响着病理切片的质量。
而苏木素染液又是细胞核染色的关键，苏木素染色的好坏决定着细胞核的着色深浅，也决定了一张切片的质量[1]。
所以选择合适的苏木素染液十分重要。
我们对3种常用的苏木素染液的染色效果进行分析和比较，寻找更为稳定可靠的苏木素染色液。
1 材料与方法1.1材料1.1.1 Harris苏木素原料：苏木精1g，硫酸铝钾15g，无水乙醇10ml，蒸馏水200ml。
配置方法：先用蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，用无水乙醇溶解苏木精再倒入已经溶解好的硫酸铝钾蒸馏水中，煮沸1min，稍冷却，慢慢加入红色氧化汞0.5g防止溅出，再煮沸2min，此时将烧瓶立即浸于冷水中冷却，当染液冷却后用纱布盖好瓶口，使用之前用滤纸过滤后每100ml加冰醋酸5ml就可以使用。
1.1.2 Gill改良苏木素原料：苏木精2g，硫酸铝钾17g，无水乙醇250ml，蒸馏水750ml，碘酸钠0.2g，冰醋酸20ml。
配置方法：先将苏木素溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水中，两溶液溶解后将其混合入碘酸钠，待苏木精氧化成紫红色，再加入冰醋酸。
1.1.3 Lillie-Mayerh苏木素原料：苏木精5g，硫酸铝钾5g，碘酸钠0.5g，蒸馏水600ml，甘油300ml，冰醋酸20ml。
配置方法：取1000ml的烧杯一个，将硫酸铝钾倒入蒸馏水中，苏木素同样也在蒸馏水中加热搅拌，等两液完全溶解再相互混合，搅拌充分后缓缓加入碘酸钠，搅匀煮沸3分钟，等温度降低到40度左右再加入甘油，待完全冷却后加入冰醋酸入棕色瓶备用。
1.2方法选择各类手术切除的人体病变组织，包括乳腺、子宫内膜、皮肤、卵巢、子宫颈病变等存档蜡块60例，连续切片，分别使用上述3种染色液进行HE染色，光学显微镜观察。
2 结果Lillie-Mayerh苏木素的切片细胞核呈鲜亮的蓝色，细胞核结构清晰，与胞浆对比鲜明；Gill苏木素染色的切片总体较鲜亮，但部分组织切片细胞核微细结构不清晰，与胞浆对比不如Lillie-Mayerh苏木素的切片；Harris苏木素染色的切片染色效果尚可，但1/10（6例）切片内有苏木素结晶沉淀，影响观察。
苏木素染色液配制流程
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Delafield苏木精染液配制及使用方法
Delafield苏木精染液配制及使用方法
配方：
配方1：苏木精4克，无水酒精25毫升；10%铵明矾水溶液400毫升（铵明矾40克，蒸馏水400毫升）；甘油100毫升，甲醛100毫升
配方2（苏木精10克/瓶）：苏木精10克，无水酒精62.5毫升；10%铵明矾1000毫升（铵明矾100克，蒸馏水1000毫升）；甘油250毫升，甲醇250毫升
配方3（苏木精10克/瓶，甘油、甲醇500毫升/瓶）：苏木精20克，无水酒精125毫升；10%铵明矾水溶液2000毫升（铵明矾200克，蒸馏水2000毫升）；甘油、甲醇500毫升
配方4（苏木精10克/瓶，无水酒精500毫升/瓶；甘油、甲醇500毫升/瓶）：苏木精80克（1瓶），无水酒精500毫升（1瓶），10%铵明矾水溶液8000毫升（铵明矾800克，蒸馏水8000毫升），甘油2000毫升（4瓶），甲醇2000毫升（4瓶）
配方5（苏木精10克/瓶，无水酒精500毫升/瓶；甘油、甲醇500毫升/瓶，铵明矾500克/瓶）：苏木精40克，无水酒精250毫升；10%铵明矾水溶液4000毫升（铵明矾200克，蒸馏水2000毫升）；甘油、甲醇1000毫升
配制方法：
苏木精溶于无水酒精中；倒入已溶解的10%铵明矾水溶液，置有光处3~4天，过滤；加甘油和甲醇，数日后过滤
能长期使用。
着色能力较强。
对细胞核和嗜碱性物质染色效果好。
使用方法：
一般染色数分钟；（苏木精-伊红染色中常用原液染10~20分钟，经盐酸酒精分色后流水冲洗至蓝色或用氨酒精返蓝）
蒸馏水稀释50~100倍，染色4~24小时
