芽孢杆菌常用培养基配方
短小芽孢杆菌培养基和生长条件
短小芽孢杆菌培养基和生长条件
短小芽孢杆菌（Bacillussubtilis）是一种常见的革兰氏阳性细菌，被广泛应用于工业生产和科学研究中。
为了成功培养短小芽孢杆菌，需要提供适宜的培养基和生长条件。
1.培养基选择：
短小芽孢杆菌可以利用多种培养基进行培养，以下是几种常用的培养基：
营养琼脂培养基：适合一般的短小芽孢杆菌培养，提供必需的营养物质。
TGY培养基：含有大量的蛋白胨、蛋白胨酵解物和酵母浸出物，适用于高密度培养。
埃氏培养基：含有酵母提取物、蔗糖和纽博尔特氯化钠，适用于制备孢子。
亚洲细胞培养基：适用于短小芽孢杆菌的体外培养。
2.生长条件：
短小芽孢杆菌对于生长条件的要求相对宽松，但仍然需要一定的条件进行培养和生长。
以下是几个常用的条件：
温度：适宜的生长温度为3037摄氏度，可以在较宽的温度范围内生长。
pH值：最适宜的pH值为6.57.5，但短小芽孢杆菌可以在pH值为58之间生长。
氧气浓度：短小芽孢杆菌是一种嗜氧菌，需要较高的氧气浓度进行生长。
因此，在培养过程中需要提供充足的通气。
摇床速度：通常在培养液中需要适度的搅拌，以保持培养液的均匀性和氧气的供应。
摇床速度通常为200300转/分钟。
培养时间：短小芽孢杆菌的生长速度相对较快，通常需要2448小时就可以达到最佳生长状态。
以上是短小芽孢杆菌的培养基选择和生长条件的一些简要说明，具体的培养方法还需要根据实际需要和研究目的进行具体调整和优化。
芽孢杆菌分离纯化及保种
芽孢杆菌分离纯化及保种
一、实验目的：从海参池底泥中分离提纯芽孢杆菌并对其进行鉴定保种
二、实验材料：底泥样品，刺激芽抱生长培养基，芽抱菌分离培养基，琼脂培养基，斜面培养基，生理盐水等其他常见微生物实验常用器材
培养基配方：
1.刺激芽抱生长培养基：蛋白胨l0g，酵母膏3g，淀粉3g,MgS040.lg,KHZP04
1.5g,Na2HP042g，水1000mL，琼脂15g，pH7.8
2.芽抱菌分离培养基：蛋白胨3g,葡萄糖5g，酵母膏5g,KZHP044g,
3.08%MnS04 1mL，琼脂18g，水1000mL,pH自然(加热煮好后加3.08%MnS04)
3.琼脂培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g,NaCl5g，18g的琼脂，水1000mI,pH 7.2^-7.4
4.斜面培养基即琼脂培养基
三、实验步骤：
1、配制刺激芽孢杆菌生长的培养基、芽抱菌分离培养基、琼脂培养基、生理盐水
2、对各种实验所需仪器进行灭菌
3、将底泥样品1g放入9ml生理盐水中，震荡，充分混匀分散样品，最后取上清液1ml涂布于刺激芽孢杆菌生长的培养基（液体）上，30℃培养24h
4、将培养好的菌悬液置于80℃水浴锅中加热10---20min，杀死不能形成芽抱的其它菌体，平板涂布法接种于芽抱菌分离培养基，30℃培养24--48h，挑取疑似菌落，30℃培养24h后观察并记录
5、将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。
四、实验结果：
芽孢杆菌菌落形态特征:菌落为圆形，直径多在3-10mm之间，淡黄色，中间颜色较深，表面平整不光滑，无光泽，边缘不整齐
配制刺激芽孢杆菌生长的培养基：芽抱菌分离培养基：。
蛋白酶发酵培养基
碱性蛋白酶发酵菌种为芽孢杆菌(Bacillus)，37℃，培养48 h，1发酵培养基l：可溶性淀粉1%、蛋白胨0.5%、Na2HPO4*12H2O 0.4% 、KH2PO4 0.03% 、CaCl2 0.1% 、pH中性、121℃灭菌25 min。
2发酵培养基Il：玉米粉2% 、豆饼粉3% 、麸皮3% 、Na2HPO4*12H2O 0.4% 、KH2PO4 0.03% 、ZnCl2 0.1% 、pH 8.0、121℃灭菌25 min。
发酵培养基(1000mL)：黄豆饼粉50g，玉米粉50g，麸皮25g，KH2PO4 0.3g，Na2HPO4 0.4 g，Na2CO3 lg；自然pH，在36℃下通风培养，前期通风1：0.15，后期通风1：0.2，搅拌40 h左右。
低温碱性蛋白酶：黄海黄杆菌发酵培养基(1) 豆饼粉(水解液，加0.5%NaOH，121℃水解30min，冷却、过滤)4.5%、玉米浆(酶解液.购自华北制药厂)6%、Na2HPO4 0.4%、KH2PO4 0.03%、Na2CO，0.1%、MgSO4 0.02%、CaC12 0，2%、泡敌约0.5‰(视具体情况及时补加)，pH 7，121℃灭菌30 min。
(2)豆饼粉(水解液.加0.5 NaOH，121℃水解30 min，冷却、过滤)4.5%、葡萄糖1%、Na2HPO40.4%、KH2PO40.03%、Na2CO3 0.1%、MgSO4 0.02%、CaC12 0.2%、泡敌约0.5‰(视具体情况及时补加)，pH7。
121℃灭菌30min分批发酵动力学试验使用瑞士Bioengineering公司NLF22型自动控制发酵罐进行分批发酵。
发酵罐容积20 L .两层六平直叶搅拌，双挡板。
采用1.2.3节(1)培养基，装料系数0.65，接种量4%，培养温度18℃，以5mol/L NaOH 液调节pH7左右，通气量1：1、搅拌速度300～500r/min，控制溶氧在35%～45%之间。
胶质芽孢杆菌
胶质芽孢杆菌的活化、分离纯化、优良菌株的保藏一、培养基的配方1.硅酸盐细菌培养基：酵母浸膏0.3克，蔗糖10.0克，硫酸铵0.5克，碳酸钙0.5克，七水硫酸镁0.5克，磷酸氢二钾1克，蒸馏水1000毫升，pH值7.0-7.2。
2.无机磷培养基：蒸馏水1000毫升，葡萄糖10.0克，硫酸铵0.5克，七水硫酸镁0.3克，氯化钠0.3克，氯化钾0.3克，硫酸亚铁0.036克，一水硫酸锰0.03克，磷酸三钙2.0克，琼脂15克，pH7.0-7.2。
3.钾细菌筛选培养基：蔗糖（10g），酵母膏（0.5g），Na2HPH4（2g），（NH4）2SO4(1g)，MgSO4.7H2O(0.5g)，CaCO3(1g)，钾长石粉（1g），其中K2O质量分数为9.60%，琼脂（15g），去离子水（1L），调节初始pH值为7.0。
二、菌株活化、培育和挑选：将菌种提前从下层冰箱取出，然后接种到硅酸盐细菌培养基中进行28℃恒温培养2天，每隔12小时观察一次，并选取长势优良菌株，实施分离纯化，直到得到生长优良的纯菌落。
三、解磷、解钾能力的测定：将上述所挑选的优良菌种接种于无磷培养基恒温培养七天，采用溶磷圈法进行解磷能力测定。
用溶磷圈直径与菌落直径的比值（HD/CD）大小分析该菌种的解磷能力，比值越大，解磷性能就越好。
把解磷能力优良的胶质芽孢杆菌采用低温斜面保藏法保藏。
四、菌种扩大培养培养液用5个100ml三角瓶分装，高压灭菌或间歇灭菌后，挑选斜面菌种上的菌苔接种到培养液中，25到28℃下培养3天。
培养期间，每天要定时摇瓶3到5次，每次3分钟，以加速菌体繁殖。
然后接种到5个500ml的三角瓶扩大培养。
最后接种到2000ml的塑料壶中培养并保存。
钾细菌在这种以淀粉为能源的培养基中生长繁殖时，它们的夹馍消失，且能大量生成芽孢。
因此培养液没有粘性，菌体是均匀的悬浮在培养液中的，这样的菌悬液很适合作固体菌剂接种的菌种。
芽孢杆菌的发酵方法
芽孢杆菌的发酵方法
芽孢杆菌是一种常见的细菌，具有很高的产酶能力，被广泛应用于发
酵工业中。
下面我们将介绍关于芽孢杆菌的发酵方法。
一、菌液筛选
首先，需要筛选出优良的芽孢杆菌菌株，进行菌株的培养和培育。
具
体的筛选方法通常包括挑选菌株的活性、产酶能力和耐酸碱性等特性。
二、基础培养基的配制
芽孢杆菌的发酵需要使用到基础培养基，因此，需要针对不同的菌株
配制不同的培养基，以保证菌株能够充分生长和繁殖。
常用的基础培
养基包括磷酸氢二钾、酵母提取物和玉米粉等原料。
三、发酵条件的设定
在芽孢杆菌的发酵过程中，需要对于发酵条件进行调整和设定，以保
证菌株的繁殖和产酶能力都能够充分发挥。
具体的发酵条件包括温度、pH值、氧气含量等参数。
四、产酶的收获
在芽孢杆菌的发酵过程中，需要通过不同的收获方式获取产生的酶，以便后续的应用。
一般来说，可以通过分离菌体、离心沉淀等方式收获酶，然后进行纯化和分离。
五、产酶的应用
最后，通过对产生的酶进行应用和利用，可以获得具有广泛应用价值的商品酶。
例如，芽孢杆菌产生的蛋白酶可以应用于食品加工、药物制剂和皮革加工等领域，具有很大的经济和社会意义。
总之，芽孢杆菌的发酵方法是一项重要的工艺技术，需要全面了解并掌握相关的技术方法和操作技巧，以保证发酵产物的纯度和品质。
同时，还需要不断探索和研发新的发酵技术和应用领域，为经济与社会的可持续发展做出积极贡献。
枯草芽孢杆菌的培养
菌种的培养1.1材料1.1.1 菌种枯草芽孢杆菌。
1.1.2 培养基（1）LB培养基：蛋白胨10g，酵母膏5g，NaCl10g，蒸馏水1000ml，pH为7，（可溶性淀粉20g）琼脂20g。
（2）筛选用培养基：含有2%可溶性淀粉的LB培养基。
（3）种子培养基：豆饼粉4%，玉米粉3%，Na2HPO40.8%，(NH4)2SO40.4%，NH4Cl0.15%，H2O。
（4）发酵培养基：豆饼粉5.6%，玉米粉7.2%，Na2HPO40.8%，(NH4)2SO40.4%，NH4Cl0.13%，CaCl20.13%，α—淀粉酶50g。
【2】1.1.3 主要试剂蔗糖、葡萄糖、淀粉、玉米淀粉、麦芽糖、酵母浸出物、胰蛋白胨、牛肉膏、尿素、氯化铵、硫酸锰、硫酸镁、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硫酸亚铁、氯化钠和氯化钙。
1.1.4 仪器设备控温摇床、高压蒸气灭菌锅、电子天平、pH测定仪、无菌操作台和紫外分光光度计。