结果：细胞核和嗜碱性物质呈蓝色（新鲜的苏木精染色）或黑色（陈旧的苏木精染色）。
苏木精、苏木素染色液溶液配制方法
华越洋苏木素(苏木精)染色液的配制各类溶液的配制方法如下：华越洋苏木素染色液：500ml1) Harry`s苏木素苏木素 1g 无水酒精 10ml硫酸铝钾 20g蒸馏水 200ml氧化汞 0.5g冰醋酸 8ml分别用无水酒精溶解苏木素，蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，然后两液混合并煮沸，加入氧化汞，继续加热和搅拌至溶液为深紫色，立即冷却，恢复至室温后过滤备用。
(2) 改良Lillie-Mayer`s苏木素苏木素 2.5g无水酒精 20ml硫酸铝钾 5g蒸馏水330ml碘酸钠250mg甘油150ml冰醋酸 10ml分别用无水酒精溶解苏木素，蒸馏水溶解硫酸铝钾，然后两液混合后，依次加入碘酸钠、甘油和冰醋酸。
(3) Mayer`s苏木素苏木素100mg蒸馏水100ml碘酸钠 20mg硫酸铝铵 5g柠檬酸100ml水合氯醛 5g 用蒸馏水溶解苏木素后，依次加入碘酸钠、硫酸铝铵和水合氯醛，过滤后备（4）Ehrlich氏苏木素（1886）苏木素 1g无水酒精 50ml甘油50ml硫酸铝钾 7.5g蒸馏水 50ml冰醋酸 5ml将苏木素溶于无水酒精里，硫酸铝钾溶于蒸馏水中，然后所有的试剂都加在一起，充分搅拌均匀后，放于窗台上阳光充足的地，让其慢慢氧化成熟，大约需四个星期，才可使用。
该液量种很好的细胞核染色液，用它染后，细胞核染色清晰，不易过染。
对于用酸脱钙组织细胞核的染色，该试剂优于其它各种苏木素。
这种自然氧化成熟的苏木素，可长期使用，不会变质。
但染色时间较长，需要20分钟以上。
如需急用而苏木素又未成熟时，该液可加入20-30mg的碘酸钠，以促使其迅速氧化成熟，但这试剂配成后，就不是原来的苏木素，不能长期使用，但起码可用半年左右。
（5）Weigert氏铁苏木素A液：苏木素 1g无水酒精100ml将苏木素溶于酒精，让其慢慢氧化成熟，约四周以后，便可以使用，或者用成熟的10%的苏木素酒精配制，即时可用。
B液： 29%三氯化铁水溶液 4ml蒸馏水 95ml盐酸1ml临用时，取A液和B液等份混合，即可使用，在4小时内使用完毕，如果超时，这种试剂便过分氧化而失效。
苏木精、苏木素染色液溶液配制方法
华越洋苏木素(苏木精)染色液的配制各类溶液的配制方法如下：华越洋苏木素染色液：500ml1) Harry`s苏木素苏木素1g 无水酒精10ml硫酸铝钾20g蒸馏水200ml氧化汞0.5g冰醋酸8ml分别用无水酒精溶解苏木素，蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，然后两液混合并煮沸，加入氧化汞，继续加热和搅拌至溶液为深紫色，立即冷却，恢复至室温后过滤备用。
(2) 改良Lillie-Mayer`s苏木素苏木素 2.5g无水酒精20ml硫酸铝钾5g蒸馏水330ml碘酸钠250mg甘油150ml冰醋酸10ml分别用无水酒精溶解苏木素，蒸馏水溶解硫酸铝钾，然后两液混合后，依次加入碘酸钠、甘油和冰醋酸。
(3) Mayer`s苏木素苏木素100mg蒸馏水100ml碘酸钠20mg硫酸铝铵5g柠檬酸100ml水合氯醛5g用蒸馏水溶解苏木素后，依次加入碘酸钠、硫酸铝铵和水合氯醛，过滤后备（4）Ehrlich氏苏木素（1886）苏木素1g无水酒精50ml甘油50ml硫酸铝钾7.5g蒸馏水50ml冰醋酸5ml将苏木素溶于无水酒精里，硫酸铝钾溶于蒸馏水中，然后所有的试剂都加在一起，充分搅拌均匀后，放于窗台上阳光充足的地，让其慢慢氧化成熟，大约需四个星期，才可使用。
该液量种很好的细胞核染色液，用它染后，细胞核染色清晰，不易过染。
对于用酸脱钙组织细胞核的染色，该试剂优于其它各种苏木素。
这种自然氧化成熟的苏木素，可长期使用，不会变质。
但染色时间较长，需要20分钟以上。
如需急用而苏木素又未成熟时，该液可加入20-30mg的碘酸钠，以促使其迅速氧化成熟，但这试剂配成后，就不是原来的苏木素，不能长期使用，但起码可用半年左右。