1.2方法1.2.1 培养基的制备(1)称量按培养基配比依次准确地称取酵母膏、NaCl、蛋白胨放入烧杯中，并在烧杯中加入少量蒸馏水。
注：酵母膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，酵母膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片【3】。
(2)溶化可溶性淀粉溶液的配制方法：将所需克数的可溶性淀粉放入一个小烧杯中，加入少量蒸馏水，搅拌成糊状，然后将糊状溶液均匀倒入少于培养基总体积的沸水中，一边搅拌一边加热，待其溶化成透明状后继续在电炉上加热5分即制成可溶性淀粉溶液。
如果配制固体培养基时，将已准备好的可溶性淀粉溶液倒入烧杯中，将称好的琼脂放入已溶的药品中，再加热溶化，补水到所需的总体积。
在制备用三角瓶盛固体培养基时，一般也可先将一定量的液体培养基分装于三角瓶中，然后按2%的量将琼脂直接分别加入各三角瓶中，不必加热溶化，而是灭菌和加热溶化同步进行，节省时间【4】。
芽孢杆菌培养基配方
芽孢杆菌培养基配方
芽孢杆菌（Bacillus）是一类常见的细菌属，具有广泛的应用和研究价值。
以下是一种常用的芽孢杆菌培养基的配方，称为Luria-Bertani培养基（LB培养基）：
1. 配方：
- 蛋白胨（tryptone）：10 g/L
- 酵母提取物（yeast extract）：5 g/L
- 氯化钠（sodium chloride）：10 g/L
- 琼脂（agar）（如果需要制备琼脂平板）：15 g/L
2. pH调节：
- 使用NaOH或HCl调节pH至约7.0（可以根据需要微调pH值）
3. 制备方法：
- 将蛋白胨、酵母提取物和氯化钠加入适量的蒸馏水中，充分溶解。
- 如果需要制备琼脂平板，将琼脂加入上述溶液中，加热搅拌使其溶解。
- 如果需要琼脂平板，将培养基分装至培养皿中，待凝固后，在室温下保存或在4摄氏度冷藏。
- 如果需要液体培养基，将培养基分装至培养瓶中，用适当的塞子或膜覆盖。
- 对于液体培养基，可通过高压灭菌或自动厌氧培养等
方法进行无菌处理。
LB培养基是一种常用的通用培养基，适用于很多细菌的培养和研究。
需要注意的是，具体的芽孢杆菌培养基配方可能因研究需求和菌株特性而有所不同。
因此，在具体的实验或应用中，建议根据需要进行适当的调整和优化。
胶冻样芽孢杆菌工艺
胶冻样芽孢杆菌是一种常见的细菌，广泛存在于自然界中。
它可以利用多种有机化合物作为碳源和能量源生长，同时具有较强的产酶能力和抗生素产生能力，在生物技术领域中有着广泛的应用前景。
下面我们将介绍胶冻样芽孢杆菌的工艺。
一、菌种选用胶冻样芽孢杆菌是一种常见的土壤细菌，因此可以从自然环境中分离得到。
在实验室中，也可以通过购买或者向相关单位索取获得该菌株。
选择高质量的菌种对于后续的工艺操作具有重要意义。
二、培养基配方培养基是细菌生长的重要环境，不同的菌株需要不同的培养基。
对于胶冻样芽孢杆菌来说，适宜的培养基配方是：（1）碳源：葡萄糖、淀粉、木质素等。
（2）氮源：蛋白胨、酵母提取物、尿素等。
（3）矿物质：NaCl、KCl、MgSO4等。
（4）微量元素：FeSO4、MnSO4、ZnSO4等。
（5）pH值：7.0-7.5。
三、培养条件胶冻样芽孢杆菌适宜在30℃左右进行培养，最适温度为37℃。
在培养过程中，需要注意以下几点：（1）通气性：胶冻样芽孢杆菌需要良好的通气环境，因此需要配备透气性好的培养瓶或者使用摇床培养。
（2）培养时间：胶冻样芽孢杆菌生长周期较长，一般需要在培养基上培养24-48小时。
（3）培养条件：胶冻样芽孢杆菌喜欢微酸性条件，因此需要控制培养基的pH值在7.0-7.5之间。
四、发酵工艺胶冻样芽孢杆菌的发酵工艺可以分为两个阶段：预培养和主发酵。
（1）预培养：将胶冻样芽孢杆菌接种到含有适宜营养物质的液态培养基中，经过一定时间的培养，使其达到一定的菌量。
预培养的温度为30℃，通气性良好。
（2）主发酵：将预培养好的胶冻样芽孢杆菌接种到发酵罐中，进行主发酵。
主发酵的条件如下：①温度：37℃。
②pH值：7.0-7.5③通气性：良好通气。
④搅拌速度：150rpm。
⑤发酵时间：24-72小时。
五、产物收获在主发酵结束后，需要对发酵液进行离心分离、过滤等操作，得到目标产物。
收获的产物可以在后续的实验中用于酶学研究、抗生素开发等领域。
芽孢杆菌
芽孢杆菌培养：1、如果只是要求使枯草芽孢杆菌生长，就用这个培养基（1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂）或者用其他的如牛肉膏蛋白胨培养基、LB培养基都行，主要是看你的培养目的是什么，因为枯草芽孢杆菌具有很多生物学特性和应用价值，可用来产酶如淀粉酶、蛋白酶、抗血栓酶，甚至产生其他生理活性物质等，根据你的目的不同，应该有所选择，选择不同碳氮源及生长因子，促进目标产物的积2、1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂3、枯草芽孢杆菌常用培养基配方：1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂枯草芽孢杆菌原生质体的制备1 培养枯草芽孢杆菌取亲本菌株T4412、TT2 新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基(CM)的试管中，36℃振荡培养14 h，各取1 mL 菌液转接入装有20 mL 液体完全培养基的250 mL 锥形瓶中，36℃振荡培养3 h，使细胞生长进入对数前期，各加入25 u/mL 青霉素，使其终浓度为0.3 u/mL，继续振荡培养2 h。
2. 收集细胞各取菌液10 mL，4000 r/min 离心10 min，弃上清液，将菌体悬浮于磷酸缓冲液中，离心。
如此洗涤两次，将菌体悬浮10 mL SMM 中，每mL 约含108～109 活菌为宜。
3. 总菌数测定各取菌液0.5 mL，用生理盐水稀释，取10-5、10-6、10-7 各1mL(每稀释度作两个平板)、倾注完全培养基，36℃培养24 h 后计数。
此为未经酶处理的总菌数。
4. 脱壁二株亲本菌株各取5 mL 菌悬液，加入5 mL 溶菌酶溶液，溶菌酶浓度为100 ug/mL，混匀后于36℃水浴保温处理30 min，定时取样，镜检观察原生质体形成情况，当95%以上细胞变成球状原生质体时，用4000 r/min 离心10 min，弃上清液，用高渗缓冲液洗涤除酶，然后将原生质体悬浮于5 mL 高渗缓冲液中。
枯草芽孢杆菌的培养基配方
枯草芽孢杆菌的培养基配方枯草芽孢杆菌，听起来是不是有点儿陌生？但是别担心，今天咱们就来聊聊这种小家伙的培养基配方，保证让你听了之后会心一笑。
咱们得明白，这种细菌可不是随便找块土壤就能长出来的，得有个合适的“家”。
想象一下，咱们如果要聚会，当然要找个舒服的地方对吧？所以，咱们的培养基就得“精心准备”。
咱们的枯草芽孢杆菌喜欢的培养基可不是随便的，得是个“营养丰富”的配方。
咱们需要一些蛋白胨，像是给细菌准备的“营养餐”。
这玩意儿能提供它们所需的氨基酸，简直就像是给它们开了个“补给站”。
别忘了添加酵母提取物，这可是细菌们的“能量饮料”，里面含有维生素，细菌们喝了可开心了。
然后，咱们得说说碳源的问题。
这个枯草芽孢杆菌可喜欢糖哦，所以加点葡萄糖，简直是它们的“甜蜜蜜”。
有了这些，小家伙们就能充分发挥它们的“潜力”，快速生长。
再加点无机盐，比如氯化钠，别小看这盐，给细菌们的生活带来了一丝“咸味”，让它们更有精神。
这个培养基可不能缺水，毕竟细菌也跟咱们一样需要水分。
水就像是它们的“生命之源”，没有水，细菌们可就没法茁壮成长了。
想象一下，咱们在干燥的沙漠中生活，连口水都没有，那日子得多难熬啊。
不禁让人想起了“水是生命之源”，可见这句话一点儿都没错。
培养基准备好后，咱们可得考虑一下pH值了，枯草芽孢杆菌可是有自己的“小脾气”。
理想的pH值在6.8到7.2之间，这个范围就像是细菌们的“舒适区”，能够让它们觉得“安逸自在”。
一旦偏离了这个范围，小家伙们可能就会闹情绪，生长速度直线下降。
这时候，你可能会问，怎么才能做到呢？其实很简单，可以通过添加一些缓冲剂，来调整培养基的pH。
比如磷酸盐缓冲液，细菌们见了这玩意儿，简直就像见到了老朋友，心里踏实多了。
等到这些准备都搞定，咱们就可以把培养基放进高压灭菌器里，来个“高温消毒”。
这一步可不能省，保证培养基干干净净，细菌们才能放心“入住”。
高压灭菌的时间一般在15到20分钟，别着急，耐心点儿，毕竟好事多磨。
多粘芽孢杆菌检测方法
多粘芽孢杆菌检测方法一、检测用培养基配方与培养条件1.培养基：酵母浸膏培养基配方：蔗糖：1.0%酵母浸膏：0.45%KH2PO4:0.05%MgSO4：0.05%NaCl：0.05%琼脂粉：2%--2.5%PH：7.2--7.42. 培养条件：温度：33℃-37℃；时间：24--30小时。
二、检测与计数方法1. 系列稀释取250ml锥形瓶一个，加入适量玻璃珠，100ml无菌水，3滴吐温80（分散剂：分散菌团用），塞上棉塞并放入到70℃水浴锅中预热，待锥形瓶中水温达到70℃后，称取适量样品加入锥形瓶中，摇匀，70℃水浴20分钟。
水浴结束后迅速冷却到30—40℃左右，上旋转式摇床200 r/min充分振荡40 min，即成母液菌悬液（基础液）。
2. 用10mL无菌移液管分别吸取10mL上述母液菌悬液加入90 mL无菌水中，按1:10进行系列稀释，分别得到1:1×101，1:1×102，1:1×103，1:1×104……1:k稀释的菌悬液（每个稀释度应更换无菌移液管）。
3. 加样及培养取1个适宜的稀释度，用移液枪吸取菌悬液0.1ml (菌悬液加入量)，加至预先制备好的固体培养基平板上，用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀地涂于琼脂表面。