（5）Weigert氏铁苏木素A液：苏木素1g无水酒精100ml将苏木素溶于酒精，让其慢慢氧化成熟，约四周以后，便可以使用，或者用成熟的10%的苏木素酒精配制，即时可用。
B液：29%三氯化铁水溶液4ml蒸馏水95ml盐酸1ml临用时，取A液和B液等份混合，即可使用，在4小时内使用完毕，如果超时，这种试剂便过分氧化而失效。
苏木精染液的配制及染色改进方法措施
【 关键词 】 苏木精染液 ； 配制方法 ； 改进
在以往 的病理 检查时 ， 所使 用 的是最 广泛 的苏 木精 一伊
红染 色法 ， 一般使用 在病理 制作等检 验过程 中 ， 是诊 断病情 １ ． ２ ． １ 改 良染液 的配制 方法 Ａ液 通过改 良后 的方法 进行 的唯一关 键 ， 而临床上使用 的普通切 片、冷冻切 片、涂片等 溶 液 的配制 ： 在锥形 １ ０ ０ ｍ ｌ 的容器 瓶 中 ， 用 无水 乙醇 ５ ０ ｎ １ ｌ 染色方法 ， 也多 用此法 。这种 方法对任何 固定液 固定 的组织 来 溶解 ２ ｇ 的苏木精 溶液 ， 均匀 的摇 动就可 以使溶 液迅 速的 和应用各种包埋法 的切片均可使用 。 在长期临床实践过程 中 ， 溶解 。在 Ｂ液 中采用 的方式 为 ： 在锥 形 １ ０ ０ ０ ｍ ｌ 的容器瓶 中 ， 根据 以往原配制 的手法 ， 在该法 的基础上科 学的进行 了改进 ， 用蒸 馏水 ７ ０ ０ ｍ ｌ 来 溶解硫酸 铝钾 ２ ０ ｇ ， 通过震 动 以及振 荡就 改进 后检 验结 果优 良、还 有 时间长 ， 性 能稳 定 ， 质量 过关 ， 能够 把溶液充分 的溶解 。并且把 Ａ液与 Ｂ液进行混 合 ， 加 入 达到 了预期 的效果 。现报告 如下 。 适 当的碘酸 钠溶液 ， 将其 摇动为颜 色逐渐 的加深 。最后 加入 １ 材料与方法 冰醋酸 ， 其含量 为 ２ Ｏ ｍ ｌ ， 并 且将其 摇匀 ， 颜色逐 渐呈现 出深 １ ． １ 材料 其 中主要包 括是 ２ ｇ的苏 木精 、无水 的 乙醇为 葡 萄酒红色 。其染 液配制 为当 日 ， 就能够有利 于染色 。酸化 ５ ０ Ｉ Ｉ Ｉ ｌ ， 硫 酸铝钾 质量为 ２ ０ ｇ ， 碘酸钠含量为 ０ ． ２ ｇ ， 冰醋酸质量 液 的 比例为 ： ２ ０ ～ ３ ５ ｍ ｌ 的醋酸 ， 以及 将蒸 馏水 加 至为 ７ ０ ０ ｍ ｌ 为２ ０ Ｉ Ｉ Ｉ ｌ ， 以及 ７ ０ ｏＩ Ｉ ｌ ｌ 的蒸馏 水。
苏木素配制
（1）明矾苏木素1．Harris氏苏木素（1990）∙苏木素 2.5g无水酒精 25ml硫酸铝钾（钾明矾） 50g或硫酸铝铵（铵明矾）蒸馏水 500ml黄*色氧化汞 1.25g冰醋酸 20ml该溶液为当前最广泛使用的染液，由于它染色时间短，效果好，很受使用者的欢迎。
配制时，先将苏木素溶于酒精（平时也可将苏木素以10%的浓度溶解好，贮存备用），取一2000ml的三角烧瓶，倾入钾明矾，加入蒸馏水，于电炉上加热，熔解钾明矾，完全熔解后，待温度至90℃左右时，加入预先溶解好的酒精苏木素，继续加热至沸腾，延续3-5min，此时溶液逐渐加深，变为紫红色，拔离电源，加入黄*色氧化汞，当充分氧化后，重新插上电源继续加热3-5min，此时溶液变深紫色，拔去电源，直接将三角烧瓶插入预先备好的冰水里，放于暗处，第二天过滤后加入冰醋酸，即可使用三个月，但据我们的实践及多年的经验认为，只要掌握好切片的“无水化”，该染液可反复使用达一年之久（天天使用）。
注意事项：∙①苏木素一定要预先溶解，否则较难彻底溶解。
②加入黄*色氧化汞后，可产生大量的气泡，因此，配制500ml的溶液，一定要选择2000ml以上的容器，否则液体便会溢出。
③当溶液变为深紫色后，应终止氧化，烧瓶应直接插入冰水中，不要担心玻璃瓶会爆裂，因三角烧瓶经特殊处理的，不会有爆裂的危险，如果有，那是属于产品质量问题。
迅速冷却的主要目的是不让溶液过度氧化，以免缩短溶液的使用寿命。
④溶液过滤后方加入冰醋酸，不要颠倒过来。
如果加入冰醋酸后再过滤，过滤速度将非常慢，这是因为醋酸会使滤纸中的纤维膨胀，增加了密度，使溶液不易通过，导致过滤时间延长。
⑤该苏木素在使用一段时间后，可以在表面产生金属膜。
当出现这种现象时，可用粗滤纸捞去，否则贴于切片上将较难除去。
⑥苏木素加入冰醋酸后，其PH值在2－2.28之间。
改良的苏木素配制法（1000ML）一、材料和方法：1、药品：苏木色精2G，硫酸铝5G，碘酸钾（钠）0.2G，乙醇（95%、100%）250ML，蒸馏水750ML，丙三醇50ML，柠檬酸0.3G。
HE染色操作流程
HE染色操作流程HE染色，即是苏木精-伊红染色法，是最常用的染色方法，在质量较佳的HE染色切片上，各种组织或细胞的一般形态结特点都可以观察到。
苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
[试剂材料]1.试剂：%醇溶性伊红染液，改良的哈瑞（Harris）苏木素，%盐酸酒精溶液伊红：配制方法：中性红0.5g，80%酒精100ml,将伊红溶于酒精内搅拌，全部溶解后即可使用。
苏木精：配制方法：A液：苏木素1g，无水酒精10mlB液：硫酸铝钾20g，蒸馏水200ml两液分别溶解后混合，加热煮沸后，慢慢加入红色氧化汞，此时有大量气泡产生，故容器要大，以防液体溢出，然后将染液迅速冷却，冷却后过滤，并每100ml加入冰醋酸6ml，甘油10ml。
%盐酸酒精溶液配制方法：盐酸，70%酒精100ml2.材料：石蜡切片[操作流程]1.将石蜡切片置于烘箱中60℃烤1～2h；2.石蜡切片常规二甲苯，乙醇脱蜡至水，3.苏木素染10分钟，4.流水冲洗，去余色，5.0.7%盐酸乙醇分化数秒钟，6.流水冲洗，切片变蓝约15分钟，%乙醇30秒钟，8.酒精性伊红染30秒，95%乙醇30秒钟，95%乙醇30秒钟，100%乙醇30秒钟，%乙醇30秒钟，13.石碳酸二甲苯30秒钟，（1：4石碳酸1-二甲苯4）二甲苯30秒钟，二甲苯30秒钟，16.中性树胶封片。
[实验结果]：镜下观察细胞核呈蓝色；细胞浆一般呈红色；胶原纤维呈不同程度的红色，红细胞呈亮红色；粘蛋白呈浅蓝色；钙化组织呈深蓝色等。
[。
苏木染色方法
苏木染色方法
苏木染色是一种常用的组织染色方法，广泛应用于生物学和医学领域。
它可以用于染色细胞核、细胞质、胶原纤维、肌纤维等，是一种简单易行、效果明显的染色方法。
下面将介绍苏木染色的方法和步骤。
首先，准备好实验材料和试剂。
所需材料包括玻璃片、玻璃片夹、显微镜载玻片、苏木精染液、脱水酒精、蜡烛或加热平台等。
苏木精染液的配制方法为将苏木精溶解于75%酒精中，制成0.1%的苏木精染液。
接着，取细胞组织标本，将其固定在玻璃片上。
固定方法可以采用甲醛固定或乙醇固定等方法。
固定后的组织标本要经过脱水、透明和浸蜡等步骤，以便组织切片。
然后，将组织切片放置在玻璃片上，用苏木精染液浸泡片上的组织。
浸泡时间一般为5-10分钟，可以根据需要适当延长。
浸泡后，将组织切片在脱水酒精中脱水，然后透明，最后在载玻片上封片。
最后，将封好的载玻片放置在显微镜下观察。
苏木染色后的组织细胞会呈现出深蓝色或紫色，细胞核染色明显，细胞质和胶原纤维也能清晰显示。
苏木染色方法简单易行，适用于各种类型的组织标本。
它不仅可以用于常规的生物组织染色，还可以用于病理组织学的研究。
在实际操作中，需要注意控制好染色时间和浓度，以保证染色效果的稳定性和一致性。
总之，苏木染色是一种重要的组织染色方法，具有操作简便、染色效果好的特点。
掌握好苏木染色的方法和技巧，对于生物学和医学研究都具有重要意义。
希望本文介绍的苏木染色方法能对您有所帮助。
苏木精-伊红染色使用说明
苏木精-伊红染色使用说明【试剂配制】苏木精染液苏木精配方很多，现介绍常用的是Harris苏木精染液。
苏木精1g95％乙醇溶液10ml钾矾或铵矾20g蒸馏水200ml氧化汞0.5g冰醋酸8.0ml先将苏木精溶于乙醇溶液。
钾矾加温溶解烧瓶后，将倒入，继续加热1min。
加热停止后，缓慢加入氧化汞0．5g，再继续加热煮沸1min。
迅速将烧瓶移人冰水内。
染液冷却呈深色时，加冰醋酸过滤后即可使用。