此稀释度重复3次，同时以空白作对照，于适宜的条件下培养。
4. 菌落识别根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。
当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应重做。
5. 菌落计数以出现20—300个菌落数的稀释度的平板为计数标准，分别统计有效活菌数目和杂菌数目。
有效菌平均菌落数（x）在20—300之间时，则以该菌落数计算。
有效活菌数按式（1）计算，同时计算杂菌数：nm = x kv1/(m0v2) ×10-8或 nv = x kv1/(v0v2) ×10-8（1）式中：nm —质量有效活菌数，亿/gnv —体积有效活菌数，亿/mLx—有效菌落平均数，个k —稀释倍数v1—基础液体积， mLv2—菌悬液加入量， mLv0—样品量， mLm0—样品量， g重点需要注意的部分在菌悬液的制备及震荡过程上，因为固态发酵的的产品大部分为聚集状态不容易分散开来，这点与液态发酵产品不同。
枯草芽孢杆菌的液体培养基配方
枯草芽孢杆菌的液体培养基配方说到枯草芽孢杆菌，这可不是随便说说的哦，它可是个小家伙，能在各种环境中生存得很好。
液体培养基就是我们给它准备的“餐厅”，想让它吃得好，生长得快，那可得好好调配一下。
这儿我就给大家说说，怎么调制这个神奇的液体培养基，保证让枯草芽孢杆菌乐得不行。
得准备一些基础原料，绝对不能少。
咱们先来点水，当然是无菌水，清澈见底，没杂质的那种。
水是这个培养基的灵魂，没了它，所有的调料都得打折扣。
我们得加一些氮源。
氮可不是随便找的，最好选用胨或者酵母提取物，这两样可都是营养丰富的小家伙。
它们就像是餐桌上的大菜，能让枯草芽孢杆菌长得倍儿快。
咱们得添加碳源，绝对不能让小家伙饿肚子。
葡萄糖是个不错的选择，能提供充足的能量。
想想看，小小的芽孢杆菌就像是一个爱吃糖的小朋友，给它点甜的，它可乐了。
别忘了再加上一点盐，盐能帮助调节渗透压，就像是给小家伙调味，适合它的口味。
为了让它更有活力，咱们还可以放点矿物质，比如镁、钾、钙，这样可以让它的“生活”更丰富。
好了，材料都准备齐全了，咱们接下来就要把这些东西混合在一起。
这个时候，可以用一个干净的烧杯，把所有的原料倒进去，然后搅拌均匀。
就像在调制一杯美味的鸡尾酒，得用心才能做得好。
搅拌的时候，想象一下小家伙们在水里欢快游泳的样子，别提多开心了。
咱们得把混合好的液体培养基装进瓶子里。
记得用无菌的试管或者培养瓶，这样才能避免细菌的污染。
想想那些小芽孢们，等着在里面开派对呢，怎么能让坏细菌抢了风头？把瓶子装好之后，得用铝箔纸把口包好，保护得妥妥的。
这样小家伙才能安心待在里面，避免被外面的世界干扰。
然后，咱们得给这瓶子找个地方放，温度和光照都很重要。
最好是放在一个恒温箱里，保持在37度左右，正合适。
也不要直射阳光，太强的光线可不合适。
小芽孢杆菌可娇气了，它们需要一个舒适的环境，才能充分发挥它们的“潜力”。
想象一下，它们就像是小小的冒险家，在培养基中探索，真是有趣。
几天后，打开瓶子，嘿，里边的变化可大了。
蜡样芽孢杆菌显色培养基配方及使用方法
蜡样芽孢杆菌显色培养基配方及使用方法蜡样芽孢杆菌显色培养基(Chromogenic Bacillus Cereus Agar )
用途：
用于食品样本中蜡样芽孢杆菌的快速分离和鉴定。
原理：
蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;磷酸氢二钠和磷酸二氢钾为缓冲剂;琼脂是培养基的凝固剂;混合色素与蜡样芽孢杆菌酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团，在淡黄色平板上蜡样芽孢杆菌产生绿~蓝绿色的菌落。
配方(每升)：
蛋白胨15g
酵母膏粉4g
磷酸氢二钠 2.52g
磷酸二氢钾0.28g
琼脂15g
混合色素 3.25 g
最终pH 7.2±0.2
使用方法：
1、取瓶内干粉40克，用1000ml蒸馏水或纯水溶解，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃15min高压灭菌，冷至50℃，每瓶添加剂(SR0210)中加入1ml无菌水，使之完全溶解，然后加入100毫升培养基中，混匀，倾注灭菌平皿。
2、用无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液配制10-1~10-5的样本稀释液按GB/T 4789.2测定。
3、取各稀释液0.1ml接种至蜡样芽孢杆菌显色琼脂平板上涂布或划线。
4、37℃培养24小时，选取适当菌落数的平板进行计数。
5、通过验证试验进一步确认假定性蜡样芽孢杆菌，如氧化酶、革兰氏染色等。
6、报告每克(毫升)食品样本中蜡样芽孢杆菌的数目。
枯草芽孢杆菌发酵培养基及发酵条件优化
枯草芽孢杆菌发酵培养基及发酵条件优化作者：焉兆萍宋士良陆克文来源：《国外畜牧学·猪与禽》2019年第01期摘; 要：本文对枯草芽孢杆菌的发酵培养基和发酵条件进行了筛选优化。
采用单因素试验和正交试验方法，确定该枯草芽孢杆菌的优化培养基为：豆粕40 g/L、玉米粉20 g/L、葡萄糖15 g/L、磷酸氢二钾3 g/L、磷酸二氢钾1.5 g/L、硫酸镁0.5 g/L、硫酸铵0.35 g/L、酵母浸粉0.2 g/L、硫酸锰0.2 g/L、硫酸亚; ;铁0.1 g/L、碳酸钙0.1 g/L。
最适发酵条件为：初始pH 7.2，接种量5%，发酵温度35 ℃，摇床转速250 r/min。
关键词：枯草芽孢杆菌;发酵培养基;发酵条件中图分类号：TQ920.6 文献标志码：A 文章编号：1001-0769（2019）01-0051-05枯草芽孢杆菌是嗜温、好氧、产芽孢的革兰氏阳性杆状细菌，在自然界中广泛存在，对人畜无毒无害，且不污染环境;能产生多种抗菌物质和酶，具有广谱抗菌活性。
该菌已被我国农业农村部列入饲料添加剂目录名单，越来越多地被研制成微生物制剂，其制剂作为“绿色”饲料添加剂，在畜牧养殖业、饲料加工业中得到广泛应用，成为现代养殖业的一种常规添加剂，具有广阔的发展前景[1]。
枯草芽; 孢桿菌在动物肠道内具有较强的生物夺氧能力，这对动物的营养物质利用、生长、防病起到重要作用[2];其还可以通过产生抗体和提高嗜菌作用等，刺激免疫，激发体液免疫与细胞免疫，从而提高动物的生产性能和饲料利用率[3]。
由于枯草芽孢杆菌生长速度快、营养需求简单、易于存活、无致病性，具有良好的发酵基础，国内外已有众多学者对此菌进行了大量研究[4]。
本文通过单因素试验与正交试验，对枯草芽孢杆菌的发酵培养基和发酵条件进行了研究，确定其最佳发酵培养基和最适发酵条件，以最大限度地提高枯草芽孢杆菌的发酵菌数，降低生产成本，满足工业化发酵生产的要求。
凝结芽孢杆菌培养基形态
凝结芽孢杆菌培养基形态
凝结芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种常见的细菌，通常生长在含有适当营养物质的培养基上。
这里简要介绍一种常用于培养凝结芽孢杆菌的基本培养基形态。
常见的培养凝结芽孢杆菌的培养基是固体培养基，称为普通富集培养基，也称为通用富集培养基。
它由一些基本成分组成，如蛋白质、糖类和盐等。
下面是该培养基的基本形态：
1.成分：基本成分通常包括蛋白胨、葡萄糖、氯化钠和琼脂。
2.形态：普通富集培养基为固体培养基，通常呈现为琼脂平板。
当凝结芽孢杆菌在此培养
基上生长时，会形成圆形或不规则的菌落。
菌落通常呈白色或乳白色，直径约为1-3毫米，边缘整齐。
3.营养：该培养基富含营养物质，为凝结芽孢杆菌的生长提供充足的营养。
4.特点：凝结芽孢杆菌是一种革兰氏阳性细菌，因其产生孢子而得名。
孢子具有耐热性和
抗干扰性，使得该菌在环境中有很好的存活能力。
值得注意的是，不同的研究目的和实验要求可能会使用不同的培养基。
普通富集培养基是一种最基本的培养基，常用于细菌的常规培养和观察。
如果需要特定的培养条件或选择性培养，可能需要使用其他不同配方的培养基。
枯草芽孢杆菌发酵培养基配方
枯草芽孢杆菌发酵培养基配方1. 引言大家好，今天咱们聊聊一个很有意思的话题，那就是枯草芽孢杆菌的发酵培养基配方。
听起来好像有点高大上，其实就是让小细菌们在一个舒适的环境里茁壮成长嘛！说到这里，你可能会问：“这枯草芽孢杆菌到底是个啥？”别急，咱慢慢来。
枯草芽孢杆菌，顾名思义，跟“枯草”有点关系，它能在各种环境下生存。
说白了，就是个“生存达人”。
咱们用它来做发酵，能够帮助咱们在农业、医药等领域有更好的应用，比如促进植物生长、提高土壤肥力等。
这可是个大忙人，嘿嘿！2. 培养基的组成2.1 基本成分那咱们要怎么调配这个培养基呢？其实挺简单的，先来看看基本成分都有哪些。
主要的配方有：1. 水：这是培养基的灵魂，少了水可不行，细菌可是“水中精灵”。
2. 营养琼脂：这个东西就像细菌的“营养快线”，能给它们提供成长所需的各种营养素。
3. 葡萄糖：别小看这糖，细菌可是特别喜欢这个，吃了能让它们“嗨”起来，分分钟活力四射。
4. 氮源：比如蛋白胨，帮助细菌合成蛋白质，细菌们得有营养才行啊。
这几个成分调配好，就像调制一杯完美的鸡尾酒，嘿嘿！2.2 其他成分除了基本成分，咱们还可以加入一些“调味剂”。
比如：1. 磷酸盐：帮助细菌更好地利用能量，别小看这个，重要得很呢。
2. 微量元素：铁、锰这些，虽然含量不多，但对细菌来说可是大补品，简直是“细菌的维生素”。
3. pH调节剂：有时候环境酸碱度不对，咱们得调调，保证细菌在最佳状态下发酵。