棕色磨口瓶保存。
室温保存2个月，4℃保存4个月左右。
1.0％伊红染液将1.0g水溶性伊红溶100ml蒸馏水中，每100ml伊红液中加0.2ml冰醋酸。
【实验步骤】(1)石蜡片经脱蜡、水化，单层细胞片经漂洗固定。
(2)苏木素染液染5～10min(染色时间与温度、染液成熟度有关)。
(3)自来水换数次，标本转为深蓝色。
(4)分色：浸入1％稀盐酸乙醇液(100ml 75％乙醇溶液中加1d盐酸)分色数秒钟至1min，脱去多余的蓝浮色，标本转为淡紫红色镜下呈紫红色，胞质无色或灰蓝色(后者为幼稚细胞)。
(5)蓝化：自来水浸洗10min或数小时，甚至更长，标本从淡紫红色转为鲜艳的浅蓝色。
注意：为缩短自来水浸洗时间，使苏木素更加显色，可将标本置淡氨水溶液(400ml自来水加氨水2滴)中10min，切片很快呈鲜艳的浅蓝色，经此处理的标本，要经自来水充分浸洗，否则会影响伊红染色。
(6)蒸馏水漂洗。
(7)伊红染液5～10min，进行对比染色。
(8)用蒸馏水洗去玻片的浮色,经70％、80％、90％梯度乙醇溶液脱水各一次，再分别经95％、100％乙醇溶液脱水各两次，每次1min。
(9)浸入二甲苯两次，每次1min。
中性树胶封片【注意事项】(1)Harris苏木精染液即配即用，不能久存，宜少量配用。
(2)HE染色时，除大批标本采取浸染外，一般以滴染为好。
染液反复使用而被水稀释,使特异性染色和染色速度下降。
(3)苏木精染液出现沉淀现象，是染液变质的一种指示，但滤液仍可使用一段时间。
Harris苏木素染液的新配制
3.2 氧化剂添加要适时。Harris苏木素染色周期短，我们发现与氧化剂的添加时间有关。Harris苏木素原配方是在近100℃时加入氧化汞后，继续用小火加温。而实际工作中，根据观察配制过程，当苏木素染液温度在91℃左右时，添加氧化汞，即能使氧化汞完全分解于苏木素液中，又不会很快完全氧化，使染液一直处于染色力最强的三氧化苏木素状态，达到Harris苏木素染液长期最佳使用效果。
3.3 媒染剂剂量减少。苏木红要对细胞具有强的亲和力，必须加入媒染剂——硫酸铝钾。从苏木精分子的结构式来看不可能结合很多的铝离子，故Harris苏木素原配方常用1g苏木素配20g硫酸铝钾为媒染液，在实际应用中，当冷却和久置后有大量沉淀生成，甚至有明矾结晶析出。以上不良现象主要是因为媒染剂用量过大。我们根据文献报道，用1g苏木素配8.8g硫酸铝钾，不但节约试剂，而且减轻了媒染剂副作用的影响。
1.5 次日晨，将配制的苏木素液进行过滤。加入2g柠檬酸搅匀，此时的 Harris液为绛红色。
2．结果
配制好的染液即可使用。切片染1′—3′，涂片30″—1′，然后入水、分化、蓝化，胞核呈鲜蓝色。
3．讨论
3.1 Harris苏木素染液,有很多优点,所用试剂较少,操作步骤简单。但在实际运用中也有些缺点,如染色周期短,有沉淀现象和氧化膜等。我们根据文献报道反复摸索,对Harris苏木素染液进行了一些调整。
1.2 将2.5g苏木素放入25ml无水乙醇中，搅拌至完全溶解。
1.3 将22g硫酸铝钾加入500ml蒸馏水内，加热溶解，然后加入苏木素无水乙醇液，使溶液尽快沸腾后，移离开火焰。
1.4 搅拌溶液，待温度下降至91℃左右时，将氧化汞缓缓加入。此时，烧瓶内液体变成紫红色，但不会沸腾溅出。继续搅拌至看不到氧化汞的黄颜色为止，迅速将烧瓶放置于冷水中，用纱布置于瓶口处盖之。注意，瓶口不能用橡皮塞，否则会有氢氧化铝凝胶形成。
苏木精等染料的配制
常用染料的性质和配制（1）代氏（Delafield's）苏木精苏木精4g95％酒精25ml苏木精溶解后，逐滴加入加热（80℃）溶化的10％钱明矾水溶液400ml中，瓶口用纱布封盖，放置光线充足处，3—4天后过滤后再加入：甘油100ml甲醇100ml数日后过滤，两月后成熟，溶液变为蓝紫色，方可使用。
放置时间愈长，染色力愈强。
此染液为动、植物最常用的细胞核染色剂。
染色时间一般为3—5分钟，染色后，细胞质亦稍染上颜色，需用0.1％盐酸水溶液褪去细胞质颜色，保存细胞核颜色，这种区别作用称为分色。
（2）爱氏（Ehrlich's）苏木精苏木精2g纯酒精100ml冰醋酸10ml甘油100ml蒸馏水100ml钾明矾2—3g先将苏木精溶于25ml酒精，再加甘油和醋酸。
然后将其余75ml酒精加入。
将钾明矾溶于水中，加热使其溶化，然后慢慢加入苏木精液中，随加随搅，混合后，应放在有光和通风处3星期使其成熟，成熟后为深红色，即可使用。
用法与代氏苏木精一样，染细胞核结果极好。
用稀释液慢染脊椎动物胚胎及无脊椎的幼虫，作整体染色效果颇佳。
（3）铁矾苏木精液（又名Heidenhain's苏木精液）苏木精0.5g95％酒精10ml重蒸馏水90ml将苏木精先溶于10ml酒精中，然后慢慢倒入重蒸馏水中，瓶口用纱布扎紧静置于有光处。
约1个月后，苏木精被氧化，溶液变为深琥珀色，即可用。
此时要将瓶塞塞好。
此液可以放置很久，是较好的染核结构的染色剂。
（4）伊红（Eosin）伊红又称曙红，为染胞浆、胶原纤维、肌纤维及嗜酸性颗粒等常用的染料，是一种酸性染料。
伊红的种类很多，一般分水溶和酒溶两种。
伊红配法很简单，水溶液一般用0.1—1％，酒精溶液用60—96％酒精溶化，浓度与水溶液相同。
（5）苏丹（Sudan）Ⅲ苏丹Ⅲ 0.3—0.5g70％酒精100ml（6）莱氏（Wright's）染料莱氏染料（粉末）0.1g甲醇（A．R）60ml先把染料放入研钵研细后，加入少量甲醇反复研磨，最后将全部甲醇加入研匀后，用吸管吸入棕色瓶保存备用。
HE染色和吉姆萨染液
HE染色和吉姆萨染液试剂和方法如下。
一、HE染色试剂：苏木素染液：苏木精1g；无水乙醇25mL；硫酸铝钾10g；蒸馏水350mL；碘酸钾0.1g；冰醋酸10mL。
A 液：用25mL 无水乙醇溶解1g苏木精，摇动即可溶解。
B 液：用350mL 蒸馏水溶解10g硫酸铝钾，摇动或振荡即可溶解。
把A 液和B 液混合，加入碘酸钾摇动至颜色加深。
最后加入10mL冰醋酸，摇动颜色变为深葡萄酒红色。
染液配制当日即可应用于染色。
酸化液：醋酸20-35mL加蒸馏水至700mL。
伊红染液：储液：取1g伊红，溶于100mL 95%的乙醇，待溶解完全后加几滴冰醋酸至染液呈半透明状，避光保存备用。
工作液：取一定量的伊红储液，加入等量70%乙醇，此液即为伊红染液的工作液。
染色步骤：（1）细胞爬片放用PBS漂洗3次，每次5min，无水乙醇固定5min，风干。
（2）95%乙醇1min，75%乙醇1min，三蒸水1min。
( 3 ) 浸洗5 % 的醋酸液( 酸化液) 数秒。
( 4 ) 苏木精染液3 - 5 m i n，胞核呈橙红色。
( 5 ) 自来水冲洗至颜色变蓝。
( 6) 盐酸乙醇液分化数秒，颜色再次返红。
(7) 自来水再次冲洗，返蓝。
( 8) 伊红染液5min，流水漂洗15min左右。
二、吉姆萨染色试剂：吉姆萨染液配制：取吉姆萨粉末1g溶于66ml甘油中研磨混匀，然后放置55-60℃水浴2h，冷却后加入66ml甲醇中混匀，过滤后棕瓶分装保存。
PBS甲醇液：PBS与甲醇一比一混合。
染色步骤：（1）细胞爬片使用PBS漂洗3次，每次5min。
（2）加PBS甲醇液静置2min，去掉PBS甲醇液。
（3）加甲醇固定10min，去掉甲醇，加入新无水甲醇漂洗去掉。
（4）加吉姆萨染液2ml/25cm2，2min后加入8ml水稀释并晃动染液2min，去掉染液。
（5）流水冲洗10~20s，湿润时观察。
巴氏染液配制
巴氏染液配制1、苏木精：Harris苏木精：苏木精5g溶于无水乙醇50ml ，硫酸铝钾100g溶于蒸馏水1000ml ，混合后煮沸，待稍冷加入氧化汞2.5g，再煮沸2min，用前加冰醋酸20ml改良Gill氏半氧化苏木精：苏木精2g, 无水乙醇250ml, 硫酸铝17.6g,（可减半量）碘酸钠0.2g, 柠檬酸2g，甘油50ml, 蒸馏水750ml。
配制方法：将苏木精溶于无水乙醇，硫酸铝溶于蒸馏水，完全溶解后两液混合，依次加入碘酸钠，柠檬酸，甘油。
此配方特点：配制时勿须加温。
配后即可应用。
性能稳定，基本消除了过度氧化的苏木精结晶污染涂片的麻烦。
唯染色时间较长，须5～10min。