配方就像是做饭，想要味道好，就得多尝试，多调整，找到那个完美的平衡点！3. 制备步骤3.1 具体步骤好啦，现在咱们来聊聊怎么把这些成分变成培养基吧。
其实步骤很简单：1. 准备好所有材料：一切准备就绪，像个小厨师一样。
2. 称量成分：按比例把营养琼脂、葡萄糖、氮源等称好，别马虎，量要准。
3. 溶解：把称好的成分放进水里搅拌，直到完全溶解，就像搅拌奶茶一样，直到没有颗粒。
4. 灭菌：这一点特别重要，得把细菌们的“敌人”消灭干净，才能让咱的枯草芽孢杆菌尽情生长。
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芽孢杆菌常用培养基配方
（按理说，该实验的所有培养基都在这了，后红字更为清楚些。
摘自百度）
一、肉汤琼脂培养基：蛋白胨10g ，牛肉膏15g ，NACL15g ，
蒸馏水1000ml ，琼脂18g 。
调节, 灭菌。
如果用液体做培养基，则去掉琼脂即可。
100 mL/组，其中20 mL液体培养基/250 mL △中（内装玻璃珠10颗）；50 mL固体斜面培养基分装在试管中：5mL/支，10支。
2、或是（J-琼脂培养基：胰蛋白胨5g,酵母膏15g, 磷酸氢
二钾3g,葡萄糖2g, 琼脂20g, 蒸馏水1000ml。
调节—
30min灭菌。
）
二、过氧化氢酶测定
1、试剂：3-10%过氧化氢
2、接种与培养：一般将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上，30度下
培养1-2天。
3、试验方法：取一干净载玻片，在上面加一滴3-10%的双氧水，
挑取1环1-2天的的菌苔，在双氧水溶液中涂抹，如有气泡出
现（O2），作为过氧化氢酶阳性，无泡为阴性。
也可以将过氧
化氢液直接加入斜面上，观察气泡的产生。
三、需氧性测定
1、培养基：酪素水解物20g,葡萄糖
10g, ,NACL5g,HOCH2SO3Na1g,HSCH2COONa2g,琼脂15g,蒸馏水1L。
调节，分装试管，，30min灭菌，培养基不摆斜面。
2、接种与观察：用一小环的肉汤菌液，穿刺接种到上述培养基中
（穿刺管底），一般与30 度培养3-7天观察结果。
若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿穿刺线生长则为厌氧菌。
四、酪素水解（用于检测不同种类的芽孢杆菌是否具有分解酪素的
特点）
1、培养基
（1）脱脂牛奶制备取新鲜牛奶，煮沸后去掉上层油脂，再经离心脱脂（3000r/min,10min）,除去上层油脂，即为脱脂牛奶。
（2）牛奶平板的制备取50ml的脱脂牛奶放入一只三角瓶中，另外称1.5g琼脂置于含有50ml蒸馏水的另外3只三角瓶中，然后将两液分开灭菌，，带冷至45-50摄氏度时，速将两液混匀倒平板，即为牛奶平板。
将平板倒置过夜，使表面水分干燥。
2、接种与观察
将测试菌种以三点法点接在牛奶平板上，一般于30度培养1,3,5,7和14天，如菌落周围和下面呈透明，表明酪素已被分解。
培养基
可溶性淀粉3g/L 蛋白胨10g/L 酵母膏3g/L KH2PO41.5g/L K2HPO42g/L
MgSO4 0.1g/L PH —（富集用）
肉汤（NA）培养基（营养琼脂）：
蛋白胨10g/L 牛肉膏3-5g/L NaCl5g/L —（保存计数或分离纯化用）
营养琼脂：麦芽汁培养基=1：1混合使用，菌落不易扩散，形态特征典型
蛋白胨10g/L 酵母膏5g/L 葡萄糖3.5g/L NaCl5g/L K2HPO4 0.5g/L
MgSO4 3g/L MnSO4 25mg/L PH —（分离纯化用）
产淀粉酶菌株筛选培养基：
可溶性淀粉3-5g/L 蛋白胨10g/L 牛肉膏3-5g/L NaCl 5g/L —（用于淀粉酶产生菌分离筛选）
产蛋白酶菌株筛选培养基
1.5.1酪素培养基：
★★2.1.5.葡萄糖1g/L，酵母膏1g/L，酪素4-5g/L，K2HPO4 1g/L，KH2PO4 0.5g/L，MgSO4 0.1g/L 蒸馏水1000ml，。
另：葡萄糖0.5g/L，酪素10g/L，NaCl 5g/L K2HPO4 0.5g/L，KH2PO4 0.5g/L，
琼脂20g/L
2.1.5.牛肉膏3g/L或酵母浸粉5g/L 酪素10g/L NaCl 4-5g/L —
先将酪素用少量2%氢氧化钠润湿，玻棒搅动，再加适量的蒸馏水，在沸水浴中加热搅拌至完全溶解（10-15min），补足1000mL蒸馏水，加入其他成分，调PH 分装灭菌。
2.1.5.酵母膏0.05g/L 酪素4g/L KH2PO4 0.36g/L Na2HPO4 1.1g/L MgSO4 0.5g/L NaCl 0.16g/L FeSO4 0.002g/L CaCl2 0.002g/L ZnCl2 0.014g/L
酪素母液制备：4g酪素溶解于的30-35mL的氢氧化钠溶液中，水浴溶解20min，
溶解完毕后加入60-70℃热水定溶到培养基加20mL.