2、桔黄G6(orangeG6)：桔黄G 0.5g，溶于95%酒精100ml, 加磷钨15mg。
3、EA染液：EA36：由三种贮备液按比例混合而成：0.5%亮绿(light green)酒精溶液45ml，0.5%裨士麦褐(bismark brown)酒精溶液10ml，0.5%伊红Y(eosin yellowish)酒精溶液45ml，混合后，再加磷钨酸0.2g，饱和碳酸锂水溶液1滴。
EA50：3%亮绿水溶液10ml，纯甲醇250ml，20%伊红Y 水溶液20ml，冰醋酸20ml，磷钨酸2g (水溶后加入)，95%酒精700ml 。
染色方法1、经固定的涂片入水、苏木精染核、盐酸酒精分化、返兰同HE染色。
2、70%、80%、95%酒精逐级脱水各1min。
3桔黄G6 3～ 5 min 。
4、95%酒精二缸漂洗各 1 min 。
5、EA36或EA50 5 min 。
6、95%酒精二缸漂洗各 1 min 。
7、无水酒精二缸漂洗各 1 min 。
8、二甲苯二缸透明各 1 min 。
9、中性树胶封片。
染色结果核深蓝色, 鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞浆染绿色，表层不全角化细胞胞浆染粉红色, 完全角化细胞胞浆呈桔黄色, 红细胞染鲜红色，粘液染淡蓝色或粉红色。
病理染色试剂—苏木精配置的探讨
谢谢！
苏木素的配置方法
Harris苏木素： 苏木素2.5g 无水乙醇25ml 硫酸铝钾50g 蒸馏水500ml 氧化汞1.25g 冰乙酸20ml A液：苏木素与无水乙醇溶解 B液：硫酸铝钾与蒸馏水溶解 A液+B液混合加热使溶质溶解，等溶液冷却后加入氧化 汞，然后再加温煮沸，冷却后备用。（临时用前加入冰 乙酸）
配置注意事项
1.A液+B液混合加热，应缓慢分次导入，防止液体喷出，禁止在 明火上操作。 2.氧化汞加入后煮沸时间不应该过长，防止过度氧化。 3.用于配置的烧杯应大于配置液体的一倍以上容积。 4.如需要自然氧化的苏木素可以不加氧化汞，三个月以后自然氧 化，临时用时加入20ml，冰乙酸即可。
总结
苏木素伊红（HE）染色在病理组织制片中占有很重要的位置，HE 好坏直接影响病理诊断的准确性，其中用于细胞核染色的苏木素 更是重要，在长期实际应用过程中发现Harris苏木素效果较好，染 色稳定性佳，核仁着色明料，是因为苏木素的分子 氧化后成为生物染料—氧化苏木红。在常规HE 染色中，苏木素经过氧化变成酸性染料苏木红， 苏木红与二价或者三价的金属盐或氢氧化物结合 下形成带+电荷的蓝色色精，只有这种情况下， 才能与细胞核中带-电荷的DNA结合完成染色。 苏木红和媒染剂的结合不但较好的现实细胞核成 分，还可以与组织中其他物质进行结合。
病理染色—苏木精配置的探讨
西丽医院病理科 柳知浩
前 言
苏木素是一种天然燃料，是从苏木素树的树心 木提炼出来的。它原产于墨西哥，虽然使用年限 较早，但是着色性能一直很差。一直到上个世纪 70年代，苏木素才有了新的提取方法，将苏木素 树锯倒后剖皮去掉外衣，将苏木素树心先用热水 浸泡，然后加尿素沉淀后制成的染料稳定性有明 显改善，自从有苏木素以来，苏木素在单独使用 时着色能力较差，但仍是最常用的细胞核的组织 学染料。
病理室常用试剂配制方法
福尔马林的配制
日常工作中用于组织固定的10%福尔马林， 是由甲醛原液与蒸馏水1:9混合配制而成， 实际浓度含甲醛为4％。其固定液渗透能力 很强，固定均匀，对组织收缩小。
Thank you
苏木精染色液的配制
配制苏木精染液所需试剂的作用 ：
• 甘油：作为稳定剂，延缓苏木精染液蒸发，防止 苏木精过度氧化，延长苏木精液的使用期。
• 冰醋酸：可抵销氧化剂的氧化，使苏木精和苏木 红保持均衡。同时又可增加胞核的选择性染色， 使胞核染色质显示得清晰细致。
苏木精染色液的配制
改良Lillie-Mayen苏木素染液的配制：
福尔马林的配制
固定液的种类很多，分为单纯固定液和混 合固定液。
常用单纯固定液 ：1.甲醛(formaldehyde ）；