★★2.1.5.2脱脂奶培养基：
牛肉膏3g/L（酵母浸粉5g/L）蛋白胨10g/L NaCl5g/L 脱脂奶粉10-12g/L，（用于蛋白酶产生菌的筛选）
将脱脂奶（粉）加水溶解制成10℅溶液，于115℃加热灭菌20-30min，与牛膏蛋白胨固体培养基1：9混合均匀倒平板。
2.1.6纤维素产生菌培养基：
CMC-Na2g/L蛋白胨10g/L 酵母膏5g/L NaCl5g/L
（用于纤维素产生菌的筛选）
2.1.7促芽胞形成培养基：
土壤浸出液1000mL 蛋白胨5g/L 牛肉膏6g/L —
蛋白胨1g/L 酵母膏0.7g/L 葡萄糖1g/L (NH4)2SO40.2g/L MgSO40.2g/L K2HPO4 1g/L —（分离纯化用）
产芽孢培养基：蛋白胨10g/L 牛肉膏3-5g/L NaCl5g/L .玉米粉0.5g/L 酵母膏0.1g/L —
2.1.8产蛋白酶发酵培养基：
玉米粉30g/L 豆饼粉20g/L 麸皮10g/L 磷酸二氢钠4g 磷酸二氢钾0.3g/L 碳酸钠1.0g/L—八层纱布塞，牛皮纸扎好。
2.1.9产淀粉酶发酵培养基：
玉米粉40g/L 豆饼粉20g/L 蛋白胨5g/L 硫酸铵4g/L 磷酸二氢钠8g/L 磷酸二氢钾3g/L —八层纱布塞，牛皮纸扎好。
产酶培养基（蛋白淀粉酶）：蛋白胨10g/L 酵母膏5g/L 葡萄糖1g/L 可溶性淀粉5g/L 磷酸二氢钾2g/L MgSO4 0.5g/L CaCl2 0.2g/L
分离纯化（或复壮）
2.2.1冻干管的活化及菌种复壮：
活化：用无菌吸管吸取无菌水滴入安管中，轻荡使干菌体溶解成菌悬液，
做梯度稀释后取涂布或直接划线于肉汤（麦芽汁）培养基平皿，或转
接于斜面（活化）37℃24-36h。
复壮：挑取选择生长快，菌落大的菌落于无菌水试管中，振荡摇匀后置于
80℃水浴加热15-20min，梯度稀释后涂布于促芽胞形成培养基平皿或蘸取菌悬液直接划线，37℃24h。
反复二至三次，选取平皿上菌落大而且生长快的菌落转接于斜面37℃18-20h，4℃冰箱保存。
2.2.2商品微生物制剂中菌种选育
1g（1mL）商品制剂加入99mL无菌（生理盐）水/250mL三角瓶（带玻璃珠），置
于摇床振荡20-30min，80-85℃水浴加热15-20min，进行梯度稀释成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7，根据活菌含量选取两至三个梯度进行混菌或涂布35℃-37℃24 h，挑取一环生长快，菌落大的不同典型菌落分别转接5mL无菌水试管中，混合器混合5-10min，做成菌悬液梯度稀释后混菌或涂布，或直接蘸取菌悬液直接划线，37℃18-20h。
结合镜检直到菌落大小基本一致，转接于斜面37℃18-20h，于4℃冰箱保存。
或将梯度菌液1mL加入平板，然后分别注入淀粉和酪素培养基中，30-37℃24-48h，挑取D/d大的（淀粉培养基加碘液，观察透明圈）转接于斜面备用或用划线法进行纯化。
并通过染色镜检观察，从菌落形态和细胞形态进行鉴别。
2.2.3自然筛选
2.2.
3.1富集培养：
取5g底泥或肠道内溶物0.5g，加入45（50）mL无菌水/250mL三角瓶（带玻珠）中，振荡15-20min，取5mL菌悬液或5mL水样加入45mL促芽培养基/250mL三角瓶中，75℃-80℃水浴15-20min，降至35℃-37℃150-200r/min振荡24h，染色镜检，连续两至三次培养备用。
或取1g底泥（土）置于20mL肉汤培养基/250mL 三角瓶，八层纱布封口，75℃-80℃水浴处理15-20min，然后150-200r/min振荡24h。
镜检形成芽孢情况，挑取具有芽孢的菌落进行划线纯化培养，获得单菌落。
2.2.
3.2分离纯化
取富集菌液置于75℃-80℃水浴15-20min，梯度稀释10-3、10-4、10-5、10-6、10-7，
选择三个合适的梯度混菌或涂布于营养琼脂麦芽汁培养基或直接涂布于酪素培养基上初筛，也可划线分离（划线法先将平板置于30℃（24-48 h）或37℃
（18-24h），无菌检查，表面冷凝水干燥）。
每个梯度二个平皿，将平板倒置，于35℃-37℃24-48h。
对长出的单菌落进行编号，选择生长快、菌落大，表面干燥，粗糙，不透明的菌落转接于斜面备。
挑取少许菌苔涂片，做芽胞染色判断是否为芽孢杆菌。