2.乙醇(alcohol) ； 3.醋酸(aceticacid)又名乙酸
福尔马林的配制
甲醛为非沉淀性固定剂，是一种约有40％ 重量溶于水的气体，易挥发，市售的为40 ％的甲醛水溶液，也称为福尔马林原液 (formalin)。此液久存自行分解，形成的白 色沉淀为副醛(三聚甲醛或多聚甲醛)。
盐酸酒精的配制
盐酸酒精的配制方法是，用滴定管配合吸耳 球转移盐酸1ml至99ml 70%乙醇中混匀即可。 1%盐酸酒精有效期3个月。
福尔马林的配制
固定的目的是在于尽量使组织和细胞保持与 生活时相仿的成分和形态，迅速防止组织、 细胞的死后变化，防止自溶与腐败，使细胞 内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变 成不溶性物质，使组织中的各种物质沉淀和 凝固起来 。 因此，固定的组织愈新鲜愈好，固定组织时， 应使用足量的固定液。
病理室常用 试剂配制方
法
病理常用试剂及染液的配制
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华越洋苏木素(苏木精)
染色液的配制
各类溶液的配制方法如下：
1) Harry`s苏木素苏木素1g 无水酒精10ml
硫酸铝钾20g蒸馏水200ml氧化汞冰醋酸8ml分别用无水酒精溶解苏木素，蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，然后两液混合并煮沸，加入氧化汞，继续加热和搅拌至溶液为深紫色，立即冷却，恢复至室温后过滤备用。
(2) 改良Lillie-Mayer`s苏木素苏木素无水酒精20ml硫酸铝钾5g蒸馏水
330ml碘酸钠250mg甘油150ml冰醋酸10ml
分别用无水酒精溶解苏木素，蒸馏水溶解硫酸铝钾，然后两液混合后，依次加入碘酸钠、甘油和冰醋酸。
(3) Mayer`s苏木素苏木素100mg
蒸馏水100ml碘酸钠20mg硫酸铝铵5g柠檬酸100ml水合氯醛5g用蒸馏水溶解苏木素后，依次加入碘酸钠、硫酸铝铵和水合氯醛，过滤后备
（4）Ehrlich氏苏木素（1886）
苏木素1g
无水酒精50ml
甘油50ml
硫酸铝钾
蒸馏水50ml
冰醋酸5ml
将苏木素溶于无水酒精里，硫酸铝钾溶于蒸馏水中，然后所有的试剂都加在一起，充分搅拌均匀后，放于窗台上阳光充足的地，让其慢慢氧化成熟，大约需四个星期，才可使用。
该液量种很好的细胞核染色液，用它染后，细胞核染色清晰，不易过染。
对于用酸脱钙组织细胞核的染色，该试剂优于其它各种苏木素。
这种自然氧化成熟的苏木素，可长期使用，不会变质。
但染色时间较长，需要20分钟以上。
如需急用而苏木素又未成熟时，该液可加入20-30mg的碘酸钠，以促使其迅速氧化成熟，但这试剂配成后，就不是原来的苏木素，不能长期使用，但起码可用半年左右。
（5）Weigert氏铁苏木素
A液：苏木素1g
无水酒精100ml
将苏木素溶于酒精，让其慢慢氧化成熟，约四周以后，便可以使用，或者用成熟的10%
的苏木素酒精配制，即时可用。
B液：29%三氯化铁水溶液4ml
蒸馏水95ml
盐酸1ml
临用时，取A液和B液等份混合，即可使用，在4小时内使用完毕，如果超时，这种试
剂便过分氧化而失效。
因此，每次使用，需要多少配制多少，采取一次性用完，以免造
成浪费。
该染液具有抗弱酸的能力，因此，常用于某些特殊染色核的染色，染色时间为20-30分钟。
华越洋苏木素染色液综合了多种经典的苏木素染色方法，例如Harris法、Mayer法等，简化了操作步骤，缩短了操作时间，并且染色液内不使用汞、甲醇等有毒试剂。
可以用于组织切片或培养细胞的染色。
本苏木素染色液染色后细胞核呈蓝色。
本染色液可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。
一方面可以在本苏木素染色液染色后进行免疫荧光染色或其它染料的染色，另一方面也可以在免疫组化染色后再进行苏木素复染。
华越洋苏木素染色液可以重复使用，直至认为效果不佳时再换用新的染色液。
一个包装的本染色液至少可以染色200个样品。